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糖化血红蛋白标准化和检测准确度现状(续)冯仁丰【摘要】糖化血红蛋白A1c(HbA1c)是诊断糖尿病和监测其治疗效果的重要指标.在国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)定义了HbA1c的被测量之后,经过各方的努力,全球各临床实验室HbA1c检测结果间的差异正逐步减小.所有提供HbA1c检测产品的厂商都不会客观地描述自己产品的弱点,只会强调其优点和临床价值.面对HbA1c检测的现状,临床实验室必须充分了解每个产品的特性及其不足之处,在将产品用于临床检测前必须验证产品的分析性能.只有确认其分析性能能够用于临床检测时,才能使用.一个实验室内必须具备2种不同检测方法的产品,这样才能识别患者样品内有无异常血红蛋白.目前,尽管人们认为免疫学方法检测HbA1c时无异常血红蛋白的干扰,但国际上尚未从临床上对各种异常血红蛋白的影响作出客观的判断.为了患者的利益,临床实验室一定要充分了解更多的信息.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)006【总页数】5页(P437-441)【关键词】糖化血红蛋白;标准化;准确度【作者】冯仁丰【作者单位】上海市临床检验中心,上海200126【正文语种】中文【中图分类】R446.11968年，RAHBAR等[1-2]首次发现糖尿病患者HbA1c升高。
40余年以后，HbA1c已成为糖尿病诊断和治疗一个不可或缺的指标。
自从DCCT、UKPDS等临床试验开展以来，HbA1c检测的标准化工作获得了相当大的进展，明确了糖尿病患者血糖控制（由HbA1c检测确定）与其并发症之间的关系[3]。
由于HbA1c检测方法的发展，各大厂商在其产品特点和检测准确度宣传上有很多针对异常血红蛋白影响HbA1c检测结果的介绍。
尤其是我国，在厂商刻意夸大宣传的情况下，临床实验室对其产品优点和缺点的了解很模糊。
其实，任何一个检测方法都有其特点和优点，也一定有不足之处。
（一）血红蛋白病血红蛋白病是由于血红蛋白分子结构异常（异常血红蛋白病）或珠蛋白肽链合成速率异常（珠蛋白生成障碍性贫血，又称地中海贫血）所引起的一组遗传性血液病。
解决溯源性是临床检验结果准确性的关键重庆医科大学陈宏础一个病人的苦恼：“为什么几家医院检查不同结果，我相信谁？现在检查很多，价钱都很贵，实在承受不了，无奈！希望遇到一个好大夫，把我的病诊断清楚，早日治好，这是全家最幸福的事”。
ISO/IEC17025的质量体系中就提出“按时、准确、客观地报告检验结果”。
如何做准确？一、测量结果的准确性(accuracy)的新观念：准确性=正确性(trueness)+精密度(precision)+其他测量能力（线性范围、灵敏度、特异性）。
现在人们十分重视：严格按规范化操作，SOP是检验科共同遵守的法规；临床检验量值必须校准。
但如何校准？这就涉及溯源性问题。
如何解决溯源性？二、溯源性的定义：“测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定的参考标准相联系的属性。
参考标准通常是国家或国际标准，比较链中的每一步比较都有给定的不确定度，此定义适用于各领域的测量。
”所以，溯源性是解决的测量结果的正确性（Trueness of Measurement），即测量均值与真值的一致程度。
以往我们只认为我们的临床标本只有用国际上公认的决定性方法和国际公认的标准品去测定，其结果才接近“真值”。
如果没有这些条件怎么办？ISO一系列文件回答了这个问题。
如果有SI单位制单位，又有国际公认的原级参考程序(即有原（一）级参考测量程序，又有国际标准物质，)，其量值溯源性见图1“连续比较链”是指“正确性”由低级到高级的、交替出现的测量程序和校准物，如厂家提供给临床实验室常规测量程序由同时提供的产品校准物校准，而产品校准物由高一级的测量程序定值，此高一级的测量程序由更高一级的校准物校准，以次类推，直至“一定的参考标准”，即国际公认的参考物质和参考测量程序。
上述比较链又称溯源链。
每一次结果传递均带来一定的不确定度。
三、稿清楚日常遇到的一些概念问题临床上对一些概念必需搞清楚，如测定方法、标准物质、检测（分析）系统等。
4种糖化血红蛋白检测系统的IFCC二级参考方法认证IFCC(国际临床化学和分子诊断联合会)二级参考方法认证是用于糖化血红蛋白检测系统的认证方法之一、以下将介绍四种糖化血红蛋白检测系统的IFCC二级参考方法认证。
1.HPLC方法认证：HPLC(高效液相色谱)方法是一种常用的糖化血红蛋白检测方法，可通过色谱柱对血红蛋白中的糖化血红蛋白进行分离和定量。
该方法的IFCC二级参考方法认证包括标准曲线的制备、检测精密度和重复性的评估等步骤。
认证结果会评估该方法的准确性和可靠性。
2.电泳方法认证：电泳方法是另一种常用的糖化血红蛋白检测方法，通过电泳技术对血红蛋白中的糖化血红蛋白进行分离和测定。
这种方法的IFCC二级参考方法认证包括样品的制备、电泳条件的优化和系统的准确性和可重复性的评估。
认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。
3.免疫测定方法认证：免疫测定方法是一种常用的高通量糖化血红蛋白检测方法，它利用抗体与糖化血红蛋白特异性结合来进行测定。
IFCC二级参考方法认证对于免疫测定方法包括抗体选择和标准的准备、测定系统的优化和准确性与重复性的评估等步骤。
认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。
4.质谱法认证：质谱法是一种新兴的糖化血红蛋白检测方法，通过质谱仪对糖化血红蛋白进行定性和定量分析。
IFCC二级参考方法认证对于质谱法包括样品制备、仪器条件的优化和准确性与重复性的评估等步骤。
该方法的认证结果可用于评估该方法在糖化血红蛋白检测中的准确性和可靠性。
总结起来，IFCC二级参考方法认证针对四种常用的糖化血红蛋白检测系统进行，包括HPLC方法、电泳方法、免疫测定方法和质谱法。
这些认证方法评估了糖化血红蛋白检测系统的准确性和可靠性，有助于确保检测结果的精确和可靠。
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。
糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。
临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。
近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。
有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。
测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。
1HbA1c的临床意义糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。
能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。
1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。
此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。
1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。
1．3作为糖尿病的病情监测指标1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。
1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。
1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。
1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。
可溯源性解决溯源性是临床检验结果准确性的关键重庆医科⼤学陈宏础⼀个病⼈的苦恼：“为什么⼏家医院检查不同结果，我相信谁？现在检查很多，价钱都很贵，实在承受不了，⽆奈！希望遇到⼀个好⼤夫，把我的病诊断清楚，早⽇治好，这是全家最幸福的事”。
ISO/IEC17025的质量体系中就提出“按时、准确、客观地报告检验结果”。
如何做准确？⼀、测量结果的准确性(accuracy)的新观念：准确性=正确性(trueness)+精密度(precision)+其他测量能⼒（线性范围、灵敏度、特异性）。
现在⼈们⼗分重视：严格按规范化操作，SOP是检验科共同遵守的法规；临床检验量值必须校准。
但如何校准？这就涉及溯源性问题。
如何解决溯源性？⼆、溯源性的定义：“测量结果或标准的值通过连续的⽐较链与⼀定的参考标准相联系的属性。
参考标准通常是国家或国际标准，⽐较链中的每⼀步⽐较都有给定的不确定度，此定义适⽤于各领域的测量。
”所以，溯源性是解决的测量结果的正确性（Trueness of Measurement），即测量均值与真值的⼀致程度。
以往我们只认为我们的临床标本只有⽤国际上公认的决定性⽅法和国际公认的标准品去测定，其结果才接近“真值”。
如果没有这些条件怎么办？ISO⼀系列⽂件回答了这个问题。
如果有SI单位制单位，⼜有国际公认的原级参考程序(即有原（⼀）级参考测量程序，⼜有国际标准物质，)，其量值溯源性见图1“连续⽐较链”是指“正确性”由低级到⾼级的、交替出现的测量程序和校准物，如⼚家提供给临床实验室常规测量程序由同时提供的产品校准物校准，⽽产品校准物由⾼⼀级的测量程序定值，此⾼⼀级的测量程序由更⾼⼀级的校准物校准，以次类推，直⾄“⼀定的参考标准”，即国际公认的参考物质和参考测量程序。
上述⽐较链⼜称溯源链。
每⼀次结果传递均带来⼀定的不确定度。
三、稿清楚⽇常遇到的⼀些概念问题临床上对⼀些概念必需搞清楚，如测定⽅法、标准物质、检测（分析）系统等。
糖化血红蛋白国际标准糖化血红蛋白（HbA1c）是一种血液中的蛋白质，它可以反映出人体血糖的平均水平。
因为它不受单个时间点的血糖波动影响，所以被广泛应用于糖尿病的诊断和管理。
为了确保全球范围内糖化血红蛋白检测结果的准确性和可比性，国际上制定了糖化血红蛋白的国际标准，以便于不同实验室和不同国家的检测结果能够进行比较和交流。
国际标准化的糖化血红蛋白检测方法主要包括两种，NGSP（National Glycohemoglobin Standardization Program）和IFCC（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine）。
NGSP主要是以美国为主导，它的单位是百分比，通常用于美国以及一些其他国家；而IFCC主要是以欧洲为主导，它的单位是毫摩尔/摩尔，通常用于欧洲以及其他一些国家。
在国际标准化的糖化血红蛋白检测方法中，为了确保结果的准确性和可比性，需要使用标准的校准物质和标准的测量方法。
此外，实验室需要定期参加国际标准化组织组织的质控活动，以验证实验室的检测结果是否符合国际标准。
糖化血红蛋白国际标准的建立和实施，对于糖尿病的诊断和管理具有重要意义。
它不仅可以帮助医生更准确地了解患者的血糖控制情况，还可以帮助研究人员进行全球范围内的糖尿病流行病学调查和临床研究。
同时，它也为糖化血红蛋白检测方法的标准化和质量控制提供了重要的指导和支持。
总的来说，糖化血红蛋白国际标准的建立和实施，对于全球范围内的糖尿病防控和管理具有重要的意义。
它不仅可以提高糖化血红蛋白检测结果的准确性和可比性，还可以促进全球范围内的糖尿病研究和临床实践的发展。
因此，各国实验室和医疗机构应该严格按照国际标准进行糖化血红蛋白的检测和管理，以确保患者获得更好的诊断和治疗效果。
4种糖化血红蛋白检测系统的IFCC 二级参考方法认证刘文彬，居 漪，唐立萍，王美娟，欧元祝，虞啸炫，李 卿（上海市临床检验中心，上海 200126）摘要：目的 通过溯源至国际临床化学和检验医学联合会（IFCC ）糖化血红蛋白（HbA 1c ）一级参考方法，为上海市临床检验中心建立二级参考方法，完善HbA 1c 量值溯源体系。
方法 分别采用HA-8180糖化血红蛋白分析仪（简称HA-8180）、Hb-9210糖化血红蛋白分析仪（简称Hb-9210）、Capillarys 2 Flex Piercing 毛细管电泳仪（简称Cap2）、MQ2000-PT 糖化血红蛋白分析仪（简称MQ2000-PT ）及各自的配套试剂组成的4种检测系统检测IFCC HbA 1c 工作组提供的24份样本，将检测结果与IFCC 公布的靶值比较，并根据IFCC 的评价规则评价4种检测系统的性能。
结果 HA-8180、Hb-9210、Cap2和MQ-2000PT 的变异系数（CV ）分别为1.1%、2.0%、2.2%、2.0%，不精密度分别为0.6、1.0、1.1、1.0 mmol/mol ；根据回归方程得出的结果与50 mmol/mol 水平的|偏移|分别为1.0、1.1、0.4、1.0 mmol/mol ；全年整体总误差（TE ）分别为 2.2、3.1、2.6、3.2 mmol/mol 。
HA-8180的评价结果为“Sliver ”，Hb-9210、Cap2和MQ-2000PT 的评价结果均为“Bronze ”。
结论 HA-8180、Hb-9210、Cap2和MQ-2000PT 4种检测系统均符合HbA 1c IFCC 二级参考方法的认证要求。
关键词：糖化血红蛋白；参考方法；总误差；生物医学变异IFCC Secondary Reference Measurement Procedure for 4 HbA 1c determination systems LIU Wenbin ，JU Yi ，TANG Liping ，WANG Meijuan ，OU Yuanzhu ，YU Xiaoxuan ，LI Qing. （Shanghai Center for Clinical Laboratory ，Shanghai 200126，China ）Abstract ：Objective To improve the traceability of glycated hemoglobin A 1c （HbA 1c ） in Shanghai Center for Clinical Laboratory with establishing the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine （IFCC ） Secondary Reference Measurement Procedure ，through tracing from the IFCC Primary Reference System. Methods Using 4 HbA 1c determination systems ，including HA-8180，Hb-9210，Capillarys 2 Flex Piercing （Cap2） and MQ2000-PT with their original reagents and calibrators ，the results of 24 samples sent by IFCC were compared with the target values assigned by the IFCC Primary Reference System. The performance of the 4 determination systems were evaluated by the IFCC rules. Results The coefficients of variation （CV ） of the 4 determination systems were 1.1% for HA-8180，2.0% for Hb-9210，2.2% for Cap2 and 2.0% for MQ2000-PT. The imprecisions were 0.6，1.0，1.1 and 1.0 mmol/mol ，respectively. The |biases| at the level of 50 mmol/mol were 1.0，1.1，0.4 and 1.0 mmol/mol ，respectively. The total errors （TE ） of whole year were 2.2，3.1，2.6 and 3.2 mmol/mol ，respectively. According to the rules ，HA-8180 got a "Sliver " score ，and Hb-9210，Cap2 and MQ2000-PT got "Bronze " score. Conclusions The 4 determination systems demonstrate traceability to the IFCC Secondary Reference Measurement Procedure.Key words ：Glycated hemoglobin A 1c ；Reference measurement procedure ；Total error ；Biological variation基金项目：上海市社区糖尿病防治公共卫生体系（15GWZK0301[0]）；上海市卫生和计划生育委员会公共卫生三年行动计划（15GWZK0301）作者简介：刘文彬，男，1983年生，学士，主管技师，主要从事临床化学检验研究。
通信作者：居 漪，E-mail ：juyi@ 。
文章编号：1673-8640（2019）05-0443-04 中图分类号：R446.1 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2019.05.0132011年，上海市临床检验中心建立的糖化血红蛋白（glycated hemoglobin A 1c ，HbA 1c ）参考实验室获得了由国际临床化学和检验医学联合会（the International Federation of ClinicalChemistry and Laboratory Medicine，IFCC）HbA1c标准化工作组颁发的认可证书，成为当时全球13家HbA1c一级参考方法网络实验室成员之一。
上海市临床检验中心利用一级参考方法开展了大量与HbA1c检测质量持续改进相关的工作[1]。
经过几年的发展，IFCC允许具备一级参考方法资质的实验室建立HbA1c二级参考方法[2]，作为一级参考系统向常规检测系统进行量值传递的重要环节。
从2015年起，上海市临床检验中心申请参加了二级参考方法的认证，并连续获得了由IFCC颁发的2016、2017年度合格证书，成为全国第1家获得IFCC认证的HbA1c二级参考方法的临床实验室[3]，从而进一步完善了国内HbA1c量值溯源体系[4]。
本研究对HbA1c二级参考方法的建立与认证进行探讨。
1 材料和方法1.1 主要仪器与试剂将HA-8180糖化血红蛋白分析仪[简称HA-8180，爱科来国际贸易（上海）有限公司]、Hb-9210糖化血红蛋白分析仪[简称Hb-9210，普莱默斯医疗器械（上海）有限公司]、Capillarys 2 Flex Piercing毛细管电泳仪（简称Cap2，法国赛比亚公司）、MQ-2000PT糖化血红蛋白分析仪（简称MQ-2000PT，上海惠中医疗科技有限公司）分别与各自的配套试剂、校准品组成4种检测系统。
所有仪器均由厂家检定合格，试剂和校准品均在有效期内使用。
1.2 样本来源I F C C提供的样本为乙二胺四乙酸二钾（ethylenediaminetetraacetic acid-K2，EDTA-K2）抗凝人全血，靶值由IFCC参考实验室网络采用一级参考方法确定。
1.3 校准品IFCC提供的校准品来源为EDTA-K2抗凝人全血（批号：Shanghai 2016.116），共有8个浓度，分别为31.4、38.7、49.6、58.5、69.0、78.3、88.6、99.2 mmol/mol，每个校准品的靶值由IFCC参考实验室网络采用一级参考方法确定。
由于血红蛋白浓度的差异可能导致HbA1c 检测结果出现误差，每个校准品的总血红蛋白浓度被控制在8.0～10.0 mmol/L。
分别用HA-8180、Hb-9210、Cap2、MQ-2000PT检测以上8个浓度的校准品，每个校准品重复检测2次，将2次检测结果的均值作为实测值，以实测值为X，校准品靶值为Y，建立校准品的回归方程Y=bX+a。
本实验室2016年每3个月检测1次校准品，共检测4次。
若发生更换试剂批号、更换色谱柱、仪器损坏维修等情况，则需另外再检测校准品。
1.4 样本分别用4种检测系统按照各自的操作规程检测IFCC提供的2016年二级参考方法认证正式样本24份。
除Cap2使用全血模式外，其他3种检测系统均使用手工稀释模式，平均每2周检测1次。
1.5 结果报告将检测结果分别输入各检测系统的校准回归方程，其输出结果作为校准后的拟合值。
若采用美国国家糖化血红蛋白标准化计划（the National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）单位（%），可通过NGSP-IFCC结果转换公式IFCC（mmol/mol）=[NGSP （%）-2.15]/0.091 5[5]进行转换。
由于本实验室参加认证的4种检测系统均采用NGSP（%）单位报告结果，最终上报结果需转换为IFCC（mmol/mol）单位，最后上报至IFCC网站（http：//）。
1.6 统计学方法根据IFCC公布的样本靶值结果，24份样本按照次序被分成12对，本研究用不精密度评价12对样本中每2个重复样本在不同检测时间内检测结果的平均差异，用变异系数（coefficient of variation，CV）和不精密度描述。
不精密度体现了50 mmol/mol水平下该差异的具体数值。
按照IFCC规定的计算方法进行计算，公式如下：√∑（Δ）2nCV=√2x×100%不精密度=CV×50 mmol/mol式中Δ为2个重复样本的差值、n为2个重复样本的组数、x为24份样本的均值。
