牛Ⅰ型胶原蛋白模拟胰蛋白酶酶切结果

酶法提取牛骨胶原蛋白研究陈静怡;肖厚荣;杨红;张靖华;张佩佩;朱许燕【摘要】以牛骨为原料,采用酶解法提取胶原蛋白,对影响胃蛋白酶酶解过程的诸多因素进行研究;在单因素实验的基础上进行正交优化,得到酶解法提取胶原蛋白的最佳工艺参数.结果表明:最佳酶解条件为脱脂时间6h,脱钙时间6h,加酶量0.50％,pH 1.8,酶解温度38℃,酶解时间8h.在该条件下,牛骨胶原蛋白提取率最高,可以达到25.38％.【期刊名称】《蚌埠学院学报》【年(卷),期】2016(005)006【总页数】5页(P31-35)【关键词】牛骨;胶原蛋白;酶解法;正交设计【作者】陈静怡;肖厚荣;杨红;张靖华;张佩佩;朱许燕【作者单位】合肥学院生物与环境工程系,安徽合肥230601;合肥学院生物与环境工程系,安徽合肥230601;合肥学院生物与环境工程系,安徽合肥230601;安徽华伊美科技企业集团,安徽合肥230088;合肥学院生物与环境工程系,安徽合肥230601;安徽华伊美科技企业集团,安徽合肥230088【正文语种】中文【中图分类】TQ936胶原蛋白是一类蛋白质家族，具有其特殊的三股螺旋结构，已至少发现了30余种胶原蛋白链的编码基因，可以形成16种以上的胶原蛋白分子，根据其结构，可以分为纤维胶原、基膜胶原、微纤维胶原、锚定胶原、六边网状胶原、非纤维胶原、跨膜胶原等。

根据它们在体内的分布和功能特点，可以将胶原分成间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。

间质型胶原蛋白分子占整个机体胶原的绝大部分，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白分子，Ⅰ型胶原蛋白主要分布于皮肤、肌腱等组织，也是畜产品加工废弃物(皮、骨)含量最多的蛋白质，占全部胶原蛋白含量的80%-90%左右，在医学上的应用最为广泛[1]。

胶原蛋白具有特殊的三股螺旋结构，其生物相容性好，可生物降解，无毒，在医学、生物学、组织工程等方面显示出巨大的潜力。

1976年，胶原蛋白产品在美国通过一系列的审批后被批准上市，调查报告显示，从1993-2000年短短的几年中，全球胶原蛋白年销售额从12亿增加到了40亿。

牛跟腱Ⅰ型胶原纤维的微观结构与理化性能分析琚海燕;刘新华;但卫华;但年华;陈娇;张玉红【摘要】In the paper,type I collagen fibrils(CF)from bovine tendon was successfully prepared by the enzyme hydrolysis method,and its secondary structure was similar with the molecular structure characteristics of type I collagen.AFM results showed that CF had even thickness with a diameter of (135±0.20)nm and enjoyed the D cycle horizontally striped structure,and the micro porous network structure was present with uniform disper-sion in aqueous solution.The tensile strength and tensile elongation of CF samples were respectively 1.293 MPa and 93.77%.The hydrophobic property of the CF samples with a mean contact angle of 68.9°were better than pure type I collagen.The bibulous rate,holding water rate and water vapor permeability rate of the CF samples were 37.13%,1 9.44% and 2749.77 g/(m2/d),and the mean porosity was 89.54%.Average cumulative adsorp-tion and desorption of specific surface area of the CF samples were 8.425 1 and 12.8046 m2/g,and the results presented the characteristics of large volume,small specific surface area and large pore size.The results provide a new reliable theoretical basis for deep processing,molding and application of natural collagen fibrils.%采用酸酶结合法成功制备了牛跟腱Ⅰ型胶原纤维,其二级结构与Ⅰ型胶原的结构特征相符；AFM 结果发现,胶原纤维粗细均匀,具有 D 周期横纹结构,直径为(135±0．20)nm,在溶液中分散均匀且呈现多孔的微观网络结构；其抗张强度与拉断伸长率分别达到1．293 MPa、93．77％；其疏水性能较纯Ⅰ型胶原有所提高,接触角为68．9°,吸水倍率、保水率与透水汽率分别为37．13％,19．44％和2749．77 g/(m2/d)；其孔隙率为89．54％,平均累积吸附与累积解吸附的比表面积分别为8．4251和12．8046 m2/g,表现出孔体积大、比表面积小和孔尺寸大的特点.牛跟腱Ⅰ型胶原纤维的微观结构与理化性能分析对天然胶原纤维的深度加工、成型及应用提供了新的、可靠的理论依据.【期刊名称】《功能材料》【年(卷),期】2015(000)015【总页数】5页(P15031-15034,15040)【关键词】Ⅰ型胶原纤维;FT-IR;理化性能;AFM;接触角【作者】琚海燕;刘新华;但卫华;但年华;陈娇;张玉红【作者单位】四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都 610065; 武汉纺织大学化学与化工学院，武汉 430073;四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都610065;四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都 610065;四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都 610065;四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都 610065;四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都 610065【正文语种】中文【中图分类】O631 引言Ⅰ型胶原是哺乳动物体内含量最丰富的细胞外基质，在体内以胶原纤维的形式存在，具有保护肌体和支撑器官的作用。

第22章模拟试题模拟试题（1）一、判断题（正√，误×）1.构成所有蛋白质的氨基酸都是α-氨基酸。

（√）2.羧肽酶A和B联合可以从羧基端开始逐一水解所有肽类物质。

（×）3.根据Anfinsen牛胰核糖核酸酶的实验结果，可以推测牛胰核糖核酸酶的生物合成途径中不存在肽链的断裂和拼接。

（√）4.胶原蛋白的稳定性得益于其三股肽链间形成大量的二硫键。

（×）5.血红蛋白与肌红蛋白都是氧的载体。

（√）6.生物膜上的糖蛋白的糖链部分与蛋白质肽链的β-酰胺基、β-羟基或γ－羟基结合。

（√）7.竞争性抑制剂是指与酶竞争结合底物。

（×）8.具有正协同效应的酶，其Hill系数总等于1。

（×）9.用定点突变的方法获得的酶蛋白突变体失去了催化活性，表明该突变氨基酸是酶的催化基团。

（×）10.所有tRNA具有相似的二级结构。

（√）11.遗传密码在各种生物和各种细胞器中都是通用的。

（×）12.基因表达的最终产物都是蛋白质。

（×）13.真核细胞DNA都集中于细胞核中。

（×）14.三羧酸循环酶系都存在于线粒体基质中。

（√）15.核酸是通过与蛋白质的相互作用执行其遗传信息传递功能的。

（√）16.真核染色体是由DNA、RNA和蛋白质组成的。

（√）17.核苷酸酶具有磷酸二酯酶活性。

（×）18.双链RNA也和DNA一样有Tm，其Tm受RNA中G-C含量影响。

（√）19.胰岛素受体具有丝氨酸激酶活性。

（×）20.缬氨霉素引起细胞死亡的原因是干扰细胞摄取氨基酸。

（×）二、选择题（幻分，1分／翅）1.一项使用Ⅹ-衍射晶体学或NMR测定大量蛋白质结构的计划应属于（B ）新兴学科。

A.基因组学（Genomics） B.蛋白质组学（Proteomics） C.糖组学（Clycomics）D.脂组学（Lipidomics）E.代谢组学（Metabolomics）2.下列功能中（D ）不是各种蛋白质所具有的功能。

i型胶原酶结构
（实用版）
目录
1.引言
2.i 型胶原酶的结构特点
3.i 型胶原酶的功能与应用
4.结论
正文
【引言】
i 型胶原酶（Collagenase I）是一种在人体内广泛存在的酶，主要负责分解胶原蛋白。

胶原蛋白是动物体内最丰富的蛋白质之一，对于维持皮肤、骨骼、关节等组织的结构和功能具有重要作用。

因此，研究 i 型胶原酶的结构、功能及其应用具有很高的理论和实际意义。

【i 型胶原酶的结构特点】
i 型胶原酶属于金属蛋白酶家族，其结构由两个亚基组成：一个催化亚基和一个调节亚基。

催化亚基负责胶原蛋白的分解，而调节亚基则可以调控酶的活性。

i 型胶原酶的作用底物是胶原蛋白的三螺旋结构，它能够识别并切割胶原蛋白的特定位点，将其分解为较小的肽段。

【i 型胶原酶的功能与应用】
i 型胶原酶在人体内有多种生理功能，包括：
1.参与组织修复：在伤口愈合过程中，i 型胶原酶可以分解受损的胶原蛋白，为新生组织的生长和修复提供空间。

2.调控细胞迁移：i 型胶原酶能够分解胶原蛋白，改变细胞外基质的结构，从而影响细胞的迁移和分化。

3.降解肿瘤：i 型胶原酶在肿瘤组织中的表达升高，可以促使肿瘤细胞降解，从而抑制肿瘤生长。

在实际应用中，i 型胶原酶的研究也有广泛前景。

例如，在医学领域，可以利用 i 型胶原酶开发新型药物，用于治疗关节炎、骨折等；在食品工业中，可以利用 i 型胶原酶制备胶原蛋白肽等保健品。

【结论】
i 型胶原酶是一种具有重要生理功能和广泛应用前景的酶。

牛胰蛋白酶（Trypsin Bovine）-Qwbio
产品名称：Trypsin Bovine（启维益成有售）
货号：PRO-313
规格：1 mg，10 mg，100 mg
物理形态：灭菌过滤的冻干粉末
纯度：经RP-HPLC和SDS-PAGE测定，其纯度高于90%。

来源：玉米
组分：无任何添加剂，冷冻干燥得到
溶解性：推荐牛胰蛋白酶溶于18 MΩ-cm的灭菌水中，浓度不低于100 μg/ml，使用之前稀释成对应的工作浓度。

稳定性：牛胰蛋白酶在室温下可以稳定存放1周，长期保存请置于-20°C，同时推荐添加载体蛋白（0.1% HSA或BSA），避免反复冻融。

生物活性：3650 Units/mg
产品介绍
胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，其作用是水解蛋白质，在大量脊椎动物的消化系统中都有发现。

在胰脏内，胰蛋白酶前体胰蛋白酶原被合成，由胰腺分泌，而后在小肠内分解成活化胰蛋白酶。

胰蛋白酶能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，但是当这两种氨基酸与脯氨酸相邻时则不能被切断。

胰蛋白酶被分泌到十二指肠中，将多肽水解成氨基酸，此过程对于食品中蛋白质的吸收非常必要，因为即使多肽相对蛋白质已经很小了，但是回肠粘膜要将其吸收，其尺寸仍然过大。

胰蛋白酶最佳工作pH为8，温度为37 °C。

在囊胞性纤维症中，运输胰蛋白酶和其他源于胰腺的消化酶的系统缺乏。

胰蛋白酶在胰腺中的含量高，易纯化，其在多个生物技术领域得到了广泛应用。

描述
重组牛胰蛋白酶既非来源于动物，也不是来源于人。

抑制剂对重组牛胰蛋白酶和天然牛胰蛋白酶的抑制作用相同（启维益成有售）。

·论著·基金项目：中国科学院理化技术研究所协作课题（Grant No．LHS-DBSW2013-01），总装后勤部课题资助项目*通讯作者：郭燕川，Email ：YanchuanGuo@mail．ipc．ac．cn牛骨胶原肽对成骨细胞分化的影响刘俊丽1张兵2宋淑军1马铭2司少艳1王毅虎2吴继功1郭燕川2*1．解放军第306医院特种病医学实验中心，北京1001012．中国科学院理化技术研究所，光化学转换与功能材料重点实验室，北京100190中图分类号：Ｒ855.22文献标识码：A文章编号：1006-7108（2014）07-0723-05摘要：目的研究3mg /ml 牛骨胶原肽（Bovine collagen peptides ，BCP ）对人成骨细胞（Human osteoblast ，HOB ），小鼠前成骨细胞系MC3T3分化的影响。

方法Western blot 检测MC3T3细胞中BCP 对Ｒunx2表达的影响；分离培养HOB ，利用对硝基苯磷酸比色法检测3mg /ml BCP 对碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase ，ALP ）含量的影响；骨钙素（osteocalcin ，OC ）ELISA 法测定BCP 对OC 含量的影响；茜素红矿化染色检测BCP 对HOB 矿化，然后用5%高氯酸进行脱色，用吸光度法检测BCP 对人成骨细胞矿化程度。

结果Western blot 检测表明，14d 后BCP 处理的MC3T3细胞中Ｒunx2蛋白表达水平（0.178ʃ0.201）与CN 组（0.146ʃ0.582，P ＞0.05）比较，有增高趋势。

ALP 染色结果表明，BCP 混合物处理组的ALP 的染色面积（33859ʃ8221）在第10d 与CN 组（19900ʃ2796）相比，显著增加（P ＜0.05），表明BCP 混合物能促进人成骨细胞早期的ALP 表达量。

BCP 混合物处理组的OC 吸光度值（0.137ʃ0.014）在第14d 高于CN 组（0.086ʃ0.023，P ＜0.05），表明BCP 混合物能促进人成骨细胞晚期阶段的OC 含量。

不同存储液对人离体牙牙周膜成纤维细胞的影响钱瀚宇;丁允鹏;吴洋欧;李生娇【摘要】目的:比较5种离体牙储存液,在不同温度、不同储存时间条件下,体外维持人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts, PDLF)活性的能力,为外伤后离体牙的保存提供实验依据.方法:选取5种离体牙存储液:牛奶、汉克斯液(Hank's balanced salt solution,HBSS)、HBSS1(HBSS+阿仑膦酸钠)、HBSS2(HBSS+还原型谷胱甘肽)、HBSS3 (HBSS+碱性成纤维细胞生长因子),用cck-8试剂测定人PDLF不同温度下,在上述溶液中保存不同时间后的细胞活性.结果:4℃条件下,各实验组的PDLF细胞活性随时间延长均呈下降趋势.在不同时间点,牛奶组均表现出相对较高的细胞活性,尤其在6 h时与其他实验组相比,差异有统计学意义(P＜0.05). 20℃条件下,各实验组的PDLF细胞活性随时间延长也呈下降趋势,其中HBSS3组活性下降相对缓慢.在不同时间点,HBSS组和HBSS3组均表现出相对较高的细胞活性,尤其在72 h时,HBSS3组与HBSS1组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).总体上,HBSS组、HBSS1组和HBSS2组的存储效果不受温度影响,而牛奶组和HBSS3组的存储效果与温度有关. HBSS3组PDLF细胞活性20℃时高于4℃,其中48 h、72 h差异有统计学意义(P＜0.05),而牛奶组PDLF细胞活性20℃时低于4℃,其中6 h、24 h差异有统计学意义(P＜0.05).结论:牛奶可作为一种方便有效的储存介质用于脱位牙的短期保存,且低温时更有优势.当脱位牙需要长期储存时,HBSS和HBSS3可作为合适的存储液.并且,HBSS在4℃和20℃时存储效果相当,而HBSS3在室温下优势更明显.%Objective: The aim of this study was to evaluate the capacity of temperature and storage media in maintaining the viability of human periodontal ligament fibroblasts (PDLF). Methods: PDLF in vitro were kept in whole milk, Hank's balanced salt solution (HBSS), 1mmol/L alendronate in HBSS (HBSS-1), 5 mmol/L glutathione in HBSS (HBSS-2), 10 ng/mL basic fibroblast growth factor in HBSS(HBSS-3)respectively. The temperature of solutions were at 4℃ and20℃respectively. After 3, 6, 24, 48 and 72 h in storage media, cell viability of PDLF were examined by CCK-8 assay. Results:At 4℃, the PDLF viabilities in every storage solution showed a downward trend with time, The milk exhibited better than other storage media in maintaining cell viability at different storage time, especially at 6 h (P＜0.05). At 20℃, the PDLF viabilities in every storage media were still decreasing over time. Among them, HBSS-3 had a relatively slow decline. HBSS and HBSS-3 were better than others in maintaining cell viability at different storage time. HBSS-3 was significantly better than HBSS-1 at 72 h (P＜0.05). In general, the performance of HBSS-1, HBSS-2 and HBSS were not influenced by storage temperature. However, the higher temperature decreased the effectiveness of whole milk, especially at 6 and 24 h (P＜0.05). But, favored the HBSS-3, especially at 48 and 72 h (P＜0.05). Conclusion: Whole milk may be an effective and convenient storage medium for avulsed teeth in a short time period and at lower temperature condition. HBSS and HBSS-3 may be suitable for long term storage in normal temperature.【期刊名称】《口腔颌面外科杂志》【年(卷),期】2017(027)004【总页数】5页(P241-245)【关键词】牙脱位;牙周膜成纤维细胞;阿仑膦酸钠;谷胱甘肽;碱性成纤维细胞生长因子【作者】钱瀚宇;丁允鹏;吴洋欧;李生娇【作者单位】上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海 200072;上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海 200072;上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海 200072;上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海 200072【正文语种】中文【中图分类】R782.4恒牙完全脱位是一类涉及牙髓、牙周膜、牙槽骨和牙龈等多种组织的严重牙外伤，占恒牙外伤比例的16%[1]。