蛋白质分子量标准(高)使用说明书

SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量【目的】1 ．掌握 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量的操作方法。

2 ．熟悉 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量的原理。

【原理】带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。

不同蛋白质分子具有不同的大小、形状，在一定的 pH 环境中带有不同的电荷量，因而在一定的电场中所受的电场引力及介质对其的阻力不同，二者的作用结果使不同蛋白质分子在介质中以不同的速率移动，经过一定的时间后得以分离，这就是电泳分离蛋白质及核酸生物大分子的基本原理。

聚丙烯酰胺凝胶电泳就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。

在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关，为了使其只与蛋白质分子的大小有关，从而利用蛋白质在介质中的迁移率来测定蛋白质的分子量，就需要消除蛋白质分子的形状和所带电荷量的不同对迁移率的影响或减小到可忽略不计的程度。

SDS 是十二烷基硫酸钠（ sAium dAecyl sulfate ）的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与 SDS 的结合比为 1.4 g SDS/ 1 g 蛋白质），使各种蛋白质 -SDS 复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别，使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，于是根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。

SDS 与蛋白质结合后引起蛋白质构象的改变。

SDS- 蛋白质复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形状的长椭园棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样（约为 18? ，即 1.8 nm ），而长轴则随蛋白质分子量成正比的变化。

说明， SDS 和蛋白质的结合所形成的 SDS- 蛋白质复合物消除了由于天然蛋白质形状不同而对电泳迁移率的影响。

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5.“SDS — 聚丙稀酰胺凝胶电 泳法测定蛋白质分子量”一实验的开 设达到了与国内同类院校相当的较高 水平。
对本科生的实验教学、本科生的 论文设计、研究生的高级生化实验等 方面都充实了内容。
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（二）特点：
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在 聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二 烷基磺酸钠）。
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蛋白质在一定浓度的含有强还原剂 的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合， 形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。
蛋白质丧失了原有的电荷状态形成 仅保持原有分子大小为特征的负离子团 块，降低或消除了各种蛋白质分子之间 天然的电荷差异，因此在进行电泳时，
电泳分类：移动界面电泳、区带电泳等。
区带电泳 是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄 层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支 持介质中迁移。
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区带电泳使用不同的支持介质，有
滤纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀 粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜， 现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和 琼脂糖凝胶。
球蛋白（去年完成的基金项目）
（三）纯化免疫球蛋白G DEAE-离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白G子量（ 连续四个单项实验）。
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（1）制胶（简单叙述）（双层胶，摸索胶浓度）
A.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干, 准备2个干 净的锥形瓶。把玻璃板在灌胶支架上固定好。
开封后溶于200µl蒸馏水，置-20℃保存，使用前室温融化，沸水浴中加热3-5分钟后上样。
。 样品1：称3mg样品1，加2 ml蒸馏水溶解

本说明仅供参考超滤离心管蛋白浓缩和换Buffer 通常会使用到超滤管，有多种不同MWCO 和处理量的型号可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。

超滤离心管具有快速超滤功能，能够达到较高的浓缩系数，易于从稀释液和复杂的样本组合中进行浓缩回收。

其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率（通常大于90%的初始溶液），并能进行多倍浓缩。

竖式设计将溶质极化之后造成的滤膜结垢降至最低，过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本的损失。

浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集，而超滤出液则收集到所提供的离心管中。

该装置可在离心机中进行。

装置未经消毒，只供一次使用（但是国内众多科研院所及科研单位的老师，都在重复使用，毕竟使用一次就扔掉太浪费。

）超滤离心管储存在15-30°C 下，保质期自生产之日起3年。

整套装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管，如右图所示：一、使用方法：1预清洗：超滤离心管的过滤薄膜含有微量甘油。

如果此材料干扰分析，可用缓冲液或超纯水预清洗。

如果干扰仍然存在，用0.1M NaOH 清洗，然后用缓冲液或超纯水再次清洗后甩干。

注意：Amicon®Ultra 超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免重新干燥。

若在预清洗后没有立即使用该装置，则应保持滤膜湿润，直到使用该装置为止。

瑞达恒辉恒辉恒辉瑞达恒辉瑞达瑞达恒辉2.向超滤离心管加入不超过处理量的样品。

3.将盖好盖子的超滤离心管放入离心转子中。

4.适当转速离心。

（关于旋转时间，请参见图1和图2以及表1和表2）5.如要回收浓缩后的样品，在超滤离心管底部插入一个移液管，然后左右摇摆着吸取样本，以确保完全回收。

超滤液可以保存在离心管中。

二、除盐或渗滤举例：除盐、更换缓冲液或渗滤是去除含有生物分子的溶液中的盐分或溶剂的重要方法。

可以在超滤离心管中，通过浓缩样本、然后向浓缩液加入任何所需溶剂复原至样本原始体积的方式，去除盐分或更换缓冲液。

蛋白质分子量标准产品简介：碧云天生产的蛋白质分子量标准(Protein Molecular Weight Marker)包含了从14.4 kD到116 kD共7种纯化的蛋白质(见右图)，适合作为SDS-PAGE的蛋白质分子量标准。

本蛋白质分子量标准已经配制在1X的SDS-PAGE上样缓冲液中，可以直接使用。

根据上样孔的大小，本蛋白质分子量标准通常每次上样5-10微升，就可以用染色观察到非常清楚的蛋白条带。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：本蛋白质分子量标准用1X SDS-PAGE上样缓冲液配制，不适用于非变性PAGE胶。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 将蛋白质分子量标准置于沸水浴或100℃加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

2. 在上样时根据加样孔的大小每孔上样5-10微升蛋白质分子量标准。

3. 通常电泳至蓝色的溴酚蓝基本上到达凝胶的底部时停止电泳。

4. SDS-PAGE胶用常规考马斯亮蓝染色，或用碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液(P0017)染色后，对于蛋白质分子量标准可以观察到如右图的清晰条带。

5. 如果采用银染方法检测蛋白条带，上样量应该适当减少。

使用本产品的文献：1.Lin X, Zhao J, Qian J, Mao Y, Pan J, Li L, Peng H, Luo Y, Yan J.Identification of immunodominant B- and T-cell combined epitopes in outer membrane lipoproteinsLipL32 and LipL21 of Leptospira interrogans.Clin Vaccine Immunol. 2010 May;17(5):778-83.2. Lin X, Sun A, Ruan P, Zhang Z, Yan J.Characterization of conserved combined T and B cell epitopes in Leptospira interrogans majorouter membrane proteins OmpL1 and LipL41.BMC Microbiol. 2011 Jan 26;11(1):21.3. Yang Y, Xia T, Zhi W, Wei L, Weng J, Zhang C, Li XPromotion of skin regeneration in diabetic rats by electrospun core-sheath fibers loaded with basicfibroblast growth factor.Biomaterials. 2011 Jun;32(18):4243-54.4. Yang Y, Xia T, Chen F, Wei W, Liu C, He S, Li X.Electrospun fibers with plasmid bFGF polyplex loadings promote skin wound healing in diabeticrats.Mol Pharm. 2012 Jan 1;9(1):48-58.5. Sun Q, Xiong J, Lu J, Xu S, Li Y, Zhong XP, Gao GK, Liu HQ.Secretory TAT-peptide-mediated protein transduction of LIF receptor α-chain distal cytoplasmicmotifs into human myeloid HL-60 cells.Braz J Med Biol Res. 2012 Jun 21..6. He S, Xia T, Wang H, Wei L, Luo X, Li X.Multiple release of polyplexes of plasmids VEGF and bFGF from electrospun fibrous scaffolds towardsregeneration of mature blood vessels.Acta Biomater. 2012 Jul;8(7):2659-69. doi: 10.1016/j.actbio.2012.03.044. Epub 2012 Apr 3.7. Wang H, Zhang Y, Xia T, Wei W, Chen F, Guo X, Li X.Synergistic Promotion of Blood Vessel Regeneration by Astragaloside IV and Ferulic Acid from ElectrospunFibrous Mats.Mol Pharm. 2013 Jun 3;10(6):2394-403. doi: 10.1021/mp400031y. Epub 2013 May 8.8.Liu Q, Liu L, Zhou J, Shin HD, Chen RR, Madzak C, Li J, Du G, Chen J.Biosynthesis of homoeriodictyol from eriodictyol by flavone 3'-O-methyltransferase from recombinant Yarrowia lioplytica: Heterologous expression, biochemical characterization, and optimal transformation.J Biotechnol. 2013 Sep 20;167(4):472-8. doi: 10.1016/j.jbiotec.2013.07.025. Epub 2013 Jul 29.9. Zhao L, Liu Q, Yan S, Chen Z, Chen J, Li X.Multimeric immobilization of alcohol oxidase on electrospun fibers for valid tests of alcoholic saliva.J Biotechnol. 2013 Oct 10;168(1):46-54. doi: 10.1016/j.jbiotec.2013.08.015. Epub 2013 Aug 19.10.Chen F, Wan H, Xia T, Guo X, Wang H, Liu Y, Li X.Promoted regeneration of mature blood vessels by electrospun fibers with loaded multiple pDNA-calcium phosphate nanoparticles.Eur J Pharm Biopharm. 2013 Nov;85(3 Pt A):699-710. doi: 10.1016/j.ejpb.2013.07.009. Epub 2013 Jul 24.11.Luo X, Jia G, Song H, Liu C, Wu G, Li X.Promoting antitumor activities of hydroxycamptothecin by encapsulation into acid-labile nanoparticles using electrospraying.Pharm Res. 2014 Jan;31(1):46-59. doi: 10.1007/s11095-013-1130-4. Epub 2013 Jul 25.12.Cai C, Zhao D, Ma C, Zhang Y, Wu X, Wei G, He D.Connexin 43 expression in Sprague-Dawley rat seminiferous epithelium after in utero exposure to flutamide.Syst Biol Reprod Med. 2014 Oct;60(5):257-62. doi: 10.3109/19396368.2014.921738. Epub 2014 May 27.13.Liu Y, Lu J, Li H, Wei J, Li X.Engineering blood vessels through micropatterned coculture of vascular endothelial and smooth muscle cells on bilayered electrospun fibrous mats with pDNA inoculations.Acta Biomater. 2014 Oct 7. pii: S1742-7061(14)00446-2. doi: 10.1016/j.actbio.2014.10.004.。