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耐热芽孢杆菌检测方法耐热芽孢杆菌是一种常见的细菌，它具有较强的耐热性，可以在高温环境中存活并繁殖。
耐热芽孢杆菌对人类健康有一定的危害，因此需要进行有效的检测方法来及时发现和控制其传播。
一、背景介绍耐热芽孢杆菌属于芽孢杆菌科，是一类革兰氏阳性细菌，形状呈杆状，具有芽孢形成能力。
它在自然环境中广泛存在，可以在土壤、水体、空气中被检测到。
由于其具有耐热性和抵抗力强的特点，耐热芽孢杆菌常常成为食品加工过程中的污染源，容易引发食源性疾病。
二、耐热芽孢杆菌的危害耐热芽孢杆菌可以产生多种毒素，其中最为重要的是耐热芽孢杆菌肠毒素。
当食物被耐热芽孢杆菌污染后，如果没有经过正确的加热处理，这些细菌和毒素就可能进入人体，引发食物中毒。
耐热芽孢杆菌中毒的症状包括腹泻、腹痛、呕吐和发热等，严重的情况下甚至可能导致肠道出血和休克。
三、耐热芽孢杆菌的检测方法为了及时发现和控制耐热芽孢杆菌的传播，科学家们开发了多种检测方法。
下面介绍几种常用的方法：1.生物学方法生物学方法是最常用的耐热芽孢杆菌检测方法之一。
通过在培养基上培养样品中的细菌，观察菌落的形态和特性来判断是否存在耐热芽孢杆菌。
这种方法操作简单，成本低廉，但需要一定的培养时间。
常用的生物学方法有营养琼脂培养法和巴氏液体营养培养法。
2.分子生物学方法分子生物学方法是一种快速、敏感的耐热芽孢杆菌检测方法。
通过提取样品中的DNA，利用PCR技术扩增耐热芽孢杆菌特异基因的片段，然后通过凝胶电泳等方法分析扩增产物的大小和形态，从而确定是否存在耐热芽孢杆菌。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以在短时间内得到结果。
3.免疫学方法免疫学方法是利用抗原与抗体的特异性反应来检测耐热芽孢杆菌的方法。
常用的免疫学方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光法。
这些方法可以通过检测样品中的特定抗原或抗体来判断是否存在耐热芽孢杆菌。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏度，但操作相对复杂，成本较高。
耐热菌的检测方法
耐热菌的检测方法包括以下几种：
1. 常规培养方法：通过将样品接种到含有特定培养基的琼脂平板上进行培养，利用耐热菌在高温下能够生长的特性检测其存在。
2. 腹腔注射法：将样品与小鼠混合注射到小鼠的腹腔内，通过观察小鼠的死亡与否来判断样品中是否存在耐热菌。
3. PCR法：使用聚合酶链反应（PCR）扩增样品中的特定基因片段，通过检测扩增产物来确认耐热菌的存在。
4. 培养基过滤法：将样品过滤并收集滤液，将滤液接种到含有特定培养基的琼脂平板上进行培养，通过观察生长的菌落来确定耐热菌的存在。
5. 免疫学检测法：使用特异性抗原与样品中的耐热菌结合，再加入特异性抗体与抗原结合，通过检测抗原-抗体结合的信号来确定耐热菌的存在。
根据具体的需要和实验条件，可以选择适合的检测方法来判断样品中是否存在耐热菌。
![10[1].高温耐热菌检测](https://img.taocdn.com/s1/m/0ac41cfc910ef12d2af9e74c.png)
高温耐热菌的测定方法（企业标准）1、设备和材料1.1工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台，琼脂平板在工作台上暴露15min，每平板不得超过15个菌落。
1.2恒温培养箱：36±1℃。
1.3恒温水浴箱：45±1℃。
1.4 水浴锅、50ml试管。
1.5吸管：1、5 ml和10ml，具0.1ml刻度。
1.6平皿：直径为90mm。
1.7稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶，容量为150ml和200ml。
1.8天平：感量0.1g。
2、培养基和试剂2.1 平板计数琼脂。
2.2 75%乙醇。
2.3 稀释剂：0.85%生理盐水。
3、操作程序3.1 样品制备3.1.1无菌取检液10ml放入灭菌试管中,把试管放入沸水锅中,从再度沸腾时起算加热10分钟,取出样品,然后分析与一般生菌数的测定方法相同。
3.1.2液体食品：用灭菌吸管吸取5g样品，放入装有45ml稀释剂的150ml稀释瓶中，制成1：10的样品匀液，吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm。
吸管内液体要在2-4s内完全排入稀释剂中，不要在稀释剂中吹洗吸管。
3.1.3用1ml灭菌吸管准确吸取1：10的样品匀液1ml，放入装有9ml稀释剂的试管中。
制成1：100的样品液，从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中，吸管尖不要碰着瓶口。
吸入的液体应高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。
3.1.4分别用1ml灭菌吸管按3.1.2条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液，如10-3。
10-4……。
3.1.5分别用灭菌吸管吸取1ml样品液放入适宜标志的平皿内，每个稀释度的样品液用两个平皿，如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3min，应再振摇该样品液。
3.1.6分别加12-15ml平板计数琼脂（已放45±1℃的水浴中恒温）到各平皿内。
立即将平皿内的样品液和琼脂等培养基充分混合，混合方法是将平皿倾斜和旋转，要防止把混合物测到平皿壁和盖上。
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定光度法
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定是一项重要的环境监测工作，对于保障水质安全具有重要意义。
光度法是一种常用的测定方法，通过测定样品中细菌的光学密度来间接反映其浓度，具有操作简便、结果准确等优点。
本文将介绍水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的光度法测定方法。
一、实验仪器与试剂
1. 实验仪器：分光光度计
2. 试剂：含有氯化铁的培养基、无菌水
二、样品处理
1. 取水样：从待测水体中取得一定体积的水样，使用无菌容器收集。
2. 过滤处理：将水样通过0.45μm的微孔滤膜过滤，以去除大颗粒悬浮物和杂质。
3. 稀释处理：取适量过滤后的水样，用含有氯化铁的培养基进行适当稀释，以提高细菌在培养基中的生长适应性。
三、菌落计数
1. 培养条件：将处理后的水样接种在含有氯化铁的培养基上，进行37℃培养24小时。
2. 计数方法：取适量培养好的菌落涂布在琼脂平板上，进行菌落计数。
四、光度法测定
1. 光学密度测定：取适量经过稀释处理的水样，用分光光度计在特定波长下进行吸光度测定。
2. 细菌浓度计算：根据吸光度值和标准曲线，计算出水样中细菌的浓度。
五、结果分析
根据测定得到的数据，可以对水样中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群进行浓度分析，为水质安全评价提供参考依据。
通过光度法测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的浓度，可以及时了解水质情况，为环境保护和公共卫生安全提供重要数据支持。
希望本文介绍的光度法测定方法对相关工作人员有所帮助。
耐热霉菌（百事可乐）的检测方法
1 适用范围
本方法适用于清汁、浊汁、水及浓缩果汁中耐热霉菌的检测。
2 仪器和试剂
2.1 恒温水浴：80±1℃。
2.2 恒温培养箱：30±1℃。
2.3 灭菌培养皿：直径为150mm。
2.4 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：按产品说明书配制。
2.5 灭菌蒸馏水。
3 操作步骤
3.1 样品处理
3.1.1 浊汁及浓缩果汁：以无菌操作，取50ml检样于无菌稀释瓶中，再添加50ml无菌蒸馏水。
3.1.2 清汁：以无菌操作，直接吸取100ml检样于无菌瓶中。
3.2 同时称量相似的样品作为温度控制样品。
在温度控制瓶中插入温度计，把实验样品瓶和温度控制瓶同时放入80℃的水浴中。
3.3 当温度控制瓶的温度达到80℃±1℃时开始计时，维持30min。
3.4 把试验样品瓶放入冰浴中冷却后，平均注入到8个无菌培养皿中。
3.5 每个培养皿注入35-40mlPDA琼脂，同时作空白试验。
3.6 待琼脂凝固后，翻转平板放入塑料袋中在30℃下培养14-30天。
3.7 培养结束后，计数8个平板上所有的菌落数。
4 数据处理
浓汁及浊汁以cfu/50ml报告，清汁以cfu/100ml报告。
参考资料：参照R&TS Microbioligy lab 耐热霉菌检测方法。
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群检测是一种用于评估水质和判断水域环境卫生安全的重要方法。
下面是关于水中耐热大肠菌群检测的10条基本信息以及详细描述：1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过将水样中的细菌标记并通过流式细胞仪进行检测和计数的方法。
适用于快速分析水样中的大肠菌群含量。
2. 膜过滤法：膜过滤法通过将水样通过膜滤器，筛选并集落大肠菌群，并在适当的培养基上进行培养，可用于定量检测水样中的大肠杆菌。
3. PCR技术：PCR技术通过引物对大肠菌群的DNA进行扩增，从而快速检测水样中的大肠菌群的数量和种类。
可以利用PCR技术进行快速筛选和检测水质。
4. 培养方法：传统的培养方法通过将水样中的细菌在适当的培养基上进行培养，进行形态和生理特性的观察，并通过计数菌落形成单位(CFU)来评估水样中大肠菌群的含量。
5. 颜色指示法：这种方法通过将水样与专门的指示剂配合使用，观察颜色变化以识别大肠菌群污染。
可以通过比较颜色的深浅程度来估计水样中大肠菌群的含量。
6. 微生物生化方法：利用大肠菌群的特定生化反应，如气体产生、酶反应等来判断水样中是否存在大肠菌群污染。
适合用于水样中大肠菌群含量的快速筛查。
7. 荧光显微镜技术：荧光显微镜技术利用特定的荧光探针标记细菌，通过显微镜观察细菌的形态和分布情况，可以用来定性检测大肠菌群。
8. 免疫学检测方法：免疫学检测方法通过检测水样中的大肠菌群特异性抗原或抗体来判断细菌的存在与否。
可以利用快速免疫层析法或ELISA法进行大肠菌群的快速检测。
9. 流动细胞技术：流动细胞技术将水样通过流动细胞仪，利用荧光标记的细胞特异性探针检测水中的大肠菌群。
可用于快速检测水质中大肠菌群的含量和分布。
10. 分子生物学方法：分子生物学方法可以通过分析水样中的DNA或RNA序列，利用特定的引物对大肠菌群进行特异性检测。
使用16S rRNA基因扩增子测序技术可以鉴定水样中的大肠菌群种类和丰度。
水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法研究进展水是人类生活和生产不可或缺的重要资源，而水体中的耐热大肠菌群则是评估水体污染程度和水质安全的重要指标之一。
耐热大肠菌群通常是指在高温环境下具有耐热能力的大肠杆菌及其相关且有类似表型特征的菌群，对人类健康具有潜在的危害性。
研究水体中耐热大肠菌群的分布特征、污染源和消除方法对维护水体生态环境和保障人类健康具有重要的意义。
研究意义：1. 评估水体污染程度：耐热大肠菌群可以作为水体污染的指示生物，通过检测水体中耐热大肠菌群的含量和分布，可以评估水体的污染程度和污染源，为水体污染防治提供依据。
2. 预测水质安全：耐热大肠菌群通常与粪便污染有关，其存在可能意味着水体中存在其他病原微生物和病原体污染，对人体健康构成潜在威胁。
通过监测水体中耐热大肠菌群的含量和种类，可以预测水质安全状况，采取相应的措施避免水源污染。
3. 寻找污染源和追溯来源：耐热大肠菌群的种类和分布特征可以帮助科学家确定水体的污染源，并追溯水体污染的来源。
这对于明确责任和制定控制措施具有重要意义。
检测方法研究进展：1. 基于培养方法的检测：传统的耐热大肠菌群检测常基于培养方法，包括了大肠杆菌最概核间接培养法、大肠杆菌最概核直接培养法、大肠杆菌以小直接培养法等。
这些方法可以通过培养和观察菌落形态来检测大肠菌群的存在与数量，但存在时间较长、操作繁琐、且不能准确检测不能培养的微生物的缺点。
2. 分子生物学方法的检测：随着分子生物学技术的发展，PCR技术等分子方法在水体耐热大肠菌群的检测中得到了广泛应用。
通过筛选合适的基因标记（如16S rRNA基因、uidA基因等），利用PCR技术可以快速、准确地检测水体中耐热大肠菌群的数量和种类。
3. 表型特征的检测：除了分子生物学方法外，一些研究还尝试通过分析耐热大肠菌群的表型特征来进行检测。
利用色素、营养需求和生理特征等，可以对菌落进行初步识别和鉴定，从而判断耐热大肠菌群的存在与数量。
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群是指在水体中生存繁殖的耐热性强的大肠杆菌及其近缘菌种。
这些菌群可以引起水污染，可能对人类健康造成潜在风险。
因此，水中耐热大肠菌群的检测对于水质评估和公众健康至关重要。
本文将介绍一种常用的水中耐热大肠菌群检测方法。
传统方法：1.涂标法：将水样涂于大肠杆菌选择性琼脂培养基的表面，培养并检测菌落形成。
2.溶解法：将水样固体沉淀后，培养在大肠杆菌选择性琼脂培养基中，培养并检测菌落形成。
这些传统方法的主要优点在于简单易行，但也存在着一些缺点，如操作时间长，对菌种的选择性不够明确，容易产生假阳性和假阴性结果等。
随着生物技术的不断发展，现代分子生物学技术的应用广泛，水中耐热大肠菌群的检测方法也得到了很大的改进和完善。
现代方法：1.PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种高灵敏度的核酸检测方法，可以直接从水样中检测到耐热大肠菌的DNA。
通过PCR扩增特定的基因序列，如16SrRNA基因序列，来进行耐热大肠菌的检测。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测到耐热大肠菌的存在。
2.荧光原位杂交法：荧光原位杂交（FISH）是一种直接在原位上检测特定细菌群落的方法。
通过标记具有亲缘关系的细菌的特定DNA序列，然后在水样中进行原位杂交，通过荧光显微镜观察，并计数特定菌群的数量。
这种方法不仅可以定量，还可以确定细菌群落的分布情况。
3.基于纳米技术的检测方法：近年来，基于纳米技术的检测方法也得到了广泛的应用。
例如，通过使用有特定响应于耐热大肠菌存在的纳米材料，如金纳米颗粒，可以实现对耐热大肠菌的快速检测和定量，并且具有高灵敏度和良好的选择性。
综上所述，水中耐热大肠菌群的检测是十分重要的，可以通过传统方法如涂标法和溶解法，也可以通过现代方法如PCR法、荧光原位杂交法和基于纳米技术的检测方法来进行。
这些方法各有优缺点，需要根据实际需要来选择合适的检测方法。
随着技术的发展和进步，相信将会有更多更高效的水中耐热大肠菌群检测方法被开发出来，为水质监测和公众健康保护提供更好的支持。
耐热芽孢杆菌检测方法耐热芽孢杆菌是一种常见的食品中毒细菌，能够在高温条件下存活并产生毒素，对人体健康造成严重威胁。
因此，对于食品中的耐热芽孢杆菌的检测方法变得尤为重要。
本文将介绍几种常用的耐热芽孢杆菌检测方法。
一、传统培养法传统培养法是最常见的耐热芽孢杆菌检测方法之一。
该方法需要将待测食品样品制备成适当的浓度，接种于含有适宜培养基的培养皿中，然后在适当的温度下孵育一段时间。
耐热芽孢杆菌会在培养基上生长并形成典型的菌落。
通过观察菌落的形态、颜色等特征，可以初步判断是否存在耐热芽孢杆菌。
二、PCR法PCR法是一种快速、敏感的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法通过扩增耐热芽孢杆菌的特异DNA片段来进行检测。
首先，需要提取食品样品中的总DNA，然后使用特定引物进行PCR扩增反应。
最后，通过凝胶电泳等技术对PCR产物进行分析，判断是否存在耐热芽孢杆菌。
三、免疫学方法免疫学方法是一种常用的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法利用特异性抗体与耐热芽孢杆菌产生特异性结合反应，通过观察或检测结合后的信号来确定样品中的耐热芽孢杆菌含量。
免疫学方法具有灵敏度高、快速、简便等优点，可以应用于大批量样品的检测。
四、生化方法生化方法是通过检测耐热芽孢杆菌产生的特定代谢产物来进行检测。
例如，通过测定耐热芽孢杆菌产生的酶活性、气体生成等特征来判断是否存在耐热芽孢杆菌。
生化方法可以提供较快的结果，但对于样品的处理和操作要求较高。
五、基因测序方法基因测序方法是一种高通量、高灵敏度的耐热芽孢杆菌检测方法。
该方法通过对样品中的DNA进行测序，然后通过比对数据库中的耐热芽孢杆菌基因组信息来判断样品中是否存在耐热芽孢杆菌。
基因测序方法可以提供较准确的结果，但需要较长的分析时间和较高的成本。
耐热芽孢杆菌检测方法包括传统培养法、PCR法、免疫学方法、生化方法和基因测序方法等。
不同的方法具有各自的优缺点，可以根据实际需要选择适合的方法进行检测。
在进行耐热芽孢杆菌检测时，应注意操作规范，避免交叉污染，确保结果的准确性和可靠性，以保障食品安全和人体健康。
耐热大肠菌群方法原理耐热大肠菌群是一类能够在特定温度条件下生长的细菌群体，其检测对于食品安全和公共卫生具有重要意义。
本文将详细介绍耐热大肠菌群检测方法的原理，帮助读者了解这一领域的基本知识。
一、耐热大肠菌群概述耐热大肠菌群是一类能在37℃条件下生长的大肠菌群，主要包括大肠埃希菌、产气肠杆菌等。
它们在一定条件下能够引起食物中毒和水源污染，因此，对耐热大肠菌群的检测是评估食品安全和水质的重要指标。
二、耐热大肠菌群检测方法原理1.乳糖发酵法乳糖发酵法是检测耐热大肠菌群的一种传统方法。
其原理是利用大肠菌群能够发酵乳糖产生酸和气体的特性，通过观察培养基中是否出现酸碱指示剂的颜色变化和气泡产生来判断样品中是否存在耐热大肠菌群。
2.酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种基于抗原与抗体特异性结合的检测方法。
该方法通过制备特异性抗体，将抗体固定在酶标板上，待测样品中的耐热大肠菌群抗原与抗体结合，再加入酶标记的二抗，最后通过酶催化底物产生颜色变化来判断样品中耐热大肠菌群的存在。
3.聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应是一种分子生物学方法，通过设计特异性引物，扩增样品中耐热大肠菌群的特异性基因片段。
该方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点，被广泛应用于耐热大肠菌群的检测。
4.实时荧光定量PCR（qPCR）实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的一种检测方法，通过荧光标记的探针与目标DNA序列特异性结合，实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化，从而实现定量检测样品中耐热大肠菌群的数量。
5.纸片法纸片法是一种简便、快速的检测方法，适用于现场检测。
其原理是将特异性抗体固定在纸片上，待测样品滴在纸片上，若样品中含有耐热大肠菌群，则抗原与抗体结合，通过酶标记的二抗和底物产生颜色变化，从而判断样品中耐热大肠菌群的存在。
三、总结耐热大肠菌群的检测方法有多种，包括乳糖发酵法、酶联免疫吸附法、聚合酶链反应、实时荧光定量PCR和纸片法等。
方法一耐酸耐热菌（库克）的检测方法1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。
2 仪器和试剂2.1 恒温水浴：80±1℃。
2.2 恒温培养箱：40±1℃。
2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。
2.4 灭菌试管：18×180mm。
2.5 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。
2.6 酵母粉。
2.7 蛋白胨。
2.8 琼脂粉。
2.9 葡萄糖。
2.10 吐温80。
2.11 12.5%苹果酸。
2.12 灭菌蒸馏水。
2.13 K氏培养基平板：在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸馏水，加入1.25g酵母粉、2.50g 蛋白胨、6.50g琼脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐温80，使其溶解，轻轻盖上三角瓶的盖子，在121℃灭菌25分钟；在一个小烧杯中加入10ml蒸馏水和1.25克的苹果酸，搅拌直至溶解，将苹果酸的水溶液用0.45um的滤膜过滤，将处理过的苹果酸水溶液加入到灭菌的K氏培养基中，搅拌均匀，使其pH值达到3.7±0.1。
当冷却到大约50℃时，将K氏培养基倾注到培养皿中，凝固后在0-5℃的冰箱中储存，有效期60天，并记录配制日期。
3 操作步骤3.1 样品处理3.1.1 浓缩清汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作，取10ml浓缩清汁于15ml灭菌的试管中，再移取10ml浓缩清汁于另一带有温度计的15mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
冷却至室温，用90-100ml的灭菌蒸馏水将热处理过的样品转入灭菌容器中，摇匀。
将稀释后的样品溶液用0.45um的滤膜真空过滤。
3.1.2 清汁、水：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作，取150ml清汁（或水）于已灭过菌的玻璃样品瓶中，再移取150ml清汁（或水）于另一带有温度计的玻璃样品瓶中，作为温度控制用，盖上样品瓶的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
将热处理过的样品冷却至室温，用0.45um 的滤膜真空过滤。
3.1.3浊汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。
以无菌操作,取20ml浊汁于已灭过菌的试管中,再移取20ml浊汁于另一带有温度计的20mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。
将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中,当温度达到80±1℃时,开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。
冷却至室温，将热处理的样品用0.45um的滤膜真空过滤。
3.2 培养及计数取掉过滤器的上部装置，用灭菌的镊子，将过滤膜从过滤器上取下放在K氏培养基上，轻敲数次，以保证滤膜与培养基接触。
密封好倒置于40-41℃恒温培养箱中，在恒温培养箱底部放置一个有水的盘子，以调整恒温培养箱的湿度，培养5天。
培养结束后，记录该培养温度下滤膜上的菌落数。
根据对样品的污染情况，可选择稀释度。
用灭菌吸管吸取25ml样品，加入到225ml灭菌蒸馏水中，做成1：10的稀释度；用灭菌吸管吸取1：10的稀释液25ml，加入到225ml 灭菌蒸馏水中，做成1：100的稀释度，稀释后的样品的检测方法同上。
培养结束后，记录滤膜上的菌落数，并按相应的稀释度进行计算。
4 数据处理结果报告10ml的浓缩清汁样品中含有的菌落数,报告单位为cfu/10ml。
结果报告150ml的清汁（或水）样品中含有的菌落数，报告单位为cfu/150ml。
结果报告20ml的浊汁样品中含有的菌落数，报告单位为cfu/20ml。
参考资料：库克实验室耐热耐酸菌的检测方法。
方法二NDM耐酸耐热菌检验1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。
2 仪器和试剂2.1 恒温水浴锅：70±1℃2.2 恒温培养箱：45±1℃。
2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。
2.4 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。
2.5 灭菌三角瓶：500ml。
2.6 灭菌蒸馏水。
2.7 YSG培养基的配制：A组：酵母粉（MERCK）： 2.0g葡萄糖： 1.0g可溶性淀粉(MERCK)： 2.0g蒸馏水：500ml把A组用1-2N硫酸或盐酸调至PH为3.7±0.1；B组：琼脂（MERCK）：15.0g蒸馏水：500ml把A组和B组分别在121℃15分钟条件下灭菌，冷却至50—60℃，把两者混合。
3 操作步骤3.1 取样品50ml于一个无菌瓶中，另取同样品同体积于一个相同的瓶中做温度控制用，在温度控制瓶中插入温度计。
3.2 把两个瓶都放入到70℃的水浴中。
(水浴锅中的水面应高于瓶中的样品)，当温度控制瓶中的温度计达到70℃时，开始计时20分钟。
3.3 20分钟后，迅速将样品放入冰浴。
3.4 将经过热处理的样品加灭菌水稀释，稀释倍数约10倍左右。
用真空泵将此样品全部通过0.45 µm的滤膜。
用灭菌蒸馏水冲洗这个瓶子和过滤器。
确信这张膜被真空抽干。
将这张滤膜放到YSG培养基上。
为了防止气泡，小心的使滤膜滚贴到YSG培养基上，并且用无菌的镊子轻敲滤膜，使滤膜的边缘紧贴在培养基上。
3.5 将此培养基在45℃培养3-5天。
3.6 计数平板上所有的菌落4 数据处理检出的耐酸耐热菌以cfu/50ml报告。
参考资料：日本NDM公司耐热耐酸菌的检测。
方法三纯品耐热耐酸菌的检测方法1目的检测浓缩汁中环脂芽孢杆菌和其它的耐酸耐热菌。
这个程序含有经过改进的检测方法和NFPA的建议。
2 原理/概述这个程序描述了果汁和浓缩汁中环脂芽孢杆菌和其它的耐酸耐热菌的检测方法。
它是以抗热芽孢的生长为基础进行检测的。
抗热芽孢在较高温度和酸性环境中萌发生长。
通过ribotyping和2-甲氧基酚（俞创木粉）的化学测试来检定环脂芽孢杆菌，俞创木粉是通过气相色谱分析的方法（固相微提取）来进行检测。
3 范围和应用检测浓缩汁中的环脂芽孢杆菌，从不同种类的果汁和浓缩汁中分离耐酸耐热菌，例如橙汁、白葡萄汁、酸果蔓的果实、悬钩子、梨和西红柿。
4 仪器和化学药品2.1 恒温培养箱：43±1℃。
2.2 高压灭菌锅。
2.3 恒温水浴锅：80±1℃。
2.4 K氏培养基。
2.5 25%无菌苹果酸。
2.6 灭菌吸管：1ml 和10 ml。
2.7 灭菌培养皿。
2.8 无菌20×50mm螺旋盖的盖子。
5 培养基的制备（酸化K氏培养基）酵母浸膏：2.5g蛋白胨： 5.0-g琼脂粉：15.0-g葡萄糖： 1.0-g吐温80： 1.0-ml3.1将上述试剂加入到990ml蒸馏水中，溶解后混匀，煮沸，然后在121℃灭菌15分钟。
3.2 在烧杯中，将25克苹果酸加入到100ml去离子水中，混匀。
3.3 用0.20um的滤膜过滤除菌，然后将过滤液10ml加入到990ml在121℃灭菌15min且冷却到45℃±1℃的培养基中。
3.4 检测PH，如果需要，用无菌苹果酸或1N NaOH调整PH到3.7±0.1。
3.5 也可以从International Bioproducts购买脱水K氏培养基。
按照厂家的说明，将培养基冷却到48℃，用6ml的25%的过滤除菌的苹果酸调整PH为3.7±0.1。
6 样品采集用无菌容器采集样品。
采集样品时要小心，防止交叉污染。
7 样品制备5.1 浓缩果汁5.1.1将10ml样品加入到无菌瓶中或无菌的带有螺旋盖的20×50mm的试管中。
5.1.2将样品放在80℃的水浴锅中，用一样的试管或瓶子，合适的温度计检测温度，当样品温度达到80℃时开始计时10分钟。
5.1.3确保果汁的上液位应在水面下面。
5.1.4热冲击结束后，将样品放在冷水或冰水中迅速冷却。
5.2 原汁5.2.1取10 ml样品加入到无菌瓶中或无菌的带有螺旋盖的20×50mm的试管中。
5.2.2不进行热冲击。
6 平板制备6.1 向每个Petri dishes 平板上倾注1ml样品，平行三份。
6.2 在每个平板上倾注23ml PH 3.7的温度为45℃±1℃的K氏培养基。
6.3 倾注时，培养基应厚一些，防止在43℃变干。
6.4 将培养基已经凝固的平板在43℃±1℃培养3天。
为了观察到好的菌落形态，如果必要，培养时间可以延长1-2天，也可将平板放在袋中进行培养以防止变干。
8 数据分析浓缩汁/原汁：对三个平行平板上的菌落计数，结果以cfu/3ml报出。
9 讨论9.1 分离的菌落是不透明的、奶油色、微凸。
在显微镜下，中间成杆状，末端有芽孢。
对于腐败的微经过热处理的果汁，必须进一步确认以验证这种微生物时代有芽孢的。
分离的菌落也可以用PH为3.5的土豆右旋葡萄糖琼脂培养基在43℃±1℃培养5天以使孢子形成。
在无菌水中的悬浮孢子，也可用这种方法进行检测。
经过热处理存活的孢子通过酸化的K氏培养基进行验证检测。
9.2 通过ribotyping和/或气相色谱分析测试俞创木粉来鉴定环脂芽孢杆菌。
9.3 用5890 seriesⅡ气相色谱和5970型质谱仪（Hewlett-Packard）在70电子伏特离子能量下进行分析。
用分流和无分流注射器。
9.4 最低检测限是1.5ppb的2-甲氧基酚，在腐败的果汁（耐酸孢子生长）中，2-甲氧基酚的含量等于或大于1.5ppb，2-甲氧基酚的限量为5.0ppb。
参考资料：Evancho,G.M. and I. Walls . 2001.Aciduric flat sour sporeformers,p. 245-24。
方法三雀巢耐热耐酸菌的检测方法1 应用的范围和领域这个方法是用来测定果汁中的TAB，脂肪酸结合到环脂芽孢杆菌的细胞膜中，使它更能够抵抗食品中的低酸和商业无菌食品加工中的高温。
环脂芽孢杆菌，一种革兰氏阳性芽孢杆菌，通常能够在土壤中发现。
水果罐头中不合适的清洗引起加工设备的污染以及最终引起成品的污染。
环脂芽孢杆菌的芽孢能够在一些食品的低酸和商业无菌食品加工中的高温中生存，而这个高温是经常用来在加工中破坏食品中的芽孢的。
当这种生物体在加工中幸存而引起不知名的危害食品事件的发生时，会给生产厂家带来巨大的经济损失。
2 原理一个果汁样品进行热冲击和用0.45µm的滤膜进行无菌的过滤。
此过滤膜贴在K氏培养基上。
在培养皿上培养后进行计数并用显微镜来检查芽孢。
3 设备3.1 恒温水浴锅：80±1︒C3.2 温度计：0-100︒C3.3 灭菌移液管：10ml。
3.4 带盖子的灭菌试管和试管架：20 x 150 mm。
