RNA提取方法
- 格式：pdf
- 大小：490.38 KB
- 文档页数：12
下载文档原格式
合集下载
rna提取方法及原理
rna提取方法及原理RNA是一种生物大分子，具有非常重要的生物学功能，在生物研究中有着广泛的应用。
为了研究RNA的功能和结构，科学家们需要从细胞中提取出RNA。
本文将介绍RNA提取的几种常用方法及其原理。
一、酚/氯仿法酚/氯仿法是RNA提取的一种经典方法，它基于RNA和DNA的物理性质差异进行分离。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织经过低温致裂，使细胞膜破裂释放出RNA。
2. 酚酸提取：加入酚酸溶液，与DNA形成两相体系。
RNA主要溶于上层的酚酸相中，而DNA则主要溶于下层的酚氯仿相中。
3. 氯仿提取：将上层的酚酸相与下层的酚氯仿相分离，得到含有RNA的上层液体。
4. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。
酚/氯仿法的原理是利用RNA和DNA的溶解度差异以及RNA在酚酸上层相中的亲和力较大，从而实现RNA的提取。
二、硅胶膜柱法硅胶膜柱法是一种常用的RNA提取方法，它使用硅胶膜柱与试剂盒结合，以实现RNA的高效提取。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA不受降解酶的影响。
2. 结合：将破碎后的细胞溶液与硅胶膜柱结合，RNA结合到硅胶膜柱的表面。
3. 洗涤：通过洗涤剂洗去杂质和其他污染物，保留纯净的RNA在硅胶膜柱上。
4. 解吸：将洗涤后的硅胶膜柱加入含有RNase-free水的管中，使RNA从硅胶膜柱中解离。
5. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。
硅胶膜柱法的原理是利用硅胶膜柱的高亲和性和离心过滤来纯化RNA，同时通过试剂的作用保护RNA免受降解酶的影响。
三、磁珠法磁珠法是一种高效且易于自动化的RNA提取方法，它利用磁珠表面的化学基团与RNA分子进行特异性结合。
该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA稳定。
提取细胞中的rna的方法
提取细胞中的rna的方法提取细胞中的RNA是一项重要的实验技术，它能够帮助研究人员深入了解RNA在细胞中的生物学功能及表达调控机制。
下面将介绍几种常见的RNA提取方法。
1. TRIzol法TRIzol法是一种广泛应用于RNA提取的方法。
该方法基于TRIzol试剂对细胞或组织样品中RNA的溶解作用，通过氯仿沉淀和酒精洗涤来纯化RNA。
该方法简单易行，适用于各种类型细胞和组织，同时提取的RNA质量较好，但相对来说RNA纯度不高。
2. 磁珠法磁珠法是一种全自动化的RNA提取方法，通过使用磁性珠子将RNA 特异性结合剂捕获目标RNA，再通过磁力将磁性珠子从混合物中分离出来。
该方法操作简便，具有较高的RNA纯度和产量，且适用于从小样品中提取RNA。
3. 柱式纯化法柱式纯化法即RNA纯化柱法，基于RNA特异性结合柱将RNA捕获，由于RNA与柱子上的化学物质发生特异性亲和作用，其它核酸和蛋白质可以被去除。
该方法RNA纯度高，产量也比较可靠。
4. 整体细胞RNA提取法整体细胞RNA提取法采用混合酚（phenol）和氯仿（chloroform）作为RNA溶解和分离剂，该方法能够直接溶解细胞膜来提取细胞中的RNA。
整体细胞RNA提取法的优点在于它可以同时纯化RNA和DNA，同时提取的RNA产量较高，但RNA质量不够纯粹。
5. 分子降解法分子降解法是使用各种离子、化学物质和酶来切断RNA的方法，从而释放出RNA。
该方法适用于各种细胞和组织类型，它在纯化RNA的同时能够消除能降解和干扰RNA研究的RNA样品，提高RNA纯度。
但该方法RNA产量比较低，不适合处理大量样品。
总之，以上提取RNA的方法各有优缺点，选择哪种方法取决于实验目的、样品类型和实验条件等因素。
rna提取的流程和方法
rna提取的流程和方法RNA提取的流程和方法一、RNA 提取流程1、实验准备在RNA提取前，需要准备一些实验用品，如RNA提取试剂盒、干净的Eppendorf管、试剂管盒等。
2、组织采集从实验材料（如组织）中采集适量样品，将其添加到实验管中，并用恰当的液体（如液氮）固定。
3、细胞分离和消化将固定过的样品放置在消化槽中，并加入相应蛋白酶（常用的蛋白酶有 Protease、 DNase I 等）。
待消化完成后，细胞就可以分离出来，得到小分子和线粒体RNA。
4、细胞悬液处理细胞和消化液将放置在分离机中，以速度较快的离心来分离细胞悬液和上清液，获得纯净的细胞悬液，以及细胞内的RNA。
5、病毒筛选针对实验中可能存在的病毒，在RNA提取后期，可以采用专门的病毒筛选技术来检测病毒的存在与否，用以保证实验结果的可靠性。
6、RNA 提取利用加热或冷冻方法来预处理细胞悬液，再加入性质非常活跃的提取试剂，分离出RNA，最后经酶抑制剂处理，即可实现RNA的提取。
7、RNA 质量检测采用实时定量荧光PCR（qPCR）或定量实时荧光 PCR（qRT-PCR）技术，对提取出来的RNA进行质量检测，以确定RNA的质量是否满足后续研究的要求。
8、实验结束实验完成后，将所有的实验用品清洗干净，并完成实验报告记录和记录实验结果，结束实验。
二、RNA 提取方法1、常规方法（1）分离法利用细胞成分的不同溶解度，将细胞内的RNA和DNA分离出来，如甲醇分离法、混合洗涤法、膜过滤法等，然后将DNA除去，即可得到纯化的RNA样品。
（2）磁珠法采用特定的磁珠技术，通过磁场的作用，将RNA结合在磁珠上，然后加入洗涤液，脱除磁珠上的杂质和有害物质，最终得到纯化的RNA样品。
2、新型方法（1）多尺度细胞抗分离法利用细胞的多尺度的抗性，通过不同直径的磁珠把细胞内的RNA 分离出来，可以节约实验时间，并有效提高细胞内RNA的收量、纯度和活性。
（2）膜过滤法采用膜过滤的方法，可以快速准确的将细胞内的RNA纯化，提高RNA的收率，并保护RNA免受外界环境的破坏，为实验提供良好的保护条件。
提取rna的方法
提取rna的方法RNA（核酸）是一种由核苷酸构成的高分子，有多种类型，诸如mRNA、rRNA、tRNA等，比较常见的是 mRNA 和 rRNA，是细胞生物学中最重要的两种类型。
提取 RNA 是细胞和分子生物学方面的重要实验步骤，可以用于基因表达和基因组学研究，其重要性不言而喻。
提取 RNA 的方法有很多种，具体而言，包括三种主要类型：一是病理化学的方法，主要是通过破碎细胞，并利用琼脂糖或氯化钠中和病理性酶来抑制除特定 RNA 外的其他核酸类型，从而提取所需的 RNA；二、利用分子生物学的技术，主要是采用逆转录PCR（RT-PCR）技术，利用逆转录酶将 RNA 转化为 DNA，然后扩增 DNA，从而提取 RNA；三、生物学分离技术，主要是利用乙醇分离技术、酰胺衍生法等技术，从样品中提取 RNA。
第一种技术首先需要将细胞分解成一种适合于提取技术的状态，实现这一目标可以使用一种适当的细胞毒性剂和破碎分解剂，以及一系列化学试剂。
病理化学方法试图通过机体的物理过程和化学反应来分离出特定的 RNA，其核心就是中和病理性酶，并使用琼脂糖或氯化钠之类的物质来吸收其他核酸，实现纯化 RNA 的目的。
第二种技术是利用分子生物学技术来提取 RNA，具体步骤是将样品中的 RNA 放入实验室内，利用逆转录酶将其转化为 DNA，再进行 PCR 扩增，利用酶切手段提取所需的RNA。
这种技术易于操作，能够直接提取 RNA，是一个比较好的技术。
最后一种技术是利用生物学分离技术，具体方法有乙醇分离技术和酰胺衍生法等，由于它们有不同的分子量、电荷和氨基酸残基，因此可以使用不同的材料来做抑制，从而提纯出特定的 RNA 前体分子，实现提取特定 RNA 的目的。
rna的提取方法
rna的提取方法
1.细胞或组织的采集：采集样品时应尽量避免RNA的降解或污染，可使用RNase-free工具和试剂，避免手套和工作表面受到RNase污染。
2. 细胞或组织的破碎：可使用机械方法、化学方法或冻融法等
方法将细胞或组织破碎，释放RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化可使用酚/氯仿法、商用RNA纯化试
剂盒等方法。
其中，酚/氯仿法是最常用的RNA纯化方法。
该方法利
用酚将RNA从DNA和蛋白质中分离，然后通过氯仿的密度梯度离心分离出RNA。
4. RNA的质量检测：RNA的纯化后，需要进行质量检测，以确保RNA的完整性和纯度。
可使用紫外线吸收法、琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测。
5. RNA的保存：RNA的保存应避免RNA降解，需使用RNase-free 的保存液，如RNAlater等，或在零下80℃的冷冻库中保存。
- 1 -。
rna提取方法及原理 -回复
rna提取方法及原理 -回复RNA提取方法及原理引言：RNA（Ribonucleic Acid），核糖核酸，是DNA的姐妹分子，在细胞中具有多种功能，包括催化化学反应和携带遗传信息。
研究RNA的结构和功能对于理解生物学和疾病发生机理至关重要。
而RNA的提取是研究RNA的第一步，本文将介绍RNA提取的方法和原理。
一、总体原则RNA提取的总体原则是要快速、高效地获得高质量的RNA。
在提取过程中，需要注意避免RNA的降解和污染，并且尽量减少DNA和蛋白质的污染。
二、RNA提取方法目前常用的RN A提取方法主要有以下几种：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：这是最早应用的RNA提取方法之一。
其原理是通过酚酸的溶解作用和氯仿的去除作用来实现R N A的提取。
该方法通常包括细胞裂解、DNA和蛋白质的去除和RNA的沉淀等步骤。
2. 硅胶柱法（Silica Column-based Method）：硅胶柱法是一种高效的RNA提取方法，其基本原理是利用硅胶柱中的硅胶微球与RNA的亲和力，将RNA固定在柱上，而去除杂质。
该方法一般包括裂解、去除D NA和蛋白质、加入条件性溶解剂、将样品通过硅胶柱、洗脱RNA等步骤。
3. 磁珠法（Magnetic Bead-based Method）：磁珠法利用磁珠颗粒的特性，将RNA通过磁性吸附来分离和提取。
该方法通常包括样品裂解、去除DNA和蛋白质、加入磁珠颗粒、磁珠的洗脱和洗净等步骤。
三、RNA提取方法的原理不同的RNA提取方法有不同的原理，下面将以酚/氯仿法为例进行详细说明。
1. 细胞裂解首先，细胞必须被裂解，以释放RNA。
裂解的方法可以根据样品的特性选择，常用的方法包括刮取法、超声法和酶解法等。
刮取法是指将细胞沉淀刮取到离心管中，然后用细胞裂解缓冲液进行裂解。
超声法是利用超声波的机械能来破坏细胞膜。
酶解法则是通过加入细胞裂解酶来酶解细胞。
RNA提取方法总结
RNA提取方法总结这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。
1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为 1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA 沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。
使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。
此法提取的RNA 的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细胞RNA的常规方法。
其缺点是操作复杂、流程长，一次提取的样品数量有限。
2、盐酸胍-有机溶剂法本法有MacDonald 1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的，适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。
它利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，有机溶剂抽提去除蛋白质，通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA，提取的RNA质量较好，但整个操作过程繁杂费时。
3、氯化锂-尿素法本法首先由Auffray报道，利用高浓度尿素变性蛋白质同时抑制RNA 酶，3mol/L LiCl选择性沉淀RNA。
其缺点是有时会存在DNA污染，LiCl 沉淀RNA会丢失一些小分子量的RNA，如5S RNA等。
优点是快速简捷，尤其适用于大量样品少量组织细胞的RNA提取，其质量可以满足Northern分析，Oligo(dT)提取mRNA，SI核酸酶或RNase保护实验等。
本法每提取107个细胞能提取总RNA约10 g。
4、热酚法本法主要用于少量细胞样品RNA提取，其产量不高，但简单易行。
5、快速提取法本法主要用于培养细胞，通过0.5%SDS裂解细胞，酚抽提去除蛋白质和DNA沉淀，快速纯化RNA。
6、细胞质RNA提取法本法主要适用于培养细胞，首先去除细胞核，然后用蛋白酶K消化蛋白质，酚/氯仿抽提去除蛋白质。
操作简单，同时能进行多个样品操作，多数步骤在室温下进行，提取的RNA质量较高，可满足体外无细胞翻译系统、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保护实验。
提rna步骤及原理
提rna步骤及原理RNA是一种重要的生物大分子，它参与了许多基因表达和调控过程。
研究RNA的结构和功能对于理解生物体内的生物学过程至关重要。
下面将介绍RNA的提取步骤以及其原理。
1. 细胞破碎：首先需要破碎细胞壁，使RNA释放出来。
可以通过机械破碎、酶解或超声波破碎等方法，将待提取的细胞或组织进行处理，使其细胞壁破裂。
2. 蛋白质消化：为了去除细胞中的蛋白质，需要进行蛋白酶处理，将蛋白质分解释放RNA。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、蛋白酶ase等。
3. RNA沉淀：利用盐溶液将RNA沉淀下来。
常用的盐溶液有醋酸钠、氯化钠等。
加入盐溶液后，RNA会形成带负电荷的物质，与阳离子结合形成沉淀。
4. RNA纯化：通过将RNA溶解于适当的缓冲液中，并加入醇类或其他试剂，去除干扰物质如DNA、蛋白质和多余的盐等。
这里主要利用了RNA在不同条件下的溶解性差异，从而将RNA纯化。
5. RNA沉淀及洗涤：使用无水乙醚、异丙醇等有机溶剂，将纯化后的RNA沉淀下来。
然后进行洗涤以去除残留的盐和其他杂质。
6. RNA溶解：将RNA沉淀融于适当的溶液中，如去离子水或缓冲液，以便后续实验的进行。
RNA提取的原理主要基于RNA具有独特的化学结构和物理性质。
RNA是由核苷酸组成的，与DNA相似，但其具有URACIL（U）碱基而非胸腺嘧啶（T）碱基。
RNA在细胞内参与转录和翻译过程，是转录过程产生的物质，通过提取RNA可以获得物种特异性的RNA序列，进而进行RNA测序、定量PCR等分子生物学实验。
在RNA提取过程中，细胞破碎、蛋白质消化、RNA沉淀、纯化及溶解等步骤的设计，使得RNA能够被高效地提取出来，并且不受到外界干扰物质的影响，确保获取纯净的RNA样品，用于后续的实验分析。
rna提取方法
rna提取方法RNA提取方法。
RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。
在进行RNA提取时，我们需要选择合适的提取方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保提取到高质量的RNA样品。
本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤，希望能对您的实验工作有所帮助。
1. 常用的RNA提取方法。
（1）酚/氯仿法，这是最常用的RNA提取方法之一，通过酚和氯仿的相分离，将RNA从细胞裂解液中提取出来。
该方法操作简单，适用于大多数样品类型，但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性，需要在安全通风下进行操作。
（2）硅基柱法，该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA，通过洗脱的方式提取RNA。
该方法操作简便，提取效率高，且对DNA和蛋白质有较好的去除效果，适用于高质量RNA的提取。
（3）磁珠法，磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合，通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。
该方法操作简单，易于自动化，且对样品量要求较低，适用于高通量样品的提取。
2. RNA提取操作步骤。
（1）样品裂解，将待提取RNA的样品进行裂解，一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎，释放RNA。
（2）酚/氯仿提取，将裂解液与酚/氯仿按比例混合，离心分离出上清液中的RNA。
（3）酒精沉淀，向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇，使RNA沉淀出来，再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。
（4）溶解RNA，用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物，得到可用于后续实验的RNA样品。
3. 注意事项。
（1）操作环境，在进行RNA提取时，需要在RNase-free的环境下进行操作，避免RNA受到RNase的污染。
（2）样品保存，裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存，以避免RNA的降解。
（3）避免污染，在操作过程中需要避免外源RNA的污染，使用RNase-free的试剂和耗材，并注意操作规范。
（4）质量检测，提取得到的RNA样品需要进行质量检测，包括浓度、纯度和完整性的检测，以确保提取到高质量的RNA。
rna的提取方法
rna的提取方法RNA的提取是从生物样品中获取RNA的过程，这个过程通常包括以下几个步骤：1. 样品收集：根据需求选择生物样品，如细胞、组织、血液等，并采用合适的方法收集。
2. 细胞破碎：通过细胞破碎，将细胞内的RNA释放到溶液中。
破碎方法包括机械破碎、超声波破碎、化学破碎等。
3. RNA分离：分离RNA和其他分子，如DNA、蛋白质等。
4. RNA纯化：将RNA纯化，去除杂质，获得高质量RNA。
纯化方法包括硅胶柱层析、离心管基质层析等。
下面详细介绍三种常用的RNA提取方法：1. 酚-氯仿法这种方法可用于组织和细胞的RNA提取。
首先使用酚将细胞或组织破碎，然后加入等体积的氯仿，混匀，使DNA和蛋白质沉淀于底部，RNA在上层水相中得到富集。
再通过异丙醇沉淀，将RNA分离出来。
最后，通过洗涤和纯化过程，得到高质量RNA。
酚-氯仿法是一种经济、简单和高收率的提取RNA的方法。
2. 硅胶柱纯化法该方法是一种高效、快速且高纯度的RNA提取方法，适用于多样品处理。
该方法使用硅胶柱将RNA分离，并消除DNA和酶的污染。
该方法能够从各种样本中提取高品质RNA，可用于测序、杂交和原位杂交等分子生物学应用。
3. 针头粘贴法这种方法是一种快速简单的RNA提取法，特别适用于某些免疫细胞和细胞样品。
利用针头从样品中取出细胞，将其粘贴在聚丙烯酰胺凝胶上，通过离心将RNA分配到凝胶上。
该方法提取RNA量小，但可以高度升质和纯化的RNA，是一种快速且相对简单的RNA提取方法。
总之，根据不同的实验目的，可选择适用于不同的RNA提取方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3. Total RNA 的提取。 ① 向上述步骤 2 的匀浆裂解液中加入氯仿（RNAiso Plus 的 1/5 体积量），盖紧离心管盖，用手剧烈 振荡 15 秒（氯仿沸点低、易挥发，振荡时应小心离心管盖突然弹开）。待溶液充分乳化（无分相 现象）后，再室温静置 5 分钟。 ② 12,000 g 4℃离心 15 分钟。 ③ 从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液、中间的白色蛋白层及带 有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中（切忌吸出白色中间层）。 ④ 向上清中加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，在 15～30℃下静置 10 分钟。 ⑤ 12,000 g 4℃离心 10 分钟。一般在离心后，试管底部会出现沉淀。 -2-
图 1.动物组织 RNA 提取结果电泳图
2. 从植物组织中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从马铃薯块根、香菇子实体、烟草叶片、水稻叶片、芒果果实、花生果实等组织中提取 了 Total RNA，电泳结果见图 2。
1 2 3 4 5 6 M1
1% Agarose 凝胶电泳图 M1：DL2,000 DNA Marker 1：马铃薯块根 2：香菇子实体 3：烟草叶片 4：水稻叶片 5：芒果果实 6：花生果实
● 制品组成
RNAiso Plus*
100 ml
* RNAiso Plus 中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请 立即到医院进行处理。
【试剂盒之外所需准备试剂】 ◆ 氯仿 ◆ 异丙醇 ◆ 75%乙醇（DEPC 处理水配制） ◆ RNase-free 水（制备方法：使用 RNase-free 的玻璃瓶，向超纯水中加入 DEPC 至终浓度 0. 1%
2. 有关 RNA 的吸光度说明如下： 260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白质 等有机物的吸光度值。OD 260 /OD 280 （R）体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的 RNA的R值应在 1.8～2.2 之间，当R<1.8 时，溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显；当R> 2.2 时， 说明RNA已经被水解成了单核苷酸。 在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用 TE Buffer。
RNAiso Plus 具有以下特性： 1. 广谱性强。可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取 Total RNA。 2. 纯度俱佳。提取的 Total RNA 纯度高，基本不含蛋白质及基因组 DNA，可以直接用于 Northern 杂交、
斑点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 分解酶的。实验操作快速方便，整个操作在一小时内便可完成。 4. 颜色鲜明。加入氯仿离心后，会形成无色的上清层和鲜红色的下层（有机层）。
1% Agarose 凝胶电泳图 M1：DL2,000 DNA Marker 1：HL-60 细胞 2：HT293 细胞 3：CHO-K1 细胞 4：Hela 细胞 5：香菇培养菌丝 6：酵母培养细胞 7：E.coli JM109 细胞
图 4.各种培养细胞 RNA 提取结果电泳图
● Troubleshooting
【使用器具】 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。 （1） 用 0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在 37℃下处理 12 小时。 （2） 然后在 120℃下高压灭菌 30 分钟以除去残留的 DEPC。 RNA 实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。
【试剂配制】 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60 分钟）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的 玻璃容器盛装（也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后再 进行高温高压灭菌。 RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
4. RNA 沉淀的清洗。 小心弃去上清，缓慢地沿离心管壁加入 75％的乙醇 l ml（切勿触及沉淀），轻轻上下颠倒洗涤离心管管 壁，12,000 g 4℃离心 5 分钟后小心弃去乙醇（为了更好地控制 RNA 中的盐离子含量，应尽量除净乙 醇）。
5. RNA 的溶解。 室温干燥沉淀 2～5 分钟（不可以离心或加热干燥，否则 RNA 将会很难溶解，有关 RNA 溶解可以参 考 Troubleshooting 中的相关说明），加入适量的 RNase-free 水溶解沉淀，必要时可用移液枪轻轻吹 打沉淀，待 RNA 沉淀完全溶解后于-80℃保存。
● RNA 提取操作流程简图
适量的动植物组织或培养细胞 加入适量的 RNAiso Plus 后匀浆
室温静置 5 分钟 12,000 g 4℃离心 5 分钟， 上清转移至新的 1.5 ml tube 中
加入 1/5 RNAiso Plus 体积量的氯仿 振荡混匀
室温静置 5 分钟 12,000 g 4℃离心 15 分钟
图 3.全血 RNA 提取结果电泳图 -4-
4. 从培养细胞中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从 HL-60 细胞、HT293 细胞、CHO-K1 细胞、Hela 细胞、香菇培养菌丝、酵母培养细 胞、E.coli JM109 细胞等培养细胞中提取了 Total RNA，电泳结果见图 4。
M1 1 2 3 4 5 6 7
M1 1 2 3 4 5 6 7 8
1% Agarose 凝胶电泳图 M1：DL2,000 DNA Marker 1：Rat Liver 2：Rat Heart 3：Rat Brain 4：Rat Spleen 5：Rat Kidney 6：Rat Small Intestine 7：Rat Skeletal 8：Rat Pancreas
将上清液转移至新的离心管中 加入与上清液等体积的异丙醇
室温静置 10 分钟 12,000 g 4℃离心 10 分钟
向沉淀中加入 1 ml 的 75%乙醇清洗沉淀 12,000 g 4℃离心 5 分钟
弃上清保留沉淀 干燥
溶解于适量的 DEPC 处理水中
-3-
● 实验例
1. 从动物组织中提取 Total RNA。 使用本试剂盒从大鼠肝脏、心脏、脑、脾、肾、小肠、骨骼肌、胰腺等组织中提取了 Total RNA，电 泳结果见图 1。
（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。）
● 保存和运输
1. 可以在室温下保存，建议在 2-8℃下避光保存，效果更佳。 2. 可以在常温下运输。
● RNA 提取实验前的准备
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此， 在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用 RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等 等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
RNAiso Plus使用量（ml） 1
1~2 2 2 1 2 1
2. 实验样品的研磨和匀浆。 A. 贴壁培养细胞
① 倒出培养液，用 1×PBS 清洗一次。 ② 每 10 cm2生长的培养细胞中加入 1 ml的RNAiso Plus，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞
表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥 离细胞）。 ③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置 5 分钟。 B. 悬浮培养细胞 ① 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 g 4℃离心 2 分钟，弃上清。 ② 向每 107个细胞中加入l~2 ml的RNAiso Plus。 ③ 用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置 5 分钟。 C. 动物组织、植物材料样品 ① 将超低温冻结的 RNA 提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间 不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响 RNA 的收率 和质量）。 ② 对于普通的 RNA 提取样品，可以向研钵中加入适量的 RNAiso Plus，将研磨成粉末状的样品完全 覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。 对于特殊样品，如肝、脾、骨及软骨等，可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的 RNAiso Plus 的匀浆管中，把匀浆管置于冰浴中进行匀浆，直至匀浆液呈无颗粒透明状。 ③ 将匀浆液转移至离心管中，室温静置 5 分钟。 ④ 12,000 g 4℃离心 5 分钟。 ⑤ 小心吸取上清液，移入新的离心管中（结果电泳图
3. 从全血中直接提取 Total RNA。 从全血中提取 RNA，通常需要分离白细胞，而使用 1 ml 本试剂可以直接从 100 μl 全血中提取 Total RNA，电泳结果见图 3。
M1 1 2
1% Agarose 凝胶电泳图 M1：DL2,000 DNA Marker 1：-80℃保存的全血样品 2：新鲜的全血样品
页码
1 1 1 1 2 3 4 5 6
注意事项
本制品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、 吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护 物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时， 应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗；接触到皮肤时，应立即用大 量的聚乙二醇 400（Polyethylene glycol 400）冲洗，严重时请前往医院 治疗；使用本制品后感觉不舒服时请前往医院治疗。
1. 一般情况下的组织或细胞中所能提取的 RNA 量如下表：
组织材料 血
白细胞 肝脏 HL-60培养细胞 烟草叶片 肾脏 骨骼肌
脑
起始样品量 1 ml
1×107个 1g
1×107个 1g 1g 1g 1g
Total RNA提取量 15～20 μg
约20～40 μg 约5,000 μg 约100 μg 约1,000 μg 约3,000 μg 约1,500 μg 约1,500 μg