小麦面筋蛋白质的特性及其利用 面筋蛋白质的特性小麦中的蛋白主要由清蛋白, 球蛋白, 醇溶蛋白, 谷蛋白四种蛋白组成. 小麦蛋白成份中, 清蛋白占3～5%,球蛋白占6～10%,醇溶蛋白占40～50%,谷蛋白占30～40%.面筋蛋白主要是由不溶于水的麦醇溶蛋白和麦谷蛋白组成. 干面筋蛋白质总含量为85%左右。 当面粉加水揉成面团后, 由于面筋蛋白质不溶于水, 其空间结构表层和内层都存在一定的极性基团, 这种极性基团很容易把水分子先吸附在面筋蛋白质单体表层. 经过一段时间, 水分子便逐渐扩散渗透到分子内部, 造成面筋蛋白质的体积膨胀. 充分吸水膨胀后的面筋蛋白分子彼此靠极性基团与水分子纵横交错地联接起来形成面筋网络. 这便是面筋形成的基本过程. 面筋蛋白质的特性与小麦品质有关, 一般正常的小麦, 面筋蛋白质的出率高, 品质好. 玻璃质硬麦不仅蛋白质含量高, 而且品质也好. 发芽小麦面筋品质差, 发芽4天小麦洗不出面筋. 刚收割的小麦生产出来的面粉面筋品质稍差, 经过一定时期的贮存, 面筋品质得到改善, 制出的面包或馒头体积大, 弹性好, 不粘牙. 小麦在制粉过程中, 皮磨研出的面粉面筋含量高, 而心磨研出的面粉面筋含量较低, 但面筋品质相比之下要好些. 这是因为接近麦皮的胚乳外层蛋白质含量高, 而胚乳中心面筋蛋白质含量低. 面筋蛋白质中蛋氨酸含量较高, 赖氨酸含量较低. 大豆蛋白中蛋氨酸和赖氨酸含量正好与它相反. 大豆蛋白质中蛋氨酸等于面筋蛋白的63.5%,赖氨酸含量是面筋蛋白的3.78倍. 因此可以在面筋蛋白中添加大豆蛋白配制蛋白食品, 以利用植物蛋白质中氨基酸的互补特性, 充分发挥其营养互补作用, 提高营养价值. 小麦面筋蛋白质的研究进展 摘要:小麦面筋蛋白质是影响小麦品质和面制品加工性能的重要因素, 本文详细论述了麦谷蛋白的和麦醇溶蛋白的研究思路、研究方法以及研究现状并指出了今后的研究方向。
开题报告 药学 菲律宾蛤仔酶解多肽的分离及体外抗氧化作用研究 一、说明选题的依据和意义 菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum），隶属于软体动物门（Mollusca）、双壳纲（Bivalvia）、帘蛤科（Veneridae）的海洋生物，俗称花蛤，是我国四大养殖贝类之一。花蛤肉组织蛋白含量高，脂肪含量低，并含有丰富的维生素和微量元素，具有良好的营养保健功能。中医认为，蛤肉有滋阴明目、软坚化痰之功效。近代研究表明，菲律宾蛤仔提取物具有提高免疫力、抑制细胞微核形成、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗菌等作用。传统医学与现代研究均证实了菲律宾蛤仔的医疗保健作用，但是至今还没有将其开发成产品投入市场。 海洋是全球生命支持系统的一个重要组成部分，也是一种有助于实现社会、经济可持续发展的宝贵财富。向海洋进军, 开发利用海洋资源, 成为扩大人类生存空间、增加资源储备的重要出路。海洋生物技术作为一个全新的学科，已经成为21世纪海洋研究开发的重要领域。当前世界各国对开发海洋药物和功能特殊的海洋生活活性物质都给予了高度关注。浙江省海洋生物资源丰富，发展海洋经济具有得天独厚的条件，本项目研究为促进浙江省的十一五规划建设、加快实现海洋经济大省的步伐、成为“海上浙江”，打破资源限制具有重要意义；为促进功能性产品开发和海洋药物产业化的发展也具有重要的意义。此外，菲律宾蛤仔是我国重要的养殖贝类，将其进行药物保健品的研究开发，不但不会破坏生态平衡，还将会为它的高值化利用寻找新的出路。 超氧化物阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、过氧化自由基（ROO）和羟自由基（-OH）等自由基是生物体在新陈代谢过程中产生的中间产物，具有很强的氧化作用。正常生理情况下，机体内的抗氧化酶及非酶类因子可以将自由基有效地清除，从而维持自由基产生与消除的平衡状态，但自由基多数不稳定，在病理情况下，可以迅速引起脂质的过氧化。自由基通过造成细胞膜、DNA和蛋白活性的损伤，并与动脉硬化、脑卒中、阿尔茨海默病、肥胖、白内障以及肝脏疾病等多种人类疾病相关。人体细胞膜上存在多种脂质，尤其脑细胞膜含有许多易被氧化的多不饱和脂肪酸，脂质的过氧化通过破坏细胞膜而造成细胞损伤，导致人体疾病的发生。因此，对体内自由基的清除是防御机体疾病发生的一个重要途径。由于合成的抗氧化剂多数存在安全隐患，因此，目前关于天然抗氧化剂的开发和应用成为了研究热点。已有研究表明，来源于多种蛋白的活性肽都具有抗氧化活性，这些多肽
响应面法优化枯草芽孢杆菌产蛋白酶的 发酵条件 张 智，朱宏亮，钮宏禹，罗欢华 （东北林业大学林学院，黑龙江 哈尔滨 １５００４０） 摘 要：在单因素试验的基础上，应用响应面分析法对影响枯草芽孢杆菌产蛋白酶的因素进行分析，得到了最佳发酵条件为温度４０℃、ｐＨ８．０４、接种量８．３％、发酵时间５６ｈ，此条件下的蛋白酶酶活为２４７．８ Ｕ／ｍｌ，比单因素试验的最高酶活２２８．３Ｕ／ｍｌ提高了８．５４％。关键词：枯草芽孢杆菌；蛋白酶；响应面 Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ，ＺＨＵ Ｈｏｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＮＩＵ Ｈｏｎｇ－ｙｕ，ＬＵＯ Ｈｕａｎ－ｈｕａ（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５００４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ， ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：４０ ℃， ｐＨ ８．０４ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｍｏｕｎｔ ８．３％， Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｕｐ ｔｏ ２４７．８ Ｕ／ｍｌ ａｆｔｅｒｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ５６ ｈｏｕｒｓ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ８．５４％ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｏｎｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ， ｗｈｉｃｈ ｉｓｏｎｌｙ ２２８．３ Ｕ／ｍｌ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｐｒｏｔｅａｓｅ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ 中图分类号：Ｑ８１５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）１２－０４００－０５ 收稿日期：２００７－１０－１８ 作者简介：张智（１９６４－）女，研究员，硕士，研究方向为食品发酵与食品微生物。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｌｗｚ０７＠１６３．ｃｏｍ 枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）是一种安全的蛋白酶 生产菌［１］，它可产生大量的胞外蛋白酶，在工业生产中应用广泛。主要应用有以下五个方面：（１）在食品工业中应用：如奶酪生产、焙烤食品、大豆、玉米的深加工［２－３］ 、水解产物的脱苦以及阿斯巴甜的合成等。（２）在制革行业中应用：如脱毛、脱皮等。（３）洗涤剂行业［４－５］，衣服的主要污染是汗液、血迹、食迹等。在汗液中除脂肪外，干物质的１／３是蛋白质。织物上的蛋白质，特别是陈化以后很难洗除，加入蛋白酶可大大的提高洗涤效果，延长织物的寿命，目前全世界洗涤剂用酶的消费量已达到１００００多吨。现已将蛋白酶加入牙膏、牙粉、漱口水中有助于去除牙垢。（４）医药行业，可作为消化、消炎、化痰止咳等药物以及治疗跌打伤、水肿血肿、消除坏死组织等。（５）除了应用于工业及医药行业外，还可以应用于基础研究中，蛋白酶的选择性肽键裂解可用于阐明结构功能关系、肽链合成以及蛋白质测序［６］等。现在蛋白酶的生产日趋火热。 响应面分析法［８］（ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ＲＳＭ）是一种优化工艺条件的有效方法，可用于确定各因素及其交互作用在工艺过程中对指标（响应值）的影响，精确地表述因素和响应值之间的关系，已被广泛地用于同时存在多因素影响的实验优化上。为了得到最佳产酶条件，本实验采用响应面分析法对影响菌种产酶的几个条件做了优化。１材料与方法１．１ 菌种 枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）本实验室保存，是经过选育筛选出来的产蛋白酶性能稳定的菌株。１．２ 培养基 斜面培养基：葡萄糖０．５％、酵母膏１％、蛋白胨０．５％、氯化钠０．２％、琼脂２％、自然ｐＨ值。
蛋白酶产生菌的筛选
蛋白酶产生菌的筛选 组别：第*组 班级：生工**班 组员：*** 指导老师：*** 一、实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌
二、实验内容 蛋白酶产生菌的分离 三、实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。 四、实验材料和用具 1.材料：土壤样品 2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、 45mL无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液、 3.仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、 摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌 移液管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏 斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜 纸。
五、操作步骤 （一）配制所需培养基 按照以下配方配制所需的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g，琼脂 1.5～2.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL 奶粉培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 2.0g，水 100ml，pH 7.0～7.2 脱脂奶粉 3g，配制200mL （二）分离 1.采集土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬液。 2.取1:10土壤悬液5 mL，注入已灭过菌的试管中，将此试 管放入75～80℃水浴中热处理10min以杀死非芽孢细 菌。 3.取加热处理过的土壤悬液100～200μL，涂布接种到牛肉 膏蛋白胨培养平板，后将平板倒置，于30～32℃下培养 24～48h. 4.对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透 明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否 为芽孢杆菌。 （三）筛选
第32卷第4期 渔 业 科 学 进 展 Vol.32,N o.4 2011年8月 PROGRESS IN FISH ERY SCIENCES Aug.,2011 南极磷虾酶解多肽的抑菌活性 赵 玲1,2 曹 荣2 刘 淇2＊ 魏玉西1＊ 薛 勇2 (1青岛大学生物系,266071) (2中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛266071) 摘 要 选用复合酶酶解南极磷虾,对酶解多肽进行多肽含量及相对分子质量分布测定。采用滤纸片法筛选南极磷虾酶解多肽及各分级级分对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、四联微球菌、大肠杆菌、啤酒酵母和副溶血弧菌6种菌的抑菌活性。结果表明,该法所得的南极磷虾酶解多肽的含量达 81.44%,相对分子质量范围为254～10000;酶解多肽对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性,且分级 级分Ⅲ(1.0×103 实验一产蛋白酶菌株枯草芽孢杆菌的分离 一、教学目标及基本要求 1. 学习从各种样品中分离微生物的操作技术 2. 掌握分离微生物时定性测定产物的筛选方法 3. 学习和掌握枯草芽孢杆菌的分离技术 4. 掌握高产蛋白酶菌株的初筛方法 二、实验原理 枯草杆菌是属于芽孢杆菌属的一类细菌。枯草芽孢杆菌的分布十分广泛，主要存在于土壤或腐烂的稻草之中。由于能够形成芽孢，因此能够抵抗高温，低温等不良环境，所以是实验室及工业生产中主要污染菌之一，危害极大。但是许多枯草芽孢杆菌能分泌蛋白酶、淀粉酶、抗菌素等物质，是工业酶制剂生产的重要菌种。例如，我国使用的BF7658枯草芽孢杆菌生产а-淀粉酶，用于淀粉水解，纺织品退浆等。又如AS1398枯草杆菌是生产蛋白酶的重要菌株。 1. 枯草芽孢杆菌的芽孢耐热的特点。 由于芽孢具有较强的抗高温能力，分离纯化时可采用热处理的方法，即通过高温加热杀死其中不生芽孢的菌种，使耐热的芽孢菌得到富集。 2. 枯草芽孢杆菌的产酶特征。 利用枯草芽孢杆菌产生水解酶的特性，可以选择酪蛋白或淀粉为主要营养成分的分离培养基，因菌体分泌的酶可以将大分子的蛋白或淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。根据透明圈直径(H)和菌落直径(C)之比值(H/C)可以初步确定酶活力，其比值越大，酶活力越高，进而可筛选出高产酶活的菌株。 3. 枯草芽胞杆菌的形态特征 枯草芽孢杆菌的细胞大小0.7×2～3 μm，营养细胞为杆状，杆端钝圆、单生或者短链，着色均匀，无荚膜，周边运动，革兰氏染色阳性。有芽孢0.6×1～1.5 μm，芽孢中生或近中生，壁薄，不膨大，孢子呈椭圆或长筒形，常为两端染色。菌落变化很大，枯草芽孢杆菌在麦芽汁琼脂培养基斜面上，菌落呈细皱状，干燥或颗粒状。在土豆培养基上菌落呈细皱状，干燥，有时呈现天鹅绒状的菌苔，在液体培养基表面形成银白色的菌膜。菌落粗糙，扁平、扩展，不透明，不闪光，表面干燥，污白色或微带黄色。 4. 枯草芽胞杆菌的生理生化特性 枯草芽孢杆菌能够液化明胶，冻化牛乳，还原硝酸盐，不产生吲哚，H2S，V-P反应阳性，水解淀粉。葡萄糖发酵产酸不产气，需氧，适温25～31℃生长。 三、实验材料 1. 样品：从地表下10~15cm的土壤或者枯枝烂叶、腐烂稻草中用无菌小铲、纸袋取土样， 并记录取样的地理位置、pH、植被情况等。（学生自取） 2. 培养基 ①肉汤培养基（附录Ⅱ-1.1）：100 mL/组，其中20 mL液体培养基/250 mL△中（内装玻璃 蛋白酶产生菌的筛选 组别：第*组 班级：生工**班 组员：*** 指导老师：*** 一、实验目的 学习从自然界中分离蛋白酶产生菌 二、实验内容 蛋白酶产生菌的分离 三、实验原理 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板并进行培养，根据奶粉平板的水解圈做初筛。将初筛的蛋白酶产生菌接入产酶培养基振荡培养，测定蛋白酶的活力，最终得到产蛋白酶的芽孢杆菌。也可直接将细菌接种到奶粉培养平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。 四、实验材料和用具 1.材料：土壤样品 2.试剂：牛肉膏蛋白胨培养及平板、奶粉培养基平板、45mL 无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液、 3.仪器及用具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇 床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液 管、无菌试管、量筒、容量瓶、漏斗、试剂 瓶、漏斗、载玻片、滤纸、擦镜纸。 五、操作步骤 （一）配制所需培养基 按照以下配方配制所需的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 1.5～2.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL 奶粉培养基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g， 琼脂 2.0g，水 100ml，pH 7.0～7.2 脱脂奶粉 3g，配制200mL （二）分离 1.采集土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬液。 2.取1:10土壤悬液5 mL，注入已灭过菌的试管中，将此试 管放入75～80℃水浴中热处理10min以杀死非芽孢细菌。 3.取加热处理过的土壤悬液100～200μL，涂布接种到牛肉 膏蛋白胨培养平板，后将平板倒置，于30～32℃下培养24～48h. 4.对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明 的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。 （三）筛选 1、从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种奶粉斜面培养基，再转接奶粉培养基平板上，30～32℃下培养24～48h。 第２６卷第４期２００５年８月 河南工业大学学报（自然科学版） ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｖ０１．２６，Ｎｏ．４ Ａｕｇ．２００５ 文章编号：１６７３—２３８３（２００５）０４－０００５－０４ 酶解产物对小麦面筋蛋白酶水解过程抑制作用的研究 王金水１’２，赵谋明２，杨晓泉２ （１．河南工业大学粮油食品学院，河南郑州４５００５２； ２．华南理工大学轻工与食品学院食物蛋白研究与开发中心，广东广州５１０６４０） 摘要：研究了木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶水解小麦面筋蛋白后的酶解产物对反应的抑制作用．结果表明：抑制率与水解度相关，超过某一水解度（３种酶分别为５％、７％、４％）时，末端产物对反应的抑制率保持恒定，将抑制剂利用截留相对分子质量分别为２００００、１００００和５０００的超滤膜分离后，得到相对分子质量不同的４种组分，原始酶解产物和这４种组分对反应的抑制率分别为４９．８％、４．９％、３２．６％、３８．１％、６３．２％（木瓜蛋白酶），４８．４％、４．７％、２７．９％、２９．１％、５４．９％（复合蛋白酶）和６３．１％、８．５％、２８．３％、３７．６％、８５．７％（胰蛋白酶），ＳＥ—ＨＰＬＣ分离后发现抑制剂（肽）的相对分子质量主要集中在５０００以下． 关键词：小麦面筋；酶解；抑制剂；超滤膜；体积排阻一高效液相色谱 中图分类号：ＴＳ２１０．１文献标识码：Ｂ ０前言 小麦面筋蛋白（ｗｈｅａｔｇｌｕｔｅｎｐｒｏｔｅｉｎ，ＷＧＰ），又称谷朊粉（ｖｉｔａｌｗｈｅａｔｇｌｕｔｅｎ），是小麦淀粉生产过程中的副产品，主要用于食品和饲料工业．它是一种营养物质丰富、食用安全的植物蛋白，１９９７年ＦＤＡ将其列为ＧＲＡＳ（ＧｅｎｅｒａｌｌｙＲｅｇａｒｄｅｄａｓＳａｆｅ）．目前随着市场上对小麦淀粉需求量的不断增加，世界范围内小麦面筋的产量持续增加．由于传统市场对小麦面筋蛋白的需求已趋于饱和，并且小麦面筋蛋白在水中的分散性能差，导致其功能特性无法与大豆等其他植物蛋白竞争，所以难以在食品和非食品领域得到有效应用，造成全球小麦面筋蛋白过剩…．我国大多数小麦面筋生产企业效益差，市场销路不畅，使其进一步发展受到严重的市场制约． 各种食品对原料蛋白都有专用功能性要求，小麦面筋蛋白和其他植物蛋白一样，功能特性有 收稿日期：２００５－０４－０４ 基金项目：国家“十五”科技攻关课题（２００１ＢＡ５０１Ａ０４Ｂ）；河南省高校青年骨干教师资助项目 作者简介：王金水（１９６４－），男，河南登封人，博士研究生，教授，研究方向为食品生物技术．相当的局限性，为了拓宽其用途，核心在于对其改性．目前，对植物蛋白的改性方法包括物理改性、化学改性和酶法改性３类．酶改性技术是目前最安全、使用最广泛的技术．由于小麦面筋蛋白的溶解性很差，导致其酶解效率很低，因此探讨小麦面筋蛋白的酶解机理、提高水解效率是十分重要的．Ｐｅｒｅａ和Ｕｇｌａｄｅ心１报道：在膜反应器中进行的乳清蛋白连续酶解过程中，碱性蛋白酶活性被酶解过程中产生的一些小肽分子所抑制．然而利用同样的底物，Ｇｏｎｚａｌｅｚ—Ｔｅｌｌｏ等Ｌ３Ｊ进行的酶水解动力学研究表明，存在一种不可逆的丝蛋白酶抑制剂．Ｗｅｂｂｅｒ和ＮｉｅｌｓｅｎＬ４Ｊ从牛奶中分离出一种相对分子质量为５６０００～６５０００的天然丝蛋白酶抑制剂．在以大豆蛋白做底物的酶解实验中，发现有５种以上的胰蛋白酶抑制剂ｂＪ．利用碱性蛋白酶酶解玉米蛋白研究中也发现产物的抑制作用∞Ｊ．目前，在小麦面筋蛋白酶解方面的研究很少，而对于酶反应过程中底物对反应抑制方面的研究尚未见报道．本研究的目的是阐明和探讨在小麦面筋蛋白酶解过程中产物对酶解过程的抑制作用及抑制剂的性质，为深入了解限制小麦面筋蛋白酶解的抑制过程及机理奠定理论基础，为小麦面筋蛋白深度酶解提供技术指导． 万方数据 个人收集整理仅供参考学习 枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌产酶分析 一、概述 1. 枯草芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属地一种.单个细胞0.7～0.8 ×2～3微米，着色均匀. 无荚膜，周生鞭毛，能运动.革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9 ×1.0～1.5 微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大.菌落表面粗糙不透明， 污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭.需氧菌.可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚.b5E2RGbCAP 有地菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶地重要生产菌；有地菌株具有强烈降解核苷酸地酶系，故常作选育核苷生产菌地亲株或制取5'-核苷酸酶地菌种.在遗传学研究中应用广泛，对此菌地嘌呤核苷酸地合成途径与其调节机制研究较清楚.广泛分布在土壤及腐败地有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名.p1EanqFDPw 2.地衣芽孢杆菌 地衣芽孢杆菌，种属芽孢杆菌科细菌为革兰氏阳性杆菌；细胞大小：0．8μm×（1．5～3．5）μm；细胞形态及特点：细胞形态和排列呈杆状、单生.细胞内无聚-β-羟基丁酸盐（PHB ）颗粒，产生近中生地椭圆状芽孢，孢囊稍膨大. 在肉汁培养基上地菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h 后菌落直径为3mm.本菌有动力.可调整菌群失调达到治疗目地，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌.能产生抗活性物质，并具有独特地生物夺氧作用机制，能抑制致病菌地生长繁 殖.DXDiTa9E3d 二、产酶地种类 1.枯草芽孢杆菌代谢产酶种类枯草芽孢杆菌产生多种酶和其他代谢产物，主要由以下几个方面：枯草芽孢杆菌菌体在生长过程中产生地枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质对致病菌或内源性感染地条件致病菌有明显地抑制作用；RTCrpUDGiT 枯草芽孢杆菌能迅速消耗消化道内环境中地游离氧，形成肠道低氧环境，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH 值，间接抑制其它致病菌地生长；5PCzVD7HxA 枯草芽孢杆菌能刺激动物免疫器官地生长发育，激活淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力； jLBHrnAILg 枯草芽孢杆菌菌体能自身合成消化性酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪 蛋白酶产生菌的分离、活化选育、发酵及酶活力的测定 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其它微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈做初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其它蛋白酶产生菌。本实验主要包括：蛋白酶产生菌的分离纯化、产酶微生物菌种的选育、产酶微生物的发酵与酶活力的测定、蛋白酶产生菌的生长及生长曲线、培养基优化。 通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离蛋白酶产生菌的方法，菌种的纯化技术、高产菌的选育技术；了解蛋白酶产生菌的生长情况，学会绘制其生长曲线；学会培养基优化的方法；了解蛋白酶的性质及蛋白酶的测定原理；掌握蛋白酶的发酵及酶活力测定方法。 1 实验材料 1.1 实验样品 校园内土壤样品 1.2实验仪器与材料 牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液番红；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、血球计数板、试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、，玻棒、电子天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（ pH 5．5—9．0）、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、培养皿、胶头滴管、分光光度计（应符合GB9721的规定）等。 2实验方法与步骤 2.1 培养基的配制方法 1.称量 按培养基配方比例依次准确地称药品放入烧杯中。 2.溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 3.调pH 4.分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。 5．包扎 塞好棉花的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎，用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 第”卷第１期２００６年２月 河南工业大学学报（自然科字版） ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｔｌａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）Ｆｅｂ．２００６ 文章编号：１６７３—２３８３（２００６）０１－００１Ｉ－０４ 中性蛋白酶酶解小麦面筋蛋白的研究 王玲玲１，王金水刈一，王艳１，李振华１ （１．河南Ｉ业大学粮油食品学院，河南郑州４５００５２； ２．华南理工大学食品与生物Ｉ程学院，广东广州５１０６４０） 摘要：研究了中性蛋白酶水解小麦面筋的影响因素对水解度及肽提取率的影响，从而确定最硅水解务件及水解度与肽提取率之间的规律．最佳水解条件为小麦面筋蛋白浓度５％，酶浓度７０ｍｇ／ｇ，ｐＨ７，０，温度５０℃，时间３．５ｈ，水解度为８．２５％，肽提取率为０，１２２２％．在中性蛋白酶作用范围内，肽提取率与水解度成正比． 关键词：中性蛋白酶巾麦面筋蛋白；水解度；肽提取率 中图分类号：ＴＳ２０１．２文献标识码：Ｂ ０前言 植物蛋白资源丰富，营养和安全性很好，成为近年来人们研究的热点．经过水解作用，植物蛋白的相对分子质量由高变低，并有肽及氨基酸生成．常见的水解方法有酸碱水解和酶水解，由于酶解反应条件温和，不易引起变旋现象，副产物少，安全性比酸碱水解较高…限制性酶解主要生成相对分子质量低的蛋白和肽，具有良好的起泡性和乳化性【２剖；深度酶解可获得大量游离氨基酸，可作为美拉德反应良好的氨基酸来源Ｌ４Ｊ．根据产物的用途不同，可人为地控制水解度并对产物进行纯化． 近几年，人们对大豆蛋白和小麦面筋蛋白等植物蛋自的酶解作了大量研究．面筋蛋白具有独特的粘弹性、延伸性、热凝固性及一定的成膜性、起泡性及乳化性，可广泛用作食品及非食品工业的原料生面筋的分散性差，推广应用中受到限制，另外，其原始成膜性、起泡性及乳化性很弱，利用价值不高，有待于改性以提高这些功能特性．在水解产物中，小肽对起泡性和乳化性贡献 收稿Ｂ期：２６０５－ｎ７—１９ 基金项目：国家¨。１‘五”科技攻关项目（２Ｃ０１ＢＡＳ０１Ａ０４）；河ｆｌ南省高校青年骨干教师基金资助项目 作者筒介：王玲玲（１９８０一）．女，…东德州人，硕士研究生．研究方向为食品生物技术 ＊通讯联系人 较大乜－３１．本研究旨在利用中性蛋白酶水解小麦面筋蛋白，得到水解度不同的水解产品，分别测定其肽含量，为进一步提高起泡性和乳化性提供理论依据． １材料与方法 １．１材料 １１．１试剂 中性蛋白酶（ＮｅＩＩｔｒａ．ｓｅ１．５ＭＧ，１．５ＡＵ／ｇ）：丹麦诺维信（Ｎｏｖｏ）；小麦画筋蛋白：市售；其他试剂均为分析纯． １．１．２设备 电子天平：日本Ｓｈｉｍａｄｚｎ公司；ｐＨＳ－－２５Ｂ型酸度计：上海大中分析仪器厂；７８—１型磁力恒温搅拌器；上海南江电讯器材厂；ＤＺＫＷ型电子恒温水浴锅：北京永光明医疗仪器厂；ＬＤ５—２Ａ型离心机：北京医用离心机厂． １．２方法 １．２．１小麦理化特性测定 粗蛋白含量的测定：微量凯氏定氮法（ＧＢ／Ｔ５５１ｌ一８５），换算系数：５．７；水分测定：１０５℃恒重法（ＧＢ５４９７－－８５）；粗脂肪含量测定：索氏提取法（ＧＢ５５１２－－８５）；粗淀粉含量测定：１％盐酸旋光法．１．２．２水解度的测定——甲醛滴定法［５１ 水解度的定义：在水解过程中，打开的肽键占蛋白质肽键总数的百分比． 取５－ＩｌＩＪ混合水解液，加入６０ｍＬ沸腾后又冷 万方数据万方数据 山地农业生物学报25(6):554~557,2006 Jour nal of M oun tai n Agricu lture and B iology ⑥菌株产蛋白酶液体发酵条件优化枯草芽孢杆菌B 1 郭成栓,谢和 (贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025) 关键词:枯草芽孢杆菌;蛋白酶;液体发酵;影响因素 中图分类号:TQ92016;TQ92512文献标识码:A文章编号:1008-0457(2006)06-0554-04 Opti m iz i n g li q ui d fer m entation conditions of protease by Bacill u s subtilis B1⑥ GUO Cheng-shuan,X IE H e(Co llege of L ife Science,Gu izhou University,Guizhou Guiyang550025,China) K ey word s:B acillus subtilis;protease;liquid fer m en tati on;a ffecti ng fac tors 蛋白酶作为一种重要的酶制剂,广泛应用于医药、食品、酿造、纺织以及洗涤剂等行业[1-2],在工农业生产和人们的生活中发挥着重要的作用。本实验室从酱香酒高温大曲中分离到1株产酱香兼性嗜热枯草芽孢杆菌B1⑥,该菌株可用来生产优异的具有浓郁酱香风味的食品[3]。研究表明,该菌株产生的蛋白酶与食品酱香风味的产生具有密切的关系,利用提取的蛋白酶可发酵生产出酱香风味的食品[4],因而该菌株产生的蛋白酶在食品开发上具有重要的应用价值。液体发酵一直是微生物生产酶类的主要方法,然而微生物的代谢过程受到p H、温度、溶解氧等一系列外界条件的影响,不同的菌株其发酵条件有非常大的差别,因此选择一个合适的发酵条件对于蛋白酶的生产是非常必要的。为此,笔者测定了碳源、氮源、p H值、温度、接种量、种龄、溶氧量等条件对该菌株液体发酵产蛋白酶的影响,以确定其最佳发酵条件,以期为蛋白酶的液体发酵生产和应用奠定一定的基础。 1材料与方法 111菌株 兼性嗜热枯草芽孢杆菌B1⑥,分离自贵州珍酒高温大曲。 112培养基 11211种子培养基细菌种子培养基:葡萄糖10g、蛋白胨5g、酵母膏5g、N a C1014g、KH2HPO40103g、CaC120102g、M gSO417H2O0102g,p H值710~712,121e、011MPa灭菌30m in。 11212发酵培养基碳源、氮源、NaC10.4g、KH2H PO40.03g、C a C120.02g、M gSO417H2O0.02g、p H值710~7.2,121e、011MPa灭菌30m i n。 113蛋白酶活力测定 采用FoLin)酚法[5]。 2结果与分析 211不同氮源对产酶的影响 以2g葡萄糖作为碳源,大豆粉、胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硫酸铵各2g作为氮源,培养基装 收稿日期:2006-06-02;修回日期:2006-07-03 作者简介:郭成栓(1977-),男,河南南阳人,华南理工大学在读博士生,主要从事发酵工程的研究。 陇东大学 学士学位毕业论文（设计）蛋白酶产生菌的筛选及产酶条件优化 生命科学与技术学院 08生物技术班 作者： 指导教师： 蛋白酶产生菌的筛选及产酶条件优化 何泰杜旭谢丽娟，刘丽萍 (陇东学院生命科学与技术学院，甘肃庆阳745000) 摘要：采用陇东学院污水处理厂附近土壤、农田土壤及养殖场附近土壤作为样品，利用牛奶水解圈筛选模型从中分离筛选得到产蛋白酶能力较高的菌株whr1，初步鉴定该菌株属于芽孢杆菌。并对其产酶条件进行优化，结果显示该菌最适培养时间为24h，最佳碳源为质量浓度1% 蔗糖，最佳氮源为质量浓度1.5%酵母膏，最适初始pH值为6.0，最适发酵温度为35℃。 关键词：菌种筛选，鉴定，蛋白酶，条件优化 Protease produced the screening of the bacteria and the optimization of the enzyme production conditions （College of life science and technology, Longdong University, Qingyang 74500, Gansu, China） Abstract：The sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: The time is 24h; carbon source is sucrose 1%; nitrogen source is Y east extract 1.5 %, the pH is 6.0; fermentation temperature is 30℃. Keyword: Screening，Identified，Protease, Conditions optimization 0引言 蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称，是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶[1]，也是目前世界上产销量最大的商业酶，其市场占有率约占整个商品酶销售量的60％，微生物蛋白酶从微生物中提取，不受资源、环境和空间的限制，具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性[2,3]。目前，蛋白酶的研究仍注重于新品种的发掘，并通过分离筛选、发酵条件优化和诱变育种或构建基因工程菌等综合手段获得高产蛋白酶的优良菌株[4,10]。我国的蛋白酶研究还存在如微生物资源开发不足，蛋白酶种类较少，酶制剂品种单一等问题。 本论文从以下几方面对蛋白酶产生菌株进行较为系统的研究：从土壤中筛选出产蛋白酶能力较高菌株。对筛选出的菌株进行形态学的鉴定，将菌株初步确定到属。研究产蛋白酶菌株发酵产酶条件，对培养基成分和发酵条件进行优化，确定最佳培养基配方和发酵条件，进一步提高菌株的产酶活力。 小麦面筋蛋白（俗称谷朊粉）是生产小麦淀粉的副产物，主要是由麦醇溶蛋白和麦谷蛋白组成。小麦面筋蛋白具有优良的粘弹性、延伸性、吸水性、吸脂乳化性、薄膜成型性及清淡醇香等独特物理性质，这些独特性质使面筋蛋白有着广阔的应用前景［１］。 １食品工业 小麦面筋蛋白及其深加工产品在食品工业中得 到了相当广泛的应用，如传统产品中的面筋、烤麸、古老肉、素肠、素鸡、素鸭、油面筋等［２］以及面制品、肉制品等食品中也应用广泛。 １．１面制品 小麦面筋蛋白是一种优良的面团改良剂，广泛 用于面包、面条、方便面等面制品的生产。利用小麦面筋能增强面团筋力，留存气体并控制膨胀使面包体积一致；小麦面筋的吸水性和留存性能提高产品得率，保持面包柔软，延长货架寿命，增强天然口味等，可生产各种高质量的面包产品，如美国斯特福化学公司制作的高蛋白面包呈淡棕色，它的体积高度没有普通白圆面包高，但具有外观美、 芳香、美味和烘香的特点，其次强化水果面包中也有小麦面筋蛋白的添加［３］。一般的研究认为，面包中活性小麦蛋白添加的质量分数为２％左右比较合理，此时的面包比容量最大，柔软度最好［４］。挂面生产中，添加量为 １％￣２％活性面筋时，由于面片成型好，柔软性增加， 所以收到了提高作业性、增加筋力、改良触感的效果。加工煮面时，减少了团体成分向汤中溶出，有提高煮面得率，防止面条过软或断条，推迟面伸效果。以小麦淀粉为主要原料，配以小麦蛋白、马铃薯淀粉和其他的营养元素，经调浆、制丝、低温老化、松丝成 小麦面筋蛋白应用概述 王良东 （上海天之冠可再生能源有限公司，上海２０１２０３） 摘要：小麦面筋蛋白具有优良的粘弹性、延伸性、吸水性、吸脂乳化性、成膜性和清淡醇香等特点，在多种食品 如面制品、肉制品、口香糖、奶酪类似物及饲料工业和化学工业都具有多种用途。开发研究面筋蛋白对提高产品附加值，增加农民收入具有重要意义。 关键词：小麦面筋蛋白；应用；食品工业；化工工业中图分类号：ＴＳ２１０．９ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００７－６３９５（２００８）０４－００４５－０３ 型、干燥包装等工艺加工而成的蛋白粉丝，尤其是采用了低温制冷技术，缩短了老化时间，克服了目前国内非蛋白粉丝糊化度低、老化时间长的缺点，所生产的产品具有口味好、复水性好、粉丝糊化度高，富含多种人体必需的氨基酸和有益的矿物质元素，且低脂肪、无胆固醇的优点［５］。 １．２肉制品 在肉制品中，小麦面筋蛋白作为粘合剂、填充剂或增量剂而呈现出许多优点。使用１％￣５％的小麦面筋作为粘合剂用在重组化肉品中，有许多优点，如增加粘弹性、色泽稳定性、硬度、出汁率和保水性，降低了保油性和加工损耗。在其它的肉块和处理过的肉制品中，使用１％￣１３％小麦蛋白，其凝固特性有利于提高产率，降低加工损耗，提高粘度，增加组织强度，改善流变特性，增强成片能力和保持感官特性。作为加工过的肉制品的填充剂或增量剂，添加３％￣８０％小麦面筋蛋白可以提高得率，改善加工稳定性，提高硬度，增强产品稳定性和保持产品的组织状态［６］。 小麦面筋在灌肠制品中应用可以提高制品出品率、改善制品质构、赋予制品新风味、肉馅充填和补色作用以及改善营养结构［７］。以谷朊粉加工制作出的谷朊粉碎馅和肉泥为主料，辅以调味料和佐配料，所生产的狮子头具有肥香不腻、味道鲜美、营养丰富、携带食用方便、可规模化连续生产的特点［８］。在灌肠、火腿肠等肉制品中添加小麦面筋蛋白同时可以起到降低产品成本的作用。动物类肉斩拌成糜糊状（或小块），再按一定比例加入淀粉、香辛料、熟面筋、蛋白粉等制得的火腿肠具有含植物蛋白高、纤维多、脂肪低的特点，与添加大豆分离蛋白相比还降低了生产成本［９］，造价为肉类火腿肠的６０％［１０］。 此外，小麦面筋蛋白在仿真肉食品中也有广泛应用。植物蛋白通过物理化学作用使蛋白质分子的 收稿日期：２００７－１１－１５ 作者简介：王良东（１９７２－），男，工学硕士，主要从事粮食深加工和食 品领域的研究开发。 枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶条件的研究 摘要产碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌在前期培养基质优化的基础上, 采用了分阶段溶氧控制策略，在5L发酵罐中进行过程控制,即在0～13 h控制溶氧为40%，13～21 h控制溶氧为50%，13 h后控制溶氧为40%。探索分阶段溶氧对枯草芽孢杆菌发酵过程的影响。利用单因素法对一株枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的培养基成分进行优化，确定发酵培养基各成分最适宜配比。最后确定了该菌株的最适发酵培养基配方为(g/ 100 mL)：酵母浸粉1.75 ,麦芽糊精10 ,柠檬酸钠0.3 ,CaCl2 0.3 ,F e2+0.5;最适摇瓶发酵条件为: 菌龄12h,接种量3.5 % ,装液量50 mL/ 250 mL ,摇床转速200 r/ min ,34 ℃,发酵54 h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达507.53 U/ mL, 比在其他无机盐条件下的产量都高。此外,还进行了5 L 罐放大实验,装液量为3 L,在5 L 罐所确定的最适工艺条件下,发酵单位可达520.2 u/ mL 。 关键词：碱性蛋白酶；枯草芽孢杆菌；液体培养基 引言碱性蛋白酶是指在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,主要应用.于生产加酶洗涤[1] ,另外,在制革、丝绸、医药、食品、饲料和生物化学试剂等领域也有应用。我国在20 世纪70 年代初期就成功开发了碱性蛋白酶,并实现了工业化生产[2]。目前,我国用于生产的菌种为国内学者自行筛选诱变的菌株———枯草芽孢杆菌,其发酵单位在10 000 u/ mL 以上,与国外先进水平相差甚远[3]。本实验所采用的产碱性蛋白酶菌株为枯草芽孢杆菌,其实验发酵单位为22 000 u/ mL,与国外大型酶制剂公司所报道的生产水平30 000 u/ mL 相差较大[4]。本实验对该菌株的发酵培养基利用单因素实验确定其基本成分，选择出适合该菌株发酵的最适培养基，从而使其酶活有一定的增长,为其工业化生产奠定基础。 1 材料与方法 1.1 菌种与培养基 1.1.1 菌种 枯草芽孢杆菌(Baci11us subti1is)由农业与生物技术学院发酵工程实验室提供。1.1.2培养基 1.1. 2.1 种子培养基 胰蛋白胨5g, 酵母浸粉5g, 葡萄糖10g, K2HPO410g 1.1. 2.2 发酵培养基 酵母浸粉5g, 麦芽糊精20g, 柠檬酸钠3g, CaCl23g, F e2+0.5g产蛋白酶菌株枯草芽孢杆菌的分离
蛋白酶产生菌的筛选
酶解产物对小麦面筋蛋白酶水解过程抑制作用的研究
枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌产酶研究分析
蛋白酶产生菌的分离汇总讲解
中性蛋白酶酶解小麦面筋蛋白的研究
枯草芽孢杆菌B_1_菌株产蛋白酶液体发酵条件优化
产蛋白酶菌的筛选及产酶条件优化
小麦面筋蛋白应用概述
枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶条件的研究
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