最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析(参考资料)

糖化血红蛋白方法学离子交换色谱法是一种常用的测定糖化血红蛋白的方法。

其原理是利用离子交换色谱材料，如糖化纤维素柱或离子交换树脂柱，将血红蛋白与其他蛋白质分离。

然后通过光度计测定柱床流出液中的吸光度值，从而计算出糖化血红蛋白的含量。

常用的柱床流动相是碳酸盐缓冲液和甲醇的混合物。

在色谱过程中，通过改变流动相的组成，可以将糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离出来。

离子交换色谱法测定糖化血红蛋白的优点是操作简单、结果准确可靠，但缺点是分离过程相对较慢。

高效液相色谱法是一种新型的糖化血红蛋白测定方法，其原理是利用高效液相色谱技术，将血红蛋白中的糖化部分与非糖化部分分离，并通过检测器测定其吸光度值。

高效液相色谱法的优点是分离速度快，对样品要求低，仪器自动化程度高。

通过优化柱床流动相的组成和流速等条件，可以实现对糖化血红蛋白的高灵敏度测定。

常用的柱床流动相是缓冲液和有机溶剂的混合物，通过改变混合物中的有机溶剂浓度和pH值，可以实现样品中糖化血红蛋白的分离。

高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的缺点是操作复杂、设备成本高，需要专业的操作技术。

除了离子交换色谱法和高效液相色谱法，还有其他一些测定糖化血红蛋白的方法，如酶联免疫测定法、免疫扩散法等。

这些方法基于血红蛋白与糖化血红蛋白之间的抗原性差异，通过特定抗体的反应进行测定。

这些方法操作简单、结果迅速，但对设备要求较高，且结果可能受到其他物质的干扰。

总之，糖化血红蛋白是评价糖尿病患者血糖控制情况的重要指标。

离子交换色谱法和高效液相色谱法是常用的测定糖化血红蛋白的方法。

此外，还有其他一些方法，如酶联免疫测定法、免疫扩散法等。

不同的方法各有优缺点，选择合适的方法应根据实际需要和实验条件进行考虑。

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述2007年3月19日糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法及临床意义综述冯念伦范卫华刘捍东（山东省立医院济南250021）糖尿病(DM),主要是2型糖尿病的发病率，目前在世界上无论发达国家还是发展中国家均明显增加，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。

糖尿病是一种终生性疾病，其并发症已经成为病人至残和早亡的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。

有资料说美国用于糖尿病的治疗费约有1000亿美元，糖尿病已经成为世界各国的主要保健卫生问题，对糖尿病及其并发症防治的研究是2０世纪后２０年国际卫生保健研究的重点之一。

临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。

近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近2-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。

有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。

测定HbA1c有多种方法，目前临床上比较常用的方法有两种：乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法；分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自分析仪进行测定。

1、糖化血红蛋白（HbA1c）的形成及特点血液中红细胞内的血红蛋白Hb会在高糖的作用下发生缓慢的非酶促糖化反应, 血红蛋白Hb的β链N末端缬氨酸上的氨基与葡萄糖的醛基发生可逆的加成反应,，形成不稳定的中间产物--- 醛亚胺（前GHbA1c）迅速重排成不可逆的酮胺，然后缓慢重构形成HbA1c。

糖化血红蛋白HbA1c的特点：1．1 糖化血红蛋白HbA1c的百分比含量与即时所检测到的血糖水平无关。

糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。

本文将从这些方面对这两种方法进行比较，帮助读者更好地理解它们的异同。

一、原理1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）糖化血红蛋白高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪对血液中的糖化血红蛋白进行检测的方法。

其原理是利用高效液相色谱柱对血浆样品中的糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白进行分离，并通过检测器检测各组分的信号强度，从而 quantitatively 测定血浆中糖化血红蛋白的浓度。

2. 金标法金标法是一种基于化学发光原理的糖化血红蛋白检测方法，其原理是将血浆样品中的糖化血红蛋白与金标记的抗糖化血红蛋白抗体结合，形成复合物，然后通过化学发光仪测定复合物的发光强度，根据发光强度来确定糖化血红蛋白的浓度。

二、操作流程1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）（1）取血浆样品，处理样品使之具备色谱法测定的条件。

（2）注射样品至高效液相色谱仪中，经过柱分离和检测器检测。

（3）根据检测结果计算糖化血红蛋白的浓度。

2. 金标法（1）取血浆样品，加入金标记的抗糖化血红蛋白抗体，形成糖化血红蛋白-抗体复合物。

（2）加入化学底物，产生化学发光反应。

（3）用化学发光仪测定发光强度，根据发光强度计算糖化血红蛋白的浓度。

三、应用范围1. 糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）HPLC法需要专门的设备和技术人员进行操作，适用于临床检测中心或大型医院。

2. 金标法金标法操作简便，不需要复杂的设备，可以在医院的常规化验室中进行。

金标法更适用于基层医疗机构和社区诊所等地方。

四、总结糖化血红蛋白高效液相色谱法和金标法是两种常用的检测糖尿病患者血糖控制情况的方法，它们在原理、操作流程、应用范围等方面存在着一定的差异。

熟悉这些差异，有助于临床医生根据实际情况选择合适的方法进行检测，以更好地指导糖尿病患者的治疗和管理。

糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。

糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。

临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。

近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。

有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。

测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。

1 HbA1c的临床意义糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。

能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。

1．1 增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。

此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。

1．2 降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。

1．3 作为糖尿病的病情监测指标1．3．1 作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。

1．3．2 不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。

1．3．3 可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。

1．4 当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。

糖化血红蛋白（HbAlc）测定的原理方法与仪器解析及临床意义糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%,而我国糖尿病的发病率亦达2-3%,并且每年还以1%。

的速度增长。

糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。

临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。

近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbAlc）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断：也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbAlc）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。

有些发达国家已将HbAlc的测定列入中老年人的常规体检项目。

测定HbAlc比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。

1 HbAlc的临床意义糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。

能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。

1. 1增高：测定HbAlc可以了解糖尿病人在2〜3个月的血糖控制情况。

此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。

1. 2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。

1. 3作为糖尿病的病情监测指标1. 3. 1作为轻症、I【型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。

1. 3. 2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。

1. 3. 3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。

1. 4当HbAlc>9%时，说明患者存在着持续性高血糖，可以岀现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。

糖化血红蛋白测定胶体金法检测原理糖化血红蛋白（HbA1c）是一种反映血糖控制情况的指标，广泛应用于糖尿病的诊断和治疗过程中。

糖化血红蛋白测定胶体金法是一种常用的检测方法，它通过利用胶体金技术与抗-HbA1c抗体的特异性结合，实现对糖化血红蛋白的定量测定。

该检测方法的原理如下：首先，将待测血清样品与标记有胶体金颗粒的抗-HbA1c抗体共同孵育，使抗-HbA1c抗体与糖化血红蛋白结合。

然后，通过离心或其他方式将胶体金颗粒与未结合的抗体分离。

最后，用适当的方法测量胶体金颗粒的沉淀或溶解情况，通过胶体金颗粒的聚集程度或颜色变化来反映糖化血红蛋白的浓度。

这种检测方法的原理基于胶体金颗粒的物理性质和抗体的特异性识别能力。

胶体金颗粒具有较大的比表面积和高度的稳定性，能够与抗体发生特异性结合。

当糖化血红蛋白存在于样品中时，抗-HbA1c 抗体与糖化血红蛋白结合形成免疫复合物，导致胶体金颗粒的聚集或沉淀。

聚集程度或颜色变化与糖化血红蛋白的浓度成正比，从而可以通过测量胶体金颗粒的沉淀或溶解情况来间接测定糖化血红蛋白的浓度。

糖化血红蛋白测定胶体金法具有许多优点。

首先，该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以准确测定糖化血红蛋白的浓度。

其次，该方法操作简便，快速可靠，适用于临床实验室和现场检测。

此外，该方法不受其他血红蛋白变异的影响，具有较好的稳定性和重复性。

因此，糖化血红蛋白测定胶体金法被广泛应用于糖尿病的诊断、治疗和血糖控制监测中。

然而，需要注意的是，糖化血红蛋白测定胶体金法的结果可能受到一些因素的干扰。

例如，血红蛋白的突变或异常形式可能影响糖化血红蛋白的测定结果。

此外，其他疾病、药物或生理状态的影响也可能导致糖化血红蛋白的浓度异常。

因此，在使用糖化血红蛋白测定胶体金法前，需要了解样本来源和可能存在的干扰因素，并进行适当的校正和解释。

糖化血红蛋白测定胶体金法是一种常用的检测方法，基于胶体金颗粒与抗体的特异性结合实现对糖化血红蛋白的定量测定。

糖化血红蛋白测定方法
糖化血红蛋白（HbA1c）是一种在体内长期暴露于高血糖水平下形成的血红蛋白。

它被广泛用作评估糖尿病患者的长期血糖控制指标。

以下是两种常见的糖化血红蛋白测定方法：
1. 离子交换色谱法（Ion-exchange chromatography）：这是一种传统的HbA1c测定方法。

它通过离子交换柱将血红蛋白组分分离开，并使用色谱仪检测不同血红蛋白组分的浓度。

该方法的优点是准确度高，可测量不同类型的血红蛋白变异体（如HbS和HbC），但需要较长的分析时间和复杂的仪器。

2. 免疫测定法（Immunoassay）：这是一种常用的快速测定HbA1c的方法。

它利用抗体与HbA1c结合，并通过测量HbA1c-抗体复合物的信号来确定HbA1c的浓度。

该方法具有快速、简单和高通量的特点，适用于大规模的临床实验室分析。

无论使用哪种方法进行糖化血红蛋白测定，都需要严格遵循相应的操作规程和质量控制程序，以确保结果的准确性和可重复性。

此外，不同的糖化血红蛋白测定方法之间可能存在差异，因此在临床实践中需要根据实际情况选择最适合的方法进行测定。

糖化血红蛋白分析仪糖化血红蛋白分析仪是一种高精度、高灵敏度的仪器，可实现对血液中糖化血红蛋白水平的准确测量。

它主要通过光学或化学方法进行测定，具有样本消耗少、操作简便、结果快速、准确可靠等特点。

下面将详细介绍糖化血红蛋白分析仪的原理、应用及发展趋势。

离子交换色谱法通过离子交换树脂将血液中的糖化血红蛋白与其他成分分离，然后用吸收光谱法测量血红蛋白的吸收强度来计算糖化血红蛋白的含量。

这种方法准确性高，但操作复杂，检测时间较长。

免疫测定法则是通过特异性抗体与糖化血红蛋白结合来实现检测。

常用的方法有免疫比浊法、免疫荧光法和免疫发光法等。

免疫测定法操作简单、灵敏度高，但可能受到其他成分的干扰，需要校正以提高准确性。

糖化血红蛋白分析仪在糖尿病的诊断和治疗中有着广泛的应用。

首先，它可用于糖尿病的初次诊断和筛查，通过测量患者的糖化血红蛋白水平，可以准确判断是否为糖尿病患者。

其次，它还用于血糖控制的监测，通过定期检测糖化血红蛋白水平，可以及时调整治疗方案，防止并发症的发生。

此外，糖化血红蛋白分析仪还常用于评估糖尿病治疗效果的临床研究中。

首先，随着技术的不断发展，糖化血红蛋白分析仪的准确性和稳定性得到了显著提高。

新的仪器采用更先进的光学、电化学和生物技术，使得测量结果更加精确可靠。

因此，糖尿病患者可以更加准确地评估自己的血糖控制情况。

其次，糖化血红蛋白分析仪的样本处理和操作流程也得到了优化。

新的仪器可以自动完成样本加标、混匀、进样等操作，大大简化了操作流程，提高了工作效率。

此外，一些仪器还具备数据存储和传输功能，可以方便地进行数据管理和分析。

此外，糖化血红蛋白分析仪的便携性也得到了改善。

传统的糖化血红蛋白分析仪体积较大，不易携带，限制了其在临床检测和家庭自测中的应用。

而现在一些小型便携式糖化血红蛋白分析仪的出现，解决了这个问题。

这些仪器体积小巧，重量轻，方便携带和操作，可以随时随地进行检测。

总之，糖化血红蛋白分析仪在糖尿病的诊断和治疗中发挥着重要作用。

一、糖化血红蛋白测定仪及血液分析仪流水线技术参数基本功能及要求1★全自动血液分析流水线由全自动五分类血液细胞分析仪、CRP分析仪、推片染色机、糖化血红蛋分析仪等通过轨道连接组成。

2★具有血常规五分类、体液常规、CRP检测、糖化血红蛋白检测等功能。

3整套系统可仅需一台中央控制电脑即可操作，搭载全中文操作系统。

4具有一键开关机功能，无需逐台按顺序开关机。

5可配置其他模块如正90°转角模块、负90°转角模块、缓存模块、跨柱模块等，具有很好地利用实验室空间。

各功能模块基本功能及要求五分类血液细胞分析仪1.检测方法及原理：半导体激光法、鞘流电阻抗法、核酸荧光染色法、流式细胞技术。

2.★血液模式检测参数：≥33个参数，另有直方图≥2个，散点图≥8个；单台血液分析仪全自动细胞计数和分类检测速度≥120个样本/小时；全自动细胞计数、分类加网织红、有核红细胞计数同时检测速度≥80样本/小时。

3.可进行白细胞分类测定、有核红细胞测定、网织红细胞测定、网织红细胞血红蛋白含量测定、红细胞测定、血小板测定、血红蛋白测定、感染红细胞测定等项目的检测功能。

4.血小板检测采用鞘流阻抗法和细胞染色法两种方法，并可转换。

5.进样模式及样本量：手动进样≤155μl、自动穿刺进样≤205μl、末梢血模式≤45μl。

6.★进样系统：可手动进样，进样时可一次装载≥200个样本，可选配装卸载扩容模块，增大试管架容量。

7.血液分析仪主机自带10.4寸大屏幕彩色液晶触摸屏。

8.★血液分析线性范围（静脉血）：白细胞：（0-500）´109/L，红细胞：（0-8）´1012/L，血小板：（0-5000）´109/L；体液分析线性范围：白细胞线性0-10×109/L、红细胞线性0-5×1012/L。

9.具有全自动体液细胞计数和对体液中的白细胞进行分类的功能；具有通过高荧光体液细胞参数对肿瘤细胞进行提示功能。

1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3. 试剂3.1试剂3.2校准品3.3试剂与校准品的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8. 参考值9. 临床意义附录A:参数1. 检测原理1 .总血红蛋白的测定：非离子变性剂羟高铁血红素总血红蛋白2. HbA1c的测定HbA1 c的测定建立在免疫抑制比浊法基础上。

样本中HbA1c与R1中的抗HbA1c抗体反应生成可溶性的抗原-抗体复合物。

加入R2启动反应。

R1中过量的抗HbA1c抗体与R2中的多半抗原(polyhaptens) 反应生成不可溶的抗原-抗体复合物，吸光度的变化可通过比浊方法检测。

2. 标本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况。

孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。

此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。

2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3抗凝剂：全血采用使用EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。

2.4标本处理：用100倍血液标本的溶血剂处理全血(如：全血样本为5ul，溶血剂500ul),轻晃混合避免起泡，约1-2分钟后标本从红色变成棕绿色后，可以进行样本检测。

3. 试剂3.1试剂：本科使用北京利德曼生化技术有限公司HbA1c试剂盒，为液体试剂，各组分如下：3.2：校准品使用北京利德曼生化技术有限公司试剂盒提供的标准品。

定标液，每瓶加入2mL蒸馏水或去离子水。

轻轻混匀，防止产生泡沫。

复溶后的标准品在2-8°C可保存3天，-20C可保存2个月。

糖化血红蛋白原理及临床意义糖化血红蛋白，这个听上去有点儿高大上的名词，实际上跟我们的日常生活息息相关。

简单来说，它是我们血液中一种非常重要的成分，能够帮助医生了解你的血糖控制情况。

今天就让我们轻松聊聊这个神秘的家伙，看看它的原理以及对健康的影响。

1. 糖化血红蛋白的原理1.1 什么是糖化血红蛋白？糖化血红蛋白，通常简称HbA1c，听起来像个外星人名，其实它是红血球里的一种血红蛋白。

当我们的血液中葡萄糖浓度过高的时候，这些葡萄糖就会“粘”在血红蛋白上，形成糖化血红蛋白。

就像在你的早餐麦片里洒了太多糖一样，吃多了就会留下痕迹。

所以，HbA1c就成了一个记录你“吃糖历史”的小册子。

1.2 糖化血红蛋白的形成过程想象一下，你的血液就像一条长长的河流，而血红蛋白就像河里的小船。

当河流里充满了糖分时，这些小船就会慢慢被糖覆盖，变得黏糊糊的。

一般来说，红血球的生命周期大约是120天，也就是说，HbA1c的水平其实反映了过去两到三个月的平均血糖水平。

简而言之，糖化血红蛋白就像是你身体的“糖分账单”，一查就知道你最近的饮食是不是过于“甜蜜”。

2. 糖化血红蛋白的临床意义2.1 如何解读HbA1c的数值？那么，这个数字到底代表了什么呢？医生通常会把HbA1c的数值用来判断一个人是否有糖尿病，或者他的血糖控制得如何。

比如说，正常人的HbA1c一般是在4%到5.6%之间，如果超出这个范围，可能就得开始留心了。

如果你的数值在5.7%到6.4%之间，那就有可能是前驱糖尿病，6.5%或更高，那就基本上可以确诊为糖尿病了。

可见，这个数字就像个“糖警”，提醒你别把自己吃得太“甜”。

2.2 监测与管理糖尿病糖尿病患者需要定期检查HbA1c，这就像打游戏时查看自己的生命值。

通过了解自己的HbA1c，患者可以知道自己在控制血糖方面做得怎么样。

如果这个数字持续居高不下，那就意味着你需要调整饮食、增加运动，或者和医生讨论更换药物。

换句话说，HbA1c就像是一面镜子，让你看清楚自己在健康这条路上的走法。

糖化血红蛋白检测的SOP【目的】：用于评定糖尿病的控制程度【该SOP变动程序】：本标准操作程序的改动可有任一使用本sop的工作人员提出，并报告经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【检验的适用证】：本试验适用于糖尿病病人【仪器与试剂】1. 仪器：离子交换层析柱2. 试剂：2.1阳离子交换树脂缓冲液：PH6.9，8mg/dl;2.2GHB溶血试剂：氰化钾（含表面活性剂）10Mm；2.3GHB标准液：冻干2.4血清分离器：40枚【操作程序】实验温度：21-24C测定波长：415nm1、操作方法（1）收集静脉血、加入EDTA抗凝。

（2）根据样品数取试管若干，分别吸取400μl溶血剂加入各试管中。

（3）分别吸取80μl标准或样本放入上述各试管中，混合均匀。

（4）放置5～10min，则制成了血红蛋白样本A3。

2、糖化血红蛋白的制备及测定（1）根据样品的数量，取干净的试管若干，分别吸取3.0ml阳离子树脂，放入各管中。

（2）向上述试管中分别加入已预备的100μl血红蛋白样本（A3）。

将层析柱插入试管中，使得橡皮塞高于液面至少1cm。

（3）充分摇荡试管混合5～10min（最好使用涡旋摇荡器，如果没有则需剧烈摇荡20min。

（4）然后慢慢推动层析柱进入试管，直到糖化血红蛋白提取完全。

（5）上清液倒入另一支试管或直接倒入比色杯进行比色。

（6）以蒸馏水作空白在415nm调零。

（7）读取并记录标准，样品吸光度值。

3、总血红蛋白测定（1）根据样品数量取试管若干，分别加入5.0ml蒸馏水。

（2）加入20μl血红蛋白样本（A3）。

混合均匀。

（3）以蒸馏水作空白在415nm调零。

（4）读取并记录各管吸光度值。

4、参考值范围及报告单糖化血红蛋白GHB（%）=糖化血红蛋白吸光度/总血红蛋白吸光度×10（正常值范围4.0%～6%）。

【糖化血红蛋白测定注意事项】1.树脂缓冲液在使用前至少振摇10次加以混匀，每加5管反应摇匀一次；2.全血标本的血红蛋白大于18g/dl时，应将标本用蒸馏水按1：1稀释，结果乘以2；3.请勿使用塑料试管4.请使用13X100mm玻璃试管，以免因试管太小，血清分离器无法插入或因试管内劲太大，上清液无法进入血清分离器。

最全糖化血红蛋白测定的原理与仪器解析糖化血红蛋白（HbA1c）是指糖分子与血红蛋白A的糖基化产物。

尽管糖化血红蛋白的生成过程是一个非酶促反应，但当血液中的血糖水平增加时，糖化反应也会增加。

因此，糖化血红蛋白的测定可以反映出患者过去2-3个月内的平均血糖水平，通常用于糖尿病的诊断和疾病管理。

糖化血红蛋白的测定有许多方法，其中最常用的是离子交换层析法（HPLC）和免疫测定法。

下面将详细介绍这两种方法的原理和仪器解析。

1.离子交换层析法（HPLC）离子交换层析法是一种基于糖化血红蛋白与其他血红蛋白成分在离子交换柱中的不同亲和力进行分离的方法。

首先，将样品中的红细胞破碎并溶解，然后经过预处理步骤去除干扰物质。

此后，将溶解的样品装入装有离子交换柱的高效液相色谱仪中。

通过改变梯度洗脱条件，可以将血红蛋白A和其它不同类型的血红蛋白分离开来。

这些分离后的血红蛋白组分通过紫外光检测器进行检测和定量，计算出糖化血红蛋白的百分比。

离子交换层析法对仪器设备的要求相对较高。

需要使用高效液相色谱仪（HPLC）以及配套的离子交换柱和相关的分析软件。

这些设备能够提供高分辨率和高灵敏度的分离和检测，确保准确且可重复的结果。

2.免疫测定法免疫测定法是利用糖化血红蛋白与特异性抗体之间的免疫反应进行测定的方法。

首先，将样品中的红细胞破碎并溶解，然后进行预处理去除干扰物质。

然后，在试剂盒提供的试剂和缓冲液的作用下，糖化血红蛋白与特异性抗体发生免疫反应。

未结合抗体的糖化血红蛋白被洗脱掉，而结合抗体的糖化血红蛋白则与标记的酶或荧光物质形成复合物。

通过测量这些复合物中的酶活性或荧光强度，可以定量测定糖化血红蛋白的浓度。

免疫测定法通常使用酶联免疫吸附检测（ELISA）或免疫荧光法进行糖化血红蛋白的测定。

这些方法对仪器设备的要求相对较低，通常可使用光滑板读数器或荧光光谱仪进行检测。

总结起来，糖化血红蛋白的测定主要采用离子交换层析法和免疫测定法。

离子交换层析法利用离子交换柱对血红蛋白A和其它血红蛋白成分进行分离，然后通过HPLC设备进行定量分析。

D-10糖化血红蛋白A1c测定仪操作规程离子交换高效液相色谱法（HPLC）法仪器型号：Bio-Rad D10安装日期：1．目的：D-10糖化血红蛋白A1c测定仪用于报告个体EDTA抗凝静脉全血样本的糖化血红蛋白A1c的实验结果，用于个体糖尿病辅助诊断和治疗监测。

2．原理：D-10糖化血红蛋白A1c测定仪是台式仪器，应用离子交换高效液相色谱法（HPLC）对人全血糖化血红蛋白A1C的自动化和准确的测定。

标本可被自动稀释后注入分析柱。

D-10糖化血红蛋白A1c测定仪将预先编程设置的由低到高离子浓度的缓冲液注入系统，在这一过程中，血红蛋白经和分析柱中偶联离子结合的程度大小达到分离。

处理好的样本自动被注入分析通路，分离的血红蛋白随后在流经光感测量计时，测量其在415nm的光吸收情况。

D-10糖化血红蛋白A1c测定仪临床数据处理软件(CDM) 将每次分析过程中收集到的数据还原。

此间要经过两个水平的计算。

通过微积分计算得出分析结果和分析图谱，面积计算使用了指数模式的高斯对数（EMG），这样计算已经排除了可变部分的血红蛋白A1C和氨基甲酰血红蛋等干扰成分。

D-10糖化血红蛋白A1c测定仪可从全血管中自动吸取标本，随后进行稀释和分析，每个样本在3分钟内即可完成测定。

3．仪器使用环境：1．无尘、换气良好的环境。

2．避免阳光直接照射。

3．室内相对湿度20~80%4．电源电压变动在220V±10V之内5．有保护性接地4．安全条款：1．使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。

如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。

仪器污染时应随时清洗干净且消毒。

2．仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。

3．仪器的操作、保养按规定程序进行。

5．标准操作过程5.1开机程序：1)确认试剂量和打印纸充足，废液桶倒空2)打开仪器左侧下部的电源开关3)仪器自检后自动进入睡眠（Sleep）状态5.2运行前检查1）检查缓冲液和洗液/稀释液的液面水平2）检查废液桶3）检查分析柱的测试数(Lot Info)4）检查泵压力波动(Maintain/Start Pump)，压力应波动在 5%之间5）检查管路的连接处有无漏液6）检查打印纸5.3关机程序1)如系统处于Standby状态，从Run菜单中选择Sleep，经过5分钟状态转换，仪器进入Sleep状态；2)如系统已经处于Sleep状态，直接执行下步操作3)点击Run菜单中Shut Down4)当出现小月亮图标<It is safe now shutdown>后，关掉电源开关注: 建议仪器在不使用时保持sleep状态，并且尽量避免在Running状态突然关机下列情况建议关机：当更换系统零件时当将系统移动到新位置时当实验室断电时5.4常规病人样本操作5.4.1病人样本要求：1)2ml，EDTA抗凝全血；2)室温稳定3天，2-8o C可保存7天；3)如果样本量不足2ml，需要手工进行样本预稀释。