HIV-1

HIV-1抗原检测技术规范1 范围本章规定了HIV-1P24抗原检测的方法和用途。

适用于对人血液标本和病毒培养上清液中HIV-1P24抗原的检测。

2 规范性引用文件NIAID，Virology Manual for HIV Laboratory, NIH Publication,No.97-3828, Jan 19973 HIV－1P24抗原检测的意义3.1 HIV-1感染窗口期、HIV抗体不确定或HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。

3.2 第四代HIV检测试剂的阳性结果的辅助诊断。

3.3 监测病程进展或抗病毒治疗效果。

3.4 HIV分离培养，病毒复制状况的监测。

4 实验室要求同HIV抗体检测。

5 检测方法及程序5.1 试剂：抗体夹心ELISA方法，应使用经国家药品监督管理局批准注册的试剂。

5.2 样品：血清、血浆或病毒培养上清液。

5.3 定性检测5.3.1 筛选试验按照试剂盒说明书提供的标准判断有反应或无反应。

5.3.2 确证试验是P24抗原的中和试验，用于排除筛选试验的假阳性。

待检样品先与中和剂（P24 抗原的抗体）共同孵育，如果样品中存在P24抗原，中和抗体将与之结合形成复合物，而不能与固相载体上的捕获抗体结合。

然后，用这样处理过的样品重复筛选实验的步骤，同时做一孔未中和的原始样品对照，将中和与未中和孔的OD值进行比较，如果中和孔的OD 值下降50 % 以上，认为样品中的P24 抗原是真正的阳性；如果中和孔没有出现OD值的下降，认为P24抗原的反应性可能是假阳性，需要做RNA检测或随访做进一步确证。

5.4 定量检测将 P24抗原的标准物质稀释成包含0.0和125pg/ml 二个浓度在内的六个不同浓度的系列标准，进行检测。

以横坐标为P24抗原的浓度（pg/ml ），纵坐标为OD值，绘制出标准曲线。

测出未知标本的OD值以后，在标准曲线上查出抗原的浓度。

如果未知标本的OD值超出标准曲线上最高抗原浓度的OD值，则需用正常人血清将标本稀释以后再行检测。

中国艾滋病性病2021年5月第27卷第5期Chin J AIDS STD Vol.27 No.5 May 2021557 DOI: 10.13419/ki.aids.2021.05.31HIV-1潜在病毒库的研究进展赵胜男，陈晓红(哈尔滨医科大学附属第四医院感染科，哈尔滨，150001)摘要：尽管应用了 ART，HIV-1感染的细胞仍然长期存在，这是治疗HIV-1的主要障碍。

晚期感染的记忆性CD4细胞是导致病毒持续存在的主要细胞类型，但一些研究表明，非T细胞也可以作为长期的病毒库。

目前利用潜伏期反转剂(LRAs)暴露潜伏的HIV-1和通过免疫效应功能杀死暴露细胞的“激活和杀伤”策略得到越来越多人的关注，而艾滋病功能性治愈又逐渐成为目前艾滋病治疗中的研究热点。

本文对体内潜伏HIV的细胞、病毒库的持续机制及治疗策略的研究进展进行综述。

关键词：艾滋病病毒；病毒库；治疗策略中图分类号：R 373.9 文献标志码：A文章编号：1672-5662(2021)05-0557-04Research advance on the latent reservoir for HIV-1 ZHA O Shengnan, CHEN Xiao h ong. (Department o f Infectious Diseases, the Fourth Ajfiliated Hospital o f H arbin Medical University, Harbin 150001, China)Corresponding author:CHEN Xiaohong,Email:catherine89034@Supported by the National Science and Technology Major Project (2017ZX10202102-004-001,2018ZX10302104-G O1-005); the Natural Science Fund of Heilongjiang Province(C2017043)Abstract: Reservoirs of HIV-1-infected cells persist long-term despite highly active antiretroviral therapy(ART)and represent the main barrier against a cure for tently-infected memory CD4 cells are the predominant cell compartments responsible for viral persistence,but some studies suggest that non-T cells can also serve as long-term viral reservoirs.The"shock and kill"strategy aiming to expose latent HIV-1with latency-reversing agents(LRAs)and kill the exposed cells through immune effector functions is currently attracting more attention.The functional cure of AIDS seems to be a hot spot in the current treatment of AIDS.This paper reviews the recent progress of HIV-1reservoirs on latent cells in vivo,persistence mechanism,and therapy strategies.Keywords: HIV-1;reservoirs;therapy strategiesART的问世提高了 HIV感染者治愈的可能性，使许多患者的病毒血症急剧下降至低于检测下限然而,ART并不能从人体内消除所有受H1V感染的细胞，一旦ART中断，这些受感染的细胞就会刺激病毒的反弹复制，并导致高水平的病毒血症潜伏感染的静息CD4细胞能够提供终生复制的HIV-1,这个潜在病毒库的半衰期约44个月按照这种速度，至少需要60年的治疗才能根除病毒库，这使得通过目前的AKT来根除HIV变得不切实际。

HIV-1病毒载量试剂1技术参数1.名称：人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）。

2.用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。

3.原理：应用实时荧光定量聚合酶链式反应原理。

4.检测项目：HIV-1RNA定量检测。

5.检测亚型：HIV-1M、O组。

6.检测方法：全自动核酸分离纯化，全自动核酸扩增和实时荧光PCR方法。

7.适用样品种类：非肝素抗凝血浆。

8.定量方式：内部标准品定量。

9.质控品：提供阴性、弱阳性、强阳性对照质控品。

10.技术要求：a.检测灵敏度：≤20copies/ml,置信度≥95%。

b.检测范围：20-1×107copies/ml。

c.检测特异性：100%。

d.重复性：CV值≤0.3log。

e.规格:48T/盒。

f.即开即用型液体试剂。

11.试剂储存条件：2-8℃保存。

12.试剂组份：包括核酸提取、纯化、扩增和检测的全部试剂。

13.抗污染方案：采用UNG酶防止PCR产物污染。

14.样品处理能力：可以同时进行检测1-72个样品15.备件：含完整实验过程中所需的相关耗材及洗液。

16.适用设备：适用于CobasAmpliprepCobasTaqman全自动病毒载量检测系统。

17.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。

18.供货计划：按用户要求数量准时分批供货，试剂到货时有效期大于10个月。

HIV-1病毒载量试剂2技术参数1．名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸（RNA）提取及检测试剂盒2．用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。

3．检测方法：应用RT-PCR和Real-time实时荧光定量检测技术HIV-1型各组病毒载量。

4．检测项目：HIV-1RNA定量检测。

5.检测亚型：HIV-1型M组(A-H)、O组、N组。

6.适用设备：m2000sp自动核酸提取仪，m2000rt实时荧光定量PCR仪; 7．定量方式：外部标准品定量8．技术要求8.1检测灵敏度:≤40copies/mL（0.6mL、1.0mL样本体系）8.2特异性：100%(95%CI99.28-100%)8.3检测范围:40-107copies/mL8.4适用样本种类:血浆(ACD-A或EDTA抗凝)8.5检测样本体积:可选0.2mL、0.5mL、0.6mL和1.0mL8.6检测方式:96孔PCR反应板8.7检测批量：一次检测批量可选24，48，72和968.8内测标准差(SD):≤0.25log copies/mL8.9内参要求：与样本一起提取和扩增，质控整个实验过程;9.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。

HIV-1 P24抗原检测感染HIV-1后，机体针对HIV-1基因编码的抗原性物质产生相应抗体，在临床上具有重要诊断学意义的主要是对抗结构基因编码抗原(如gpl60，gpl20，gp41，p66，p55，p51，p31，p24，p17等)的抗体。

由于个体差异、各种病毒蛋白的浓度和抗原性强弱不同及不同个体对不同抗原成分的反应性均有所不同，因此相应抗体的产生时间和不同个体对相同抗原成分的免疫应答强度等存在一定差别，此外，检测方法和使用试剂的敏感性不同对HIV-l抗体的检出时间产生一定影响。

在感染HIV-1后，患者血清中最先出现p24抗原，继之，各种HIV-1抗原可达到高峰；2-6周后，随着HIV-l抗体产生及浓度的不断增加，HIV-l抗原渐趋降低或检测不出。

在HIV感染后期，抗原量不断增加，往往预后不佳，至少约有50%左右的病人发展为艾滋病。

目前用于HIV抗体检测的第三代ELISA试剂窗口期为3-4周，在该期病毒抗体不能被检出，但可检测到病毒相关抗原或分离出病毒，故在窗口期检测P24抗原是早期辅助诊断和进一步缩短窗口期的一种方法。

P24抗原的检测，大约可以使抗体窗口期缩短1周，因为估计检测P24抗原到检出P24抗体间隔只有1周时间。

有助于多数急性感染者血清HIV抗体阳转之前的诊断，还适用于：HIV-1 阳性母亲所生婴儿的早期辅助鉴别诊断；第四代 HIV-1 抗原 / 抗体 ELISA 试剂检测呈阳性反应、但 HIV-1 抗体确认阴性者的辅助诊断；监测病程进展和抗病毒治疗效果。

但由于不是所有新近感染的人都可以检出P24抗原，加上该项检测费用较高，所以一般不作为常规诊断项目。

HIV-1 P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，必须经过 SDA 批准注册。

阳性结果必须经中和试验确认，该结果才可作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性，只表示在本试验中无反应，不能排除HIV 感染。

HIV—1的增殖与阻断作者：陈婷俞如旺来源：《中学生物学》2018年第05期摘要从HIV-1的基本结构、增殖感染及药物阻断等三个方面对HIV-1进行简要介绍，为艾滋病的免疫与预防的教学提供更深入的背景材料。

关键词HIV-1 增殖方式阻断机制艾滋病（AIDS）是20世纪下叶以来，医学界的重大难题之一，其病原体是人类免疫缺陷病毒（HIV），可划分为HIV-1和HIV-2两种类型。

目前HIV-2型病毒株主要传播于西非地区，在世界范围普遍传播的HIV病毒则为HIV-1，且致病性远高于HIV-2。

HIV-1以单链RNA为遗传物质，将人体的CD4+T淋巴细胞和单核巨噬细胞作为宿主细胞并在其中进行增殖。

CD4+T淋巴细胞是表面携带CD4分子的一类成熟T淋巴细胞，对人体内的非特异性免疫、体液免疫都有重要作用。

单核巨噬细胞是人体内一种重要的非特异性免疫细胞，对衰老、凋亡细胞及病原体具有强大的吞噬功能。

国际病毒分类委员会（ICTV）将HIV-1定义为逆转录病毒科病毒，因为HIV-1的遗传物质——单链RNA分子，需要在宿主细胞内率先逆转录为cDNA，并以cDNA为中间产物，将HIV-1的遗传信息整合至宿主细胞核内的染色体上，参与到宿主细胞的转录、翻译过程中，获得子代HIV-1的RNA和特异性蛋白。

1HIV-1的结构HIV-1是一种球状病毒，从内至外能够将其分为核心、衣壳与包膜3个部分（图1）。

核心内含有HIV-1病毒的遗传信息——单链RNA（ssRNA）和一系列工具酶，包括控制ssRNA 在宿主细胞内逆转录的逆转录酶、控制cDNA整合至宿主细胞染色体的整合酶、控制HIV-1特异性蛋白加工处理的蛋白酶。

衣壳包裹在核心外侧，其本质为蛋白质，主要包括核心蛋白（p7）和核心壳蛋白（p24）。

衣壳既能保护HIV-1核心内的遗传物质，又能介导HIV-1与宿主细胞的融合。

核心与衣壳共同组成核衣壳。

病毒包膜是病毒最外层的脂蛋白双层膜结构，主要包括转膜包膜糖蛋白（gp41）、脂质双分子层、表面包膜糖蛋白（gpl20）。

中国HIV-1的主要流行状况【摘要】自1981 年美国报告首例艾滋病(AIDS) 以来,艾滋病正以惊人的速度在全球传播和扩散。

中国的艾滋病也进入了快速传播期。

本文章综述了中国，尤其是云南省和中部地区HIV-1的主要流行情况。

【关键词】中国 HIV-1 流行状况Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）是引起艾滋病的主要病原体，它属于单股正链核糖核酸(RNA)逆转录病毒科(Retroviridae) 慢病毒亚科(Lentivirinae)［3］。

该病毒在体内独特的复制方式(无校正功能)和基因重组使其基因组具有高度的多样性［4～5］，并形成一定的地区性分布特点。

到目前为止, HIV-1已有A～K 9种亚型和16种重组模式CRF1-16(Los Alamos National Laboratory, USA, http: / /1 云南省HIV-1的流行情况我国于1985年首次报道了HIV-1感染者［6］。

云南省是中国HIV-1的第一个暴发流行区。

1989年在云南省德宏地区瑞丽市发现了以IDUs（intravenous drug users，静脉吸毒人员）为主的中国第一个艾滋病流行区［7～9,10］，约有146例IDUs感染，占全国总感染人数的70%。

敲响了中国HIV/AIDS流行的警钟［8］。

亚型分析结果表明，最初在云南省IDUs中发现的是B亚型（欧美B）和B’亚型（泰国B）［7,8,10,11］。

后来B’亚型（泰国B）逐渐取代了B亚型（欧美B）占据主导地位，从1990年占所有亚型的20％增长到1996年的90％［8,10,11,12］。

1992年，在云南的IDUs中又发现C亚型，是由印度的IDUs传播来的。

到20世纪90年代末期，C亚型已通过毒品运输传播到中国的南部、中部甚至西北地区，引起了中国的广泛流行［8,12］。

1994年末，在泰国从事商业性工作的返回云南的一名妇女体内发现CRF01-AE［12］。

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。

2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。

2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。

对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。

2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性和异性性接触不安全性行为，有共用注射器吸毒史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。

核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。

2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。

18个月龄以上儿童诊断与成人相同。

2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。

2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物治疗的疗效。

病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。

一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测，以监测治疗效果，每年应检测一次。

治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价治疗后效果。

如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑治疗是否失败。

关于HIV-1_pol基因的比较分析_生物信息关于HIV-1 pol基因的比较分析摘要 HIV是RNA病毒,属慢病毒科Lentiviridae,为正链RNA病毒,由两条相同的线状RNA组成,两条链通过氢键形成二聚体。

病毒基因组长约9.7KB,共由9个基因片段,3个结构基因编码病毒结构蛋白。

pol基因序列为:NH-蛋白酶-逆转录酶p66/p51-内切核酸酶p32?COOH。

本课题研究蛋白酶和逆转录酶段序列。

由于逆转录酶缺乏3′→5′外切酶活性,使得HIV在复制的过程中不能对错误掺入的单核苷酸加以校正,从而表现出易错倾向,这是HIV产生高度变异的最重要的原因。

本课题主要运用PHYLIP、TREEVIEW和CLUSTALX等软件,对HIV-1的pol基因进行了序列相似性比较。

系统发育推断软件PHYLIP即是Phylogeny Inference Package的缩写,共包括37个程序, 按照所处理数据对象的不同可分为五类。

PHYLIP的大多数程序运行时, 从一个名为“infile”的输入文件读入数据, 如果没有该文件, 程序将会询问你输入文件的名称。

然后会出现一些应答选项让你选择。

最后输出结果到outfile或treefile文件中。

CLUSTALX是CLUSTAL多重序列比对程序的Windows版本。

本课题采用了两种方法,即最大简约法和邻位相连法,最后得到了两个进化树。

关键词:PHYLIP,TREEVIEW,CLUSTALX,进化树,genetic distance1 绪论1.1 课题背景及目的1.1.1 HIV概述HIV是RNA病毒,属慢病毒科Lentiviridae,于1983年首次在法国一位患慢性淋巴结综合症的病人身上发现。

一年后,类似的病毒在美国的一位患艾滋病的患者身上发现。

当初这种病毒被认为是一种癌病毒,与人的T-细胞白血病病毒(HTLV-1)相近,于是命名为HTLV-Ⅲ,后来发现它是慢病毒的一种,改为HIV[1]。

HIV-1抗体确证不确定和阴性样本HIV-1核酸定量检测结果分析摘要目的：探讨HIV-1核酸定量检测在HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本中的应用，为艾滋病及时诊断提供科学依据。

方法：对204例HIV-1抗体确证试验不确定和阴性样本进行核酸定量检测，通过随访分别进行HIV-1抗体确证试验和核酸定量检测并结合流行病学资料确定其感染状况。

结果：204例样本中，抗体不确定样本9I例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 53例，低于检测线38例。

抗体阴性样本II3例，核酸定量检测≥5000CPs/ml 2例，低于检测线111例。

核酸定量检测≥5000CPs/ml 55中随访检测38例，抗体阳转38例占I00%，核酸定量检测≥5000CPs/ml 38例占100%，失访17例。

核酸定量检测低于检测线的149例中，未见阳转病例，核酸定量检测低于检测线149例。

结论：核酸检测作为补充试验的其中之一，在HIV-1抗体不确定和阴性样本中采用核酸定量检测有助于更快、更早对个体艾滋病感染者进行诊断。

关键词：HIV-1抗体确证试验、不确定、阴性、HIV-1核酸定量检测、诊断随着《全国艾滋病检测技术规范》（2020年修订版）和《艾滋病和艾滋病感染诊断》（WS-293-2019）的出台和实施。

HIV感染检测手段由HIV抗体确证试验改变为补充试验—HIV抗体确证试验和HIV-1核酸试验。

随着扩大检测策略的实施，窗口期和晚期艾滋病患者及非特异性反应的病例被初筛检测出来，采用单一的HIV-1抗体确证试验，这些艾滋病感染者/艾滋病病例就不能及时得到明确诊断。

不仅增加患者的心理压力、影响病人的治疗、增加了艾滋病的传播风险、给艾滋病防治工作带来了很大的困难。

但艾滋病核酸检测需要投入的设备、检测环境、人员要求比较高，检测成本与HIV-1抗体确证试验相比也比较高，短时间内在本地区很难普片推广。

本研究提出了HIV-1抗体确证试验中的不确定和阴性样本增加HIV-1核酸定量检测。

动物学研究2004，Aug.25（4）：363-368CN53-1040/0ISSN0254-5853 Zoological ResearchHIV-1的表型及其感染的细胞嗜性张驰宇（江苏大学医学技术学院，江苏镇江2l200l）摘要：HIV-l的表型分为合胞体诱导型（syncytium-inducing，SI）和非合胞体诱导型（non-syncytium-induc-ing，NSI）。

依据所用辅助受体和感染靶细胞的不同，HIV-l又被分为R5、X4和R5X4型。

R5和X4型病毒分别利用CCR5和CXCR4作为辅助受体，而R5X4型病毒可利用这两种辅助受体。

在病毒的复制力、细胞嗜性以及合胞体诱导能力上，SI型与X4型病毒一致，NSI型与R5型病毒一致。

在HIV-l感染过程中，疾病的发展伴随着病毒从NSI型向SI型、及R5型向X4型的转变。

HIV-l的表型影响和决定着HIV-l的感染、传播及AIDS的疾病进程。

HIV-l的表型和细胞嗜性主要由病毒gpl20的V3区（特别是第ll和25位的氨基酸）决定。

V3区的氨基酸序列信息，将为预测HIV-l的表型，以及病毒感染后的疾病进程提供生物信息学的依据。

关键词：HIV-l；V3区；合胞体诱导型/非合胞体诱导型；细胞嗜性；辅助受体中图分类号：R5l2.9l文献标识码：A文章编号：0254-5853（2004）04-0363-06Phenotype and Cellular Tropism of HumanImmunodeficiency Virus Type1ZHANG Chi-yu（School of Medical Technology，Jiangsu Uniuersity，Zhenjiang，Jiangsu2l200l，China）Abstract：Human immunodeficiency virus type l（HIV-l）isoIates are cIassified phenotyicaIIy into syncytium-induc-ing（SI）and non-syncytium-inducing（NSI）according to their capacity to induce syncytia in MT-2ceIIs.Strains of HIV-l are aIso cIassified based on their co-receptor usage.Viruses using the seven-transmembrane，G-protein-coupIed，chemokine receptor CCR5，CXCR4，or both are termed R5，X4，and R5X4，respectiveIy.HIV-l strains of SI and X4 appear to have identicaI bioIogicaI properties such as repIication rate，ceII tropism，and syncytium-inducing capacity.NSI and R5viruses aIso show identicaI bioIogicaI properties.The phenotypes of HIV-l infIuence and determine viraI transmission，pathogenesis and disease progression.In the course of HIV-l infection，disease progression is associated with a switch in viraI phenotype from NSI to SI，and a change in co-receptor usage from CCR5to CXCR4.The V3do-main of HIV-l gpI20，specificaIIy，amino acids at V3position ll and25，pIay a dominant roIe in determinant of viraI phenotype and co-receptor usage.V3seguences provide important information for prediction of HIV-l phenotype and dis-ease progression using bioinformatics approaches.Key words：HIV-l；V3domain；SI/NSI；CeIIuIar tropism；Co-receptor人免疫缺陷病毒l型（human immunodeficiency virus type l，HIV-l）是导致全球艾滋病（acguired immunodeficiency syndrome，AIDS）流行的主要病原体。