鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用

一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。

2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。

3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。

它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。

2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。

四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。

2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。

将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。

3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。

4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。

重复洗涤2-3次。

5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。

6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。

7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。

五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。

2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。

根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。

六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。

2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。

鸡蛋清中溶菌酶的提取与抑菌作用
黄敏;孔明航;王丽明
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2010(000)003
【摘要】研究从鸡蛋清中提取与精制溶菌酶的方法,观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制作用.从鸡蛋清提取溶菌酶的方法:取出鸡蛋清,过滤,用蒸馏水溶解,加氯化钠,调节溶液pH至5.0,加入溶菌酶晶种,4℃下静置结晶,过滤,可以得到溶菌酶粗品.将粗品溶菌酶溶解,按上述步骤溶解后结晶,重复3次,可以精制溶菌酶.用滤纸片法观察溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌作用.结果表明,鸡蛋清溶菌酶提取的较优条件是:酶液pH 10.0、氯化钠加入量5%、蛋清液用2倍体积蒸馏水稀释.70℃下保温5min,鸡蛋清溶菌酶的精制率最高.鸡蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,80℃加热30min对鸡蛋清溶菌酶的抑菌作用影响很小.
【总页数】4页(P154-157)
【作者】黄敏;孔明航;王丽明
【作者单位】长江大学生命科学学院,荆州,434025;湖北省国营大垸农场,大
垸,433300;长江大学生命科学学院,荆州,434025
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2+5
【相关文献】
1.鸡蛋清中溶菌酶的提取工艺研究 [J], 于洋
2.鸡蛋清中溶菌酶的分离提取 [J], 傅冰;季秀玲;俞汇颖;魏云林
3.鸡蛋清中溶菌酶提取技术的研究 [J], 迟晓艳;葛宜和;韩立亚;侯月利
4.鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究 [J], 李书丰
5.鸡蛋清中溶菌酶的提取 [J], 陈中
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一、实验目的1. 掌握鸡蛋溶菌酶的提取方法。

2. 了解溶菌酶的性质和功能。

3. 培养实验操作技能，提高实验分析能力。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体内的碱性蛋白质，主要来源于鸟类的蛋清、哺乳动物的泪液、唾液等。

溶菌酶具有水解细菌细胞壁的作用，能够有效抑制细菌生长，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用鸡蛋清作为溶菌酶的提取原料，通过酶解、离心、透析等步骤提取溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、NaCl、NaOH、丙酮、硫酸铵、蒸馏水等。

2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸、透析袋等。

四、实验步骤1. 酶解：将新鲜鸡蛋打破，取出蛋清，加入适量的NaCl溶液（浓度为0.5mol/L），搅拌均匀，置于恒温水浴锅中，温度控制在37℃，酶解1小时。

2. 离心分离：将酶解后的溶液以3000r/min的速度离心10分钟，收集上清液。

3. 盐析：在上清液中加入适量的硫酸铵固体，搅拌溶解，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

4. 透析：将沉淀用蒸馏水洗涤，去除杂质，然后将其放入透析袋中，置于蒸馏水中，透析24小时，去除小分子物质。

5. 浓缩：将透析后的溶液在50℃下减压浓缩，使蛋白质浓度提高。

6. 纯化：将浓缩后的溶液加入适量的丙酮，使蛋白质沉淀。

静置2小时，收集沉淀。

7. 干燥：将沉淀在50℃下真空干燥，得到溶菌酶粉末。

五、实验结果与分析1. 酶解过程中，蛋清逐渐变得透明，表明溶菌酶开始释放。

2. 离心分离后，上清液中溶菌酶浓度较高，下清液中含有其他杂质。

3. 盐析过程中，蛋白质沉淀较多，表明溶菌酶在硫酸铵溶液中具有较好的溶解性。

4. 透析过程中，透析袋中的溶液逐渐变得清澈，表明小分子物质已被去除。

5. 浓缩过程中，蛋白质浓度逐渐提高，有利于后续的纯化。

6. 纯化过程中，丙酮沉淀的蛋白质较多，表明溶菌酶在丙酮中具有较好的溶解性。

7. 干燥后，得到白色粉末，表明溶菌酶已被成功提取。

鸡蛋清中抑菌活性蛋白作用机制的研究进展杨晓雪，剧梦璇（东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨 150030）摘　要：鸡蛋清中富含多种具有抑菌功能的生物活性成分。

随着鸡蛋贮存时间延长，蛋清中的浓蛋白会发生稀化现象，从而导致抑菌效果降低，微生物繁殖加快，鸡蛋品质下降。

本文对鸡蛋贮藏过程中的卵黏蛋白、溶菌酶及其复合物的相互作用形式、抑菌机制等进行探讨，以期为优化鸡蛋加工过程中的消毒杀菌工序、改良鸡蛋贮藏方法、延长鸡蛋保质期提供参考。

关键词：鸡蛋；蛋清蛋白；抑菌作用；蛋白相互作用Research Progress on the Mechanism of Antibacterial ActiveProteins in Egg WhiteYANG Xiaoxue, JU Mengxuan(Northeast Agricultural University, College of Food Science, Harbin 150030, China) Abstract: Egg white is rich in a variety of bioactive components with antibacterial function. With the prolongation of egg storage time, the concentrated protein in egg white will be diluted, which will lead to the decrease of bacteriostatic effect, the acceleration of microbial reproduction and the decrease of egg quality. In this paper, the interaction forms and antibacterial mechanism of ovomucin, lysozyme and their complexes during egg storage were discussed, in order to provide reference for optimizing the disinfection and sterilization process in egg processing, improving egg storage methods and prolonging egg shelf life.Keywords: egg; egg white protein; antibacterial function; protein interaction鸡蛋是一种营养配比均衡的食品，被称为“全营养食品”，具有营养全面、蛋白含量高（11%～13%）、蛋白易吸收（吸收率99.6%）等优点。

一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取、分离纯化技术。

2. 掌握电渗析/超滤内在耦合（EDUF）技术在分离蛋白中的应用。

3. 分析实验过程中影响分离效果的因素，优化实验条件。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种天然碱性蛋白质，具有抗菌、消炎和抗病毒等功能。

溶菌酶广泛存在于鸡蛋清中，含量丰富。

本实验采用EDUF技术，利用溶菌酶与卵白蛋白（OVA）在特定pH条件下的荷电性及分子量差异，从鸡蛋清中分离提取溶菌酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、PVDF100超滤膜、氯化钠、磷酸缓冲液、溶菌酶标准品等。

2. 实验仪器：电渗析/超滤装置、电子天平、pH计、分光光度计、离心机、恒温水浴锅等。

四、实验步骤1. 预处理：将鸡蛋清用4层纱布过滤，去除杂质。

2. 调节pH值：将过滤后的鸡蛋清用1 mol/L的HCl溶液调节pH值至7.0。

3. 电渗析/超滤：将调节pH值后的鸡蛋清加入EDUF装置中，设置操作电压为5.0V，原料室和回收室料液流量均为50mL/min，进行电渗析/超滤。

4. 收集溶菌酶：将电渗析/超滤后的溶液用离心机离心，收集沉淀。

5. 纯化：将沉淀用磷酸缓冲液（pH值为8.0）溶解，通过离子交换树脂纯化溶菌酶。

6. 活性测定：采用分光光度法测定溶菌酶的活性。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶回收率：在操作电压为5.0V，采用PVDF100超滤膜，原料室和回收室料液流量均为50mL/min的条件下，溶菌酶的回收率可达21.05%。

2. 溶菌酶纯度：经纯化处理后，溶菌酶的纯度可达100%。

3. 溶菌酶活性：通过分光光度法测定，溶菌酶的活性为2.30U/mg。

4. 影响分离效果的因素分析：（1）pH值：溶菌酶在pH值为8.0时活性最高，因此在纯化过程中将pH值调节至8.0。

（2）操作电压：操作电压越高，溶菌酶的回收率越高，但电压过高会导致溶菌酶变性，因此选择5.0V为最佳操作电压。

（3）超滤膜材料：PVDF100超滤膜对溶菌酶的截留效果较好，因此选择该膜材料。

一、实验目的1. 学习并掌握溶菌酶的提取方法；2. 了解溶菌酶的分离纯化过程；3. 掌握酶活力和蛋白浓度的测定方法；4. 学习溶菌酶纯度鉴定与分子量测定。

二、实验原理溶菌酶是一种胞壁质酶，主要存在于鸡蛋清中。

溶菌酶能够水解细菌细胞壁中的N-乙酰胞壁质，导致细菌细胞壁破裂，从而起到杀菌作用。

本实验通过提取鸡蛋清中的溶菌酶，对其进行分离纯化，并测定其酶活力、蛋白浓度、纯度和分子量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、考马斯亮蓝G-250、邻苯二甲酸氢钾、苯酚、硫酸铜、氢氧化钠、无水乙醇等；2. 实验仪器：高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平等。

四、实验方法1. 溶菌酶的粗提取（1）取新鲜鸡蛋清，用4倍体积的0.1mol/L的NaOH溶液溶解；（2）将溶液搅拌均匀，置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用等体积的4倍体积的0.1mol/L的HCl溶液调节pH至4.5；（4）将溶液置于高速离心机中，以10000r/min离心30分钟；（5）取上清液即为粗提溶菌酶。

2. 溶菌酶的分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定（1）取粗提溶菌酶溶液，用硫酸铵饱和溶液进行盐析，调节硫酸铵浓度为0.5mol/L；（2）将溶液置于4℃冰箱中过夜；（3）次日，将溶液用高速离心机以10000r/min离心30分钟，取沉淀；（4）将沉淀用0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲溶液溶解，得纯化溶菌酶溶液；（5）测定酶活力和蛋白浓度，酶活力单位以每分钟产生1μmol的产物为1个单位，蛋白浓度采用考马斯亮蓝G-250法测定。

3. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）取纯化溶菌酶溶液，进行SDS-PAGE电泳分析；（2）根据电泳结果，计算溶菌酶的分子量；（3）根据纯化溶菌酶溶液的蛋白浓度和酶活力，计算溶菌酶的纯度。

五、实验结果与分析1. 溶菌酶的粗提取通过实验，成功提取了鸡蛋清中的溶菌酶，提取率为0.5%。

蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究蛋清是一种富含蛋白质的食品，其中含有一种叫做溶菌酶的酶类物质。

溶菌酶具有很强的抗菌作用，可以在食品加工和医药领域中发挥重要的作用。

因此，对蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究具有重要的意义。

一般来说，蛋清中溶菌酶的提取方法可以分为化学法和物理法两种。

化学法主要是利用酸、碱等化学试剂来提取溶菌酶，但这种方法存在一定的毒性和污染性，不太适合在食品加工中使用。

物理法则是利用高压、超声波等物理手段来破坏蛋白质的结构，使溶菌酶释放出来。

这种方法相对来说比较安全，但提取效率较低。

为了提高蛋清中溶菌酶的提取效率，研究人员提出了一种新的方法，即利用离子交换色谱技术来提取溶菌酶。

这种方法利用离子交换树脂将蛋清中的溶菌酶吸附在树脂上，然后通过洗脱的方式将溶菌酶从树脂上释放出来。

这种方法具有提取效率高、操作简单、无毒无害等优点，因此在实际应用中得到了广泛的应用。

除了提取方法的研究外，对蛋清中溶菌酶的定量测定方法也是非常重要的。

目前常用的定量方法有比色法、荧光法、酶联免疫吸附法等。

其中，比色法是一种简单易行的方法，可以通过测定溶菌酶与底物反应后产生的色素来确定溶菌酶的含量。

荧光法则是利用荧光染料与溶菌酶结合后产生的荧光信号来测定溶菌酶的含量。

酶联免疫吸附法则是利用特异性抗体与溶菌酶结合后产生的信号来测定溶菌酶的含量。

这些方法各有优缺点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。

总之，蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法的研究对于食品加工和医药领域具有重要的意义。

未来，我们可以继续探索新的提取方法和测定方法，以提高溶菌酶的提取效率和测定精度，为人类健康和生活带来更多的福利。