TRI zol 总RNA 提取试剂

Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液[准备不含RNase的水，将其装入不含RNase的玻璃瓶中，加入diethylpyrocarbonate (DEPC) to 0.01% (v/v)。

静置过夜，然后高压灭菌。

0.5% SDS溶液必须用DEPC预处理、高压灭菌的水]1、组织匀浆(1) 取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。

(2) 每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。

(3) 将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置5分钟，以彻底分离核蛋白复合体。

2、相分离加入0.2 ml的氯仿，加盖好后用手剧烈摇晃15秒，在15- 30°C放置2-3分钟，然后离心12,000× g，15 minutes ，2 - 8°C。

离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，一面是无色的水相。

RNA只存在于水相中。

水相占总TRIZOL的60%。

3、RNA沉淀将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入0.5ml异丙醇，静置10 minutes ，15 -30°C，然后离心12,000 × g ，10 minutes，2 - 8°C。

离心前可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀。

4、RNA洗涤去上清，加入1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀，振荡器混匀，离心7,500 × g ，5 minutes，2 -8°C。

5、RNA再溶解去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，（不能在真空中离心干燥）。

注意不能将RNA沉淀完全干燥，这样会极大地降低它的溶解度。

提取总rna的方法
总RNA是指从细胞或组织中提取出的含有所有类型RNA的混合物。

总RNA的提取是RNA研究的重要步骤之一，可以用于分析基因表达、RNA修饰、RNA结构等。

以下是一种常用的总RNA提取方法：材料与试剂：
- 细胞或组织样本
- TRIzol试剂（Invitrogen）
- 氯仿
- 异丙醇
- 离心管
- 离心机
- 热板
步骤：
1. 将细胞或组织样本加入到离心管中，用PBS或生理盐水洗涤
一遍。

2. 加入TRIzol试剂，按照试剂和样本的比例加入。

比例一般为1mL TRIzol/1g细胞或组织。

3. 用均质器将样本均质，使细胞或组织完全破碎，并使其与TRIzol完全混合。

4. 加入氯仿，并彻底混合，使其与TRIzol完全分离。

5. 离心管离心15分钟（4℃，12000rpm），使混合液分为两层，上层为清亮的上清液，下层为混浊的有机相。

6. 将上清液转移至新的离心管中，加入相同体积的异丙醇，混匀。

7. 离心管离心10分钟（4℃，12000rpm），使RNA沉淀在管底。

8. 倒掉上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心管离心5分钟（4℃，7500rpm）。

9. 将乙醇洗涤RNA沉淀挥干，加入适量的RNase-free水溶解即可。

注意事项：
1. TRIzol是一种强还原剂，需避免与其他化学物质接触。

2. RNA样本处理过程中需注意RNase污染的防止，使用
RNase-free试剂和器材。

3. RNA的保存需避免RNase污染和长时间保存，最好在-80℃低温下保存。

警告: 有毒物接触皮肤或者不慎吞服。

会导致灼伤。

一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。

若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分(JTSRN 80100437-5000p)的正确治疗方案。

）TRIZOL在室温下能稳定保存12个月。

尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2—8°C的环境下。

一般描述：TRIZOL试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。

它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。

加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。

RNA存在于水样层中。

收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。

在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。

乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。

论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。

TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。

所有的操作可以在一小时内完成。

TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA 和蛋白的污染。

故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。

如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用级联扩大的DNase I(Cat. No. 18068)来处理抽提的总RNA。

RIZOL试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。

例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1 和0.3 kb之间(tRNA, 5S)。

当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8预防RNA酶污染:提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。

TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。

其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。

TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。

主要成分：TRIzol的主要成分是苯酚。

苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。

苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。

TRIzol是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIzol能保持RNA完整性。

加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。

※ 0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。

※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

乙醇能够消除核酸的水化层 使带负电荷的磷酸基团暴露出来。

Na 之类的平衡离子能够与这些带电基团结合 在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。

因此只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀可以利用DNA和RNA在不同浓度的氯化钠水溶液中溶解度不同进行分离，RNA 核蛋白在易于溶解在0.14mol/L氯化钠溶液中但是DNA核蛋白在此浓度中难溶，然后便可以通过离心分离将两者分开，上清液中有RNA，沉淀含DNA，这样便可以分开了并且两者都会得到较好的保留而不会分解或者变性等。

希望您能采纳，盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同利用这一特点选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解而使杂质沉淀或者相反以达到分离目的 DNA 在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出而其他杂质还留在溶液中达到粗提取的目的酶水解法采用RNase（可以买）水解杂质RNA如果混入DNase酶可以采用100度加热15min使其失活 RNase不会失活反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、时加入蛋白酶K或加碘乙酸钠。

细胞总RNA的提取一、准备1、物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml 灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管2、打开冷冻离心机4℃预冷二、操作步骤：将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室。

1、取出EP管、做好标记2、取出细胞、收集上清保存备用3、用冷PBS冲洗细胞两次4、加入1ml Trizol （24孔板每孔加0.5ml即可），调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清（生化：摇动混匀后室温孵育10min）5、将裂解液转移至1.5ml灭酶EP管中，用黄枪头加入氯仿0.2ml（1/5 Trizol 体积），用手剧烈震摇15秒，置室温5min（生化：3min dxyer：15min），分层6、4℃、12000g（12300rcf）离心15min，可见分层。

7、用黄枪头小心收集上层水相约0.5ml置于另一1.5ml灭酶EP管中（确保不要吸入中间层和有机相）。

8、各管分别加入0.5ml异丙醇（等体积），用力摇匀，置室温10min。

（提前将异丙醇4℃预冷，或混匀后置-20℃ 60min，提取效果更好）9、4℃、12000g离心10min，可见RNA沉淀。

10、倒弃上清，用滤纸吸干管口余液，加入预冷的75%灭酶异醇1ml，用指轻弹管壁使RNA沉淀飘起洗涤。

11、4℃、7500g（7700rcf）离心5min，生化为10min，（亦有dxyer用12000g），沉淀即为总RNA。

12、弃上清，真空干燥约4min或空气中干燥5~10min，加入20祃（30祃）DEPC 水。

13、 56℃水浴小于10min助溶，取少量测OD值，其余-70℃保存备用。

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Trizol法提取总RNATrizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是基于氯仿-异硫氰酸胍的试剂，能够迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。

通过将样品与Trizol试剂混合，可以裂解细胞并释放出RNA。

然后加入氯仿进一步抽提RNA，并通过离心分离出上清液中的RNA。

最后通过乙醇沉淀和洗涤得到纯化的RNA。

所需试剂和耗材1.Trizol试剂：用于细胞裂解和RNA的释放。

2.氯仿：用于抽提RNA。

3.无水乙醇：用于洗涤沉淀的RNA。

4.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。

5.1.5ml Eppendorf管：用于RNA的存储。

6.Tips：用于吸取无RNA酶的水和Trizol试剂。

实验仪器1.台式高速离心机：用于离心分离RNA。

2.涡旋振荡器：用于混合样品和试剂。

3.移液器：用于吸取试剂和样品。

4.无菌微量离心管：用于样品和试剂的存储。

5.无菌手套：用于防止RNA酶的污染。

准备工作1.在实验前需要将实验区域和所有实验用具进行清洁和消毒，以避免RNA酶的污染。

2.使用Trizol试剂前需仔细阅读说明书，并确保按照说明书的要求进行操作。

3.为避免RNA酶的污染，需要穿戴无菌手套进行实验操作。

实验方法1.准备无菌的DEPC水，加入DEPC水至10ml，然后加入10μl的氯仿，充分混匀后放置备用。

2.在无菌的1.5ml Eppendorf管中加入100μl的Trizol试剂，加入10μl的氯仿，充分混匀后加入步骤1中制备好的DEPC水-氯仿混合液100μl，再次充分混匀后放置备用。

3.将样品加入到步骤2中制备好的溶液中，充分混匀后加入氯仿，再次充分混匀后进行高速离心，分离出上清液。

4.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的无水乙醇，充分混匀后进行高速离心，收集沉淀的RNA。

5.用70%乙醇洗涤沉淀的RNA，去除残留的乙醇和盐类，最后将RNA沉淀干燥后重新溶解在水中或指定的缓冲液中。

注意事项1.在加入氯仿之前，不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

TRIzol法提取真核细胞和动物组织总RNA简介TRIzol是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA试剂，可以从动物组织，真核细胞等中提取总RNA。

它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA。

加入氯仿离心后，溶液会形成上清层，中间层和有机层，RNA 分布在上清层中，收集上清层经异丙醇沉淀后便可以回收得到总RNA。

材料（1）试剂：RIzol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水、PBS 缓冲液等。

（2）器材：RNase Free EP管、冷冻离心机、组织匀浆器等。

实验步骤1、样品处理（1）细胞：收集细胞沉淀，加入1ml TRIzol吹打混匀。

（2）组织样品：取一小块样品于1.5ml离心管中，剪碎，加入TRIzol后匀浆器匀浆。

2、抽提RNA（1）室温孵育5min，加入200ul氯仿/1ml TRIzol，震荡混匀，室温静置3min。

（2）（提前预冷离心机）4°C ，12000×g离心15 min，离心后液体分为三层，小心吸取上层水相至新的EP管。

RNA在上层水相，中间层为DNA，下层为蛋白质。

吸上清时，不可吸到中间层，宁可少吸也不能多吸。

（3）加入500ul异丙醇/1ml TRIzol，上下颠倒混匀，冰上孵育10min。

（4）4°C ，12000×g离心10 min，弃上清。

（5）加入1ml 75%乙醇轻柔洗涤沉淀，短暂涡旋使沉淀漂起。

（6）4°C ，7500×g离心5 min，吸弃上清，静置干燥沉淀。

沉淀不能过干或过湿，待沉淀会变为半透明色即可。

（7）视沉淀量加入适量DEPC水溶解，轻轻吹打，-80°C长期保存。

3、总RNA 纯度、浓度和完整性检测（1）One Drop检测RNA纯度和浓度：纯净RNA的A260/A280的比值为2.0，小于1.9说明存在有机物污染，大于2.1则说明RNA发生了降解。

Trizol (总RNA抽提试剂)产品编号产品名称包装 R0016Trizol (总RNA抽提试剂)100ml产品简介：¾碧云天生产的Trizol是一种用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。

本产品采用和Invitrogen 公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步骤完全相同。

¾ Trizol的颜色和TRIzol相同，加入氯仿后上层呈无色，下层呈紫红色，便于吸取上层水相。

¾ Trizol对动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提均适用。

¾ Trizol可以抽提长达15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA。

抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。

¾ Trizol抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。

一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。

¾裂解细胞或和组织共匀浆时，Trizol可以保持样品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。

¾每一百万细胞用Trizol抽提可得5-15µg RNA；每毫克组织用Trizol抽提可得1-10µg RNA。

产量因细胞和组织不同而异。

¾抽提两个样品约需一小时。

¾ Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protection assay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deep sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。

¾碧云天生产的Beyozol(R0011)和Trizol(R0016)的成分有细微差别，实际抽提效果无任何显著差异。

¾每100ml Trizol可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。

包装清单：产品编号产品名称包装R0016 Trizol 100ml —说明书 1份保存条件：4℃保存，一年有效。

trizol法提取rna实验报告trizol 法提取 RNA 实验报告一、实验目的RNA 提取是分子生物学实验中的一项关键技术，本次实验旨在使用 trizol 法从细胞或组织样本中提取高质量的 RNA，为后续的基因表达分析、反转录 PCR（RTPCR）、Northern 印迹等实验提供纯净的RNA 样本。

二、实验原理Trizol 试剂是一种用于提取细胞或组织总 RNA 的常用试剂。

其主要原理基于以下几个步骤：1、裂解细胞：Trizol 中的苯酚和异硫氰酸胍能够迅速裂解细胞，使细胞内的蛋白质、核酸等成分释放出来。

2、抑制 RNA 酶活性：异硫氰酸胍能够有效地抑制细胞内源性和外源性 RNA 酶的活性，防止 RNA 的降解。

3、分离 RNA：加入氯仿后，通过离心将细胞裂解液分为三相：上层为无色的水相，主要包含 RNA；中间层为白色的蛋白层；下层为红色的有机相，主要包含 DNA 和蛋白质。

4、沉淀 RNA：吸取上层水相，加入异丙醇沉淀 RNA。

5、洗涤 RNA：用 75%乙醇洗涤沉淀的 RNA，去除杂质。

三、实验材料与试剂1、材料培养的细胞系（如HeLa 细胞）或新鲜组织样本（如小鼠肝脏组织）2、试剂Trizol 试剂（Invitrogen 公司）氯仿（分析纯）异丙醇（分析纯）75%乙醇（用无水乙醇和 DEPC 处理水配制）DEPC 处理水（用于配制 75%乙醇和溶解 RNA）无 RNA 酶的离心管、移液器吸头3、仪器设备台式离心机移液器涡旋振荡器恒温水浴锅核酸蛋白测定仪（Nanodrop）四、实验步骤1、样本处理细胞样本：将培养的细胞收集到离心管中，离心弃去培养基，用PBS 洗涤细胞两次，离心弃去 PBS。

组织样本：将新鲜组织切成小块，放入液氮中速冻，然后转移至研钵中，加入适量 Trizol 试剂，迅速研磨成匀浆。

2、加入 Trizol 试剂对于细胞样本，按照每 1×10^6 个细胞加入 1 mL Trizol 试剂的比例加入 Trizol，反复吹打使细胞充分裂解。

鼠疫菌大片段RNA提取方案（LiCL沉淀）【器材准备】（一）试验器材准备1.DEPC处理的水:(DMDC) 0.1%将1ml DEPC加入1L去离子水中，剧烈混匀，37℃过夜后，高压灭菌15-20min.2.0.5×TBE(DEPC处理的水配制):3.玻璃器皿准备玻璃器皿处理：在150℃-200℃烘烤4-6h，可去除RNA酶污染。

4.塑料器材处理：将塑料管、EP管等置于0.5M N aOH浸泡10min,再用灭菌双蒸水彻底冲洗后，高压灭菌。

（二）试剂准备1.3M醋酸钠（分子量82.03，pH5.2 ）用70ml DEPC处理的水溶解24.6g无水醋酸钠，用冰醋酸调pH5.2，用DEPC处理的水定容至100 ml，再高压灭菌。

2.75%乙醇(DEPC处理的水配制)：配制200ml。

方法：取无水乙醇150ml,加入用DEPC处理的水50 ml，即得75%乙醇（DEPC处理）3.5M LiCl（分子量42.39，5M LiCl、20 mM Tris-HCl, pH 7.4, and 10 mM EDTA）方法：取21.2g的LiCl溶于70ml DEPC处理的水，0.2423g Tris, 0.2923 g EDTA,调pH7.4，定容至100ml，高压灭菌。

4. 5×TBE（500ml）Tris （分子量121.14 ,890mM）. 54g硼酸（分子量61.83 ,890mM）. 27.5gEDTA (分子量292.25,20 mM pH 8.0) 2.92 g向烧杯中加无菌去离子水400ml溶解以上成分，调pH 8.0定容到500ml。

用时稀释10倍使用。

【实验步骤】1.细菌培养鼠疫菌122接种至4ml TMH培养基（含100μM FeSO4）中，26 °C培养至OD620nm=0.8-1.0。

培养物20倍分别稀释到2只4ml新鲜TMH培养基（含100μM FeSO4）中，26 °C培养至OD620nm=1.0，收集提取菌体总RNA。