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疑似腮腺炎病例病原学标本采集和保存方法一、病原学标本采集和保存原则腮腺炎病毒可从腮腺导管，唾液腺导管，咽喉部，尿液和脑脊液（CSF）标本中检测到。
当患者出现腮腺炎临床症状时，腮腺导管拭子是最优选的腮腺炎病毒学采样标本。
建议在采样时，对腮腺导管区域进行约30秒按摩后再使用无菌的棉签拭子置于颊粘膜/腮腺导管部位反复擦拭10-15秒进行采样，以便保证棉签拭子中含有来自腮腺或其他唾液导管腺体的分泌物。
咽拭子和口腔含漱液标本也可用于腮腺炎病原学检测。
尿液样本不作为腮腺炎病例优选的病原学标本。
因为与上述标本相比，尿液中病毒滴度较低，不足以用于病毒分离培养或病毒核酸检测。
但当腮腺炎患者出现睾丸炎并发症时，尿液标本也可用于腮腺炎病原学诊断。
对于出现腮腺炎脑膜炎或脑炎并发症的病例，可同时采集患者脑脊液标本进行检测。
上述病原学标本应在患者出现腮腺炎或腮腺炎并发症后尽快采集，采样时间建议在腮腺炎发病后3天内采集，原则上采集时间不超过8天。
采集的病原学标本，应置于2～8℃冰箱暂存，并于48小时内送至实验室进行检测。
如不能及时检测，标本应放置-80℃保存，避免反复冻融。
二、腮腺导管病原学标本采集腮腺导管分泌液是腮腺炎病原学主要采集标本。
采集部位为腮腺导管口，其位于平对上颌第二磨牙牙冠的颊粘膜上，呈乳头状突起。
人体解剖位置如下图：具体采集方法：1.采集病例腮腺肿大的腮腺导管分泌液，建议在腮腺炎发病后3天内采集。
2.使用无菌的特制棉拭子（主要是前部的脱脂棉缠绕得比较多），将棉签头放在患者腮腺肿大一侧的上排第二磨牙上（没有长出第二磨牙的儿童，放在第一磨牙上），让患者咬住棉签头一侧的约1/3部分，另约2/3的部分留在牙齿与脸颊之间。
手掌放在脸颊外侧，适度按压肿大的腮腺约0.5～1分钟，取出棉拭子；如果患者应疼痛难忍，也可采用让其将棉拭子放在肿大侧的磨牙上反复咀嚼0.5～1分钟的方法采集。
要求每个病例采集2根棉拭子，放入同一管病毒采样管，棉签头应浸入至少含2 mL病毒采样运输液中。
第1篇实验名称：腮腺炎病毒分离与鉴定实验目的：1. 掌握腮腺炎病毒分离与鉴定的基本原理和方法。
2. 培养学生运用实验手段解决实际问题的能力。
3. 了解腮腺炎病毒的生物学特性。
实验时间：2021年X月X日实验地点：病原生物学实验室实验材料：1. 腮腺炎病毒阳性样本2. DMEM培养基3. RPMI-1640培养基4. Hanks'平衡盐溶液5. 0.25%胰蛋白酶6. 0.5%台盼蓝染色液7. 腮腺炎病毒特异性抗体8. 显微镜9. 实验记录本实验方法：1. 样本处理将腮腺炎病毒阳性样本用Hanks'平衡盐溶液进行稀释，取适量样本加入含有0.25%胰蛋白酶的DMEM培养基中，37℃孵育30分钟，以破坏细胞保护病毒。
2. 细胞接种取人胚肾细胞（HEK293）培养至对数生长期，用0.25%胰蛋白酶消化后，以1×10^5细胞/孔的密度接种于96孔板中，37℃、5%CO2条件下培养24小时。
3. 病毒感染将处理后的腮腺炎病毒样本加入细胞培养孔中，37℃、5%CO2条件下孵育1小时，使病毒吸附于细胞表面。
4. 细胞培养去除病毒样本，加入新鲜DMEM培养基，37℃、5%CO2条件下培养48小时。
5. 病毒分离与鉴定取培养48小时的细胞，用0.5%台盼蓝染色液进行染色，观察细胞形态变化，判断病毒分离结果。
对分离出的病毒进行以下鉴定：（1）形态学观察：取分离出的病毒，接种于HEP-2细胞上，37℃、5%CO2条件下培养48小时，观察细胞形态变化。
（2）病毒特异性抗体检测：将分离出的病毒，用病毒特异性抗体进行免疫荧光检测，观察细胞是否出现荧光反应。
（3）病毒分离培养：将分离出的病毒，接种于新的HEK293细胞中，重复病毒分离与鉴定过程，以确认病毒分离结果。
实验结果：1. 细胞接种后，细胞生长良好，呈对数生长期。
2. 病毒感染后，细胞出现不同程度的病变，如细胞皱缩、脱落等。
3. 病毒分离结果：在HEP-2细胞上观察到细胞病变，说明病毒分离成功。
腮腺炎病毒（MU）IgG 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明（96T/48T）[原理]本试剂盒采用亲和素-生物素化MU纯化抗原预包被板ELISA 原理，检测人血清/血浆中存在的MU-IgG型抗体，并配以酶标记抗人IgG单克隆抗体作为标记物。
加入底物TMB显色后终止反应，在450nm波长测各孔O.D值，O.D值的大小与待检抗体含量成正比。
生物素系统（biotin-avidin system）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高为本试剂盒之独特点。
[用途]本试剂盒用于定性检测人血清/血浆中的腮腺炎病毒IgG型抗体。
适用于腮腺炎病毒既往感染的诊断和鉴别诊断有重要的参考价值。
[试剂盒组成]1、生物素化MU抗原预包被板1块（8X12/4X12）2、阴性对照1瓶3、阳性对照1瓶4、标本稀释液1瓶（20 ml/10ml，直接使用）5、酶结合物1瓶（12/5ml，直接使用）6、30X浓缩洗液1瓶（20/10ml，加蒸馏水1：30稀释使用）7、显示剂A、B液各1瓶（5/3ml）8、终止液（2M H2SO4）1瓶（5/3ml）9、说明书1份[操作步骤]1.将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。
2.样本稀释：用标本稀释液以1：41（5ul—200ul）稀释血清标本(每孔200ul标本稀释液加5ul血清标本轻拍混匀或在震荡器上混匀)，设阴、阳性对照（各100ul）及空白对照（加100ul标本稀释液）各一孔。
轻拍混匀。
3.37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，用洗涤液洗板3次并在吸水纸上拍干。
4.加酶结合物：每孔2滴（或100ul），混匀后置37℃温育30分钟。
同上法洗涤3次并拍干。
5.显色：每孔加显色剂A、B各1滴（或50ul），轻拍混匀（或震荡器混匀）后置37℃10分钟。
[结果判断]1.目测：在白色背景下观察各孔显色情况，蓝色者为阳性，无色者为阴性。
2.酶标仪测定：每孔加终止液1滴（或50ul），混匀后在450nm下测定各孔O.D值。
儿童常见传染病：腮腺炎防治一、引言腮腺炎，又称流行性腮腺炎，是一种由腮腺病毒引起的急性呼吸道传染病。
它主要侵犯腮腺，也可侵犯各种腺组织、神经系统及肝、肾、心脏、关节等几乎所有的器官。
腮腺炎在我国属于丙类传染病，全年可发病，以冬春季为主，有时在儿童机构可形成暴发。
为了更好地预防和管理腮腺炎，提高儿童的健康水平，本文将详细介绍腮腺炎的病原学、流行病学、临床表现、诊断、治疗及预防措施等方面的内容。
二、病原学腮腺炎病毒属于副粘病毒科，为单股RNA病毒。
病毒呈球形，直径约150-300nm。
病毒颗粒外包被脂蛋白膜，膜表面有小突起，含有血凝素和神经氨酸酶等。
腮腺炎病毒可分为多个血清型，其中F和A 型最为常见。
病毒对热、紫外线、甲醛等敏感，56℃30分钟可灭活，但耐低温。
三、流行病学1. 传染源：腮腺炎患者和隐性感染者是本病的主要传染源。
患者在腮腺肿大前6天至肿大后9天内均可从唾液中分离出腮腺炎病毒。
2. 传播途径：腮腺炎主要通过飞沫传播，也可通过直接接触患者唾液污染的食具和玩具传播。
3. 易感人群：人对腮腺炎病毒普遍易感，90%的患者为5-15岁儿童。
感染后可获得持久免疫力。
4. 流行特征：腮腺炎在我国各地均有发病，以冬春季为主，有时在儿童机构可形成暴发。
四、临床表现1. 潜伏期：一般为14-25天，平均18天。
2. 前驱期：表现为发热、畏寒、头痛、乏力、纳差等症状，持续1-2天。
3. 腮腺肿大期：腮腺肿大为腮腺炎的典型体征，常累及一侧，也可双侧同时或先后肿大。
腮腺肿大以耳垂为中心，向前、后、下发展，边缘不清，表面发热但多不红，触之有弹性感并有触痛。
腮腺肿大1-3天达高峰，持续5天左右逐渐消退。
4. 并发症：腮腺炎可并发脑膜脑炎、睾丸炎、卵巢炎、胰腺炎等。
脑膜脑炎表现为发热、头痛、呕吐、颈项强直等症状，多在腮腺肿大后1周内发生。
睾丸炎多见于青春期后男性，表现为睾丸肿大、触痛，严重者可导致睾丸萎缩。
卵巢炎多见于青春期后女性，表现为下腹痛、月经不调等症状。
腮腺炎病毒实验活动风险评估报告一、页腮腺炎病毒实验活动风险评估报告二、目录1.页2.目录3.摘要4.背景和现状分析4.1腮腺炎病毒的传播途径4.2腮腺炎病毒感染的危害4.3当前腮腺炎病毒的研究现状5.项目目标5.1确定腮腺炎病毒实验活动的潜在风险5.2评估腮腺炎病毒实验活动的风险程度5.3提出腮腺炎病毒实验活动的风险控制措施6.结论三、摘要本报告旨在对腮腺炎病毒实验活动进行风险评估。
通过分析腮腺炎病毒的传播途径、感染危害以及当前研究现状，确定实验活动的潜在风险，并评估风险程度。
提出相应的风险控制措施，以确保实验活动的顺利进行。
四、背景和现状分析4.1腮腺炎病毒的传播途径腮腺炎病毒主要通过飞沫传播，当一个感染者咳嗽、打喷嚏或说话时，病毒会通过飞沫传播给其他人。
病毒也可以通过接触感染者唾液污染的物体表面传播。
4.2腮腺炎病毒感染的危害腮腺炎病毒感染会引起腮腺炎，这是一种常见的传染性疾病。
感染后，患者会出现发热、腮腺肿大、咀嚼困难等症状。
在一些罕见情况下，腮腺炎病毒还可能引发脑膜炎、睾丸炎等严重并发症。
4.3当前腮腺炎病毒的研究现状目前，腮腺炎病毒的研究主要集中在病毒传播途径、病毒变异、疫苗研发等方面。
研究人员致力于了解病毒的传播机制，以制定有效的预防措施。
疫苗研发也是腮腺炎病毒研究的重要方向，目前已有多款腮腺炎疫苗上市，为预防腮腺炎提供了有效的手段。
五、项目目标5.1确定腮腺炎病毒实验活动的潜在风险通过分析腮腺炎病毒的传播途径和感染危害，确定实验活动中可能存在的风险因素，包括病毒泄漏、实验人员感染等。
5.2评估腮腺炎病毒实验活动的风险程度根据实验活动的特点和风险因素，评估腮腺炎病毒实验活动的风险程度，包括高风险、中风险和低风险等级别。
5.3提出腮腺炎病毒实验活动的风险控制措施针对实验活动中存在的风险，提出相应的风险控制措施，包括实验操作规程、实验室安全措施、个人防护措施等，以确保实验活动的顺利进行。
麻疹、风疹、腮腺炎一．填空题（共10题）1、麻疹疑似病例血清标本采集应在岀疹后_________天内。
（28）2、对于3天内采集的血清标本，麻疹、风疹IgM抗体阴性而又无其他疾病可以解释者，应于_______天内采集第二份血进行IgM抗体检测。
（7-10）3、麻疹疑似病例咽拭子及尿液标本应在岀疹后天内采集。
（5天）4、麻疹疑似病例血清学标本采集后应在________条件下、3天内及时送检，如不能及时送检应置-20℃以下保存，避免反复冻融。
（2-8℃）5、病原学标本采集后应于48h内尽快送达市级麻疹网络实验室。
否则应放-70℃保存。
无-70℃保存条件者，可在暂时__________保存但不能超过1周。
（-20℃）6、在前驱期和岀疹期，从麻疹疑似病人的咽拭子、尿液和_________等标本中，都可以分离到麻疹病毒。
（血/淋巴细胞）7、由于血清学方法不能区分IgM抗体阳性结果是由麻疹野病毒还是疫苗株感染引起的，因此，了解患者的________对IgM抗体检测结果的解释尤其重要。
（免疫史）8、世界卫生组织（WHO）依据麻疹病毒基因________C末端456个核苷酸之间的差异程度，将麻疹病毒分为8个基因型、24个基因亚型。
（N）9、世界卫生组织（WHO）将腮腺炎病毒基因全长316个核苷酸作为_________基因型划分和常规分子流行病学研究的标准靶核苷酸序列。
（SH）10、世界卫生组织（WHO）将风疹病毒基因编码的739个核苷酸作为_______基因型划分和常规分子流行病学研究的标准靶核苷酸序列。
（E1）二、单选题（共15题）1、风疹病毒在人间传染的病原微生物名录中危害程度分类为：（A）A 第三类B 第二类C 第一类D 第四类2、我国麻疹实验室网络组成，不包括以下哪个？（D）A 国家CDC B省级CDC C市级CDC D医疗单位3、在什么情况下需要采集第2份血标本进行实验室确诊？（B）A出疹3日内采集的血标本麻疹IgM检测为阳性者。
流行腮腺炎的诊断与防治北京大学第一医院吴赤红一、概述（一）流行病学腮腺炎的传染源是病人，传播途径主要通过呼吸道的飞沫传播，在接触病人后大约2～3周可发病，大多流行于冬春季节。
人群对腮腺炎普遍易感，但易感性随年龄的增加而下降，所以腮腺炎多见于儿童和青少年，成人偶有发病，病后可以获得持久的免疫力，青春期后发病男性多于女性。
单侧或双侧的腮腺受累，主要表现为一侧或两侧以耳垂为中心的腮腺肿大。
从外观看肿大的腮腺大多呈半球形或者是梨形，并以耳垂为中心，边缘不清（如右图），表面有发热感，有触痛。
肿大的腮腺有肿、热、痛，但发红表现不明显，张口或咀嚼时会感觉局部疼痛。
腮腺的肿胀在发病的第1～3天最明显，以后会逐渐的消退，大约2周时间肿胀可完全退尽。
所以发病初期患者可有发热、乏力、全身不适、周身酸痛，以及厌食等临床表现。
（二）病原学腮腺炎病毒属于副黏液病毒系核糖核酸型，是RNA病毒，属于副黏液病毒科。
对各种物理化学因素的作用都很敏感，比如对热、紫外线以及各种消毒剂都敏感。
大约在 4 ℃时活力可保持2个月，在37 ℃时可保存24小时，加热到55 ～60 ℃时，约需10 ～20分钟就可以将其灭活，使其失去活力。
但腮腺炎病毒对于低温耐受能力很强，在-65 ℃时可以长期存活，甚至可以存活数年。
该病毒除感染人类以外，还可在猴、鸡胚羊膜和各种人和猴的组织培养中大量的增殖。
所以在科研工作中可以用猴或鸡胚进行组织培养，尤其对猴最为敏感的。
（三）病原结构含有神经氨酸酶（neuraminidase ）和一种血凝素糖蛋白(hemagglutininglycoprotein) 具有病毒抗原（V 抗原）。
S 抗原和V 抗原各有其相应的抗体。
感染腮腺炎病毒后无论发病与否都能产生免疫反应，再次感染发病者很少见。
于病程早期可自唾液、血液、脑脊液、尿或甲状腺等分离出腮腺炎病毒。
二、临床表现潜伏期8 ～30 天，平均18 天，腮腺炎在感染后起病大多较急，并没有明显的前驱症状，可以有发热、畏寒、头痛、全身酸痛、咽痛表现。
病毒感染性疾病的检验诊断及方法病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。
然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，结合患者当前所处的时机，确定检验诊断的方法。
有些病毒感染潜伏期较短，发病时机体免疫系统尚未完全应答，没有抗体产生，因此可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸。
对于潜伏期超过10天的病毒感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断、区别初次和再次感染。
对可在机体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体滴度有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。
对原因不明，可能有新病毒感染时，应采集相应部位的标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原病毒。
对同一症状可由多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。
病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。
1 标本的采集与送检临床医师根据流行病学资料，疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。
实验结果对诊断病毒感染的价值，很大程度上取决于标本的采集和处理的方式是否恰当。
正确采集标本，及时运送和处理，是极为重要的。
1.1 采集标本的时间尽可能在发病的初期，急性期或患者入院的当天进行。
疾病后期由于机体产生免疫力，开始清除病毒，使病毒数量减少或消失，不易检出。
1.2 标本种类的选择根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。
处理标本时要考虑病毒的生物学特性，如有包膜病毒冻融易被灭活。
某些病毒如麻疹病毒吸附茬白细胞上，为了有效分离病毒，血液标本应加抗凝剂。
1.2.1 心脏疾病可采取咽拭子、粪便、心脏组织或心包液标本。
分离相关的肠道病毒，包括埃可病毒、柯萨奇A组和B组病毒，也可采取血液标本进行血清学诊断。
1.2.2 中枢神经系统感染可采取咽拭子、粪便标本、脑脊液标本进行肠道病毒的分离；采取咽拭子、脑膜组织分离单纯疱疹病毒，亦可采取脑脊液进行PCR检查；采取咽拭子，尿液、脑脊液或唾液标本用于分离腮腺炎病毒。
腮腺炎病毒的分离鉴定为了解四川省腮腺炎病毒的基因特征，以填补四川省空白。
方法采集四川隆昌县腮腺炎暴发疫情中部分病例的咽拭子标本，进行病毒分离和核苷酸测序后，与腮腺炎病毒参考株SH 基因序列做进化树分析。
结果该病毒分离株与F基因型参考株聚集在同一进化分枝上，bootstrap值为96% 。
与F基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.8％～93.4％和94.7％～87.7％；与其他12个基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为91.8％～84.2％和86％～71.9％。
结论该病毒分离株为F基因型腮腺炎病毒，即四川隆昌县腮腺炎暴发疫情流行是由F基因型腮腺炎病毒引起的。
流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒引起的急性呼吸道传染病，腮腺炎病毒属于副粘病毒科腮腺炎病毒属，是单链（负链）RNA病毒，只有一个血清型，多个基因型，其中SH基因的变异程度最大，因此国际上将其作为分型的依据，目前已发现了13个（A-M）基因型，而中国主要流行株为F基因型[1～8]。
为了解四川省腮腺炎病毒的基因特征，填补四川省空白，2010-04采集四川内江隆昌县腮腺炎暴发疫情中部分病例的咽拭子标本，并进行病毒分离鉴定及SH 基因部分序列分析，现将结果报告如下。
1 材料与方法1.1 病例基本情况2010-04-21采集内江隆昌县一起腮腺炎暴发疫情中4月13日至4月19日发病的病例中6份咽拭子，按标本运送要求送到省级实验室。
1.2 病毒分离采集病例的咽拭子，用Vero/SLAM细胞进行病毒分离。
选择健康单层的细胞管，倒去生长液，每支细胞管接种0.2ml的标本悬液，37℃吸附1～2hr, 弃标本液，加入1.5ml维持液，置37℃孵箱静止培养，每天观察腮腺炎病毒的细胞病变效应CPE（Cytopathic effect 以下简称CPE），当细胞出现4+时收获，于-80℃冻存，如无CPE，连续观察7d，置-30℃冻化3次，再盲传2代，阴性者为阴性，同时做好细胞对照。
1.3 病毒核酸RNA提取使用PromegaRNA核酸提取试剂盒,批号:293651,效期：2011-03在Promega核酸自动提取仪上按厂家说明书从细胞培养物中提取病毒核酸RNA。
1.4 荧光探针逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）试剂和方法北京金豪生产，批号：200910114，效期：2010/10/08；操作按厂家说明书进行。
反应体系的配置：按n+1配置25ul反应体系, RT-PCR 反应条件:逆转录及变性：50℃30 min，95℃3 min，预扩增：95℃15 s，50℃30 s，72℃1min，共5个循环，扩增及荧光收集：95℃10s，55℃40s，共40个循环，在55℃收集FAM荧光信号。
观察结果：在阴性、阳性对照均成立的情况下，根据Ct值判断结果，Ct值小于等于35的检测标本判断为阳性标本；无Ct值或大于38为阴性；大于35小于38为灰区.1.5 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）RT-PCR在PTC-200(MJ)上进行，试剂为OneStep RT-PCR Kit(Qiagen)。
在逆转录酶(AMV ,Promega ,USA) 的作用下,在42 ℃反应45min 合成互补脱氧核糖核酸(Complementary Dexoxyribonucleic Acid , cDNA) 。
用上、下游引物在Taq DNA 聚合酶( Promega ,USA) 的作用下,主要针对MuV SH 基因316 个核苷酸片段(bp) 进行聚合酸链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) 扩增。
所用引物序列如下:上游引物( SH5-1 ) : 5′AAT A TC AAG TAG TGT CGATGA 3′,下游引物(SH5-2 ) :5′AGG TGC AAA GGT GGC ATT GTC3′。
反应条件为:94 ℃预变性2min ,95 ℃变性45s ,45 ℃退火45s ,72 ℃延伸1min ,30 个循环后,72 ℃延伸10min。
扩增后的PCR 产物(约长500bp) 经1.5 %琼脂糖凝胶( Promega USA) 电泳鉴定。
1.6 核苷酸测序和分析纯化后的PCR 产物采用末端终止法进行标记(BigDye TerminatorV311 Cycle Sequencing Kit ,Applied Biosystems ,Foster City ,USA) ,标记的反应过程为:96 ℃10s ,50 ℃5s ,60 ℃4min ,进行25 个循环后结束反应。
标记反应产物经葡聚糖凝胶G250 ( Pharmacia ,Sweden) 纯化后,于ABI Prime 3100 型序列分析仪(Applied Biosystems ,Hitachi ,J apan) 进行自动序列测定和分析。
所有核苷酸片段都为双向标记,以确保序列的准确性。
从序列测定仪上获得的序列资料以标准的图形文件(1ab1) 保存,序列整理使用Sequencher 4.0.5 软件( Gene Code,USA) ,将测序序列编辑为分子流行病学监测所需的SH基因316 个核苷酸，并使用BioEdit Sequence Alignment Editor software ( North Carolina St1University , USA )与各基因型参考株SH基因序列进行氨基酸和核苷酸同源性分析,使用Mega4.0 软件构建进化树（邻位-连接法，bootstrap检验，抽样次数500，Kimura 2 参数模型）。
2 结果2.1 病毒分离结果6份咽拭子标本，共培养了3代，每代7d，其中4月19日发病的标本出现腮腺炎病毒典型的细胞病变CPE（Cytopathic effect）主要表现为细胞聚集和退化性病变，产生融合细胞，并形成嗜酸性包涵体。
2.2荧光探针逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）结果阳性分离物使用PromegaRNA核酸提取试剂盒,在Promega核酸自动提取仪上按厂家说明书从细胞培养物中提取病毒核酸RNA后做荧光探针逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），结果全部对照符合要求，ct值为20，根据ct值的判断标准ct值＜35为阳性，该阳性分离物为腮腺炎病毒核酸阳性。
2.3 RT-PCR产物检测结果从阳性分离物中提取核酸，用RT-PCR法直接扩增后的PCR 产物(约长500bp) 经1.5 %琼脂糖凝胶电泳鉴定，阳性分离物在相应位置有明显阳性带。
2.4 核苷酸序列分析与各基因型参考株作进化树分析，该分离株(MUV-SC-2010-SXY-4)与F 基因型参考株聚集在同一分支上，bootstrap值为96% (图1)。
与各基因型参考株比较，该分离株与F基因型参考株的核苷酸序列同源性为96.8%～93.4%，氨基酸序列同源性为94.7%～87.7%；与其他12个基因型参考株的核苷酸序列同源性为91.8%～84.2%，氨基酸序列同源性为86%～71.9%。
图1 腮腺炎病毒SH基因316核苷酸进化树分析▲为四川分离株，其他为WHO各基因型参考株及GenBank录入号3 讨论流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒引起的急性呼吸道传染病，呈世界性分布，在我国归属于法定丙类传染病，全年均可发病，以冬春季为高峰，多发于儿童，呈散发或流行，中国2008年才将腮腺炎减毒活疫苗纳入免疫规划，既往的腮腺炎减毒活疫苗接种率低，儿童中存在着许多易感者，一旦有传染源就容易在集体儿童机构中可形成暴发或流行，严重影响儿童的身心健康。
尽管已将腮腺炎减毒活疫苗纳入免疫规划。
但由于种种原因至今仍缺乏完整系统的资料，尤其是腮腺炎病原学的资料，因此，开展腮腺炎病原学工作，收集分子流行病学资料，建立腮腺炎的基因库，了解腮腺炎病毒的分子特征和基因型分布，鉴定或鉴别病毒的来源，确定病毒的传播途径，评估控制策略效果和疫苗的筛选有着重要意义[2~4]。
根据中国现有的腮腺炎病毒的分子流行病学资料表明，目前中国只发现了F基因型腮腺炎病毒，尚未发现其它基因型病毒[2~6]，四川是一个腮腺炎大省，一直没有腮腺炎病原学的资料，2010-04-21四川省首次从内江隆昌县一起腮腺炎暴发疫情中的一个发病3d的病例咽拭子中分离到腮腺炎病毒，通过基因型别鉴定为F基因型，和中国其它省的流行基因型是一致的。
该病毒分离株与F基因型参考株聚集在同一进化分枝上，bootstrap值为96% 。
与F基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.8％～93.4％和94.7％～87.7％；与其他13个基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为91.8％～84.2％和86％～71.9％。
该病毒的成功分离填补了四川省的空白，建立了四川省腮腺炎病毒学的本底资料，为建立四川省的腮腺炎病毒基因库和丰富中国腮腺炎病毒基因库提供重要的依据。
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