1 / 1 实验一 红细胞计数
一、实验目的：
掌握红细胞计数原理及技术。
二、实验原理：
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。
三、实验器材及试剂：
显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。
四、实验操作：
1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。
6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。
五、计算
N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升
×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数
× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数
× 106：1ul换算为1升内红细胞数
× 200：稀释倍数
六、正常参考值
正常参考值： 成年男性：4.00-5.50×1012/升
成年女性：3.50-5.00×1012/升
新生儿： 6.00-7.00×1012/升
实验二 血红蛋白测定
一、实验目的：
掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
二、实验原理：
血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。
HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。
三、实验操作：
1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。
一. 实验原理
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。
二. 实验内容与步骤
1、红细胞计数
（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板
（2）试剂：RBC稀释液 ①Hayem 稀释液：NaCl, Na2SO4，HgCl2 ②枸橼酸钠甲醛盐水溶液:枸橼酸钠，甲醛，NaCl ③生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用
（3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝)
（4）操作步骤：①小试管加RBC稀释液2.0 ml。
②采血，取血10 μl。
③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立
即混匀。
④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高
倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细 胞数。）
2、白细胞计数
（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板
（2）试剂：WBC稀释液：冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）；蒸馏水97.0 mL；亚甲蓝（染色）
（3）标本：新鲜全血或末稍血
（4）操作步骤：①小试管加WBC稀释液0.38 mL。
②采血，微量吸管取血20 μL。
③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立
即混匀。
《实验诊断学》实验报告
实验一红细胞计数
学院：****学院
专业年级：20***级******
学号：31800*00**
姓名：**
实验日期：2020年9月15日
2020一、实验原理
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体
积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。
二、实验内容与步骤1、实验器材
显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板2、实验试剂
RBC稀释液：生理盐水
3、标本
本样本为成年男性血液样本外周血或抗凝血（EDTA抗凝）4、实验方法
（1）小试管加RBC稀释液2.0ml。
（2）采血，取血10μl。
（3）擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。
（4）混匀后充入计数室，静置3~5min，高倍镜下计数。（用高倍镜依次计数中
央大方格内4角和正中共5个中方格内的红细胞数）
（5）代入公式计算RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106
＝5个中方格内RBC数/100×1012
三、实验结果1、红细胞形态
红细胞呈双凹圆盘状，在高倍镜下见到为圆形，中央淡染，大小较一致。2、红细胞计数
（1）红细胞计数区域图片
图片1（左上计数区域）：共计110个红细胞
图片2（左下计数区域）共计104个红细胞
图片3（右下计数区域）共计103个红细胞
图片4（右上计数区域）共计120个红细胞
图片5（中间计数区域）共计116个红细胞左上计数区
域左下计数区
域右下计数区
域右上计数区
域中计数区域总数
110104103120116553
（2）计算过程RBC/L＝（110+104+103+120+116）×5×10×200×106
＝5.53×1012／L
男性：(4.0～5.5)×1012／LRBC：5.53×1012／L
略高于正常值
四、讨论1、注意事项
（1）采血时不要过分挤压。
（2）取血量须准确，动作要迅速，防止血液凝固。
（3）血液加入稀释液后，应立即混匀。
（4）充池前要摇匀，一次性充池，不能产生气泡，溢出或不足都要擦干净后重
网织红细胞计数
1．项目名称
网织红细胞计数
2．检验目的
2．1观察贫血疗效
2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复
2．3其他疾病协诊等 临床实验室
3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数
4．1重复性
4．2分析和计算参数：百分比（%）
4．3样本量：染液量=1：1
4．4精密度
5．原始样品系统：
全血
6．容器和添加剂类型
容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾
7．试及显微镜
7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：
新亚甲蓝 1.0G
枸橼酸钠 0.4G
氯化钠 0.85G
溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜
7．2．1 商标
8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正
灯泡大约半年更换一次
9．程序步骤：
9．1标本采集与要求
9．1．1标本采集：
抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理
对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理
9．1．3标本保存
检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。 9．2检验前准备
