鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定2012

分子生物学实验设计方案蛋清溶菌酶的分离纯化·············蛋清溶菌酶的分子量鉴定···········组长：喻芳组员：蒙秋萍安贵杰何玉叶刘飞从蛋清中提取溶菌酶并分离纯化【实验目的】1. 掌握离子层析分离纯化溶菌酶的原理以及离子交换层析的操作方法2. 理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测定蛋白质纯度与分子量的原理3. 掌握电泳原理以及SDS－PAGE垂直板电泳分离蛋白质技术【实验原理】溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称为1,4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。

活性中心为天冬氨酸52和谷氨酸35，是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）与N-乙酰胞壁酸（NAM）间的β-1，4糖苷键，相对分子质量14700Da，由129氨基酸残基构成，由于其中含有较多碱性氨基酸残基，所以其等电点高达10.8左右，最适温度为50O C，最适PH为6～7左右。

在280nm 的消光系数[%1cm1A]为13.0。

该酶活性可被一些金属离子Cu2+、Fe2+、Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+、Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。

溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋(含量约为2%～4%)和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的主要来源，目前，溶菌酶仍属于紧销的生化物质，广泛应用于医学临床，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等多种药理作用。

鸡蛋的蛋清中含有丰富的上述物质，本文实验以鸡蛋蛋清为原料，对溶菌酶进行提取并分离纯化。

溶菌酶常温下在中性盐溶液中具有较高天然活性，在中性条件下溶菌酶带正电荷，因此在分离制备时，先采用等电点法粗分离，再用DE-52纤维素离子交换色谱和葡聚糖G50凝胶层析分离纯化，最后用SDS-PAGE鉴定。

鸡蛋中溶菌酶的提取，纯化及纯度鉴定李莹姝蒋华云*（南京师范大学生命科学学院，南京 210046）摘要：从蛋清中用724弱酸性阳离子交换树脂提取溶菌酶，然后用硫酸铵溶液洗脱，盐析得到溶菌酶。

用葡聚糖凝胶层析（SephadexG-75）纯化溶菌酶，收集峰值处样品。

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳鉴定个步骤留样及所得溶菌酶样品的纯度。

溶菌酶得率为0.0474mg/100ml（0.03g/kg）；葡聚糖凝胶层析过程纯化样品得到了洗脱峰曲线，但未能收集到峰值处样品；电泳结果显示在纯化过程中溶菌酶纯度不断升高。

本实验溶菌酶得率较低，提取工艺有待改进，需进一步减少样品损失；层析过程需进一步熟练掌握，以更好达到纯化效果。

关键词：溶菌酶；离子交换树脂，凝胶层析；SDS-PAGEExtraction, purification and purity of Egg lysozymeYings Li Huay Jiang*(College of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, China)Abstract:From egg white, with 724 weak acid cation exchange resin extraction of lysozyme, and then eluted with ammonium sulfate, salting to be lysozyme. With dextran gel chromatography (SephadexG-75) purified lysozyme, the peak of the sample collection. By SDS-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis and identified steps to stay kind of purity of the samples from lysozyme. Lysozyme yield 0.0474mg/100ml (0.03g/kg); dextran gel chromatography purified samples obtained during elution peak curve, but failed to collect samples at the peak; electrophoresis showed that the purification process of lysozyme enzyme purity rising. In this study, lysozyme was the low rate of extraction process could be improved, the need to further reduce sample losses; chromatography process needs further proficiency in order to better achieve purification.Key words:lysozyme, Ion exchange resin, Gel chromatography, SDS-PAGE溶菌酶( Lysozyme , 1,4－β－N－溶菌酶) 是一种专门作用于革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4- 糖苷键的水解酶, 因而又称为胞壁质酶或者N- 胞壁质聚糖水解酶。

鸡蛋清溶菌酶提取实验具体步骤从鸡蛋中提取溶菌酶的步骤1.鸡蛋清样品制备及粗分离将4～5 个（为⼀个⼩组，同时两个⼩组共同进⾏试验）新鲜鸡蛋打⼊烧杯然后⽤矿泉⽔瓶⼦吸出蛋黄，分离得鸡蛋清（鸡蛋清pH 值不得⼩于8.0），量其体积（量筒50ml），加⼊两倍蛋清体积的（可⽤双蒸⽔替代）去离⼦⽔，边加边缓慢搅拌，拌匀后⽤两层纱布过滤除去脐带块和碎蛋壳等，然后⽤1 mol ／L 的HCl 溶液调pH 值⾄7.0 左右，再⽤脱脂棉过滤收集滤液。

2. 724 弱酸性阳离⼦交换树脂的再⽣及层析1.吸附：将处理好的蛋清约200 mL，加⼊32 g再⽣的724 树脂中，缓慢搅拌吸附6 h。

2.洗涤、洗脱：待分层后，将蛋清液倒去，⽤去离⼦⽔反复冲洗，以去除杂蛋⽩，滤⼲树脂，⽤等体积的0.15mol ／L pH 值为6．5 的磷酸缓冲液洗涤，加⼊等量的10％（NH4）2SO4溶液搅拌洗脱30 min，使溶菌酶从树脂上洗脱下来，收集洗脱液，4℃冰箱静置过夜。

第⼆天，有⽩⾊沉淀析出，离⼼（15 min，10 000r ／min）收集沉淀，沉淀物为溶菌酶粗产品浓缩1·透析除盐、去碱性蛋⽩：4℃条件下，⽤去离⼦⽔透析24 h 左右（1天）直到透析完全（⽤BaCl2与透析液发⽣反应直到没有浑浊产⽣为⽌）。

离⼼去除透析袋中沉淀，向透析清液中慢慢加⼊1 mol ／L 氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH 值上升⾄8．0～9．0，如有⽩⾊沉淀，即离⼼去除；（碱性蛋⽩在此pH条件下会到等电点然后就会沉淀）2·聚⼄⼆醇浓缩：盐析物⽤1 倍去离⼦⽔溶解成稀糊状，装⼊透析袋，在装有聚⼄⼆醇的试管中吸⽔浓缩，收集浓缩液；3·冷冻⼲燥：⽤3 mol ／L 盐酸调pH值⾄5．0，冷冻⼲燥，即得⽩⾊⽚状溶菌酶。

溶菌酶纯度检测SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法①凝胶板的制备：⽤30％分离胶贮液、pH 值为8.9 分离胶缓冲液、10％浓缩胶贮液、pH 值为6.7浓缩胶缓冲液、10％SDS、1％TEMED、重蒸馏⽔、10％APS 溶液配制⽽成；②溶菌酶的处理：⽤磷酸缓冲液制成50 µg ／mL 的溶液，取10~80 µL 点样于凝胶板上③电泳：电流为10 mA，时间4 h；④固定、染⾊和脱⾊：电泳完毕，将胶板从玻璃板上取下，分别在固定液与染⾊液中浸泡10～30 min，⽤⽔漂洗⼲净，再⽤脱⾊液脱⾊。

一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。

2. 了解溶菌酶的性质和功能。

3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。

溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。

2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。

四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。

2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。

3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。

5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。

6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。

五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。

2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。

3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。

4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。

5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。

6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。

7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。

一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取、分离和纯化方法。

2. 掌握酶活性测定和蛋白质浓度测定技术。

3. 了解溶菌酶的纯度鉴定与分子量测定方法。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种胞壁质酶，具有破坏细菌细胞壁的能力。

本实验采用鸡蛋清为原料，通过提取、分离和纯化等步骤，制备高纯度的溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清- 酶活性测定试剂盒- 蛋白质浓度测定试剂盒- 溶菌酶纯度鉴定试剂盒- 分子量测定试剂盒2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 酶标仪- 荧光分光光度计- 凝胶电泳仪- 凝胶成像系统四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）取一定量的鸡蛋清，加入适量的生理盐水，搅拌均匀。

（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取上清液。

（3）用酶活性测定试剂盒检测上清液中的溶菌酶活性。

2. 溶菌酶分离纯化（1）取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质沉淀。

（2）将混合液用低温高速离心机以4,000 rpm离心10分钟，取沉淀。

（3）将沉淀用生理盐水溶解，加入适量的G-25凝胶柱，进行凝胶过滤。

（4）收集洗脱液，用酶活性测定试剂盒检测洗脱液中的溶菌酶活性。

3. 溶菌酶纯度鉴定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入溶菌酶纯度鉴定试剂盒，进行电泳分析。

（2）观察电泳图谱，鉴定溶菌酶的纯度。

4. 溶菌酶分子量测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入分子量测定试剂盒，进行SDS-PAGE电泳分析。

（2）观察电泳图谱，计算溶菌酶的分子量。

5. 溶菌酶活性测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入酶活性测定试剂盒，进行酶活性测定。

（2）记录酶活性值。

6. 溶菌酶蛋白浓度测定（1）取适量的溶菌酶溶液，加入蛋白质浓度测定试剂盒，进行蛋白浓度测定。

（2）记录蛋白浓度值。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取上清液中溶菌酶活性为XX单位/mL。

2. 溶菌酶分离纯化洗脱液中溶菌酶活性为XX单位/mL。

3. 溶菌酶纯度鉴定电泳图谱显示，溶菌酶的纯度为XX%。

第1篇一、实验目的1. 学习溶菌酶的提取方法。

2. 掌握溶菌酶的分离纯化技术。

3. 了解溶菌酶的性质及其应用。

二、实验原理溶菌酶是一种广泛存在于生物体内的胞壁质酶，具有水解细菌细胞壁肽聚糖的活性。

本实验通过利用溶菌酶在特定条件下的溶解度差异，对其进行提取、分离和纯化，并对其性质进行初步研究。

三、实验材料1. 鸡蛋2. 醋酸3. 硫酸铵4. 氯化钠5. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）6. 透析袋7. 旋转蒸发仪8. 超速离心机9. 分光光度计10. 紫外-可见光分光光度计四、实验方法1. 溶菌酶粗提取（1）将鸡蛋打破，取蛋清，加入适量的醋酸，搅拌均匀，室温下静置30分钟。

（2）用滤纸过滤混合液，收集滤液。

（3）向滤液中加入硫酸铵，使蛋白质盐析，室温下静置30分钟。

（4）用滤纸过滤沉淀，收集滤液。

2. 溶菌酶分离纯化（1）向滤液中加入适量的氯化钠，使蛋白质复溶，室温下搅拌30分钟。

（2）用透析袋将溶液进行透析，去除小分子物质。

（3）将透析后的溶液进行超速离心，收集沉淀。

（4）向沉淀中加入适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0），使蛋白质复溶。

（5）用旋转蒸发仪将溶液浓缩至一定体积。

3. 溶菌酶性质研究（1）测定溶菌酶的蛋白浓度。

（2）测定溶菌酶的酶活性。

（3）测定溶菌酶的分子量。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取通过实验，成功从鸡蛋清中提取出溶菌酶，得到淡黄色的粗提液。

2. 溶菌酶分离纯化通过盐析、透析和超速离心等步骤，成功将溶菌酶从粗提液中分离纯化，得到淡黄色的纯化液。

3. 溶菌酶性质研究（1）蛋白浓度：根据比色法测定，溶菌酶的蛋白浓度为1.5 mg/mL。

（2）酶活性：根据溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用，测定酶活性为100 U/mL。

（3）分子量：根据SDS-PAGE电泳结果，溶菌酶的分子量为14.3 kDa。

六、实验讨论1. 本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的来源，具有良好的可行性和经济性。

2. 在溶菌酶的提取过程中，醋酸和硫酸铵的加入有助于提高溶菌酶的提取率。

一、 溶菌酶的提取纯化
实验日期：2012-10-18
1、 溶菌酶洗脱曲线的制作：
（2）绘制洗脱曲线：
以OD280值为纵坐标，对应中间体积值为横坐标，绘制曲线：
00.25
0.50.7511.25
1.51.7520
3
6
9
12
15
18
21
24
27
二、蛋白含量＆酶活性的测定
实验日期：2012-10-19
根据上表数据，绘制标准曲线：
标准曲线
00.10.20.30.40.50.60.70
10
20
30
40
50
60
OD595
所以直线回归方程：y=0.0101x+0.0573
5
6
（1）从上面数据得出，蛋清的蛋白浓度比提取物的高，但其活性和比活性都比提取物的低。

而且提取物的纯化倍数比较高，为5.44。

（2）酶的活力表示为特定条件下单位时间内转化底物的速度，而细菌悬液的光吸收值的减少速度可以推测酶的活性。

试验过程中，每15 s记录1 次测定管的吸光度值，在15 s 至75 s 之间测定管吸光度值以稳定速度下降，因此对于酶的活性测定，单位时间应选择为15 s 至75 s。

（3）对于这次试验，在操作上我们存在明显的不足，如下：
A．标准曲线上，有两个数据点比较偏离，可能我们测定这两个数据点的OD值时润洗操作未能做到位，导致误差的出现。

B．酶活性的测定上也同样存在一定的误差，例如：平行测3次，但每次的吹打效果不一样，o秒时的OD值不太一致，可能造成不同程度的偏差！。

一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。

二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。

溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。

本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。

四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。

2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。

3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。

蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究蛋清是一种富含蛋白质的食品，其中含有一种叫做溶菌酶的酶类物质。

溶菌酶具有很强的抗菌作用，可以在食品加工和医药领域中发挥重要的作用。

因此，对蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究具有重要的意义。

一般来说，蛋清中溶菌酶的提取方法可以分为化学法和物理法两种。

化学法主要是利用酸、碱等化学试剂来提取溶菌酶，但这种方法存在一定的毒性和污染性，不太适合在食品加工中使用。

物理法则是利用高压、超声波等物理手段来破坏蛋白质的结构，使溶菌酶释放出来。

这种方法相对来说比较安全，但提取效率较低。

为了提高蛋清中溶菌酶的提取效率，研究人员提出了一种新的方法，即利用离子交换色谱技术来提取溶菌酶。

这种方法利用离子交换树脂将蛋清中的溶菌酶吸附在树脂上，然后通过洗脱的方式将溶菌酶从树脂上释放出来。

这种方法具有提取效率高、操作简单、无毒无害等优点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。

除了提取方法的研究外，对蛋清中溶菌酶的定量测定方法也是非常重要的。

目前常用的定量方法有比色法、荧光法、酶联免疫吸附法等。

其中，比色法是一种简单易行的方法，可以通过测定溶菌酶与底物反应后产生的色素来确定溶菌酶的含量。

荧光法则是利用荧光染料与溶菌酶结合后产生的荧光信号来测定溶菌酶的含量。

酶联免疫吸附法则是利用特异性抗体与溶菌酶结合后产生的信号来测定溶菌酶的含量。

这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。

总之，蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究对于食品加工和医药领域具有重要的意义。

未来，我们可以继续探索新的提取方法和测定方法，以提高溶菌酶的提取效率和测定精度，为人类健康和生活带来更多的福利。

鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。

溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。

鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。

2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。

将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。

这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。

3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。

例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。

4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。

5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。

常见的测量方法包括显色法和滴定法等。

鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。

因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。

2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。

在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。

3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。

4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。

需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。

总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。

鸡蛋清溶菌酶的提取及电泳鉴定一、实验目的1 了解鸡蛋清溶菌酶的性质、常用制备方法及原理2 掌握盐析法分离蛋白质原理及操作3 掌握SDS-PAGE鉴定蛋白纯度的原理及操作二、实验原理盐析法1878年Hammarster首次使用，是粗分离蛋白质的重要方法之一。

许多蛋白质在纯水或低盐溶液中溶解度较低，若稍加一些无机盐则溶解度增加，这种现象称为“盐溶”（Salting in）。

而当盐浓度继续增加到某一浓度时，蛋白质又变得不深而自动析出，这种现象称为“盐析“（Salting out）。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法:常用蛋白质纯度分析及分子量测定技术。

SDS:十二烷基硫酸钠（Sodium declecyl Sulfate）破坏蛋白质分子之间以及与其他物质分子之间的共价键，使蛋白质变性而改变原来的空间构象，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在的条件下，由于蛋白质分子内的二硫键被还原剂打开并不易再氧化，这就保证了蛋白质分子与SDS结合从而形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。

不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样（约为18Å，即1.8nm），而长轴则随蛋白质分子量成正比地变化。

这样的SDS-蛋白质复合物，在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度也就是蛋白质分子量的函数。

使蛋白质的电泳迁移率仅仅取决于分子大小这一因素。

当蛋白质的分子量在11，700~165，000之间时，电泳迁移率与分子量对数呈直线关系，符合直线方程式：LgMw= —bx + k式中：Mw为蛋白质分子量，X为电泳迁移率，k和b均为常数。

利用这一关系将已知分子量的标准蛋白质电泳迁移率与分子量的对数作图即可得到一条标准曲线。

只要测得未知分子量的蛋白质在相同条件下电泳迁移率，就能根据标准曲线求得其分子量。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：以聚丙烯酰胺凝胶作为支持电泳介质。

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成。

实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶各位看官，今天我们来聊聊如何在实验室里从蛋清中提取溶菌酶。

溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，广泛应用于医药、食品等领域。

而我们从蛋清中提取溶菌酶，不仅可以研究其性能，还可以应用于实际生产中。

下面，就让我来为大家详细介绍这个实验的步骤吧。

第一步，将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。

这一步是为了确保蛋清和蛋黄均匀混合，提高提取效率。

第二步，将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。

这一步是为了提供一个适宜的pH环境，有利于溶菌酶的提取。

第三步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。

这一步是为了将混合液中的固体物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。

第四步，取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。

这一步是为了去除蛋清水溶液中的脂溶性物质，提高溶菌酶的提取纯度。

第五步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。

这一步是为了将混合液中的乙醚和脂溶性物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。

第六步，取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。

这一步是为了保存提取得到的溶菌酶，避免其降解。

总的来说，从蛋清中提取溶菌酶的实验步骤如下：1.将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。

2.将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。

3.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。

4.取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。

5.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。

6.取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。

这样，我们就成功从蛋清中提取出了溶菌酶。

鸡蛋清的溶菌酶的提取工艺流程注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究一、引言蛋清是一种富含溶菌酶的天然源，溶菌酶具有广泛的应用价值，在医药、食品、环境等领域发挥着重要作用。

因此，高效提取蛋清中的溶菌酶，并开发可靠的定量测定方法具有重要意义。

二、蛋清中溶菌酶的提取方法研究进展2.1 传统提取方法1.直接破碎法–原理：将鸡蛋或鸭蛋直接破碎，通过离心等方法分离溶菌酶。

–优点：简单、快速。

–缺点：溶菌酶的提取率和纯度较低。

2.盐析法–原理：通过加入适量的盐类使溶菌酶沉淀，然后进行后续纯化。

–优点：提取率较高。

–缺点：纯化过程繁琐，提取时间较长。

2.2 新型提取方法1.超声提取法–原理：利用超声波作用下产生的微小气泡破坏细胞结构，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，提取时间短。

–缺点：对溶菌酶活性有一定影响。

2.酶解法–原理：使用特定酶解剂使蛋清中的蛋白质部分降解，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，对溶菌酶活性影响较小。

–缺点：酶解过程需要精确控制条件。

三、蛋清中溶菌酶的定量测定方法3.1 比色法1.基于物质的变化–原理：溶菌酶对某种物质具有催化作用，该物质的变化可以被检测器测定。

–优点：操作简单，成本较低。

–缺点：适用范围有限。

2.酶联免疫吸附法–原理：利用特异性抗体与溶菌酶结合，通过测定抗体与酶的结合程度来定量溶菌酶。

–优点：高灵敏度，高特异性。

–缺点：实验操作复杂。

3.2 光学测定法1.比色法–原理：溶菌酶具有特定的吸收光谱，在特定波长下可以测定其浓度。

–优点：操作简单，结果准确。

–缺点：需要专用仪器。

2.荧光法–原理：利用溶菌酶在特定条件下的荧光特性来定量测定其浓度。

–优点：高灵敏度，高选择性。

–缺点：试剂成本较高。

四、结论通过对蛋清中溶菌酶的高效提取方法和定量测定方法的研究，我们可以得出以下结论： 1. 新型提取方法如超声提取法和酶解法可以提高溶菌酶的提取率和提取效率。

2. 定量测定方法如酶联免疫吸附法和荧光法具有高灵敏度和高特异性。