Mobius CellReady 3升的一次性生物反应器
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GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60072.2 v.A GENMED酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在使用化学去垢和物理方法相结合,快速且充分裂解酵母细胞壁,通过生物酶的萃取,获得完整而纯化的可溶性细胞壁蛋白成分的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可直接用于后续二维电泳、蛋白分离、结构分析、质谱分析、蛋白组学图谱分析等。
产品即到即用,性能稳定,操作便捷,萃取完整。
技术背景酵母细胞壁在细胞生长和分裂时,决定着细胞的形态和完整性。
酵母细胞壁是一种动力结构,由多糖和蛋白,例如葡聚糖(glucan)、甘露聚糖(mannan)、甲壳素(chitin)等构成的超分子网络,适应酵母生理和形态变化,包括单倍体细胞接合(conjugation)、孢子形成(sporulation)或假菌丝形态(pseudohyphal growth)等。
酵母细胞壁蛋白约占5%的细胞壁成分,含有400多种蛋白分子。
采用化学法和生物酶解法,可以获得100%完整的胞壁蛋白成分。
产品内容GENMED平衡液(Reagent A)毫升GENMED裂解液(Reagent B)毫升GENMED活性液(Reagent C)微升GENMED酸珠液(Reagent D)毫升GENMED清理液(Reagent E)毫升GENEMD净化液(Reagent F)毫升GENMED萃取液(Reagent G)毫升GENMED酸性液(Reagent H)毫升GENMED水解液(Reagent I)毫升GENMED中和液(Reagent J)毫升GENMED酶解液(Reagent K)微升产品说明书1份保存方式保存GENMED裂解液(Reagent B)、GENMED活性液(Reagent C)、GENMED萃取液(Reagent G)和GENMED酶解液(Reagent K)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;GENMED水解液(Reagent I)避免光照,有效保证6月用户自备50毫升锥形离心管:用于细胞收集后离心操作的容器15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器1.5毫升离心管:用于样品操作和保存的容器2毫升离心管:用于样品操作的容器烧杯:用于样品煮沸台式离心机:用于细胞收集和去除杂质微型台式离心机:用于胞壁蛋白收集和去除杂质分光光度仪:用于测定酵母细胞浓度涡旋震荡仪:用于裂解酵母细胞壁实验步骤1.准备好50毫升新鲜酵母样品(注意:通过选择性培养液培养获得酵母细胞)2.在分光光度仪上测定OD600(注意:建议达到1 OD,即1 X 107细胞/毫升;总量为5 X 108细胞) 3.转移到预冷的50毫升锥形离心管4.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为3000g5.小心抽去上清液6.加入 毫升GENMED平衡液(Reagent A),混匀7.放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为3000g8.小心抽去上清液9.重复实验步骤6至8二次10.加入 微升GENMED裂解液(Reagent B)11.加入 微升GENMED活性液(Reagent C)12.加入 微升GENMED酸珠液(Reagent D)13.在4℃环境下,持续强力涡旋震荡2分钟,间歇1分钟14.重复实验步骤12三次15.放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为300g16.小心移取上清液(500微升)到新的15毫升锥形离心管(收集管)17.加入 微升GENMED裂解液(Reagent B)到上述含有GENMED酸珠液(Reagent D)的锥形离心管18.涡旋震荡15秒19.放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为300g20.小心移取上清液(500微升)合并到上述收集管21.重复实验步骤16至19二次22.将收集管(总量为2毫升上清液)放进4℃台式离心机离心10分钟,速度为3000g23.小心抽掉上清液,保留沉淀颗粒――此为细胞壁成分24.加入 微升4℃预冷的GENMED清理液(Reagent E),混匀25.转移到新的2毫升离心管26.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g27.小心抽掉上清液28.加入 微升4℃预冷的GENMED净化液(Reagent F),混匀29.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g30.小心抽掉上清液31.加入 微升4℃预冷的GENMED清理液(Reagent E),混匀32.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g33.小心抽掉上清液34.加入 微升GENMED萃取液(Reagent G),混匀35.置于沸水中,煮沸孵育10分钟36.置于冰槽里5分钟37.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为16000g(或13000RPM;例如eppendorf 5415) 38.小心移取上清液到新的1.5毫升离心管39.放进-70℃的冰箱里备用或冻干――此为90%可溶性胞壁蛋白40.加入 微升4℃预冷的GENMED清理液(Reagent E),混匀上述沉淀颗粒41.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g42.小心抽掉上清液43.重复实验步骤39至41一次44.加入 微升4℃预冷的GENMED酸性液(Reagent H),混匀45.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g46.小心抽掉上清液47.重复实验步骤43至45一次48.加入 微升GENMED水解液(Reagent I),混匀49.室温下孵育48小时,避免光照50.加入 微升GENMED中和液(Reagent J),混匀51.加入 微升GENMED酶解液(Reagent K),混匀52.室温下孵育24小时53.放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为10000g54.移取上清液到新的1.5毫升离心管――此为10%难溶性胞壁蛋白(例如葡聚糖、甘露聚糖、甲壳素类糖蛋白)55.放进-70℃的冰箱里备用或冻干56.(选择步骤)合并上述可溶性胞壁蛋白和难溶性胞壁蛋白到1管――此为完全胞壁蛋白注意事项1.本产品为20次操作2.所有操作均须在无菌和4℃状态下进行,除步骤中规定的之外3.操作时须戴手套4.GENMED水解液(Reagent I)含有毒物质,注意操作安全5.细胞生长切莫过度,否则影响蛋白表达和细胞裂解6.50毫升(0D600=1)菌液湿重约1克7.50毫升(0D600=1)菌液可获得约250毫克湿重的胞壁成分,其中94%为多糖,5%为蛋白8.本产品可萃取约400多种胞壁蛋白,其中10%为难以萃取的β-葡聚糖和甲壳素链接的甘露糖蛋白成分9.制备产物如果放在-70℃冰箱里储存备用,避免反复冻融10.用户可以根据需求,浓缩或冻干蛋白溶液:建议使用GENMED三氯醋酸小量蛋白浓缩沉淀试剂盒(GMS30001)11.本公司提供系列酵母试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能稳定2.本产品经鉴定无蛋白酶污染使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
[化学发光]美国Beckman公司UniCel DxI800免疫分析仪迎接PG级超微量检测时代的来临免疫定量分析的发展历程1960年代以前人工免疫检测阶段1960-70年代非标记免疫发展阶段放射标记免疫发展阶段1970-80年代免疫分析新项目不断产生临床应用领域迅速拓展荧光免疫发展阶段1980-90年代免疫检测逐渐常规化检测原理发展阶段化学发光,电化学发光1990-2000年标记免疫检测原理日臻成熟优化系统均衡,清洗分离手技术的发展2000-2003年免疫自动化发展阶段;进一步吸收大生化检测的自动化技术成就,采用系统叠加的方式以寻求更快的检测速度免疫分析技术的自动化智能化发展,是临检领域继生化全自动分析时期的又一个标志性的重要阶段。
其推动力源自一些大型实验室在免疫检测应用方面的进一步拓展和规模化,对免疫分析系统的检测速度、自动化和智能化性能提出了更高的要求。
智能化方面提高了系统流程管理的智能化程度,将系统的自动化性能推进到了一个新的智能化阶段,并进一步强化了全方位的系统监控功能,保证了自动化的可控性。
自动化方面进一步完善系统的自动化性能,加强系统的简便性、灵活性和前赡性,例如多种的进样方式、尽可能简洁的日常保养程序等,并提高了与轨道自动化的顺应性。
系统化方面改变了原有检测仪器将系统进行简单并连组合以提高检测速度的做法,在继承原有分系统的独立性优点的基础上,采用同一套分析和探测系统,保证系统的整体性和结果的统一性。
UniCel TM DxI 800 展现自动化非凡成就引领智能免疫时代DxI 800智能化整系统运行,突破分系统简单组合的传统方式,采用分立一体化整系统的专利设计分立的4个进样通道1.加快进样速度,减少样品的机上滞留时间;2.任何一个进样通道出现故障,不影响其他通道的进样操作,提供了整系统操作的灵活性;3.根据需要可以任意指定某个通道用于特定检测的进样,以保证整系统的流程优化;4.可以独立的对任何一个进样通道进行配件更换或维修。
1999年3月ENVIRONM ENTA L SCIENCEM ar.,1999中空纤维膜生物反应器处理生活污水的特性*李红兵 顾国维(同济大学环境工程学院污染控制与资源化国家重点实验室,上海 200092)谢维民(日本百事德净化设备上海有限公司)摘要 中空纤维膜生物反应器生活污水处理特性的试验研究结果表明:在HRT 为1.5h 、COD 容积负荷为5.76kg/(m 3・d )条件下,均可实现90%以上的COD 去除率;对NH 3-N 的去除率可稳定在90%以上.高M LS S 浓度(8000—10000m g ・L -1)提供了内部厌氧环境,使膜生物反应器的T-N 去除率可达50%—60%.中空纤维膜生物反应器处理高效,不受冲击负荷影响,操作管理方便.其生物反应器体积比常规生物处理方法至少可减少一半.关键词 中空纤维膜,中空纤维膜生物反应器,生活污水,去除率.* 中日合作项目李红兵:男,28岁,工学硕士,现在北京市环境保护科学研究院工程中心收稿日期:1998-07-08Domestic Wastewater Treatment Property Using HollowFiber Membrane Biological ReactorLi Hongbing Gu Guow ei(State Key Lab or atory of Pollution Control an d Res ource Reu se,School of Environm ental Engineerin g,Tongji Un ivers ity,S hanghai 200092,Ch ina)Xie Weim in(Best W ater Clarify Equip ment (Shangh ai)Co.LT D)Abstract Study on domestic w astew ater treatment pr operty using Ho llow Fiber Membrane Bi-olog ical Reactor (HFM BR)was car ried out in this paper.Research result sug gested that under the condition of 1.5hour s HRT and 5.76kg /(m 3・d)COD v olumetric load,90%remo val rate of COD and NH 3-N can be easily achiev ed .T he remo val rate of T -N can g et to 50%—60%be-cause of the inner anaero bic enviro nm ent supplied by the hig h M LSS concentr ation (8000—10000mg ・L -1).HFMBR po ssesses the merits of high efficiency ,imm une to the shock loading and it is easy to manage.The volume of bio logical reactor can be half o f that o f traditional acti-vated sludge o r less .Keywords ho llow fiber membrane,hollow Fiber M em brane biolog ical reactor,domestic w astewater,rm oval rate. 近年来膜做为一种新兴的水处理手段已受到越来越多的关注.膜作为泥水分离手段与传统活性污泥过程联用具有以下优点:通过膜组件代替二沉池并在生化反应器中保持高M LSS 减小污水处理设施占地;通过保持低F/M 减少剩余污泥量;出水水质好,可直接回用于非饮用用水[1—3].特别是1989年Yamamoto 等将中空纤维膜应用于活性污泥法以来[4],使组合工艺运行成本大大降低,实际应用前景广阔.本研究进行了用中空纤维膜生物反应器处理生活污水的试验.1 试验部分1.1 中空纤维膜组件实验用膜组件由百事德净化设备(上海)有限公司提供的2块聚丙烯材质中空纤维膜.其有效面积分别为2m 2和1.5m 2,每根纤维的有效长度370mm ,膜的微孔径为0.065 m,中空纤维内外径分别为400 m 和460 m .1.2 试验装置试验装置工艺流程如图1所示.曝气池为1.气量计2.曝气管3.进水泵4.水位控制箱5.曝气池6.中空纤维膜组件7.出水管8.真空表9.出水自吸泵 10.出水流量计图1 试验装置工艺流程图长、宽、高0.6m 、0.2m 、1.2m 的PVC 材料窄箱式反应器,两块膜组件并排连接后沿曝气池长度方向浸于曝气池中,在曝气所形成紊流的带动下,中空纤维膜丝呈悬浮分数状态,同时曝气气泡接触纤维而有效去除表面沉积的污泥.曝气管采用斜下45°穿孔曝气形式,布于中空纤维膜组件的正下方.设置水位控制箱以控制曝气池中水位.1.3 试验用水前38d 用上海曲阳污水厂曝气沉砂池出水,后22d 为了提高进水浓度采用人工配水,基本水质情况见表1.曲阳污水厂主要接纳附近居民小区、高等院校、写字楼等生活污水,所占比例恒定在95%以上,其余部分工业污染源水质与生活污水相似,且不含有对好氧处理微生物有毒害或抑制作用的物质.表1 试验用水水质/mg ・L -1试验用水CODNH 3-NT KN NO -2-N NO -3-N SS pH 水温/℃曲阳厂水121.3-292.221.6-38.437.5-62.30.03-0.06<0.02180-2407-7.521-29配水433.2-3078.423.1-52.873.1-156.30.06-0.142.6-6.96.8-7.524-302 试验结果与分析2.1 中空纤维膜通量及MLSS 变化图2(A )显示了总面积为2.5m 2的2块微滤膜的总透过通量(用L /(m 2・h )表示).微滤膜在0.06M Pa 的真空度下运行.初始运行期膜的通量为28.4L/(m 2・h),通量在几天内就可下降到原来的20%左右,第6、16、26、31、35d 对膜进行简单物理清洗(用清水洗去膜表面沉积的污泥并将部分粘附在一起的中空纤维丝散开,而后在清水中浸泡30—60m in),膜的通量恢复较为明显.在第50d 以后清水清洗基本无效.由于膜的污染,微滤膜的通量最终稳定在了一个比较低的水平.图2(B )是曝气池内M LSS 浓度的变化规律,MLSS 初始浓度为4000m g ・L -1,第1—40d 每日从曝气池中取出200m l 的污泥,第41—60d 每日从曝气池中取出500ml 的污泥.在前30d M LSS 基本稳定在4000—5000mg ・L -1,在第40d 稳定在约6000m g ・L -1,在运行的末期为10000mg ・L -1左右.2.2 系统对COD 的去除效果由于接种污泥为曲阳污水厂回流污泥,因此系统不需污泥驯化直接达到了较高的COD 去除率,膜生物反应器运行第1d 出水COD 26.7mg ・L -1,去除率达89.3%.此后去除率稳定在90%以上,出水COD 一般20—50mg ・L -1(图3).膜生物反应器中COD 去除有以下特点:(1)在短HRT 和较高的容积负荷下实现COD 去除 装置运行前5d HRT 分别为1.41h 、2.28h 、4.17h 、3.47h 、5.75h,出水COD 分别为26.7、27.5、25.6、16.1和22.1mg ・L -1,可见在膜生物反应器内COD 可迅速被稳定化.运行末期进水浓度的提高使COD 容积负荷最高为5.76kg /(m 3・d ).在较稳态的运行中,装置COD 容积负荷约在0.8—1kg /(m 3・d),表明高负荷运行期间与稳态运行时处理效率基本相同.(2)M LSS 浓度对处理效果的影响 试验54环 境 科 学20卷图2 膜生物反应器中膜通量及M LS S变化规律图3 C OD 处理效果中M LSS 浓度的变化对处理效果基本没影响,曝气池上清液中COD 与MLSS 浓度没有明显的相互关系,这可能与整个运行过程中污泥负荷较低有关.稳态运行中污泥负荷一般为0.2kg /(kg ・d )(3)微滤膜的拦截作用 微滤膜通过提供高浓度污泥来提高曝气池的生化反应速度和程度,同时通过对膜生物反应器出水水质与曝气池上清液水质的同步监测,可反映膜对溶解性有机分子的过滤作用对COD 去除的贡献.试验中上清液COD 浓度变化较大,但出水COD保持稳定.2.3 系统对NH 3-N 的处理效果图4表明,膜生物反应器具有超过90%的NH 3-N 去除能力,在进水NH 3-N 为20—30mg ・L -1时,出水NH 3-N 含量(除个别异常情况)基本都在2mg ・L -1以下.较长的泥龄为硝化细菌的生长提供了条件,膜对硝化细菌的拦截作用使硝化细菌在曝气池内积累,但膜的拦截作用本身对NH 3-N 去除并无贡献,因NH 3-N 在水中是以水和氨离子形式存在,属无机小分子,可自由穿过膜的微孔.上清液与出水同步监测552期 环 境 科 学 图4 系统对NH3-N的处理效果显示N H3-N浓度完全相同.2.4 系统对T N的去除效果表2表明,膜生物反应器能达到较高的总氮去除率.在运行过程中随着M LSS浓度由约4000mg・L-1,上升到约7000mg・L-1和9000mg・L-1,总氮去除也有较明显提高.在好氧活性污泥过程中反硝化过程能够进行的原因是在好氧菌胶团的内部存在着厌氧环境,随着污泥浓度的增加,污泥可提供较多的厌氧环境,有利于反硝化过程的进行.表2 膜生物反应器中TN去除率运行天数/d1926274445484950515253545556 T N去除率/%18.933.026.943.339.735.333.751.240.255.857.544.954.748.22.5 膜生物反应器中生物活性通过测定混合液挥发性悬浮固体(M LVSS)与混合液悬浮固体(M LSS)浓度的比值可表达活性污泥的比活性.膜生物反应运转第1d取自曲阳污水厂回流泵房的污泥其M LSS和M LVSS比值为0.786.但运转至第58d和59d M LVSS/M LSS分别为0.6433和0.6428,明显低于初始污泥.膜生物反应器处理水每天均由曲阳污水厂曝气沉砂池引进一个贮水箱,在贮水箱中无机颗粒可以充分沉淀下来,排除了由于进水无机颗粒进入曝气池而使灰分大量增加的可能.因此膜生物反应器中污泥活性低于传统活性污泥法.其原因为: 较高的泥龄使惰性物质在曝气池中得以积累下来; 较低的负荷使死细菌数量增多.但膜生物反应器中单位体积污泥活性仍明显高于传统活性污泥法,这是由于膜生物反应器中M LSS浓度较高,发挥了整体效应的结果.3 结论(1)膜生物反应器对COD去除率可基本稳定在90%以上.在停留时间短至2h以下仍可保持90%以上的去除率.在较高的COD容积负荷下(5.76kg/(m3・d))能实现90%以上的COD去除率.(2)由于维持较长的泥龄与膜的拦截作用,使膜生物反应器对NH3-N的去除达90%以上.(3)高MLSS浓度为反硝化作用提供了内部厌氧环境,TN去除率可达50%—60%.(4)膜生物反应出水水质稳定,膜的拦截作用对稳定水质作用明显.(5)反应器中M LVSS/MLSS值低,但高M LSS浓度使单位体积污泥活性远高于传统活性污泥法.参考文献1 Chiemch ais ri C,Yamamoto K and Vign es waran S.House-hold M embrane Bioreactor in Domestic Wastew ater Tr eatm ent.W at.Sci.Tech.,1993,27(1):171—1782 Van Dijk L and Ron cken G C G.M embr ane Bioreactors for W as tew ater T reatmen t:T he State of the Art and New Developm ents.Wat.S ci.T ech.,1997,35(10):35—413 邢传宏,Tardieu E ric,钱易.无机膜-生物反应器处理生活污水试验研究.环境科学,1997,18(3):1—44 Yam amoto K,Hias a H,T alat M and M atsus T.Direct Solid-liquid S eparation Usin g Hollow Fiber M embranes in an Activated Slu dge Aeration Tank.W at.Sci.Tech., 1989,21(4/5):43—5456环 境 科 学20卷。
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预组装好并且经过γ辐照,与传统的玻璃生物反应器相比,可大大降低准备时间。
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与常用的控制主机兼容
Mobius CellReady生物反应器通过电机适配器(另售)可以和最标准、最常用的生物反应器控制器匹配。
可以提供适合多种电机的适配器,请参见具体的订货信息。
CellReady的探针接口适合标准的12毫米探头。
此外,它还和大多数标准的3升加热毯相兼容。
如果需要,还可以选择和热循环水浴匹配的、有夹套的生物反应器。
细胞培养表现和物理特征
MobiusCellReady3升生物反应器展现了与传统玻璃生物反应器相近的细胞培养性能和物理参数,如KLa值,加热性能,和混合时间,使其成为传统玻璃生物反应器一个方便,有效的替代品。
细胞培养性能的比较
使用下图所示(见表1)的条件,用Applikon的EZ -controls运行七个单独的生物反应器,比较在玻璃反应器和CellReady3升生物反应器中CHO细胞的生长,细胞存活率和滴度。
细胞存活率用VI-活细胞计数法测得值除以台盼蓝染色法所得总细胞数。
IgG水平,采用对小鼠IgG抗体的酶联免疫吸附试验确定。
细胞计数,存活率和滴度测定,每天两次,直到活力下降为连续2个采样点低于75%(图1-3)。
操作灵活
使用Mobius CellReady 3升生物反应器具有一次性技术和传统的台式玻璃搅拌式生物反应器相结合的好处:
• 用传统的玻璃生物反应器形状设计;
• 预安装,可热焊接的C - Flex®管
• 气体过滤器,补充通气口, 2个进气口过滤器
• 3个探测器端口和1个测温套管
• 开放式管路烧结式微分布器;
• 流体添加/排放
- 4个流体添加管路
- 1个液面下流体入口/出口
- 底部排放口用于收获
- 在线小量加样口(如消泡)
- 采样:液面下罐壁边集成式取样,以减少抽样死体积
参数
细胞生长
12000000
15000000活细胞率 (%)
时间(小时)图1. CHO 细胞生长对比图2. CHO 活细胞率对比时间(小时)
图3. CHO 细胞滴度对比
滴度
0.00
0.25
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