一种从鸡蛋清中分离溶菌酶的方法

一、实验目的1. 了解溶菌酶的生物学特性及其在食品、医药等领域的应用价值。

2. 掌握从鸡蛋清中提取溶菌酶的方法和操作步骤。

3. 学习蛋白质分离纯化的基本原理和实验技术。

二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种能够水解细菌细胞壁中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的碱性酶。

它主要存在于鸟类和家禽的蛋清中，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

本实验采用盐析法从鸡蛋清中提取溶菌酶，通过改变溶液的离子强度，使溶菌酶从溶液中析出。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、去离子水、硫酸铵、盐酸、pH试纸、玻璃棒、滤纸、烧杯、漏斗、电子天平、移液管、离心机、恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。

2. 实验试剂：硫酸铵、盐酸、去离子水等。

四、实验步骤1. 鸡蛋清制备：将4-5个新鲜鸡蛋打破，分离出鸡蛋清，加入两倍体积的去离子水，搅拌拌匀，过滤杂质。

2. 盐析：向鸡蛋清溶液中加入适量硫酸铵，搅拌溶解，使硫酸铵浓度达到60%左右。

将溶液静置一段时间，使溶菌酶析出。

3. 沉淀分离：用滤纸过滤析出的沉淀，收集滤液。

4. 洗涤：向沉淀中加入少量去离子水，搅拌洗涤，去除杂质。

重复洗涤2-3次。

5. 离心：将洗涤后的沉淀转移到离心管中，以3000r/min离心10分钟，收集上清液。

6. 蛋白质浓度测定：采用紫外可见分光光度计测定上清液中蛋白质浓度。

7. 溶菌酶活性测定：采用溶菌酶活力测定试剂盒测定溶菌酶活性。

五、实验结果与分析1. 蛋白质浓度测定：上清液中蛋白质浓度为1.5mg/mL。

2. 溶菌酶活性测定：溶菌酶活性为200U/mL。

根据实验结果，从鸡蛋清中提取的溶菌酶蛋白质浓度为1.5mg/mL，活性为200U/mL，说明本实验提取的溶菌酶纯度和活性较高。

六、实验讨论1. 盐析法是一种简单、有效的蛋白质分离纯化方法，适用于溶菌酶的提取。

2. 在实验过程中，要注意控制硫酸铵的加入量，以免影响溶菌酶的活性。

树脂吸附法分离蛋清溶菌酶的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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鸡蛋提取溶菌酶的方法鸡蛋白是一种丰富的蛋白质源，其中含有溶菌酶（lysosome），可以在细菌和真菌的溶解中发挥重要作用。

溶菌酶是一种具有溶菌、抗菌活性的酶类。

鸡蛋提取溶菌酶的方法主要包括以下几个步骤：1. 鸡蛋的分离：首先将新鲜的鸡蛋进行分离，只保留蛋清（蛋白质）部分，去除蛋黄。

2. 蛋清处理：将蛋清中的蛋白质与溶菌酶分离，可以采用酸碱沉淀法。

将蛋清加入适量的酸（如醋酸）中，使酸度下降到pH 4以下，随后使用碱（如氢氧化钠）中和酸性溶液，使溶液pH回升到中性左右。

这一过程中，溶菌酶会发生沉淀现象，可以方便地分离出来。

3. 溶菌酶的除杂：蛋清中可能还存在其他酶类或蛋白质，为了获得纯净的溶菌酶，可以进行一轮或多轮的洗涤与纯化。

例如，可以使用盐析法，通过逐渐增加溶液中的盐浓度来沉淀溶菌酶，然后用溶液洗涤沉淀物，最后得到纯净的溶菌酶。

4. 溶菌酶的浓缩与干燥：将纯净的溶菌酶溶液通过浓缩技术（如超滤或冷冻干燥）使溶液浓度增大，得到较为浓缩的溶菌酶溶液。

5. 溶菌酶的活性测定：对提取得到的溶菌酶进行活性测定，可以通过测定其对特定底物的溶解能力来评估溶菌酶的活性。

常见的测量方法包括显色法和滴定法等。

鸡蛋提取溶菌酶的方法相对简单，但有一些需要注意的注意事项：1. 鸡蛋的新鲜度对溶菌酶的提取效果有一定影响，新鲜的鸡蛋中溶菌酶的含量较高。

因此，在进行实验时应选择新鲜的鸡蛋。

2. 溶菌酶的活性与条件相关，如温度、酸碱度等。

在提取过程中需要控制好这些条件，以保证溶菌酶的稳定性和活性。

3. 提取得到的溶菌酶需储存于低温（通常-20C）下，否则易失活。

4. 鸡蛋中的蛋白质含量较高，在提取过程中需要留意对蛋白质的处理，避免产生其他影响或污染。

需要特别注意的是，提取溶菌酶并非只有上述方法，还可以根据实际需要结合其他技术和方法进行提取，例如离心、层析、电泳等。

总结起来，鸡蛋提取溶菌酶的方法包括鸡蛋的分离、蛋清处理、溶菌酶的除杂、溶菌酶的浓缩与干燥以及溶菌酶的活性测定等步骤。

实验室技术手册：从蛋清中提取溶菌酶各位看官，今天我们来聊聊如何在实验室里从蛋清中提取溶菌酶。

溶菌酶是一种能分解细菌细胞壁的酶，广泛应用于医药、食品等领域。

而我们从蛋清中提取溶菌酶，不仅可以研究其性能，还可以应用于实际生产中。

下面，就让我来为大家详细介绍这个实验的步骤吧。

第一步，将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。

这一步是为了确保蛋清和蛋黄均匀混合，提高提取效率。

第二步，将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。

这一步是为了提供一个适宜的pH环境，有利于溶菌酶的提取。

第三步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。

这一步是为了将混合液中的固体物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。

第四步，取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。

这一步是为了去除蛋清水溶液中的脂溶性物质，提高溶菌酶的提取纯度。

第五步，将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。

这一步是为了将混合液中的乙醚和脂溶性物质沉淀下来，得到较纯净的蛋清水溶液。

第六步，取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。

这一步是为了保存提取得到的溶菌酶，避免其降解。

总的来说，从蛋清中提取溶菌酶的实验步骤如下：1.将新鲜鸡蛋打入离心管中，加入适量柠檬酸钠溶液，用移液器反复吹打，使蛋清和蛋黄充分混合。

2.将混合液转移到另一个离心管中，加入适量磷酸缓冲液，再次用移液器吹打，使溶液充分混合。

3.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心10分钟。

4.取离心后的上清液，加入等体积的乙醚，用移液器反复吹打，使溶液充分混合。

5.将混合液放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。

6.取离心后的上清液，用移液器移入干净的试管中，放入冰箱冷藏保存。

这样，我们就成功从蛋清中提取出了溶菌酶。

蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究一、引言蛋清是一种富含溶菌酶的天然源，溶菌酶具有广泛的应用价值，在医药、食品、环境等领域发挥着重要作用。

因此，高效提取蛋清中的溶菌酶，并开发可靠的定量测定方法具有重要意义。

二、蛋清中溶菌酶的提取方法研究进展2.1 传统提取方法1.直接破碎法–原理：将鸡蛋或鸭蛋直接破碎，通过离心等方法分离溶菌酶。

–优点：简单、快速。

–缺点：溶菌酶的提取率和纯度较低。

2.盐析法–原理：通过加入适量的盐类使溶菌酶沉淀，然后进行后续纯化。

–优点：提取率较高。

–缺点：纯化过程繁琐，提取时间较长。

2.2 新型提取方法1.超声提取法–原理：利用超声波作用下产生的微小气泡破坏细胞结构，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，提取时间短。

–缺点：对溶菌酶活性有一定影响。

2.酶解法–原理：使用特定酶解剂使蛋清中的蛋白质部分降解，释放溶菌酶。

–优点：提取效率高，对溶菌酶活性影响较小。

–缺点：酶解过程需要精确控制条件。

三、蛋清中溶菌酶的定量测定方法3.1 比色法1.基于物质的变化–原理：溶菌酶对某种物质具有催化作用，该物质的变化可以被检测器测定。

–优点：操作简单，成本较低。

–缺点：适用范围有限。

2.酶联免疫吸附法–原理：利用特异性抗体与溶菌酶结合，通过测定抗体与酶的结合程度来定量溶菌酶。

–优点：高灵敏度，高特异性。

–缺点：实验操作复杂。

3.2 光学测定法1.比色法–原理：溶菌酶具有特定的吸收光谱，在特定波长下可以测定其浓度。

–优点：操作简单，结果准确。

–缺点：需要专用仪器。

2.荧光法–原理：利用溶菌酶在特定条件下的荧光特性来定量测定其浓度。

–优点：高灵敏度，高选择性。

–缺点：试剂成本较高。

四、结论通过对蛋清中溶菌酶的高效提取方法和定量测定方法的研究，我们可以得出以下结论： 1. 新型提取方法如超声提取法和酶解法可以提高溶菌酶的提取率和提取效率。

2. 定量测定方法如酶联免疫吸附法和荧光法具有高灵敏度和高特异性。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510423983.4(22)申请日 2015.07.17C12N 9/36(2006.01)(71)申请人泰州苏鹏蛋业生物科技有限公司地址225500 江苏省泰州市姜堰区白米镇工业集中区(72)发明人宋锡铭 姚永鹏 夏海峰 杭小伟(54)发明名称鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法(57)摘要本发明涉及鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法。

主要步骤如下：收集新鲜鸡蛋蛋清，按比例加入缓冲液，均匀搅拌，静置后离心除去除沉淀得上清液A，将其pH 调至6后上样到装有CM-琼脂糖离子交换介质的层析柱中，用1M 氯化钠溶液洗脱，将洗脱液调至pH5.5后离心去除沉淀，向所得上清液B 中加入聚乙二醇2000至其浓度达20～25％，搅拌后离心，向所得上清液C 中加入饱和硫酸钠溶液至其浓度达15～20％，混匀后离心，对所得上层清液D 进行超滤，对超滤所得溶液进行真空冷冻干燥，得到溶菌酶。

本发明分离纯化方法将离子交换法、双水相萃取法和膜分离法结合使用，克服了单一分离纯化方法存在的纯度和收率低下的缺陷，而且适合规模化生产。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 106701717 A 2017.05.24C N 106701717A1.一种鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)收集新鲜鸡蛋清，按蛋清与缓冲液体积比为1∶2的比例加入PH4.6的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，均匀搅拌，冷处静置过夜；(2)8000rpm离心去除沉淀，收集上清液A，用0.5M氢氧化钠溶液将pH调到6；(3)将CM-琼脂糖离子交换介质装柱，预处理成钠型后用pH 6的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液平衡；(4)按照上样液和介质体积比为3∶1的比例上柱，用去离子水清洗未交换蛋白，最后用1M氯化钠溶液洗脱2个柱体积，收集洗脱液；(5)用1M盐酸将洗脱液调至pH 5.5，均匀搅拌1小时，8000rpm离心去除沉淀，收集上清液B；(6)向所得上清液B中加入聚乙二醇2000，至聚乙二醇的质量浓度达20～25％，再搅拌1小时，8000rpm离心，收集上清液C；(7)向所得上清液C中加入饱和硫酸钠溶液，至硫酸钠的质量浓度达到15～20％，混匀后于6000rpm离心，收集上清液D；(8)对所得上清液D，以膜截留分子量为3000～5000Da的超滤膜进行超滤，对超滤所得溶液进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，即为溶菌酶。