微生物生化 2008

微生物生理生化反应实验原理通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。

某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。

V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。

微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。

有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。

某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

实验材料和方法：材料：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基；菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）；试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素；仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。

实验方法：1.V-P反应取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。

置于37℃恒温箱中培养48小时。

取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。

生化反应对照表（1）肠杆菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 鸟氨酸赖氨酸甲基红纤二糖山梨醇侧金盏醇鼠李糖木糖蔗糖丙二酸盐甘露醇阿拉伯糖阳紫色紫色红色黄色黄色黄色黄色黄色黄色兰色黄色黄色阴黄色黄色黄色紫色紫色紫色紫色紫色紫色绿色紫色紫色B 靛基质七叶苷苯丙氨尿素棉子糖精氨酸枸橼酸蕈糖H2S 硝酸盐蜜二糖VP阳红色黑色草绿红色黄色红色兰色黄色黑色红色黄色红色阴黄色灰色黄色黄色紫色黄色绿色紫色灰黄黄色紫色黄色注：用于氧化酶（—）的G（—）杆菌鉴定的生化反应孔位反应阳性阴性F12 O-F试验黄色紫色G12 葡萄糖黄色紫色H12 果糖黄色紫色（2）非发酵菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12硝酸盐精氨酸尿素七叶苷果糖半乳糖麦芽糖葡萄糖甘露糖甘露醇木糖麦康凯阳红色红色红色黑色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色浑浊阴黄色黄色黄色灰黑紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色澄清乳糖空白氯化钠H2S 赖氨酸鸟氨酸鼠李糖明胶淀粉酶（醋酸盐）枸橼酸SS阳黄色浑浊黑色紫色紫色黄色液化无色兰色兰色浑浊阴紫色澄清灰黄黄色黄色紫色凝固黑色绿色绿色澄清（3）葡萄球菌/微球菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 硝酸盐蔗糖蕈糖麦芽糖VP 木糖甘露糖厌氧葡萄糖甘露醇空白凝固酶凝聚因子阳红色黄色黄色黄色红色黄色黄色黄色黄色阴黄色紫色紫色紫色黄色紫色紫色紫色黄色（4）链球菌/肠球菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10胆汁七叶苷七叶苷 6.5%氯化钠Optochin 杆菌肽山梨醇山梨糖V-P 精氨酸β-溶血阳黑色黑色浑浊浑浊浑浊黄色黄色红色红色有阴灰黑色灰黑色澄清澄清澄清紫色紫色棕黄黄色无（5）（无芽孢）阳性杆菌1 2 3 4 5 6 7A 硝酸盐尿素B-E 葡萄糖麦芽糖硫化氢明胶阳紫红色红色黑色黄色黄色黑色液化阴黄色或淡红黄色灰色紫色紫色灰色凝固注：B-E为胆汁七叶苷试验。

（6）弧菌科1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 纤二糖甘露醇蔗糖赖氨酸鸟氨酸水杨苷硝酸盐0%NaCl 靛基质乳糖七叶苷VP 阳黄色黄色黄色紫色紫色黄色深红色黄色红色黄色黑色红色阴紫色紫色紫色黄色黄色紫色黄色紫色黄色紫色灰色黄色B 枸橼酸盐阳兰色阴绿色（7）酵母样真菌1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A 尿素麦芽糖蔗糖乳糖半乳糖蜜二糖纤维二糖肌醇棉子糖蕈糖木糖KNO3阳黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色黄色红色阴无色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色紫色黄色B 鼠李糖葡萄糖肉汤阳黄色黄色菌膜生长阴紫色紫色沉淀生长(8) 支原体1 2A 尿素精氨酸阳红色红色阴黄色黄色B阳阴(9) 嗜血杆菌1 2 3 4 5A X因子V因子溶血性触酶G-小杆菌阳生长生长溶血阴不生长不生长不溶血B阳阴药敏试验MIC值对照表（单位：μg/ml）注：表中的‘低’‘中’‘高’分别代表每种药物的三个MIC值，这三个MIC值确定了细菌对于药物敏感、中介或耐药的界限。

国家食品药品监督管理局关于发布化学药品注射剂和多组分生化药注射剂基本技术要求的通知（国食药监注[2008]7号）【收藏】各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：为落实国家局制定的《整顿和规范药品研制、生产、流通秩序工作方案》（国食药监办〔2006〕465号），严格审评审批化学药品注射剂、中药注射剂和多组分生化注射剂等安全性风险较大的3类品种。

国家局组织制定了《化学药品注射剂基本技术要求（试行）》和《多组分生化药注射剂基本技术要求（试行）》（以下称《技术要求》），现予发布，请参照执行，并将有关事宜通知如下：一、国家局已受理但尚未批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂应参照《技术要求》进行研究。

二、已经批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂也应参照《技术要求》进行相关研究，并在申报再注册时提供相关研究资料。

三、对已上市化学药品注射剂、多组分生化药注射剂进行仿制、改变剂型或者改变给药途径研究时，研究者应当慎重考虑已上市品种的研究基础。

附件：1．化学药品注射剂基本技术要求（试行）2．多组分生化药注射剂基本技术要求（试行）国家食品药品监督管理局二○○八年一月十日附件1：化学药品注射剂基本技术要求（试行）本技术要求适用于化学药品中各种注册分类的注射剂。

本技术要求主要针对目前化学药品注射剂研发、生产和使用中存在的突出问题，在遵循一般评价原则的基础上，通过分析可能影响注射剂临床使用安全性的主要因素，结合品种的上市基础等，提出化学药品注射剂审评中的重点关注点和相应的技术要求。

一、化学药品注射剂剂型选择的必要性、合理性（一）选择注射途径给药剂型的必要性、合理性对剂型的必要性、合理性进行评价通常应综合考虑如下因素：1.药物的理化性质、稳定性和生物学特性药物的理化性质（溶解度、pKa、分配系数、吸湿性、晶型等）、稳定性（对光、湿、热的稳定性，固、液状态下的稳定性和配伍稳定性）和生物学特性（吸收、分布、代谢、消除等）可以为剂型的选择提供指导，在有些情况下甚至可能限定剂型的选择。

微生物生化鉴定【微生物生化鉴定】微生物生化鉴定是一种鉴定微生物种类和特性的方法，它通过检测微生物代谢产物和酶的活性等生化特性来对微生物进行鉴定。

在微生物的研究、诊断和治疗等方面都有着广泛的应用。

下面我们将分别介绍鉴定细菌、真菌和病毒的微生物生化鉴定方法。

一、细菌的微生物生化鉴定1. 常规生化试验：包括氧化-发酵试验、铁锰试验、利用光对紫杆菌的鉴别、胶原酶酶切试验等。

2. 抗生素敏感试验：对于致病菌的抗生素敏感试验是非常重要的生化鉴定方法。

在临床上，通过检测微生物对各种抗生素的敏感性来确定选用哪种抗生素进行治疗。

3. 酸碱度试验：对于肠道菌等产生乳酸的菌株，可以通过酸碱度试验来鉴定其种类。

4. 糖代谢试验：细菌不同的糖代谢方式也是一种微生物生化鉴定方法。

二、真菌的微生物生化鉴定1. 吸附凝集实验：可用于白色念珠菌的鉴定。

2. 纸片扩散法：可用于真菌药物敏感性试验。

3. 不同培养基的试验：对于不同种类的真菌，它们对不同培养基有不同的适应性，可以通过这种方法来进行鉴定。

4. 营养需求试验：真菌的营养需求也不同，通过对真菌在培养基上的生长情况进行观察，可以对其种类进行初步鉴定。

三、病毒的微生物生化鉴定1. 免疫荧光试验：通过对病毒进行免疫染色等手段来进行鉴定。

2. 基于PCR技术的鉴定：包括标准PCR、荧光PCR和荧光定量PCR等方法。

3. 细胞培养法：将病毒在细胞培养基上培养，观察病毒在细胞上的生长和变化，以进行鉴定。

总之，微生物生化鉴定方法是一种基础的、重要的微生物鉴定方法，对于微生物的研究、诊断和治疗等方面都具有重要的意义。

不同类型的微生物鉴定方法不同，需要根据具体的情况进行选择和操作。

通过合理地运用微生物生化鉴定方法，可以更准确地鉴定不同类型的微生物，为其应用提供有力的支持。

国家食品药品监督管理局关于发布化学药品注射剂和多组分生化药注射剂基本技术要求的通知（国食药监注[2008]7号）【收藏】各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：为落实国家局制定的《整顿和规范药品研制、生产、流通秩序工作方案》（国食药监办〔2006〕465号），严格审评审批化学药品注射剂、中药注射剂和多组分生化注射剂等安全性风险较大的3类品种。

国家局组织制定了《化学药品注射剂基本技术要求（试行）》和《多组分生化药注射剂基本技术要求（试行）》（以下称《技术要求》），现予发布，请参照执行，并将有关事宜通知如下：一、国家局已受理但尚未批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂应参照《技术要求》进行研究。

二、已经批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂也应参照《技术要求》进行相关研究，并在申报再注册时提供相关研究资料。

三、对已上市化学药品注射剂、多组分生化药注射剂进行仿制、改变剂型或者改变给药途径研究时，研究者应当慎重考虑已上市品种的研究基础。

附件：1．化学药品注射剂基本技术要求（试行）2．多组分生化药注射剂基本技术要求（试行）国家食品药品监督管理局二○○八年一月十日附件1：化学药品注射剂基本技术要求（试行）本技术要求适用于化学药品中各种注册分类的注射剂。

本技术要求主要针对目前化学药品注射剂研发、生产和使用中存在的突出问题，在遵循一般评价原则的基础上，通过分析可能影响注射剂临床使用安全性的主要因素，结合品种的上市基础等，提出化学药品注射剂审评中的重点关注点和相应的技术要求。

一、化学药品注射剂剂型选择的必要性、合理性（一）选择注射途径给药剂型的必要性、合理性对剂型的必要性、合理性进行评价通常应综合考虑如下因素：1.药物的理化性质、稳定性和生物学特性药物的理化性质（溶解度、pKa、分配系数、吸湿性、晶型等）、稳定性（对光、湿、热的稳定性，固、液状态下的稳定性和配伍稳定性）和生物学特性（吸收、分布、代谢、消除等）可以为剂型的选择提供指导，在有些情况下甚至可能限定剂型的选择。