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中药葛根的提取研究【摘要】本文首先随本实验的选题意义及选题依据进行简单的介绍，阐述了葛根素的药理作用，进而引入本文的研究内容。
本文的实验部分进行了详细而紧密的探讨，探讨内容包括总黄酮含量的测定方法、提取溶剂的选择、提取方法的选择。
【关键词】葛根提取工艺葛根在我过分分布单位较广，具有较好的药用价值，对各种心血管疾病、糖尿病具有较好的作用。
本课题旨在通过正交实验确定该天然药物主要成分的最佳提取工艺，并对天然提取物的稳定性进行研究。
一、仪器与药品（一）仪器：可见分光光度计，超声提取仪，B204-S型万分之一电子天平，DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱。
（二）药品：葛根、无水亚硫酸钠、亚硝酸钠、焦性没食子酸、氧化钙（块状）、硫代硫酸钠、氢氧化钠（粒）、氯化钠铁、石油醚、乙醇二、总黄酮含量的测定方法称取5g葛根至于一定量的圆底烧瓶中，添加4倍的乙醇进行回流提取和超声提取，提取的时间均为3h，将溶剂蒸干，得到膏状物。
称取30mg的膏状样品置于量瓶中，量瓶的含量约为50mL，添加25mL乙醇，通过超声分散的方法将膏状物进行溶解，将乙醇添加到25mL刻度线处。
采用吸量管吸收其中的1.0mL的溶液进行实验。
采用去离子水、乙醇作为溶剂提取葛根素进行比较，选择一个较优的溶剂。
粉碎一定量的葛根至于提取瓶中，分别采用4倍、2倍的溶剂进行回流提取，提取的时间分别为1.5 h和1 h，将两次回流提取所得的提取液进行混合，浓缩成膏状物质，测量其中葛根素的含量，进而计算其中葛根素的提取率。
三、提取方法的选择采用回流提取法和超声提取法，在相同条件下进行实验，并予以比较，具体实验步骤为：采用去回流提取、超声提取作为溶剂提取葛根素进行比较，选择一个较优的方法。
所得结果如表1所示。
四、葛根素提取工艺的正交实验研究在整个实验的过程当中以葛根素的提取率为主要参考指标。
具体的实验步骤及方法是：称取10.0g的葛根粉末，加入乙醇200mL，实验过程中回流提取的时间为2h，每个样品提取5次，在1000mL的乙醇中溶解，过滤后测量其中葛根素的含量，发现葛根素的含量为39.9mg/g。
葛根提取工艺的研究[摘要]目的：研究葛根最佳提取工艺条件。
方法：采用3因素3水平l9（34）正交试验法，以葛根素含量为评判指标，对葛根提取工艺进行研究。
结果：实验设计3个因素中乙醇浓度具有极显著影响。
结论：结合实际生产情况，葛根提取的最佳工艺条件为a1b2c2。
[关键词]葛根；提取；正交试验[abstract]objective:to study the optimum extraction conditions of radix puerariae. methods: the puerarin content was used as a marker. the extraction process of radix puerariae was studied by orthogonal design with 3factors and 3 levels(l9（34）).results: the alcohol concentraction was remarkable factor in the test. conclusion: considering the demand of manufacture, the best extraction is a1b2c2.[key words]radix puerariae;extraction;orhtogonal design 葛根为常用中药，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效[1]。
现代研究表明，葛根具有降压、改善脑循环、扩张冠脉、改善心功能等作用[2].其主要有效成分为葛根素等黄酮类物质，提取研究时，常以葛根素为检测指标。
赵浩如[3]等进行了渗漉法、浸渍法、回流法及水煎煮法的对比试验，结果表明，渗漉法时一种较好的提取方法。
为了进一步确定最佳的渗漉条件，本文作者以乙醇浓度、浸泡时间和渗漉速度为因素，设计3因素3水平l9（34）正交试验，以hplc法测定葛根素含量，对提取工艺进行了筛选。
复方野葛根胶囊的薄层色谱辨别研究危华玲杨嘉珍潘洪平【摘要】目的成立复方野葛根胶囊的薄层色谱辨别方式，为制定其质量操纵标准提供实验依据。
方式采纳薄层色谱辨别法辨别处方中的要紧药味西洋参。
结果处方中的西洋参的薄层色谱具有辨别特点。
结论薄层色谱辨别方式简即靠得住，专属性、重复性好，可作为复方野葛根胶囊的质量操纵指标。
【关键词】复方野葛根胶囊；西洋参；薄层色谱；辨别Abstract：ObjectiveTo establish a TLC identification method for Compound Pueraria lobata Capsules. MethodsThe TLC method was applied to identifying the Panax quinquefolium L．ResultsDescribable characteristics of Panax quinquefolium L． by TLC were is a simple，reliable and specific method with good reproducibility, and it can be used as quality control guideline for compound Pueraria lobata Capsules.Key words：Compound Pueraria lobata Capsules； Panax quinquefolium L.； TLC； Identification复方野葛根胶囊为本院闻名中医经连年临床实践挑选出来的中药配方。
复方野葛根胶囊是应用西洋参等十几味药材，经科学方式精制而成。
药理实验及临床实践说明，本品可用于医治心脑血管疾病，成效良好。
其中西洋参为本方中的要紧成份。
为操纵制剂质量，咱们对方中西洋参成份用薄层层析法进行了定性辨别研究。
1 材料复方野葛根胶囊，由本院制剂室提供（批号：070402，070416，070426）。
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载生化制药大实验-葛根素的提取、分离和精制地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容葛根素的提取、分离和精制一、实验目的1. 建立对生化物质提取、分离及精制过程的认识2. 了解溶剂萃取法、吸附分离法、柱层析法及结晶的基本原理3. 掌握大孔吸附树脂的分离原理和基本操作4. 掌握葛根素的提取、分离和精制方法二、实验原理葛根（Radix Puerariae）为豆科植物野葛Pueraria lobata （Willd．）ohwi的根，是常用的中药，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻等功效。
图1 葛根葛根中含多种黄酮类成分，主要活性成分为大豆素(daidzein）、大豆甙（daidzin）、葛根素（puerarin）、葛根素-7-木糖甙（puerarin-7-xyloside）等。
其主要成分为葛根素，即8-β-D-葡萄吡喃糖-4,7-二羟基异黄酮。
葛根素具有扩张冠脉和脑血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收缩功能、促进血液循环等作用。
适用于冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动脉静脉阻塞、突发性耳聋等疾病的治疗，效果显著。
1. 萃取萃取（extraction）是利用溶质在互不相溶的两项之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的方法。
萃取是是工业生产中常用的分离、提取的方法之一。
如果含有目标产物的原料为固体，则称此操作为液固萃取或浸取；如果含有目标产物的原料为液体，则称此操作为液液萃取。
（1）液固萃取液固萃取通称浸取（leaching），是用液体提取固体原料中的有用成分的扩散分离操作。
生物分离过程中经常需要利用液固萃取法从细胞或生物体中提取目标产物或除去有害成分。
例如，从咖啡豆中脱咖啡因，从草莓中提取花色苷色素，从植物组织中提取生物碱、黄酮类皂苷等。
实验一葛根药材的真实性鉴定1.仪器与材料1.1 仪器生物显微镜[BA210、Motic]、镊子、载玻片、盖玻片、酒精灯、单（双）面刀片、紫外分析灯（254nm和365nm）[WFH-203B、上海精科实业有限公司]、硅板、层析缸、天平[JH202、上海精密科学仪器有限公司]、锥形瓶、超声胶HF254振荡仪[SB-5200D、宁波新芝生股份有限公司]、量筒、点样毛细管、水浴[XMTE-8112、上海精宏实验设备有限公司]。
1.2 试剂水合氯醛试液、蒸馏水、稀甘油、甲醇[分析纯 AR 批号:20120508 国药集团化学试剂有限公司]、乙酸乙酯[分析纯 AR 批号:T20110822 国药集团化学试剂有限公司]、氯仿[分析纯 AR 批号:20131227 国药集团化学试剂有限公司]。
1.3 材料待鉴定天然药物及对应药材粉末各5份。
5份未知药材分别为葛根（豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根）、粉葛（混乱品种：豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根）、劣质葛根、未知生药1（伪品）、未知生药2（伪品）；葛根制剂愈风宁心片；葛根素对照品、葛根对照药材、粉葛对照药材。
2. 实验方法2.1 葛根及粉葛的性状鉴定观察并记录（文字记录及数码采集图像）药材性状特征，鉴定其是否符合2015年版《中华人民共和国药典》相关项下标准。
葛根的性状鉴别：完整的块根呈圆柱形。
表面褐色，具纵皱纹，可见皮孔及须根痕。
质坚实。
饮片呈纵切的长方形厚片或小方块，长5-35cm，厚0.5-1cm。
外皮淡棕色，有纵皱纹，粗糙。
切面黄白色，纹理不明显。
质韧，纤维性强。
气微，味微甜。
粉葛的性状鉴定：呈圆柱形，类纺锤形或半圆柱形，长12-15cm，直径4-8cm；有的为纵切或横切的厚片，大小不一。
表面黄白色或淡棕色，未去外皮的呈灰棕色。
体重，质硬，富粉性，横切面可见由纤维形成的浅棕色同心性环纹，纵切面可见由纤维形成的数条纵纹。
气微，味微甜。
2.2 葛根、粉葛和愈风宁心片的显微鉴定水装片：取少许粉末，置于载玻片中央，滴适量蒸馏水，用针将粉末分散均匀，将盖玻片以45°夹角盖上，用大拇指按压盖玻片，无气泡最佳。
用于观察淀粉粒。
水合氯醛装片：取少许粉末，置于载玻片中央，用解剖针将粉末分散均匀，加1-2滴水合氯醛试液，在酒精灯上透化，重复2-3次透化后加半滴甘油。
将盖玻片与载玻片以45°夹角盖上，用大拇指按压盖玻片，无气泡最佳。
用于观察纤维、导管形态等。
观察并记录（文字记录及数码采集图像）原料药粉末显微特征，鉴定其是否符合2015年版《中华人民共和国药典》相关项下标准，鉴定其制剂愈风宁心片是否符合该药品质量标准。
葛根的显微特征：粉末淡棕色。
淀粉粒单粒球形，直径3-37μm，脐点点状，裂缝状或星状；复粒由2-10分粒组成。
纤维多成束，壁厚，木化，周围细胞大多含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚。
石细胞少见，类圆形或多角形，直径38-70μm。
具缘纹孔导管较大，具缘纹孔六角形或椭圆形，排列极为紧密。
粉葛的显微特征：粉末黄白色。
淀粉粒甚多，单粒少见，圆球形，直径8-15μm，脐点隐约可见；复粒多，由2-20分粒组成，纤维多成束，壁厚，木化，周围细胞大多含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚。
石细胞少见，类圆形或多角形，直径25-43μm。
具缘纹孔导管较大，具缘纹孔圆形，排列极为紧密。
2.3 葛根、粉葛及其制剂的TLC鉴别葛根素对照品溶液、天然药物原料药及其制剂供试品溶液的制备：①对照品溶液制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，制成对照药材溶液。
②药材供试品溶液制备：天然药物原料药(5个样品)0.1g加甲醇10ml，超声处理20min，将上清液滤出，药液置蒸发皿中水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
③制剂供试品制备：取愈风宁心片2片，除去包衣，研细，加醋酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液。
点样：按照2015年版《中华人民共和国药典》一部薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述8种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，使成条状。
展开：以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取出，晾干。
结果观察：置紫外光灯（365nm和254nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应得位置上，显示相同颜色的荧光条斑。
记录（数码照相）实验结果。
3.实验结果（A组）3.1 性状鉴定观察可得，样品A应为葛根制剂愈风宁心片，青绿色包衣片，除去包衣后显棕褐色；味微苦、甜。
样品B 样品C 样品D 样品E 样品F 外皮颜色淡棕色黄白色淡灰棕色黄白色白色或淡黄色形状纵切的大小不一的小方块纵切或斜切的大小不一的小方块纵切的大小不一的小方块大小不一的不规则片状及条状大小不一的小方块断面有纵皱纹，粗糙。
切面黄白色，纹理不明显。
横切面可见由纤维形成的浅棕色同心性环纹，纵切面可见由纤维形成的数条纵纹。
有纵皱纹，切面淡棕色，纹理明显，粗糙。
切面黄白色，纹理不明显，有细小孔隙。
表皮纹细、纹理不明显，断面白色细腻，颗粒性。
气味气微，味微甜。
气微，味微甜。
气微，味微甜。
气微、味微涩。
气微，味微酸。
其它质韧，纤维性强。
体重，质硬，富粉性，纤维性强。
质韧，纤维性强。
体重，质硬，不易折断。
体重，质坚实。
3.2 显微鉴定样品B 样品C 样品D 样品E 样品F 颜色淡棕色黄白色淡褐色黄白色黄白色淀粉粒单粒球形，直径3-37 μm，脐点点状、裂缝状或星状；复粒由2-10分粒组成。
甚多，单粒少见，圆球形，直径8-15μm，脐点隐约可见；复粒多，由2-20分粒组成。
单粒球形，直径3-37 um，脐点点状、裂缝状或星状；复粒由2-10多分粒组成。
单粒扁卵形、类圆形、三角状卵形或矩圆形，脐点点状、人字状、十字状或短缝状，可见层纹；复粒稀无少，由2-3分粒组成。
晶纤维 纤维多成束，壁厚，木化，周围细胞多含草酸钙方晶， 形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚。
纤维多成束，壁厚，木化，周围细胞大多含草酸钙方晶， 形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚。
纤维多成束，壁厚，木化，周围细胞多含草酸钙方晶， 形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚。
无可见颗粒状团块，菌丝细长，稍弯曲，有分枝，无色或带棕色，横壁偶可察见石细胞 少见，类圆形或多角形，直径38-70μm少见，类圆形或多角形，直径25-43μm 少见，类圆形或多角形，直径38-70μm少见，类圆形或多角形 少见，类圆形或多角形具缘纹孔导管 较大，具缘纹孔六角形或椭圆形，排列极为紧密。
较大，具缘纹孔圆形，排列极为紧密。
较大，具缘纹孔六角形或椭圆形，排列极为紧密。
除具缘纹孔导管外还有网纹、螺纹及环纹导管。
无 样品B ：淀粉粒 晶纤维石细胞具缘纹孔导管样品C：淀粉粒晶纤维石细胞具缘纹孔导管样品D：淀粉粒晶纤维石细胞具缘纹孔导管样品E：淀粉粒石细胞具缘纹孔导管样品F：石细胞晶纤维3.3 TLC鉴别1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 2 3 4 5 6 7 8 9（254 nm紫外灯下TLC图）（365 nm紫外灯下TLC图）1：葛根素对照品；2：野葛对照品；3：粉葛对照品；4：样品A--愈风宁心片；5-9：样品B-F各组分比移值（R f）：R f1=0.30；R f2=0.27、R f2’=0.70；R f3=0.25；R f4=0.27、R f4’=0.68；R f5=0.27、R f5’=0.67；R f6=0.25；R f7=0.30、R f7’=0.68 样品8、9无明显荧光现象。
3.4 实验结果通过性状鉴别、显微鉴别、TLC鉴别及Rf值的对比，得出结论：样品A为愈风宁心片；样品B为葛根；样品C为粉葛；样品D为劣质葛根；样品E为伪品1（推测可能为天麻）；样品F为伪品2（推测可能为茯苓）。
4.讨论与小结注意事项：① TLC鉴别点样时点样量不宜过大，易造成拖尾；注意边缘效应，点样时边缘预留出一定距离。
②制片时粉末不宜过大，且需分散均匀，便于观察。
性状鉴别：观察可得，样品A应为愈风宁心。
片样品C表面黄白色，纵切面可见由纤维形成的数条纵纹，粉性强，推测为粉葛。
样品B、D外表淡棕色，推测可能葛根。
E、F无此特征，推测可能为伪品。
观察其性状，F虽性状类同粉葛，无粉性，有可能为茯苓。
显微鉴别：样品B、D可观察到单粒球形淀粉粒；含草酸钙方晶的晶纤维且含晶细胞壁木化增厚；少见石细胞，类圆形或多角形；较大的具缘纹孔导管，具缘纹孔六角形或椭圆形，推测可能为葛根。
样品C观察到淀粉粒甚多，单粒少见，复粒多；纤维成束，周围细胞多含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚，推测可能为粉葛。
样品E无法观测到晶纤维，样品F无法观测到淀粉粒与具缘纹孔导管，推测其可能为伪品。
TLC鉴别：与对照品在254 nm下相比较，粉末样品A、B、C、D对照品在相应位置上均有颜色相同的斑点。
根据斑点与对照品的比较以及在同样点样量下斑点颜色深浅比较，推论出A是愈风宁心片，B是葛根，C是粉葛，D是劣质葛根。
E、F未显示斑点，为伪品。
总结：性状鉴定与显微鉴定可以推测样品B、D为葛根，C为粉葛，E、F为伪品，。
TLC鉴定可知样品是否含葛根素以及含量高低，由此区分优葛(B)、劣葛(D)、粉葛（C）和伪品1、2。
综上所述，得出结论：样品A为愈风宁心片；样品B为葛根；样品C为粉葛；样品D为劣质葛根；样品E为伪品1（推测为天麻）；样品F为伪品2（推测为茯苓）。
实验二葛根总黄酮的提取工艺研究1.仪器与材料1.1仪器试剂旋转蒸发仪【RE-52AA 上海亚荣生化仪器厂】、鼓风干燥箱、水浴锅、煎煮锅、玻璃层析柱、纱布、量筒、容量瓶、蒸发皿、移液管、洗耳球、电子天平【JA5002 上海精天电子仪器有限公司】、乙醇、甲醇、蒸馏水1.2实验材料豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.) Ohwi的干燥根【批号140206 上海康桥中药饮片有限公司】、AB-8大孔吸附树脂2.实验方法2.1水煎提取工艺取葛根（野葛）饮片80g，置煎煮锅中，加10倍量水（800ml），温室浸泡半小时。
大火煮沸然后小火保持微沸状态1小时，纱布过滤提取液，药渣用8倍量水（640ml）再煮沸半小时，纱布过滤提取液。
合并两次提取的滤液，混合均匀，测量总体积并记录。
精密量取0.50ml置于10.0ml容量瓶中，以30%乙醇定容（测试样品1），以备测定水提物总黄酮的含量；奇遇水煎液常压浓缩至1g生药/ml（80ml），另精密量取5.0ml（相当于5g生药量）的药液于已经记录重量的蒸发皿中，水浴蒸干，烘干称重，计算水煎法浸膏得率。
