第十章 新酶的发现与筛选
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1. 筛选和分离酶源:从天然或改造来源中筛选出表现出所需酶活性的微生物或细胞系。
酶学研究的最新进展酶学是研究酶作用机理、性质以及酶的应用等方面的学科。
酶作为生物催化剂,参与了生命的各个领域,如代谢、信号传导、细胞分化、免疫反应等。
对于酶学的研究,不仅可以加深对生命基本规律的认识,还能为实现农业、医疗、工业等领域的经济增长和社会发展做出重要的贡献。
在现代生命科学的研究中,酶学一直是一个热门话题。
近年来,酶学研究在机制、结构、功能等方面都取得了一些新进展。
一、酶催化机制的新认识催化是酶最基本的功能之一。
酶能够加速化学反应的速率,使之不再受限于传统反应条件,如温度、pH等。
而酶作用机制,一直是酶学家们关注的焦点。
目前,关于酶催化机制的研究主要集中在以下几个方面。
1.催化机构的精细解析酶的催化机构通常包括吸附、取向、诱导、质子传递等多个环节。
目前,酶学家们在利用X射线晶体结构技术等手段,对许多重要酶的催化机构进行了精细解析。
例如,对乳酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、GLUT1、P-gp等酶的结构研究,揭示了酶的催化机制,进一步深化了对酶的理解。
2.中间态的探究与研究在催化过程中,酶能够形成不同的中间态,这些中间态反映了催化机制的多个方面,如亚基配位、化学反应、质子转移等。
例如,针对α-淀粉酶、环氧酶、酯酶、乳酸催化剂等酶的研究,发现了不同的中间态,进一步揭示了其催化机制。
3.催化剂的创新发现酶的活性部位就是催化剂。
近来,对酶活性部位的理解得到了重要补充。
例如,发现了吡咯核酸的催化剂作用、金属离子的催化剂作用、催化剂协作的作用等重要发现。
这些新发现,可能在未来的研究中为制备更高效的催化剂提供借鉴。
二、酶结构与功能的研究酶的结构与功能是密不可分的。
如何发现和研究酶的结构与功能,一直是酶学家们努力的方向。
近些年来,关于酶结构与功能的研究进展主要集中在以下几个方面。
1.结构和功能之间的联系酶学家们一直在努力破解结构与功能之间的联系。
近来,研究人员采用多种方法来探究酶的结构和功能之间的关系,例如,利用定量质谱方法、表达遗传学方法等,可以发现结构上构象变化给酶的功能带来了重要影响。
微生物酶筛选的一般流程英文回答:Microbial enzyme screening typically involves several steps to identify and select enzymes with desired properties. Here is a general process that is commonly followed:1. Identification of target enzymes: The first step is to determine the specific enzyme activity that is of interest. This could be based on the desired function or the ability to catalyze a specific reaction.For example, let's say we are interested in finding enzymes that can degrade cellulose for biofuel production.2. Source selection: Once the target enzyme is identified, the next step is to select a suitable microbial source that is likely to produce the desired enzyme. Microbes such as bacteria, fungi, and yeast are commonlyused sources.Continuing with our example, we could choose to screen cellulose-degrading enzymes from a variety of fungi known for their ability to break down plant material.3. Isolation and cultivation: The selected microbial source is isolated and cultivated under controlled conditions to optimize enzyme production. This may involve growing the microbe on specific media or in specialized bioreactors.In our case, we would isolate the chosen fungi and cultivate them in a nutrient-rich medium that promotes cellulase production.4. Enzyme extraction: Once sufficient enzyme production is achieved, the next step is to extract the enzymes from the microbial culture. This can be done through various methods such as centrifugation, filtration, or precipitation.For example, we could use centrifugation to separatethe fungal cells from the culture broth, and then collectthe supernatant containing the secreted enzymes.5. Enzyme screening: The extracted enzymes are then screened for the desired activity. This can be done through various assays and tests that measure the enzyme's abilityto catalyze the desired reaction.In our case, we could perform assays to measure the ability of the extracted enzymes to break down celluloseinto glucose.6. Enzyme characterization: Enzymes that show promising activity are further characterized to determine their properties. This may include studying their optimal pH and temperature range, stability, substrate specificity, and kinetic parameters.For example, we could determine the optimum temperature and pH at which the cellulase enzyme functions best, aswell as its ability to degrade different types of cellulose.7. Optimization and engineering: If needed, the selected enzyme can be further optimized or engineered to improve its properties. This can be done through techniques such as protein engineering or directed evolution.In our case, we could use protein engineering to modify the cellulase enzyme to make it more efficient in breaking down cellulose.8. Scale-up and production: Once the desired enzyme is identified and optimized, it can be scaled up for large-scale production. This may involve transferring the enzyme-producing strain to industrial fermentation systems and optimizing the production process.For example, we could transfer the selected fungal strain to a large-scale bioreactor and optimize the fermentation conditions for maximum cellulase production.Overall, the process of microbial enzyme screening involves identifying the target enzyme, selecting asuitable microbial source, isolating and cultivating the microbe, extracting and screening the enzymes,characterizing and optimizing the selected enzyme, andfinally scaling up production.中文回答:微生物酶筛选通常包括几个步骤,以确定和选择具有所需特性的酶。
▁▂▃▄▅▆▇█▉▊▋▌精诚凝聚 =^_^= 成就梦想▁▂▃▄▅▆▇█▉▊▋▌新陈代谢与酶知识点新陈代谢与酶名词:1、酶:是活细胞(来源)所产生的具有催化作用(功能)的一类有机物。
大多数酶的化学本质是蛋白质(合成酶的场所主要是核糖体,水解酶的酶是蛋白酶),也有的是RNA。
2、酶促反应:酶所催化的反应。
3、底物:酶催化作用中的反应物叫做底物。
语句:1、酶的发现:①、1783年,意大利科学家斯巴兰让尼用实验证明:胃具有化学性消化的作用;②、1836年,德国科学家施旺从胃液中提取了胃蛋白酶;③、1926年,美国科学家萨姆纳通过化学实验证明脲酶是一种蛋白质;④20世纪80年代,美国科学家切赫和奥特曼发现少数RNA也具有生物催化作用。
2、酶的特点:在一定条件下,能使生物体内复杂的化学反应迅速地进行,而反应前后酶的性质和质量并不发生变化。
3、酶的特性:①高效性:催化效率比无机催化剂高许多。
②专一性:每种酶只能催化一种或一类化合物的化学反应。
③酶需要适宜的温度和pH值等条件:在最适宜的温度和pH下,酶的活性最高。
温度和pH偏高和偏低,酶的活性都会明显降低。
原因是过酸、过碱和高温,都能使酶分子结构遭到破坏而失去活性。
4、酶是活细胞产生的,在细胞内外都起作用,如消化酶就是在细胞外消化道内起作用的;酶对生物体内的化学反应起催化作用与调节人体新陈代谢的激素不同;虽然酶的催化效率很高,但它并不被消耗;酶大多数是蛋白质,它的合成受到遗传物质的控制,所以酶的决定因素是核酸。
5、既要除去细胞壁的同时不损伤细胞内部结构,正确的思路是:细胞壁的主要成分是纤维素、酶具有专一性,去除细胞壁选用纤维素酶使其分解。
血液凝固是一系列酶促反应过程,温度、酸碱度都能影响酶的催化效率,对于动物体内酶催化的最适温度是动物的体温,动物的体温大都在35℃左右。
6、通常酶的化学本质是蛋白质,主要在适宜条件下才有活性。
胃蛋白酶是在胃中对蛋白质的水解起催化作用的。
酶的定向进化方法一、随机突变与筛选/选择随机突变和筛选/选择是传统的酶优化方法之一、通过实验手段引入突变体库,其中每个突变体都带有一个或多个氨基酸的突变,从而改变了酶的催化性能和特性。
然后通过筛选/选择酶的突变体库,选出具有更好性能的突变体。
随机突变是通过不同的方法引入突变体库,如辐射突变、化学突变和PCR突变等。
这些突变能导致氨基酸序列上的单个或多个碱基的突变,进而改变酶的蛋白质结构和功能。
筛选/选择是通过其中一种策略或实验步骤,将突变体库中具有更好性能的突变体选出。
这种方法可以通过酶活性检测、底物特异性筛选、抗体亲和性或酶稳定性等筛选/选择技术来实现。
二、衍生物的进化衍生物的进化是一种利用酶的天然亲和力进行定向进化的方法。
酶可以选择结合和催化一些化合物,例如酶底物或抑制剂。
利用这些底物或抑制剂的结构特征,可以设计出一系列的衍生物。
这些衍生物能与酶结合和催化,但其结合或催化性能可能比天然的底物或抑制剂更好。
通过衍生物进化,可以得到具有更高催化活性、更高底物特异性、更好稳定性或更高抑制剂亲和性的酶。
为了实现衍生物进化,需要结合合理的设计和筛选技术,如重组DNA技术、高通量筛选技术和计算模拟等。
三、DNA重组技术DNA重组技术是酶定向进化的重要手段之一,通过改变酶的基因序列,可以产生新的突变体库。
DNA重组技术通常包括酶的突变、重组和筛选等步骤。
酶的突变可以通过随机突变、有限突变或定向突变等方法实现。
随机突变通过PCR反应引入突变体库;有限突变通过合成含有特定突变位点的寡核苷酸引入突变体库;定向突变利用镊刀酶等限制修饰酶切剪酶切剪、回收酶片段并用酶反应体外合成而成的、含有特定突变位点的DNA片段。
酶的重组是将不同的突变体的DNA片段进行拼接,形成新的DNA片段,从而得到含有多个突变位点的突变体。
可以通过拼接PCR、敏感蛋白酶切剪、局部重组/突变或基因片段替换等方法进行酶的重组。
酶的筛选是通过一系列实验和检测步骤,对突变体库进行筛选,选出具有更好性能和特性的酶。
微生物的分类和鉴定第十章微生物的分类和鉴定一、名词解释:01.系统学(systematics):是研究生物多样性及其分类和演化关系的科学。
分子系统学是检测、描述并揭示生物在分子水平上的多样性及其演化规律的科学。
研究内容包括了群体遗传结构、分类学、系统发育和分子进化等领域。
02.系统树:在研究生物进化和系统分类中,常用一种树状分支的图型来概括各种(类)生物之间的亲缘关系,这种树状分支的图型也称为发育树(phylogenetic tree)。
03.分子系统树:通过比较生物大分子序列差异的数值构建的系统树称为分子系统树。
04.微生物分类学(microbial taxonomy):是一门按微生物的亲缘关系把它们安排成条例清楚的各种分类单元或分类群的科学,其具体任务有三,即分类、鉴定和命名。
05.分类(classification):根据文献资料,经过科学的归纳和理性的思考,整理成一个科学的分类系统。
即解决从个别到一般或从具体到抽象的问题。
06.鉴定(identification):通过详细观察和描述一个未知名称纯种微生物的各种性状特征,然后查找现成的分类系统,以达到对其知类、辨名的目的。
即解决从一般到特殊或从抽象到具体的问题07.命名(nomenclature):为一个新发现的微生物确定一个新学名的过程。
08.培养物(culture):是指一定时间一定空间内微生物的细胞群或生长物。
如微生物的斜面培养物、摇瓶培养物等。
如果某一培养物是由单一微生物细胞繁殖产生的,就称之为该微生物的纯培养物(pure culture)。
09.菌株(strain):从自然界分离得到的任何一种微生物的纯培养物,都可以称为微生物的一个菌株;用实验方法(如通过诱变)所获得的某一菌株的变异型,也可以称为一个新的菌株,以便与原来的菌株相区别。
菌株是微生物分类和研究工作中最基础的操作实体。
10.标准菌株:指能代表这个种的各典型性状的一个被指定的菌株。
酶的发现及研究史酶的发现来源于人们对发酵机理的逐渐了解。
早在18世纪末和19世纪初,人们就认识到食物在胃中被消化,[1]用植物的提取液可以将淀粉转化为糖,但对于其对应的机理则并不了解。
[2]到了19世纪中叶,法国科学家路易·巴斯德对蔗糖转化为酒精的发酵过程进行了研究,认为在酵母细胞中存在一种活力物质,命名为“酵素”(ferment)。
他提出发酵是这种活力物质催化的结果,并认为活力物质只存在于生命体中,细胞破裂就会失去发酵作用。
[3]法国科学家路易·巴斯德1878年,德国生理学家威廉·屈内首次提出了酶(enzyme)这一概念。
随后,酶被用于专指胃蛋白酶等一类非活体物质,而酵素(ferment)则被用于指由活体细胞产生的催化活性。
这种对酶的错误认识很快得到纠正。
1897年,德国科学家爱德华·比希纳开始对不含细胞的酵母提取液进行发酵研究,通过在柏林洪堡大学所做的一系列实验最终证明发酵过程并不需要完整的活细胞存在。
[4]他将其中能够发挥发酵作用的酶命名为发酵酶(zymase)。
[5]这一贡献打开了通向现代酶学与现代生物化学的大门,其本人也因“发现无细胞发酵及相应的生化研究”而获得了1907年的诺贝尔化学奖。
在此之后,酶和酵素两个概念合二为一,并依据比希纳的命名方法,酶的发现者们根据其所催化的反应将它们命名。
通常酶的英文名称是在催化底物或者反应类型的名字最后加上-ase的后缀,而对应中文命名也采用类似方法,即在名字最后加上“酶”。
例如,乳糖酶(lactase)是能够剪切乳糖(lactose)的酶;DNA聚合酶(DNA polymerase)能够催化DNA聚合反应。
德国科学家爱德华·比希纳人们在认识到酶是一类不依赖于活体细胞的物质后,下一步工作就是鉴定其生化组成成分。
许多早期研究者指出,一些蛋白质与酶的催化活性相关;但包括诺贝尔奖得主里夏德·维尔施泰特在内的部分科学家认为酶不是蛋白质,他们辩称那些蛋白质只是酶分子的携带者,蛋白质本身并不具有催化活性。