荧光定量PCR验证大鼠严重烫伤后早期骨骼肌代谢高通量芯片中miRNA-30a表达及意义

《microRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制研究》MicroRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的调控机制研究一、引言随着生物学领域的研究深入，microRNA（miRNA）作为一类内源性的非编码小RNA，其在调控细胞生长、增殖以及分化等方面扮演着重要角色。

在众多miRNA中，miR-128因其对骨骼肌发育的潜在影响而备受关注。

本研究旨在探讨miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制，以期为骨骼肌发育和肌肉生长提供新的理论依据。

二、材料与方法2.1 材料实验所需牛骨骼肌卫星细胞购自ATCC（美国标准生物品收藏中心），并使用相关培养基进行培养。

同时，miR-128的模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）等试剂亦用于本实验。

2.2 方法采用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测miR-128的表达水平；通过细胞增殖实验和流式细胞术分析miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响；采用Western blot技术检测相关蛋白的表达水平；并通过双荧光素酶报告实验验证miR-128的靶基因。

三、实验结果3.1 miR-128在牛骨骼肌卫星细胞中的表达情况通过qRT-PCR实验发现，miR-128在牛骨骼肌卫星细胞中呈基础表达水平，并在一定条件下表达量有所变化。

3.2 miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响细胞增殖实验结果显示，过表达miR-128可显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖，而抑制miR-128则抑制细胞的增殖。

流式细胞术分析进一步证实了这一结果，过表达miR-128的细胞周期进程加快，而抑制miR-128的细胞周期进程减慢。

3.3 miR-128对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响Western blot结果显示，过表达miR-128可显著促进成肌相关蛋白的表达，如肌球蛋白重链蛋白等。

与此同时，细胞的成肌分化能力也得到了明显提高。

相反，抑制miR-128则导致成肌相关蛋白的表达减少，成肌分化能力降低。

大鼠严重体表烫伤后骨骼肌蛋白酶作用研究
文耕云;董燕麟
【期刊名称】《第三军医大学学报》
【年(卷),期】1991(13)3
【摘要】为探讨严重烧伤早期负氮平衡发生机制,利用包括一侧后肢的37％大鼠体表面积全皮层烫伤模型,观察受伤肢体与未伤肢体比目鱼肌蛋白分解率的变化及相应肌肉几种蛋白水解酶可溶性部分活性改变。

同时观察了胰岛素和β-羟基丁酸钠(β-HOBNa)对这些蛋白酶的效应。

烧伤后第3天结果表明,烫伤肢体比目鱼肌蛋白分解率及蛋白酶可溶性部份活性显著升高;胰岛素有降低组织蛋白酶活性的作用;β-HOBNa无此效应。

上述结果提示:严重体表烧伤早期受伤部位肌肉蛋白分解加快乃局部组织蛋白酶活性上升所为。

胰岛素的节氮作用可能与抑制了这类蛋白酶的活性有关。

【总页数】5页(P217-221)
【关键词】烧伤;组织蛋白酶类;肌肉;代谢
【作者】文耕云;董燕麟
【作者单位】第三军医大学训练部生化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R644.02
【相关文献】
1.大鼠骨骼肌26S蛋白酶复合体在严重烫伤后含量的变化 [J], 谭银玲;汪仕良;董燕麟
2.严重体表烫伤后大鼠比目鱼肌蛋白质代谢与TNF作用的机制探讨 [J], 杨春;董燕麟
3.严重烫伤大鼠骨骼肌26S蛋白酶复合体和19S调节复合体活性的变化 [J], 谭银玲;汪仕良;董燕麟
4.内毒素对大鼠严重体表烫伤早期骨骼肌蛋白质分解代谢的影响 [J], 周长保;董燕麟;陈敏
5.严重体表烫伤后大鼠比目鱼肌蛋白质代谢变化与TNF作用机理的探讨 [J], 杨春;董燕麟;周长保;陈敏
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《miR-133a互作LncRNA调控牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的机制研究》摘要：本文旨在探讨miR-133a与长链非编码RNA（LncRNA）之间的相互作用，以及这种互作如何调控牛骨骼肌卫星细胞的增殖与分化。

通过生物信息学分析、细胞实验和分子生物学技术，我们揭示了miR-133a与特定LncRNA之间的结合机制，并进一步探讨了这种互作对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响。

本研究不仅为牛骨骼肌发育的分子机制提供了新的视角，也为肌肉相关疾病的预防和治疗提供了理论依据。

一、引言骨骼肌卫星细胞是成年哺乳动物骨骼肌的重要组成成分，其增殖与分化对于维持肌肉的生长和修复具有重要意义。

近年来，随着对非编码RNA研究的深入，miRNA和LncRNA在骨骼肌发育和功能维持中的重要作用逐渐被揭示。

其中，miR-133a作为一种重要的miRNA，在肌肉发育过程中发挥着关键作用。

而LncRNA作为一类重要的调控分子，在多种生物学过程中发挥着重要作用。

本研究旨在探讨miR-133a与LncRNA之间的互作关系及其对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的调控机制。

二、材料与方法1. 材料：实验所用的牛骨骼肌卫星细胞购自ATCC（美国标准生物品收藏中心），miR-133a模拟物、抑制剂及相应的对照品由本实验室合成，LncRNA的序列信息来自公共数据库。

2. 方法：采用生物信息学分析、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、双荧光素酶报告实验、流式细胞术等分子生物学技术进行实验和数据分析。

三、实验结果1. miR-133a与LncRNA的互作关系：通过生物信息学分析，我们发现miR-133a与多个LncRNA具有潜在的互补序列。

进一步通过双荧光素酶报告实验验证了miR-133a与特定LncRNA之间的互作关系。

2. miR-133a对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响：通过qRT-PCR检测到miR-133a在牛骨骼肌卫星细胞中的表达水平。

过表达或抑制miR-133a后，通过流式细胞术分析细胞增殖和周期的变化，结果显示miR-133a对牛骨骼肌卫星细胞的增殖和分化具有显著影响。

严重烫伤早期外源性β-羟丁酸钠、胰岛素对大鼠骨骼肌蛋白
质代谢的影响
杨青;董燕麟
【期刊名称】《第三军医大学学报》
【年(卷),期】1989(11)1
【摘要】本文就外源性β-羟丁酸钠(β-HOBNa)、胰岛素(Ⅰ)对37％体表严重烫伤大鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响进行了研究。

结果为伤后第4天血清乙酰乙酸(AcAc)无明显变化,游离脂肪酸(FFA)下降,尿3-甲基组氨酸(3-MH)和伤肢比目鱼肌蛋白质分解率明显增加。

伤后连续三天注入β-HOBNa可降低尿3-MH和比目鱼肌蛋白质的分解率,但对其合成无明显影响。

联合注入β-HOBNa和Ⅰ未见二者有明显的协同抗蛋白质分解的效应。

【总页数】5页(P5-9)
【关键词】烧伤;羟丁酸钠;胰岛素;蛋白
【作者】杨青;董燕麟
【作者单位】第三军医大学生化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R982
【相关文献】
1.早期补充外源性左旋肉碱对严重烫伤大鼠肾功能的影响 [J], 田曦茜;孔维昌;李朋涛;夏正国;徐结苟;徐庆连
2.荧光定量PCR验证大鼠严重烫伤后早期骨骼肌代谢高通量芯片中miRNA-30a 表达及意义 [J], 张海军;柴家科;郝岱峰;申传安;郁永辉
3.烫伤后早期肠道喂养对骨骼肌蛋白质分解代谢影响的研究 [J], 周建嫦;董燕麟
4.内毒素对大鼠严重体表烫伤早期骨骼肌蛋白质分解代谢的影响 [J], 周长保;董燕麟;陈敏
5.严重体表烫伤早期TNF对骨骼肌蛋白质分解代谢影响的实验研究 [J], 李林;董燕麟;杨春;陈敏
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基于实时荧光定量反转录PCR技术的动物miRNA表达分析策略宋嘉哲;孙福伯;庄开歌;薛恺【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(40)9【摘要】在人体内有约60％的蛋白质编码基因受到到miRNA调控.近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注.目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的放大检测技术是应用范围最广,实施手段最灵活的一种研究策略.主要包括miRNA的全定量PCR法(miR-Q)、基于茎环引物的实时荧光定量PCR法、Poly(A)加尾性通用反转录法、miRNA表达谱的高通量RT-PCR分析和miRNA扩增谱系(mRAP)法.作者对这几种基于实时荧光定量RT-PCR技术的动物miRNA表达分析策略分别进行了介绍,对其原理、方法和应用范畴进行了概括性总结.【总页数】5页(P109-113)【作者】宋嘉哲;孙福伯;庄开歌;薛恺【作者单位】大连医科大学,辽宁大连 116044;大连医科大学,辽宁大连 116044;大连医科大学,辽宁大连 116044;大连医科大学,辽宁大连 116044【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性 [J], 许炎;张晨;徐庆文;黄江平;刘亚楠;邹凯南;平原;周怀谷2.实时荧光定量PCR检测转基因阿尔茨海默病小鼠脑组织中miRNAs的差异表达[J], 田密;丁宇;侯德仁;邓炎尧;李维;奉夏露3.茎-环反转录实时PCR技术分析miR-93和miR-342在乳腺癌细胞系中的表达* [J], 杨璐全;杨曼曼;刘晓燕;龙燕;魏春莉;杨维婵;傅俊江4.实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测HLA-DRα基因mRNA表达 [J], 宁勇;王宇学;陶建武5.基于实时荧光定量PCR技术的蝴蝶兰PPO和PAL基因表达分析 [J], 赵和文;崔金腾;周田田因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

1472022年2月上 第03期 总第375期学术研究China Science & Technology Overview0.引言骨骼是由骨、软骨、脂肪、成纤维细胞、神经、血管和造血细胞等组成的器官，它不仅为哺乳动物身体提供了物理支架，还可以通过再生来修复使其恢复完全功能状态。

骨的细胞在不停地进行着细胞代谢，在骨代谢中有两种细胞起着重要的作用，一种是吸收骨基质的破骨细胞，另一种是合成骨基质的成骨细胞。

成骨细胞的骨生成与破骨细胞的骨吸收相互协调使得哺乳动物得以保持正常骨量及骨骼完整性[1]。

MicroRNA（miRNA）是由真核细胞产生的一类，长约19nt ～24nt，具有调节功能的、保守的、单链非编码RNA，对基因表达进行转录中或者转录后调节。

近年来，随着对miRNA 包括其靶基因涉及信号通路研究的深入，发现越来越多的miRNA 及靶基因在哺乳动物生理过程中具有重要功能，在骨骼发育与修复上更具有不可忽视的作用。

1. miRNA 调控骨骼细胞生长发育1.1 miRNA 调控成骨细胞成骨细胞是骨骼发育的重要细胞，miRNA 与成骨细胞分化及骨形成有着密不可分的联系。

miRNA 在干细胞成骨分化过程中发挥了重要作用[2]，已经被广泛用于骨再生方面的研究，多种miRNA 对间充质干细胞及骨髓干细胞的成骨分化具有调控作用。

研究表明，部分miRNA 能抑制骨分化，逆转骨丢失：miR-146a 能抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化[3]，而miR-214抑制人脂肪干细胞的成骨分化过程[4]。

随着对miRNA及骨骼发育与修复相关生理过程研究的深入，miRNA 对成骨细胞分化的影响呈现出多维度、多角度的特点。

Pei 通过细胞实验证明在骨髓间充质干细胞的表达下调的miR-22可以促进成骨细胞的形成。

随后验证miR-22的antagomir 将前成骨细胞转化为更分化和矿化的表型，ALP、CBFA1和COL1A1蛋白表达水平的上调。

凋亡相关性microRNA及其靶基因蛋白在心肺复苏后大鼠心肌中的表达变化余姚凤;何爱文;李章平;陈寿权;李惠萍;黄唯佳;程俊彦;章杰;薛继可【期刊名称】《温州医学院学报》【年(卷),期】2013(43)6【摘要】Objective:To explore changes of the expression of apoptosis-related MicroRNAs,target genes and protein in cardiomyocytes after cardiopulmonary resuscitation in rats.Methods:Sixteen male SpragueDawley mice were randomly divided into two groups:the control group (n=8) and CPR group (n=8).The animal model of cardiac arrest (CA) induced by asphyxia was established and CPR was performed.Myocardium samples were taken 24 hours after CPR or intubation for detecting the expression profile of microRNA-1 and miRNA-133a using RT-PCR.Myocardium cell apoptosis were detected by TUNEL method.The levels of Bcl-2 and Bax were measured using immunohistochemical staining.Results:Compared with group A,microRNA-l,miRNA-133a,the levels of bcl-2 and Bax protein increased significantly in group B (P ＜0.01),and Bcl-2/Bax ratio decreased significantly (P ＜ 0.01).There was significant correlation between miRNA-1,miRNA-133a and Bcl-2,Bax individely.Conclusion:There are promoting cardiomyocyte apoptosis after CA/CPR.The changes of apoptosis-related microRNAs may be one of the mechanisms.%目的:探讨凋亡相关性微小RNA (microRNA,miRNA)在心肺复苏(CPR)后大鼠心肌中的表达变化.方法:雄性SD大鼠16只,随机分成对照组(A组)和复苏组(B组),每组8只,采用窒息法建立心搏骤停(CA)大鼠模型.以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测自主循环恢复后(ROSC)后24 h的心肌细胞凋亡指数(AI)；实时荧光定量法检测miRNA-1和miRNA-133a的表达情况；免疫组化染色法检测Bc1-2、Bax蛋白表达.结果:B组ROSC后24 h AI、miRNA-1、miRNA-133a、Bc1-2及Bax蛋白表达比A组高(P＜ 0.01),Bc1-2/Bax值比A组低(Jp＜0.01),miRNA-1、miRNA-133a分别和Bc1-2、Bax的变化有相关性.结论:大鼠心搏骤停/心肺复苏后存在明显的心肌细胞凋亡,凋亡相关的miRNA变化可能是其机制之一.【总页数】4页(P367-370)【作者】余姚凤;何爱文;李章平;陈寿权;李惠萍;黄唯佳;程俊彦;章杰;薛继可【作者单位】温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院急诊科,浙江温州325027;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000;温州医学院附属第一医院急诊科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R541.7【相关文献】1.心肌组织基质金属蛋白酶-1,2,9及其抑制物-1,2基因表达变化在心肌肥厚患者心肌纤维化中的意义 [J], 王先梅;严睿;杨丽霞;郭传明;齐峰;石燕昆;王燕;魏玲2.解偶联蛋白- 2基因在压力负荷模型大鼠心肌中的动态表达变化 [J], 汪春晖;江时森;宫剑滨;杭涛;任海玲;谢渡江;诸葛海鸿3.辐射诱发大鼠体内旁效应中肺及肾组织凋亡相关基因mRNA的表达变化 [J], 张朝宁;李金田;刘永琦;蔺兴遥4.大鼠嗅球中凋亡相关基因蛋白和成纤维细胞因子表达的相关性及其意义 [J], 关桂梅;董震;杨占泉5.Nogo-A蛋白在大鼠心肌细胞中的表达变化及其在细胞缺氧性凋亡中的作用 [J], 程亮;易蔚;任凯;裴建明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

hsa-miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及其对细胞凋亡的影响丁江水;邓英虎【摘要】目的：研究miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS中的过表达对其凋亡的影响。

方法：构建pEZX-MR04-pre-miR-30a真核表达载体，瞬时转染人骨肉瘤细胞株U2-OS，荧光显微镜及荧光定量PCR法（ qRT-PCR）检测miRNA-30a在U2-OS中的表达，并采用流式细胞仪检测稳转株细胞的凋亡情况。

结果：荧光显微镜下观察真核表达载体pEZX M-R04-pre-miR-30a转染后的U2-OS细胞，可见大量绿色荧光；qRT-PCR检测U2-OS中miR-30a的表达明显提高；流式细胞检测转染后的U2-OS细胞的凋亡明显增加。

结论：miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS过表达能促进其凋亡，miR-30a可能是U2-OS细胞潜在的抑癌基因。

%Objective:To determine the expression of miR-30a in human osterosarcoma cell line U2-OS and the effects on the apoptosis of human U2-OS cells.Methods:pEZX-MR04-pre-miR-30a vector was constructed and transiently transfected into U2-OS cells.The expression of miRNA-30a inU2-OS cells was verified by fluorescence microscopy and quantitative real time PCR (qRT-PCR).Flow cytometry was used to detect the effects of miR-30a on the apoptosis of U2-OS cells.Results:pEZX-MR04-pre-miR-30a vector was successfully transfected into U2-OS cells.Quantitative green positive cells were seen under fluorescence microscope,and qRT-PCR results indicated significant increase of miR-30a expression in U2-OS cell lines.Flow cytometry findings showed that miR-30a significantly promoted U2-OS cells apoptosis.Conclusion:Over-expression of miR-30a hassignificantly facilitated the apoptosis cells U2-OS,suggesting that miR-30a may be a potential tumor suppressor gene for human osteosarcoma.【期刊名称】《皖南医学院学报》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】4页(P12-15)【关键词】hsa-miR-30a;骨肉瘤;细胞凋亡;抑癌基因【作者】丁江水;邓英虎【作者单位】青阳县人民医院骨科，安徽池州 242800;铜陵市人民医院骨科，安徽铜陵 244000【正文语种】中文【中图分类】R733.3目前骨肉瘤治疗方法通常为手术治疗并辅以化疗，5年生存率为50% ～80%［1］。

MicroRNA--1133a在大鼠失神经骨骼肌中的初步研
究的开题报告
题目：MicroRNA-1133a在大鼠失神经骨骼肌中的初步研究
摘要：失神经骨骼肌（DNM）是一种神经肌肉障碍，导致骨骼肌的功能障碍和退化。

MicroRNAs（miRNAs）是一类长度约为20-25个核苷酸的非编码RNA分子，可以调节基因的表达。

近年来，越来越多的研究发现，miRNAs在DNM的发生发展中扮演着关键的角色。

本研究将探究miRNA-1133a在DNM中的作用机制及其对骨骼肌退化的影响。

方法：本实验将使用异丙酚麻醉控制下的大鼠模型，分别制备DNM 组和对照组。

收集大鼠的股二头肌组织样本用于RNA提取及miRNA-1133a的检测。

此外，还将进行肌肉组织学和生化测定，分别探究miRNA-1133a对DNM大鼠肌肉退化的影响。

预期结果：预计DNM组中miRNA-1133a的表达量将明显高于对照组。

同时，肌肉组织学和生化测定结果显示，DNM组中的骨骼肌退化程度会明显高于对照组，且miRNA-1133a的高表达可能是导致肌肉退化的重要原因之一。

这些初步结果将有助于更深入地了解DNM以及miRNA 在DNM中的作用机制。

烧伤后大鼠不同骨骼肌凋亡相关蛋白的转录表达变化目的：通过检测烧伤大鼠不同骨骼肌组织中凋亡相关蛋白的转录变化，探讨细胞凋亡对烧伤后骨骼肌高消耗的影响机制。

方法：180只大鼠随机分为5组，通过建立大鼠烧伤模型，分别在烧伤后6h、1天、3天、7天及14天切取大鼠伸趾长肌和比目鱼肌，采用RT-PCR方法测定骨骼肌组织Akt、Bcl-2、Caspase-3的转录表达。

结果：伸趾长肌Akt转录表达在伤后前期变化不明显，在第14天显著下降；Bcl-2转录表达在初期轻度上升，在后期下降；Caspase-3转录表达在伤后第7天和第14天显著增高。

比目鱼肌Akt转录表达在烧伤后6h、1天、4天、7天无明显变化，在烧伤后14天显著下降；Bcl-2转录表达在烧伤后6h、1天和4天呈逐渐表达显著增强趋势，而后逐渐下降，；Caspase-3转录表达各个时间点无显著变化。

结论：在严重烧伤大鼠，快白肌组织凋亡明显，而且随着病程的延长，凋亡越显著；慢红肌组织凋亡不明显，尽管随着病程的延续，有上升的趋势。

Abstract:ObjectiveBy detecting the transcriptional changes in apoptosis-related proteins in different types of skeletal muscle in burned rats, the influence mechanism of apoptosis on the skeletal muscle wasting was studied.Methods180 rats were randomly divided into 5 groups. By setting up the rat burned model, extensor digital longus muscle and soleus muscle samples were collected at 6h,1d,4d,7d and 14d after burn injury. Transcriptal expression of Ake, Bcl-2 and caspase-3 were measured by RT-PCR method. Results In extensor digital longus muscle, the Akt expression decreased significantly at different time points. The Bcl-2 expression increased slightly at early stage,but decreased at late stage.Caspase-3 expression increased significantly on days 7 and 14 postburn. While in soleus muscle,there were no significant changes in Akt expression at other time points except significant decrease on day 14. There were significant increases in Bcl-2 at 6h,1d and 4d, and the decrease gradually on days 7 and 14 postburn. There were no marked changes in caspase-3 expression. Conclusion In severely burned rats, apoptosis could commonly occur in fast-white skeletal muscle,and become markedly along with the prolongation of the disease course, with no obvious change in slow-red skeletal muscle.Key words: burn injury; skeletal muscle;apoptosis大面积深度烧伤对全身的影响极为剧烈，骨骼肌作为人体最大的含氮组织，在严重烧伤时会发生明显萎缩，因此是烧伤时机体蛋白质丧失的主要来源[1]。