微生物生化反应

细菌生化反应的原理及意义1. 你知道细菌生化反应的原理吗？就像一场奇妙的魔法秀！比如大肠杆菌能分解乳糖产生酸和气体，这就像是它有独特的技能一样。

这意义可大啦，能帮助我们识别不同的细菌呢！2. 细菌生化反应的原理其实超有趣的呀！好比细菌在进行一场独特的表演。

像沙门氏菌能进行某些特定反应，这不就像它的拿手好戏嘛！这对诊断疾病可是很关键的哟！3. 哎呀，细菌生化反应的原理真的很神奇呢！仿佛它们在进行神秘的化学反应。

举个例子，变形杆菌的一些反应，就如同它拥有特殊的秘密武器。

这意义不就在于让我们更好地了解细菌世界嘛！4. 你想过细菌生化反应的原理是什么样的吗？简直就是一个微缩的奇妙世界！比如说葡萄球菌的某种反应，不就像是它的独特标志嘛！这对医学研究的帮助可大了去了！5. 细菌生化反应的原理啊，那可真是充满了奥秘！就好像细菌们有着各自的小计谋。

像链球菌的某个反应，不正是它的特点之一嘛！这对疾病防控有着重要意义呀！6. 哇塞，细菌生化反应的原理可太有意思了！宛如细菌在玩各种游戏。

比如双歧杆菌能有那样的反应，不就像它的专属玩法嘛！这能让我们更好地利用细菌呀！7. 细菌生化反应的原理，你真的了解吗？就如同一个个小惊喜等待我们去发现。

像芽孢杆菌的某些表现，不恰似它展现魅力的时刻嘛！这对于微生物学的发展可是意义非凡啊！8. 嘿，细菌生化反应的原理真的很值得探究呢！仿佛是细菌们的神秘密码。

例如绿脓杆菌的某个反应，不就是它的独特标识嘛！这对细菌的分类很重要哦！9. 细菌生化反应的原理可别小看呀！就好像是细菌在施展魔法。

像霍乱弧菌的某些反应，不正是它与众不同的地方嘛！这对保障我们的健康有着重大意义！10. 细菌生化反应的原理呀，那可是充满魅力的呢！宛如细菌的一场精彩演出。

比如结核杆菌的某种反应，不就是它的特色嘛！这对于攻克相关疾病可是至关重要的呢！我觉得细菌生化反应的原理非常神奇，对于我们认识和利用细菌有着极其重要的作用，我们应该深入研究和了解它。

实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。

1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。

3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理。

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。

以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。

指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。

产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。

2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。

有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。

有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。

3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。

某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。

4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。

5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。

6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。

一、实验目的1. 了解微量生化反应管的基本原理和操作方法。

2. 掌握利用微量生化反应管进行微生物生理生化反应实验的操作技能。

3. 通过实验观察微生物对特定底物的代谢能力，从而鉴别不同微生物。

二、实验原理微量生化反应管是一种用于检测微生物生理生化反应的实验工具，通过在反应管中加入特定底物和试剂，观察微生物对底物的代谢情况，进而鉴别微生物。

实验过程中，通过观察颜色变化、气体产生等现象，判断微生物是否具有相应的酶活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 微量生化反应管：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、糖发酵管、吲哚试验管、甲基红试验管、V-P试验管等。

- 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等。

- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基等。

- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。

2. 实验仪器：- 酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。

四、实验步骤1. 菌种接种：将菌种接种于相应培养基上，37℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 微量生化反应管准备：将培养好的菌液分别接种于葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、糖发酵管、吲哚试验管、甲基红试验管、V-P试验管中。

3. 观察记录：- 葡萄糖发酵实验：观察菌液是否产生气泡，判断微生物是否具有葡萄糖发酵能力。

- 乳糖发酵实验：观察菌液是否产生气泡，判断微生物是否具有乳糖发酵能力。

- 糖发酵实验：观察菌液是否产生气泡，判断微生物是否具有糖发酵能力。

- 吲哚试验：观察菌液是否产生红色沉淀，判断微生物是否具有吲哚产生能力。

- 甲基红试验：观察菌液是否变红，判断微生物是否具有甲基红产生能力。

- V-P试验：观察菌液是否产生红色沉淀，判断微生物是否具有V-P产生能力。

4. 结果分析：根据观察到的实验现象，分析微生物对特定底物的代谢能力，从而鉴别微生物。

五、实验结果与分析1. 葡萄糖发酵实验：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌产生气泡，金黄色葡萄球菌无气泡产生，说明大肠杆菌和枯草芽孢杆菌具有葡萄糖发酵能力。

细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。

（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。

其代谢产物也不同。

例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。

酸的生成可通过指示剂来确定。

在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。

气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。

（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。

此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。

因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。

如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。

因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。

（4）大分子代谢的实验。

靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。

硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。

明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。

淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。

它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。

细菌常见的生化反应试验（一）什么是生化试验?指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。

生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。

在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应（二）生化试验的方法：1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。

2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。

3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。

4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。

（三）生化试验的注意事项1.待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。

2.待检菌应是纯种培养物。

3.遵守观察反应的时间。

观察结果的时间，多为24或48小时。

4.应做必要的对照试验。

5.提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。

（四）检验细菌的生化试验范围:1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（Methyl Red）试验MR（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖醇类发酵试验1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖(醇)，有的只能分解1~2种糖(醇) ，有的分解糖(醇)能产酸产气，有的分解糖(醇)只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。

常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。

细菌生理生化试验—小木虫微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。

因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一,微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:(一)糖、醇发酵试验原理:不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。

可用指示剂及发酵管检验、有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:＋)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:－),培养基仍为紫(蓝)色、培养基配制:一般细菌常用休与李夫森二氏培养基:蛋白胨:2g,Ｋ2ＨPO4 :0.2ｇ,NaCl:5g,糖(醇、糖苷):1％,水洗琼脂:5～６g,蒸馏水:1０0０mL,PＨ:6、８～７.0,溴百里酚蓝:1％水溶液３mL(先用少量得9５％乙醇溶解后,再加水配成1％水溶液)。

先调PH后再加指示剂。

芽孢杆菌培养基配制:(NH４)2ＨＰO4:１g ,ＭｇＳO4:０.2g ,KCl:0。

２ｇ,酵母膏:０.２g ,糖(醇、糖苷):1％水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:100０mL ,溴甲酚紫:0、４％乙醇液2mL,ＰH:６、8~7。

0。

先调PH后再加指示剂。

将以上培养基分装试管,培养基高度约为４～5cｍ,115℃灭菌20min、测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(１、5%)、半乳糖(１.５％)、D—山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。

注意:以上亦可用液体培养基。

接种与观察结果:用18～２4h得幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,３d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。

结果记录:产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。

(二)淀粉水解试验原理:某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。

微生物检测基础知识大全微生物检测涉及多行业和领域，在实验室检测中有着重要的地位，今天和大家一起对微生物检测中的一些基础操作进行汇总和梳理！接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1、划线接种这是最常用的接种方法。

即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。

常用的接种工具有接种环，接种针等。

在斜面接种和平板划线中就常用此法。

２、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。

此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。

除三点外，也有一点或多点进行接种的。

３、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。

做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。

用的培养基一般是半固体培养基。

它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４、浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。

待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

５、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

６、液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。

７、注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

８、活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。

微生物常用生化实验胆汁-七叶苷试验原理：培养基中的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。

肠球菌和D群链球菌都能在含有胆汁的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe3+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑。

65g/L NaCl生长试验原理：肠球菌具有很强的耐盐能力，能在上述培养基生长，并且分解培养基中的葡萄糖产酸，使指示剂溴甲酚紫变黄。

而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基不能生长。

原理：培养基中葡萄糖和乳糖的比例为1︰10，指示剂为酚红，酚红变色范围在pH6.4~8.2（黄~红），而KIA的pH为7.4，产少量的酸就可导致颜色改变。

斜面部分为有氧环境，底层与空气隔绝是相对厌氧的环境。

如接种的是能发酵葡萄糖和乳糖的细菌，因产生大量的酸，使斜面与底层均成黄色。

如接种的是只发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可产酸。

开始的8~12h时，产生的酸足以引起斜面和底层的颜色变黄。

在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分所生成的酸可因接触空气而氧化挥发，细菌在有氧的条件下开始分解蛋白质，氧化降解氨基酸，产生碱性化合物，18~24h整个斜面又转换成碱性颜色—红色。

底层（相对缺氧状态），细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化而氨基酸降解产生的碱性化合物不足以中和形成的酸，所以培养基仍为黄色。

细菌如分解蛋白质产生硫化氢，则与培养基中枸橼酸铁形成黑色的硫化铁。

细菌产气时，在底层还可看到有气泡或裂口现象。

苯丙氨酸脱氨酶试验培养基：苯丙氨酸微量液体培养基2）原理：细菌分解氨基酸可通过脱氨或脱羧基生成反应物。

某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与10%三氯化铁试剂产生深绿色反应。

3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h，滴加入10%三氯化铁试剂3-4滴。

4）结果：立即（延长时间颜色会退去）观察结果，出现绿色环者为阳性，阴性为黄色。

山东大学实验报告2017年12月4 日___________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物鉴定常用的生理生化试验姓名：丁志康一、目的要求1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。

2.掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。

3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。

4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5.了解IMViC反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二、基本原理1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。

胞外酶只要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。

如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。

这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不在产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。

脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色，说明胞外存在着脂肪酶。

2、糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。

绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。

有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳的等）；有些细菌只产酸不产气。

例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。

发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。

当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。

气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。

3、IMViC反应是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。

大肠杆菌的生化反应鉴定一、引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和其他动物的肠道中。

它有助于维持肠道微生物群落的平衡，并参与多种重要的生化反应。

本文将对大肠杆菌的生化反应鉴定进行全面、详细的探讨。

二、大肠杆菌的主要生化反应2.1 氧化还原反应大肠杆菌通过氧化还原反应调节细胞内外的氧化还原平衡。

其中，以下几个重要的酶参与了氧化还原反应：2.1.1 细胞色素氧化酶细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）是大肠杆菌中重要的氧化酶之一。

它参与电子传递链的最终步骤，将电子从还原的细胞色素C传递给氧气，生成水分子。

2.1.2 辅酶Q氧化酶辅酶Q氧化酶（Ubiquinol oxidase）是另一个重要的氧化酶，它也参与电子传递链，并将电子从辅酶QH2传递给氧气，生成水分子。

2.2 糖代谢反应大肠杆菌能够利用多种糖类进行代谢。

以下是几个常见的糖代谢反应：2.2.1 糖酵解糖酵解是大肠杆菌通过分解葡萄糖产生能量的过程。

首先，葡萄糖经过磷酸化反应被转化为葡萄糖-6-磷酸，然后进一步分解为丙酮酸和乳酸。

这个过程通过糖酵解途径中的多个酶催化。

2.2.2 氧化呼吸大肠杆菌也可以利用糖类通过氧化呼吸产生能量。

在氧气存在的条件下，葡萄糖可以通过三羧酸循环和电子传递链来产生更多的ATP。

这个过程包括多个关键酶的活性，如丙酮酸脱羧酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。

2.3 氮代谢反应大肠杆菌具备多样的氮代谢反应，使其能够利用多种氮源进行生长。

2.3.1 氨基酸代谢大肠杆菌能够利用多种氨基酸作为唯一碳、氮源进行生长。

在代谢氨基酸的过程中，多个酶参与了氨基酸的降解和转化。

例如，谷氨酸酯酶能够将谷氨酸酯转化为谷氨酸，谷氨酰胺酶能够将谷氨酰胺转化为谷氨酸。

2.3.2 尿素代谢大肠杆菌可以利用尿素作为氮源。

尿素酶能够将尿素分解为氮和二氧化碳。

此外，天冬酸酐酰胺酶能够将天冬酸酐酰胺转化为尿素。

细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。

（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。

其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。

酸的产生可利用指示剂来判定。

在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。

气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。

（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。

因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。

若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。

（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。

硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。

明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。

淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。

细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

【实验原理】通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。

某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。

微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。

有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。

某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

【实验材料和用具】1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。

【实验方法】（一）V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。

空白对照不接种。

置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。

放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。

（二）甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。