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食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定方法。
本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定；第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。
第一法液相色谱法2原理样品经处理后，用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1氨水（NH3•H2O）。
3.1.2氢氧化钠（NaOH）。
3.1.3硫酸（H2SO4）。
3.1.4亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）。
3.1.5乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）。
3.1.6氯化钠（NaCl）。
3.1.7酒石酸（C4H6O6）。
3.1.8硅酮树脂。
3.1.9磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）。
3.1.10磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.11中性氧化铝。
3.1.12甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.13乙酸铵（CH3COONH4）。
3.2 试剂配制3.2.1 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合，经微孔滤膜过滤后备用。
3.2.2 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取4 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
3.2.3硫酸溶液（0.5 mol/L）：移取30 mL浓硫酸（约70%）边搅拌边慢慢加入至500 mL水中，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
3.2.4亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取106 g亚铁氰化钾加水至1000 mL。
3.2.5 乙酸锌溶液（183 g/L）：称取220 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水稀释至1000 mL。
3.2.6 酒石酸溶液（15%）：称取15 g酒石酸，用水定容100 mL。
3.2.7的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）：分别称取16.72 g磷酸二氢钠和2.72 g磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1000 mL，经微孔滤膜过滤后备用。
项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。
但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。
表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。
即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。
重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。
对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。
在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。
特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。
对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。
我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。
防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。
防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。
2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。
由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。
3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。
4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。
《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）一）简要起草过程1. 标准任务下达后，天津科技大学针对制定“食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定”国家标准的具体工作进行了认真研究，确定了总体工作方案，并于2014年6月，成立了标准起草工作小组。
2. 起草工作组收集和查阅了相关标准及编制说明，在参考和借鉴国内、国际苯甲酸、山梨酸和糖精钠的检测标准的基础上，结合标准的清理结论，编制了《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》标准初稿。
并由起草人撰写标准文本和编制说明。
3.从2014.9起，标准起草工作组在北京多次召开会议征求专家意见，认真学习研究了反馈的意见和建议，对标准文本及编制说明进行了修改和完善，形成了标准征求意见稿。
于2014年10月，上报食品安全国家标准审评委员会秘书处。
4. 该标准“公示征求意见稿”在卫生部网上向各相关部门及社会公开征求意见后，起草单位将根据反馈的意见对标准文本及编制说明进行进一步的修改和完善，形成标准“送审稿”。
二）主要起草单位、起草人标准负责起草单位：天津科技大学；标准参加起草单位：江西出入境检验检疫局；主要起草人：天津科技大学张颖；其他起草人：天津科技大学张健，江西出入境检验检疫局郭平。
起草人负责标准技术资料查询、收集、整理、标准文本及编制说明的编辑、撰写，行业内征求意见，组织专家对标准预审，标准送审等。
二、标准的重要内容及主要修改情况1.检测食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠现行的标准方法有GB/T 5009.29-2003、GB/T 5009.28-2003、GB/T 23495-2009、GB 21703-2010、SB/T 10389-2004、SN/T 2012-2007，这六项标准在试样处理和检测技术方面条件相似，因此，可以整合形成一项标准，同时，充分考虑GB 2760-2011规定的使用范围及限量，整合后的标准可以替代上述六项标准方法。
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解(转自仪器信息网色谱论坛)苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-1996，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-1996，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-1996和GB/T5009.29-1996 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-1996使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1m ol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
134 食品安全导刊 2020年9月Tlogy科技分析与检测食品很容易因为温湿度、环境等出现变质，给企业带来巨大经济损失，也会制约食品行业发展。
防腐剂的添加很好地延长了食品的保质期，因此被广泛添加到食品中。
目前常添加的有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、丙酸及其盐、脱氢乙酸等。
甜味剂能够改善口感进而增加食欲，常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜与阿力甜等[1]。
近些年的研究表明食品添加剂超量使用也会危害人体健康，食品安全国家标准对防腐剂和甜味剂的添加量作出明确规定，以保证食品安全[2]。
本文采用液相色谱法同时测定食品中所添加的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜。
1 试验部分1.1 仪器与试剂Waters allianc acquity e2695液相色谱仪；涡旋混合器；HR/T20 MM 立式高速冷冻离心机；KH-250DB 数控型超声波清洗器。
甲醇（HPLC 纯）；乙酸铵、亚铁氰化钾、乙酸锌均为分析纯；标准试剂：山梨酸、安赛蜜、苯甲酸、糖精钠纯度均＞99%。
1.2 色谱条件色谱柱：C 18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：甲醇+乙酸铵溶液=8+92；柱温：35 ℃；进样量：10 μL，检测波长：230 nm；流速：1 mL/min。
1.3 样品前处理取2.5 g 左右样品于50 mL 离心管中，加入25 mL 水涡旋振荡，加入2 mL 10.6%的亚铁氰化钾溶液涡旋20 s 混匀，再加入2 mL 22%的乙酸锌溶液涡旋1 min 后定容至刻度线，超声30 min，于10 000 r/min 离心10 min，上清液转移至50 mL 容量瓶中，残渣再加水混匀后离心提取一次，上清液合并至原容量瓶中，用水定容至刻度线混匀，取上清液2 mL 过 0.22 μm 滤膜，供液相色谱上机检测。
2 结果与讨论2.1 流动相条件的选择参照GB 5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》检测标准，通过改变甲醇的比例[1]对比验证标准品目标峰的分离和出峰时间，最后确定流动相条件为：甲醇+乙酸铵溶液=8+92。
066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。
苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。
GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。
GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。
本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。
一、仪器与试剂1.仪器。
高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。
2.试剂。
苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。
二、实验与方法1.色谱条件。
（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。
（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本方法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。
2 依据GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》。
3 原理不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
.4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。
甲醇，乙酸铵等。
苯甲酸标准储备液：称取0.0638g 苯甲酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。
山梨酸标准储备液：称取0.0766g 山梨酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。
糖精钠标准储备液：称取0.0766g 糖精钠，用水溶解并定容至100mL 。
混合标准使用液：分别吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成适当浓度，见附后标准曲线图谱。
5 分析步骤 5.1 样品处理称取适量样品（雪菜）于小烧杯中，用50mL 水分数次将样品移入100mL 容量瓶中，80℃水浴提取30min ，冷却后定容、过滤，滤液待上机分析。
5.2 色谱条件a) Agilent 高效液相色谱仪；b) 色谱柱：C 18柱，250mm ×4.6mm ，5μm ；c) 流动相：0.02mol/L 乙酸铵溶液+甲醇（90+10）； d) 流速：1mL/min ； e) 检测波长：230nm ； f) 进样量：20μL ； g) 柱温：25℃。
5.3 测定取处理液和混合标准使用液各20μL 注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量。
6 结果计算样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量按下式计算： X =式中：X ——样品中待测组分含量，g/kg ；c ×Vm ×1000c ——由标准曲线得出的样液中待测物的浓度，μg /mL ； V ——样品定容体积，mL ； m ——样品质量，g 。
食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定方法。
本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定；第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。
第一法液相色谱法2原理样品经处理后，用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1氨水（NH3•H2O）。
3.1.2氢氧化钠（NaOH）。
3.1.3硫酸（H2SO4）。
3.1.4亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）。
3.1.5乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）。
3.1.6氯化钠（NaCl）。
3.1.7酒石酸（C4H6O6）。
3.1.8硅酮树脂。
3.1.9磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）。
3.1.10磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.11中性氧化铝。
3.1.12甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.13乙酸铵（CH3COONH4）。
3.2 试剂配制3.2.1 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合，经微孔滤膜过滤后备用。
3.2.2 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取4 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
3.2.3硫酸溶液（0.5 mol/L）：移取30 mL浓硫酸（约70%）边搅拌边慢慢加入至500 mL水中，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
3.2.4亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取106 g亚铁氰化钾加水至1000 mL。
3.2.5 乙酸锌溶液（183 g/L）：称取220 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水稀释至1000 mL。
3.2.6 酒石酸溶液（15%）：称取15 g酒石酸，用水定容100 mL。
3.2.7的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）：分别称取16.72 g磷酸二氢钠和2.72 g磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1000 mL，经微孔滤膜过滤后备用。
食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定【摘要】目的：同时对食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸进行测定，缩短检测时间，提高检测效率。
方法：使用高效色谱仪，紫外检测器，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量。
结果：精密度在1%-8%之间，回收率在91%-110%之间。
结论:该方法前处理简单，检测结果稳定性好，准确度高，能同时检测食品中的4种添加剂，提高检测效率。
【关键词】高效液相色谱仪; 安赛蜜; 苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 脱氢乙酸在食品加工中，为了提高食品的风味，延长保持期等原因，食品中会加入各种的添加剂，而比较常用的包括山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸等。
在国标中，山梨酸、苯甲酸、糖精钠是使用国家标准GB 5009.28-2016进行检测，脱氢乙酸是使用国家标准GB 5009.121-2016进行检测，但在市场的抽检中，有很多的食品均需要检测这4种添加剂，在大量的检测工作中，如果能把这4种添加剂同时进行检测，可以大大缩短检测时间，提高检测效率。
本实验通过对流动相、检测波长的调整探索了一种能同时检测山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法。
1 实验部分1 试剂与仪器岛津液相色谱仪，配紫外检测器，C18色谱柱苯甲酸钠标准品（CAS号:532 32-1)，山梨酸钾标准品（CAS号:590-00-1)，糖精钠标准品（CAS号:128-11-9)氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、无水乙醇、正已烷、甲醇: 色谱纯1.2 试样提取准确称取约2 g试样于50 ml具塞离心管中,加水约25 m，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液（92g/L)2 ml和乙酸锌溶液(183g/L)2 mL，用氢氧化钠溶液(20g/L)调pH至7.5，混匀于8 000r/ min离心5 min,将水相转移至50 ml容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，于8 000 r/min离心5 min将水相转移到同一50 ml容量瓶中并用水定容至刻度，混匀。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。
下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。
一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。
主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。
二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。
然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。
2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。
可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。
3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。
4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。
四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。
2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。
这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。
3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。
4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。
高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。
各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。
因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。
并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。
1 材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。
1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。
1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。
1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。
1.2 前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。
[1，2]配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法2.1原理不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
2.2试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。
2.2.1 甲醇：色谱纯。
2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤。
2.2.3 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]加水至1000mL。
2.2.4 乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]溶于少量水中，加入30mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。
2.2.5 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。
2.2.6 正己烷。
2.2.7 pH4.4乙酸盐缓冲溶液：a）乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH3COONa·3H2O）,用水溶解后定容至1000mL。
b）乙酸溶液：称取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。
将上述两种溶液按体积比37:63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。
2.2.8 pH7.2磷酸盐缓冲溶液：a）称取23.88g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）,用水溶解后定容至1000mL。
b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH2PO4），用水溶解后定容至1000mL。
将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲液。
2.2.9 标准溶液的配制：a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。
b）山梨酸标准储备液：准确称取0.2680g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含山梨酸1.00mg。
c）糖精钠标准储备液：准确称取0.1702g糖精钠（C6H4CONNaSO2）(120℃烘干4h)，加水溶解并定容至200mL。
食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定食品安全检验手册26~27页1．试剂和溶液方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为重蒸水。
（1） 甲醇 色谱纯（2） 稀氨水（1+1）氨水加水等体积混匀。
（3） 0.02mol/L 乙酸铵溶液 称取1.54g 乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL，溶液经滤膜（0.45μm）过滤。
（4） 亚铁氰化钾溶液： 称取10g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至100 mL。
（5） 硫酸锌溶液：称取15g 硫酸锌，用水溶解，并稀释至100 mL。
（6） 苯甲酸标准储备溶液 准确称取10.0mg 苯甲酸，加少量乙醇溶解，移入10mL容量瓶中，加水定容至10mL。
此溶液苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备液。
（7） 山梨酸标准储备溶液 准确称取10.0mg 山梨酸，加少量乙醇溶解，移入10mL容量瓶中，加水定容至10mL。
此溶液山梨酸含量为1mg/mL，作为储备液。
（8） 糖精钠标准储备溶液 准确称取10.0mg 糖精钠，加少量水溶解，移入10mL容量瓶中，加水定容至10mL。
此溶液糖精钠含量为1mg/mL，作为储备液。
（9） 苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准使用液 取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液各1.0mL，放入100 mL 容量瓶中，加水至刻度。
此溶液含苯甲酸、山梨酸、糖精钠各10μg/mL，将此溶液用水稀释成2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μg/mL 标准系列。
溶液通过滤膜（0.45μm）过滤后进样。
2.测定方法（1） 样品处理①汽水饮料果汁类：（汽水需温搅拌除去二氧化碳）吸取2.0 mL 样品， 加入已装有中性氧化铝（3.5cmⅹ1.5 cm）的小柱中，过滤，弃去初滤液，然后用流动相洗脱苯甲酸、山梨酸、糖精钠，接收于25mL 带塞量筒中，洗脱至刻度，摇匀。
此溶液通过0.45μm 微孔滤膜后进样。
②配制酒类：称取10.0g 样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调节pH 约7，加水定容至适当体积，经滤膜（0.45μm）过滤。
食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定1目的为规范食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定及测量结果的准确度，特制定本作业指导书。
2适用范围本法适用于食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定3 岗位要求和职责检验员经培训后持证上岗，能熟练操作该仪器。
4 依据文件GB/T 5009.28-2016 第一法液相色谱法5 方法概述称取2g样品于50mL具塞比色管中，加25mL水混匀后，50℃水浴超声20min，冷却至室温后加蛋白沉淀剂混匀，4000r/min离心10min，取上清液过水系0.45μm滤膜，上机。
通过具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定。
以保留时间定性，外标法定量。
注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等不加蛋白沉淀剂。
6 检测程序6.1方法原理样品经水提取，高蛋白样品经沉淀剂沉淀蛋白后，采用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
6.2 仪器和设备、试剂和材料、试样制备与保存6.2.1 仪器：高效液相色谱仪带可调波长紫外检测器。
（校准周期2年，校准周期内做期间核查）色谱柱：C18 250mm×4.6mm 粒径5μm离心机：转速＞8000r/min恒温水浴锅：水温≤100℃数控超声波清洗器：温度、功率及时间可调6.2.2所需化学试剂甲醇：HPLC级乙酸铵：分析纯乙酸锌：分析纯亚铁氰化钾：分析纯苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准物质：市售有证标准溶液，避光4℃储存6.2.3玻璃器皿：250mL分液漏斗、旋转蒸发瓶及一般常用仪器清洗：首先用自来水冲洗玻璃器皿残留的溶剂。
然后用低泡洗涤剂洗刷玻璃器皿，用自来水冲洗三遍。
最后用纯水冲洗三遍、超纯水冲洗三遍。
（冲洗规则遵循少量多次）6.2.4环境条件：实验前对实验室通风6.2.5试样制备：液体：取多个预包装饮料直接混匀，试样于4℃保存。
非均匀的液态，半固态：组织均浆机均浆，-18℃保存。
固态：研磨机充分粉碎并搅拌均匀，-18℃保存。
6.2.6仪器所配备计算机需满足仪器对软件/硬件的要求6.2.7结果计算6.2.7.1按以下公式计算试样中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量X=ρ×V m×1000式中：X——试样中待测组分含量(g/kg)ρ——试样中待测组分的质量浓度 (mg/L)V——试样定容体积(mL)m——试样质量(g)1000——换算因子6.2.7.2检测过程中及时填写使用记录及维护保养记录。
一、编制目的
为规范食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定方法，编制本指导书。
二、适用范围
本指导书适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。
三、编制依据
GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》
四、实验原理
样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。
五、试剂和材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 氨水（NH3˙H2O）。
5.1.2 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6˙3H2O]。
5.1.3 乙酸锌[Zn(CH3COON)2˙2H2O]。
5.1.4 无水乙醇（CH3CH2OH）。
5.1.5 正已烷（C6H14）。
5.1.6 甲醇（CH3OH）。
5.1.7 乙酸铵（CH3 C00NH4）：色谱纯。
5.1.8 甲酸（HCOOH）：色谱纯。
5.2 试剂配制
5.2.1 氨水溶液（1+99）：取氨水1ml，加到99ml水中，混匀。
5.2.2 亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶
解，用水定容至1000ml。
5.2.3 乙酸锌溶液（183g/L）：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30ml 冰乙酸，用水定容至1000ml。
5.2.4 乙酸锌溶液（20mmol/L）：称取1.54g乙酸锌，加入适量水溶解，用水定容至1000ml，经0.22um水相微孔滤膜过滤后备用。
5.2.5 甲酸-乙酸铵溶液（2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸铵）：称取1.54g 乙酸铵，加入适量水溶解，再加入75.2ul甲酸，用水定容至1000ml，经0.22um水相微孔过滤后备用。
5.3 标准品
5.3.1 苯甲酸钠（C6H5COONa，CAS号：532-32-1），纯度≥99.0%；苯甲酸（C6H5COOH,CAS号：65-85-0），纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.2山梨酸钾（C6H7KO2，CAS号：590-00-1），纯度≥99.0%；或山梨酸（C6H8O2，CAS号：110-44-1），纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.3糖精钠（C6H4CONNaSO2，CAS号：128-44-9），纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.４标准溶液
5.4.1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）标准储备溶液（1000mg/L）:分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠0.118g、0.134g和0.117g(精确到0.0001g)，用水溶解并分别定容至100mL。
于4℃贮存，保存期为6个月。
当使用苯甲酸、山梨酸标准品时，需要用甲醇溶解并定容。
注：糖精钠含结品水，使用前需在120℃烘4h，干燥器中冷却至室温后备用。
5.4.2 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准中间溶液（200mg/L）：分别准确称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容。
于4℃贮存，保存期为3个月。
5.4.3 苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）混合标准系列工作溶液：分别准确称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、
0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、和10.0mL，用水定容至10mL，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L/20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L的混合标准系列工作溶液。
邻用现配。
5.5材料
5.5.1水相微孔滤膜：0.22μm；
5.5.2塑料离心管：50mL。
六、仪器和设备
6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。
6.2 分析天平：感量0.1mg，0.01g。
6.3 涡旋振荡器。
6.4 离心机：转速＞8000r/min。
6.5 匀浆机。
6.6 恒温水浴锅。
6.7 超声波发生器。
七、分析步骤
7.1 试样制备
取多个预包装的材料、液态奶等均匀样品直接混合：非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆：固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀：奶酪、黄油、巧可力等采用50°C-60°C加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。
取其中的200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4°C保存，其他试样于-18°C保存。
7.2试样提取
7.2.1一般性试样
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50ml，具塞离心管中，加水约25ml，涡旋混匀。
于50°C水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2ml和乙酸锌溶液2ml，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50ml容量中，并用水定容至刻度，混匀。
取适量上清液过0.22цm滤膜，待液相色谱测定。
7.2.2含胶基的果冻、糖果等试样
准确称取约2g(精确到0.001g）试样于50ml具塞离心管中，加水约25ml，涡旋混匀，于70°C水溶加热溶液解试样，于50°C水浴超声20min，之后的操作同5.2.1
7.2.3油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样
准确称取约2g(精确到0.001g）试样于50ml具塞离心管中，加水约25ml，涡旋混匀，于70°C水浴加热溶解试样，于50°C水浴超声20min，之后的操作同5.2.1
7.3仪器参考条件
7.3.1 色谱柱：C18柱，柱长250mm：内径4.6mm，粒径5цm，或等效色谱柱。
7.3.2流动相：甲醇+乙酸铵溶液=5+95。
7.3.3流速：1ML/min。
7.3.4检测波长：230nm。
7.3.5进样量：10цL。
7.4标准曲线的制作
将混合标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以横面积为纵坐标，绘制标准曲线。
7.5试样溶液的测定
将试样的溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中苯甲酸，山梨酸和糖精钠（以糖精计）的质量浓度。
八、分析结果表述
试样中苯甲酸、山梨酸和糖精钠（以糖精计）的含量按式（1）计算
X----试样中待检测组分含量，单位为克每千克（g/kg ）；
P----由标准曲线得出的试验液中待测物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ）；
V----试样定容体积，单位为毫升（ml ）； M----试样质量，单位为克（g ）；
1000----由mg/kg 转换为g/kg 的换算因子。
结果保留3为有效数字。
九、精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。
十、其他
按取样量2g ，定容50ml 时，苯甲酸，山梨酸和糖精钠（以糖精计）的检出限均为0.005g/kg ，定量限均为0.01g/kg 。
()1 (1000)
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