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重组人促红细胞生成素的制备一、引言重组人促红细胞生成素（rHuEPO）是一种人工合成的蛋白质，可以刺激骨髓中的造血干细胞增殖和分化，促进红细胞的生成。
它被广泛应用于治疗各种类型的贫血，包括肾性贫血、癌症相关贫血等。
本文将介绍rHuEPO的制备过程。
二、rHuEPO的结构与功能rHuEPO是一种由165个氨基酸组成的糖蛋白，其分子量约为34kDa。
它在体内主要由肾脏分泌，但也可以由其他组织产生。
rHuEPO能够与红细胞前体细胞表面上的受体结合，并通过下游信号通路促进红细胞生成。
三、制备rHuEPO的方法1. 基因克隆制备rHuEPO的第一步是进行基因克隆。
目前已知有三种来源可供选择：人体、小鼠和大肠杆菌。
其中，以大肠杆菌为主要来源最为常见。
2. 转化表达将克隆得到的基因导入到表达载体中，再将载体导入到大肠杆菌中，使其表达rHuEPO蛋白。
这一过程需要进行多次筛选和纯化，以确保得到纯净的rHuEPO。
3. 后续处理经过转化表达后得到的rHuEPO需要进行后续处理，包括蛋白质结构分析、纯化、重组和活性检测等步骤。
其中，重组是指将rHuEPO与其他蛋白质结合形成复合物，以提高其生物活性。
四、rHuEPO的应用1. 治疗肾性贫血rHuEPO是治疗肾性贫血的常用药物之一。
它能够刺激骨髓中的造血干细胞增殖和分化，促进红细胞生成。
对于患有慢性肾病的患者来说，长期使用rHuEPO可以显著改善他们的生活质量。
2. 癌症相关贫血rHuEPO也被广泛应用于治疗癌症相关贫血。
由于化疗和放疗会对正常细胞造成损伤，从而导致贫血发生。
而rHuEPO的使用可以促进红细胞生成，减少贫血的发生率。
3. 运动员兴奋剂rHuEPO也被一些运动员作为兴奋剂使用。
由于它能够提高氧气输送能力，从而增加肌肉耐力和运动表现。
但这种使用方式是不合法的，并且存在一定的风险。
五、结论rHuEPO是一种重要的生物制品，广泛应用于治疗贫血等疾病。
其制备过程需要进行多次筛选和纯化，以确保得到纯净的rHuEPO。
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载重组人促红细胞生成素的生产与应用地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容重组人促红细胞生成素的生产与应用任雅怡3090102202摘要重组人促红细胞生成素是成功应用于生物医药领域的重组蛋白药物产品。
科研领域对其性质和合成方法已有了成熟的了解。
工业生产者也早已开始大量生产重组人促红细胞生成素，并且取得了不俗的市场成效。
关键词重组人促红细胞生成素生产工艺应用市场开发重组人促红细胞生成素的性质促红细胞生成素（erythropoietin,简称EPO）最早于1906年被发现。
EPO 属唾液糖蛋白激素，由165个氨基酸组成，为人体内源性化合物，糖基化位点为Asn24、Asn28、Asn83和Ser126,有2对半胱氨酸组成的二硫键(Cys7-Cys61和Cys29-Cys33)，分子量为34～36 ku (SDS-PAGE)、30.4 ku(超滤)或60 ku （凝胶电泳），疏水性极强,pI为3.75~4.15。
它主要来源于肾脏（少量来源于肝脏），由皮质管周围的间质细胞合成。
由基因重组技术合成的rhEPO相对分子质量为30400道尔顿，为含165个HYPERLINK "/92666/" \t "_blank" HYPERLINK "/225210/" \t "_blank" 氨基酸糖的酸性糖蛋白，由哺乳动物细胞培养产生，结构与天然EPO极为相似，其理化性质和生物学活性与天然内源性红细胞生成素相同。
其不同点是基因位点在7号染色体。
在基因重组技术诞生前，EPO主要从贫血患者的尿和绵羊血中提取，提取率非常低，且极不稳定，理化和生物性质难以测定。
用三步法纯化重组人促红细胞生成素技术方法李 琳 邓继先 卢建申 周 江军事医学科学院生物工程研究所 北京 100071【摘要】 用生物反应器培养中国仓鼠卵巢细胞2促红细胞生成素(CHO 2EPO )C2细胞株,培养上清液中重组人促红细胞生成素(rHuEPO )表达水平达2×106～3×106U/L 。
培养上清液经过三步纯化:第一步为反相色谱,可将样品体积浓缩约96.7%,其收集液经充分透析后进行第二步的DEAE 2离子交换色谱,最后进行分子筛色谱,总回收率为30%以上。
经纯化的rHuEPO 比活性为1.5×108U/g 蛋白,SDS 2PA GE 为一条带,扫描测试纯度达98%以上。
关键词 促红细胞生成素;纯化;色谱法中国图书资料分类法分类号 R392.11Purif ication of recombinant human erythropoietin to homogeneity by a rapid three 2step procedureL i L i n ,Deng Ji xian ,L u Jianshen ,Zhou JiangInstitute of Biotechnology ,Academy of Military Medical Sciences ,Beijing 100071Abstract Chinese hamster ovary 2erythropoietin (CHO 2EPO )C2cells were cultured in the packed bed bioreactor with free 2fetal bovine serum medium.Conditioned medium from the Bioreactor contained 2×106-3×106U/L of recombinant human erythropoietin (rHuEPO ).Crude rHuEPO from the con 2ditioned medium was purified by three 2step procedure to yield preparations with potency of 1.5×108U/g in 30%yield.The three steps involved :(1)reverse 2phase chromatography which made 302fold concentration ;(2)sufficient dialysis and purification with ion 2exchange chromatography ;(3)gel filtra 2tion.SDS 2PA GE result of the preparations showed a single band.Homogeneity was confirmed by UV scanning.K ey w ords erythropoietin ;purification ;chromatography 促红细胞生成素(erythropoietin ,EPO )是一种糖蛋白激素,它通过刺激红细胞前体细胞分化生成成熟红细胞以调节外周血红细胞水平。
