基因芯片差异表达和聚类分析(20171030)
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基因表达谱芯片的数据分析基因芯片数据分析就是对从基因芯片高密度杂交点阵图中提取的杂交点荧光强度信号进行的定量分析,通过有效数据的筛选和相关基因表达谱的聚类,最终整合杂交点的生物学信息,发现基因的表达谱与功能可能存在的联系。
然而每次实验都产生海量数据,如何解读芯片上成千上万个基因点的杂交信息,将无机的信息数据与有机的生命活动联系起来,阐释生命特征和规律以及基因的功能,是生物信息学研究的重要课题[1]。
基因芯片的数据分析方法从机器学习的角度可分为监督分析和非监督分析,假如分类还没有形成,非监督分析和聚类方法是恰当的分析方法;假如分类已经存在,则监督分析和判别方法就比非监督分析和聚类方法更有效率。
根据研究目的的不同[2,3],我们对基因芯片数据分析方法分类如下。
(1)差异基因表达分析:基因芯片可用于监测基因在不同组织样品中的表达差异,例如在正常细胞和肿瘤细胞中;(2)聚类分析:分析基因或样本之间的相互关系,使用的统计方法主要是聚类分析;(3)判别分析:以某些在不同样品中表达差异显著的基因作为模版,通过判别分析就可建立有效的疾病诊断方法。
1 差异基因表达分析(difference expression, DE)对于使用参照实验设计进行的重复实验,可以对2样本的基因表达数据进行差异基因表达分析,具体方法包括倍数分析、t检验、方差分析等。
1.1倍数变化(fold change, FC)倍数分析是最早应用于基因芯片数据分析的方法[4],该方法是通过对基因芯片的ratio值从大到小排序,ratio 是cy3/cy5的比值,又称R/G值。
一般0.5-2.0范围内的基因不存在显著表达差异,该范围之外则认为基因的表达出现显著改变。
由于实验条件的不同,此阈值范围会根据可信区间应有所调整[5,6]。
处理后得到的信息再根据不同要求以各种形式输出,如柱形图、饼形图、点图等。
该方法的优点是需要的芯片少,节约研究成本;缺点是结论过于简单,很难发现更高层次功能的线索;除了有非常显著的倍数变化的基因外,其它变化小的基因的可靠性就值得怀疑了;这种方法对于预实验或实验初筛是可行的[7]。
基因表达差异的分析方法研究基因表达差异是指在不同生物或不同条件下,对同一基因进行的表达实验中,所测得的表达量之间的差异。
对基因表达差异的研究可以帮助我们更好地理解基因功能和调控机制,并为疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
接下来,将介绍一些基因表达差异分析的方法。
1. 微阵列技术微阵列技术是最早被用于基因表达差异分析的方法之一。
该技术利用DNA芯片上固定的互补DNA序列与待测RNA样品进行杂交,测定样品中各个基因的表达水平。
具体操作步骤包括:样品采集、RNA提取、标记、杂交与扫描等多个步骤。
虽然微阵列技术具有高通量、高灵敏度和高精度等优点,但也存在着成本高、样品处理复杂和标记的局限性等问题。
2. RNA测序技术随着二代测序技术的发展,RNA测序技术已成为一种常用的基因表达差异分析方法。
RNA测序技术利用高通量测序平台对RNA样品进行测序,可以对基因的转录和剪切等过程进行全面的检测和定量。
与微阵列技术相比,RNA测序技术不需要依赖于基因组序列信息,同时还可以检测未知序列和新基因的表达情况。
但RNA测序技术也存在着不同的测序深度和质量、样品处理和分析方法等影响分析结果的因素。
3. 质谱技术质谱技术是一种基于蛋白质组学的方法,也可以用于基因表达差异的分析。
该技术主要包括两个步骤:蛋白质消化和质谱分析。
在蛋白质消化步骤中,蛋白样品被加入胰酶等酶类,将多肽生成后进行分离。
在质谱分析中,分离后的多肽样品被注入质谱仪,得到其质量和放电荷比例的信息。
由此可以推断出蛋白的氨基酸组成和序列等信息。
质谱技术的优点包括定量、选择性和灵敏度高,同时可以进行定量分析和鉴别分析。
4. 基因编辑技术随着基因编辑技术的发展,我们还可以通过CRISPR-Cas等技术对基因表达差异进行分析。
在这种方法中,我们可以将CRISPR-Cas系统引导的RNA处理后注入细胞内,选择性地打靶并对目标基因进行编辑,从而直接体现基因在表达水平上的变化。
基因芯片数据挖掘分析表达差异基因基因芯片(genechip)(又称DNA芯片、生物芯片)的原型是80年代中期提出的。
基因芯片的测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列。
据此可重组出靶核酸的序列。
目前已有许多数据库,包括NCBI的GEO数据库(/geo/),ArrayExpress数据库(/arrayexpress/),和TCGA数据库(/)等等,记录和储存着大量芯片相关的数据,其中GEO数据库是目前最大最全的数据库,可供科研人员查询和下载相关数据。
下面和大家分享一下基因芯片数据的预处理方法。
1)分析前需要对数据进行背景信号处理:背景处理即过滤芯片杂交信号中属于非特异性的背景噪音部分。
一般以图像处理软件对芯片划格后,每个杂交点周围区域各像素吸光度的平均值作为背景,但此法存在芯片不同区域背景扣减不均匀的缺点。
也可利用芯片最低信号强度的点(代表非特异性的样本与探针结合值)或综合整个芯片非杂交点背景所得的平均吸光值做为背景。
其中,各字母的意义如下:N:条件数;G:基因数目(一般情况下,G>>N);行向量mi=(mi1,mi2,…,miN)表示基因i在N个条件下的表达水平(这里指绝对表达水平,亦即荧光强度值);列向量mj=(m1j,m2j,…,mGj)表示在第j个条件下各基因的表达水平(即一张芯片的数据);元素mij表示第基因i在第j个条件下(绝对)基因表达数据。
m可以是R(红色,Cy5,代表样品组)。
也可以是G(绿色,Cy3,代表对照组)。
2)芯片数据清理:经过背景校正后的芯片数据中可能会产生负值,还有一些单个异常大(或小)的峰(谷)信号(随机噪声)。
基因芯片数据的统计分析的开题报告一、选题背景基因芯片技术已成为分子生物学和基因组学领域的重要工具。
通过基因芯片技术能够同时测量上万个基因的表达水平,从而探究基因在不同组织和不同状态下的表达模式和调控机制。
然而,基因芯片数据机上的数据量大,且存在很多干扰因素,对这些数据进行统计分析是获得科学研究结果的关键步骤。
二、选题目的本文旨在探讨基因芯片数据的统计分析方法,包括与基因表达数据相关的数据质量控制、差异表达分析、聚类分析、功能富集分析等方面。
通过研究基因芯片数据的统计分析方法,可以更好地理解基因芯片数据、提高数据分析的质量、准确性和可靠性。
三、研究内容1. 基因表达数据的质量控制基因芯片数据包括探针强度和表达值两部分,通过探针强度可以计算得到表达值。
因此,探针强度的质量控制是基因表达数据的重要组成部分。
本文将介绍常用的探针强度和表达值的质量控制方法,例如MAS5和RMA。
2. 基因差异表达分析差异表达分析主要是比较一组样本与对照组样本基因表达量之间的差异,以筛选出差异显著的基因,从而发现关键的基因调控机制。
本文将介绍几种差异表达分析方法,如T测试、显著性分析和ANOVA。
3. 基因聚类分析基因芯片数据在存在着很多基因和样本时,难以从直观上准确把握数据。
基因聚类分析可以将具有相似表达模式的基因或样本归为一类,以便更好地理解基因芯片数据。
本文将介绍常见的聚类分析方法,如层次聚类和k-均值聚类。
4. 基因功能富集分析功能富集分析是一种基于基因本体论的分析方法,利用生物医学数据库对基因进行功能分类,以便更好地理解基因在生命过程中的调控机制。
本文将介绍基因功能分类数据库和功能富集分析软件的使用方法。
四、研究方法本研究将通过分析公开的基因芯片数据集来探讨基因芯片数据的统计分析方法。
数据集将从国家生物信息中心等数据库中选择合适的数据集。
本研究将使用R语言作为数据分析的工具,并且使用常用的R包进行统计分析。
五、研究意义本研究将使我们更好地理解基因芯片数据的统计分析方法,提高数据分析的质量和可靠性。
差异表达基因识别之芯片分析展开全文小伙伴们,今天给大家介绍的是生物信息学分析中最基础的差异表达基因的筛选。
筛选差异表达基因作为分析中最基础也是非常重要的一个环节,自然而然有多种筛选方法啦。
1 1、倍数法用倍数分析基因表达水平差异。
S1和S2是基因在两类样本中的表达值。
FC>1,表示基因上调FC<>对于倍数法确定阈值比较困难,分析中通常以2倍差异为阈值。
倍数法通常用于初步筛选差异表达基因。
1 2、t检验法t检验法可以判断基因在两种不同条件下的表达差异是否具有显著性。
零假设为基因在两种不同条件下的平均表达水平相等,与之对应的备择假设是不相等。
例如a是某基因在所有正常样本中的表达值,b是某基因在所有癌症样本中的表达值,在R中使用t.test(a,b)可以得到某基因在两类样本中是否有差异的P值,函数p.adjust()选择FDR或Benjamini & Hochberg等多种方法中的一个矫正P值,最后保留矫正后P值显著的基因即为差异表达基因。
1 3、方差分析方差分析可用于基因在两种或多种条件间的表达量的比较,它将基因在样本之间的总变异分解为组间变异和组内变异两部分。
组间变异体现了不同条件带来的基因表达的差异,组内变异体现了随机误差。
通过方差分析的假设检验判断组间变异是否存在,存在则表明基因在不同条件下的表达有差异。
R语言中使用函数aov()计算方差分析,summary()提取方差分析的信息。
1 4、SAM法进行统计学假设检验时,最后得出的推断结论不管是拒绝H0或是不拒绝H0,均可能发生错误,即I型错误或II型错误。
I型错误是无差异表达的基因判断为差异表达。
II型错误是差异表达的基因判断为无差异表达。
运用t检验和方差分析进行差异基因筛选时,存在多重假设检验的问题,或导致假阳性率(型错误)增大。
SAM方法纠正多重假设检验中的假阳性率。
计算相对差异统计量d:计算所有基因的d值,这些d值的分布应该独立于基因的表达水平。
基因芯片和基因表达谱分析在人类基因测序技术不断发展的背景下,基因芯片和基因表达谱成为了研究生物学和医学领域的重要工具。
本文将重点探讨基因芯片和基因表达谱分析的原理、应用以及未来发展方向。
一、基因芯片基因芯片(Gene chip)又称为微阵列芯片(microarray)是一种将数万个DNA序列可控地捕捉在一个硅片上的生物技术产品。
其原理基于同位素标签法和荧光标记法,用来研究生物大分子(包括DNA、RNA和蛋白质)在细胞周期、转录和翻译等生物活动过程中的表达差异和变化规律。
基因芯片的操作过程分为如下几步:1. DNA序列打印和固定。
通过免疫印刷技术,将已知的DNA序列按照一定的规则打印到芯片上,并使用化学方法将其固定在芯片上,作为反应体系中的探针。
2. 样品准备和反应。
将待测样品中的RNA提取、反转录成cDNA,再将其标记为荧光分子,加入到含有探针的芯片反应体系中。
其中,标记为红色和绿色的荧光分子分别代表着样品RNA在两种不同条件下的表达水平。
3. 芯片扫描和数据统计。
将芯片送入扫描仪中扫描,获得荧光信号强度。
通过芯片上探针的位置、荧光信号的强度以及探针序列的注释信息等,对数据进行分析和解读,得到各种基因的表达信息。
基因芯片在各个领域有着广泛的应用。
在医学领域,它可以用于疾病诊断、治疗效果预测、药物靶点筛选等方面的研究。
在生物学研究中,它可以分析基因调控、遗传变异和发育过程等生物学领域的课题。
二、基因表达谱分析基因表达谱分析是以生物体内mRNA的转录活性水平为信号,分析在不同条件下各种基因的表达水平差异。
常见的基因表达谱分析方法有RT-qPCR、Northern blot、Western blot、RNA-seq等。
其中,RT-qPCR方法是一种基于荧光信号检测的技术,可以非常精确地检测出RNA的拷贝数。
其操作过程分为三步:反转录、定量PCR和数据分析。
反转录过程中,RNA被逆转录酶逆转录成DNA。