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南京大学生物技术系实验报告题目微生物生理生化实验的结果观察及放线菌、酵母菌和霉菌的培养姓名年05 月17 日【一、实验目的】1、了解反应原理和细菌的生理生化特性。
2、正确掌握测定的方法并用作鉴别细菌的重要依据。
【二、实验原理、步骤和结果】一、细菌生理生化实验1、过氧化氢试验取一干净的载玻片，在上面滴一滴H2O2溶液，挑取一环菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若产生气泡(氧气)为过氧化氢阳性反应，不产生气泡为阴性反应，本次实验用E.Coli和苏云金芽孢杆菌。
实验结果：两种细菌都产生了气泡(O2)，但E.Coli产生的气泡比苏云金芽孢杆菌更剧烈也更多。
实验证明E.Coli含有较多的过氧化氢酶。
2、淀粉水解试验(最后做，先每4人转接其中的菌种于斜面，然后做实验)淀粉是一种多糖，不能透过细菌细胞，但有的细菌能产生胞外的淀粉酶，将淀粉水解成麦芽糖后入细胞，淀粉遇碘呈蓝紫色。
取一瓶淀粉肉膏培养基熔化，每人倒一皿。
冷却，把平板划分成两部分，一边接种E.Coli，一边接种枯草杆菌。
用碘液淹没平板观察现象。
实验结果：E.Coli边缘呈蓝色，中间呈黄；而枯草芽孢杆菌则不变色。
3、甲基红(M.R.)试验有些细菌在降解葡萄糖过程中产生大量的酸，使培养基的pH显著下降。
甲基红指示剂可检测之，它在中性时呈黄色，酸性时呈红色。
将E.Coli及假单胞杆菌各接种2支葡萄糖蛋白水培养基。
另有1支不接种对照。
37℃培养7天。
每支试管加5滴甲基红试剂观察颜色变化。
实验结果：对照组呈黄色，E.Coli呈红色证明有酸的产生；而假单胞杆菌的2支都变黄色。
4、乙酰甲基甲醇(V.P.)试验第 1 页共3 页有些细菌能将糖代谢过程中产生的丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇、乙酰甲基甲醇在碱性条件下被空气中氧气氧化成二乙酰。
二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基超作用，生成红色化合物，为V.P.试验阳性。
接种、培养同甲基红试验。
每ml培养液中加入0.6ml α－萘酚和0.2ml KOH溶液，充分振荡，静止15min后观察。
1 目的1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2 原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验5 步骤(一) 糖类发酵试验1 目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2 原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料3.2菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验摘要本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
一、实验目的1、大分子水解试验证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
2、糖发酵试验了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3、IMViC试验了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1、大分子水解试验：微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。
第1篇一、实验目的1. 学习微生物学的基本实验操作技能。
2. 掌握细菌的分离纯化方法。
3. 了解细菌的形态学和生理学特征，进行初步鉴定。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，广泛分布于自然界。
本实验通过平板划线法或稀释涂布平板法分离纯化细菌，观察其形态学特征，并利用生理生化实验对其进行初步鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤、无菌生理盐水、牛肉膏蛋白胨琼脂平板、细菌培养箱、显微镜、酒精灯、接种环等。
2. 仪器：高压蒸汽灭菌器、无菌操作台、恒温培养箱、移液器、试管、烧杯等。
四、实验步骤1. 土壤样品的处理（1）取土壤样品10g，加入90ml无菌生理盐水，振荡混匀。
（2）用无菌纱布过滤，收集滤液。
2. 细菌的分离纯化（1）取滤液1ml，加入9ml无菌生理盐水，制成10^-1稀释液。
（2）取10^-1稀释液0.1ml，涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（3）重复步骤（2），制作10^-2、10^-3稀释液的涂布平板，共计3个。
（4）将平板倒置，放入细菌培养箱，37℃培养24小时。
3. 细菌的形态学观察（1）将长出的菌落挑取少量，制作临时玻片。
（2）在显微镜下观察菌落的形态、大小、颜色等特征。
4. 细菌的生理生化实验（1）将长出的菌落分别接种于下列培养基：a. 硫酸铜琼脂培养基：用于检测硫化氢产生。
b. 硝酸盐还原培养基：用于检测硝酸盐还原。
c. 氧化酶试验培养基：用于检测氧化酶活性。
（2）将接种后的培养基放入细菌培养箱，37℃培养24小时。
（3）观察并记录实验结果。
五、实验结果与分析1. 细菌的分离纯化通过平板划线法，成功分离出细菌纯培养。
2. 细菌的形态学观察在显微镜下观察到菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。
3. 细菌的生理生化实验a. 硫化氢产生实验：菌落周围出现黑色沉淀圈，说明该菌能产生硫化氢。
b. 硝酸盐还原实验：菌落周围出现红色沉淀圈，说明该菌能还原硝酸盐。
c. 氧化酶活性实验：菌落周围出现蓝色，说明该菌具有氧化酶活性。
(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。
如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。
发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。
将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。
（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。
细菌的生化实验报告细菌的生化实验报告细菌是微生物界中最为常见的一类生物，它们以其微小的身躯和巨大的生物活动而闻名。
在本次实验中，我们旨在探索细菌的生化特性和其在环境中的作用。
通过实验，我们对细菌的生长、代谢和适应能力有了更深入的了解。
实验一：细菌的生长曲线在这个实验中，我们选择了大肠杆菌作为研究对象。
我们将大肠杆菌接种在培养基上，并在一定时间间隔内记录细菌的生长情况。
通过测量培养液中的细菌数量，我们绘制了细菌的生长曲线。
结果显示，细菌的生长曲线呈现出典型的“S”形曲线。
在实验初期，细菌数量增长较为缓慢，这是由于适应期的存在。
随着时间的推移，细菌进入了指数增长期，细菌数量迅速增加。
然而，随着培养基中营养物质的消耗和代谢产物的积累，细菌的生长速率逐渐减缓，进入了平台期。
这是由于细菌的生长受到了环境条件的限制。
实验二：细菌的代谢特性在这个实验中，我们研究了细菌的代谢特性，特别是其对碳源的利用能力。
我们选择了葡萄糖、乳糖和蔗糖作为碳源，通过测量细菌在不同碳源下的生长情况，评估了细菌对不同碳源的利用能力。
结果显示，大肠杆菌对葡萄糖的利用能力最强，其次是乳糖，而对蔗糖的利用能力较弱。
这表明细菌对碳源的利用能力存在差异，可能与其代谢途径和酶的分布有关。
此外，我们还观察到在不同碳源条件下，细菌的生长速率和产生的代谢产物也有所不同。
这提示我们，在实际应用中，选择合适的碳源可以促进细菌的生长和代谢活性。
实验三：细菌的适应能力在这个实验中，我们研究了细菌的适应能力，特别是其对环境压力的响应。
我们将大肠杆菌分别接种在不同的培养基中，其中一组培养基中添加了抗生素，另一组培养基中添加了高温。
结果显示，添加抗生素的培养基中，细菌的生长受到了明显的抑制。
抗生素通过抑制细菌的代谢活性和细胞分裂，从而阻碍了细菌的生长。
而在高温条件下，细菌的生长速率明显减慢，部分细菌甚至无法生存。
这表明细菌对环境压力的适应能力有限，过高的温度和抗生素的存在可能对细菌产生不可逆的影响。
微生物鉴定之生化实验大全Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。
（3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（O/F)的测定（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。
发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。
将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。
细菌生理生化试验—小木虫微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。
因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一,微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:(一)糖、醇发酵试验原理:不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验、有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:＋)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:－),培养基仍为紫(蓝)色、培养基配制:一般细菌常用休与李夫森二氏培养基:蛋白胨:2g,Ｋ2ＨPO4 :0.2ｇ,NaCl:5g,糖(醇、糖苷):1％,水洗琼脂:5～６g,蒸馏水:1０0０mL,PＨ:6、８～７.0,溴百里酚蓝:1％水溶液３mL(先用少量得9５％乙醇溶解后,再加水配成1％水溶液)。
先调PH后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:(NH４)2ＨＰO4:１g ,ＭｇＳO4:０.2g ,KCl:0。
２ｇ,酵母膏:０.２g ,糖(醇、糖苷):1％水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:100０mL ,溴甲酚紫:0、４％乙醇液2mL,ＰH:６、8~7。
0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为４～5cｍ,115℃灭菌20min、测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(１、5%)、半乳糖(１.５％)、D—山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意:以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:用18～２4h得幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,３d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
结果记录:产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。
(二)淀粉水解试验原理:某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
