DNA条形码的标准
Kress等(2005)和Taberlet等(2007)提出了 理想的DNA条形码标准:
(1)具有可以区分物种的足够变异和分化, 同时种内变异必须足够小;
(2)有高度保守的引物设计区以便于设计通 用引物;
(3)片段足够短,以便于DNA提取和PCR扩增 ,尤其是对部分降解的DNA的扩增。
变性、退火
延伸
PCR扩增原理
聚合酶链式反应(PCR)
1.PCR技术的创建 2.PCR的原理 3.PCR的反应体系和方法 4.PCR技术的近现代运用
基因组DNA
引物
DNA聚合酶
DNA片段体外扩增
PCR技术的创建
Kary B. Mullis(穆利斯(美))
Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引 物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得 到实现。 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了 PCR技术 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大 科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣 获1993年度诺贝尔化学奖。
操作及分析方法
1.提取目的基因 2.PCR 3.电泳 4.结果分析
植物DNA的提取
1.2g新鲜植物叶片,液氮中研磨尽量越细越好; 2.至50ml离心管中,加8ml细胞提取液,混匀,65℃水浴
保温20min; 3.取出离心管,加入2.5ml 5mol/L KCl溶液,混匀,冰浴
20min; 4.4000r/min×20min,并转移上清至另一50ml离心管; 5.加等体积酚/氯仿混匀,12000r/min×5min,取上清;