水痘-带状疱疹病毒微生物学检验关键词:细胞库菌株培养中心 atcc 北纳细胞网(一)检验程序水痘-带状疱疹病毒检验程序同图29-1。
(二)标本的采集VZV感染者几乎均出现皮肤水痘或疱疹。
水疱内液体含有高浓度的无细胞病毒,且采集方法简单易行,故水疱液体是确诊VZV感染的最主要标本。
PCR检测可以拭子采集水疱液,置病毒运输培养基或生理盐水。
VZV DNA很稳定,PCR法检测可采集血清、血浆、全血和外周血单核细胞(peripheral blood mononuelear,PBMC)保存于-20℃。
然而,VZV极不稳定,-20℃冰冻后病毒活性极大地降低。
故病毒培养时,应尽早接种,否则标本应加冷冻保护剂保存于-80℃。
(三)标本直接检查1.显微镜检查最原始且最简单易行的是Tzanck试验,方法是取水疱基底部含有细胞的标本涂片,用瑞特-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色。
镜检可见多核巨细胞、多个嗜酸性核内包涵体。
由于HSV、VZV感染均可以观察到此形态的病变细胞,故此方法不能用于VZV的特异性诊断。
2.抗原检测VZV抗原检测是住院病人VZV,感染的首选实验诊断方法。
采用无菌皮肤刮勺用力刮取疱疹基底部含细胞的标本,涂片,用低温丙酮固定,室温干燥,加荧光标记的VZV特异性单克隆抗体在37℃潮湿的培养箱中染色培养半小时,洗去未结合抗体,加盖玻片后在荧光显微镜下观察。
也可采用间接荧光抗体法检测VZV抗原。
3.核酸检测PCR技术彻底改变了VZV,相关中枢神经系统和散播性感染的诊断,是诊断VZV感染的重要方法。
由于皮肤损伤部位标本易采集,且疱疹液VZV浓度高,PCR检测阳性率高,成为VZV诊断及基因分型的理想标本。
VZV相关面瘫等患者皮肤表面无明显疱疹,可采集痂结或皮肤刮取物进行PCR检测。
血清、血浆、全血、PBMC、CSF标本均可用于PCR检测。
此外,PCR技术可快速鉴别VZV与其他病毒,特别是HSV-1和HSV-2引起的疱疹。