SUMO 蛋白酶说明书

SUMO Protease产品简介：碧云天生产的SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)，是一种重组表达的高度特异性识别SUMO 化修饰或SUMO 结构域，并水解SUMO 羧基端(C 端) x-Gly-Gly-x 肽段中Gly-Gly 后的肽键，从而去除SUMO 化修饰或者去除SUMO 融合表达蛋白中SUMO 结构域的蛋白酶。

本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae 的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。

SUMO 是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein)，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification, PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。

SUMO 也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，例如碧云天的D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO 质粒就是一种在N 端同时表达His 标签和SUMO 标签的原核表达质粒。

将SUMO 作为标签和目的蛋白的氨基端(N 端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。

随后使用SUMO Protease 对SUMO 融合蛋白进行酶切,去除SUMO 标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。

因此SUMO Protease 可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO 标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。

SUMO Protease 进行酶切时的最适pH 值为8.0，最佳酶切温度为30ºC 。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号pET-N-His-PreScission-SUMO产品编号 产品名称包装 D2918-1µg pET-N-His-PreScission-SUMO 1µg D2918-100µgpET-N-His-PreScission-SUMO100µg产品简介：pET-N-His-PreScission-SUMO 是一种用于表达N 端同时含有His 标签(His tag)和SUMO 标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。

His 标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化，而SUMO 标签则有利于改善目的蛋白的折叠，增加目的蛋白可溶性和产量。

表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His 标签但保留SUMO 标签，也可以通过SUMO Protease (P2310)酶切去除N 端的His 和SUMO 两个标签。

如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO 标签酶切位点后插入目的蛋白ATG 起始的序列，SUMO Protease 酶切后，可以确保表达的目的蛋白氨基端(N 端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始，不会增加或减少任何一个氨基酸，实现目的蛋白的完美正确表达。

本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac 操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。

在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N 端含有His 和SUMO 双标签的目的蛋白。

去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究程金科;左勇【摘要】SUMO, an ubiquitin-like protein, can covalently conjugate proteins and plays a role in the regulation of target protein functions and localizations. Similar to ubiquitin, SUMO modification is a dynamic process catalyzed by El, E2? and E3 and reversed by Sentrin/SUMO-specific proteases ( SENPs) . To date, 6 SENP members have been defined in human cells, each of which has different cell localization and target specificity. However, the physiologic functions of SENPs are not fully understood. By analysis of SENPs knock-out mice, we find that SENP1 regulates hypoxia-HIFla signaling or androgen receptor ( AR) signaling through positive feedback loop, and plays an important role in HIFlot or AR-involved physiologic and pathologic processes. We also find that SENP2 is essential for suppression of polycomb group protein-mediated gene silencing during heart development. These results reveal the critical roles of SENPs in the regulation of targets-involved signaling,%小泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰是一种新发现的类泛素蛋白质修饰形式.SUMO修饰由活化酶E1、接合酶E2和连接酶E3等三个酶相继作用来完成.同时它又是一个动态的、可逆的过程,其去SUMO修饰的过程则是由SUMO特异性蛋白酶(SENP)家族来介导.在蛋白质SUMO修饰的动态过程中,SENP介导的去SUMO过程是决定其靶蛋白质SUMO修饰水平的一个主要因素,同时也是SUMOylation被调节的一个主要环节.SENP家族包括SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7等成员,每个成员具有不同的细胞内定位和底物特异性.虽然对其生化特性进行了大量研究,但SENP在参与的细胞生命活动过程中的作用并未十分了解.我们通过分析SENP1和SENP2基因敲除小鼠的表型,发现了SENP1通过正反馈机制调控缺氧-HIF1α和雄激素受体所介导的信号通路,从而在HIF1α与AR所参与的生理病理过程中发挥了重要作用.同时,我们发现SENP2通过调控PeG的活性,参与心脏的发育过程.这些结果表明SENP在调控其靶蛋白所参与的信号通路中发挥了重要作用.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)009【总页数】5页(P1117-1121)【关键词】小泛素样修饰蛋白;蛋白质修饰;SUMO特异性蛋白酶【作者】程金科;左勇【作者单位】上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025;上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025【正文语种】中文【中图分类】Q55小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier protein，SUMO)是一种类泛素蛋白，它通过与底物蛋白共价连接来调节靶蛋白的定位和与其他生物大分子的相互作用等活性。

rTEV 蛋白酶使用说明书货号：P2060规格：1000U（200μL）产品简介：rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶，该酶特异性识Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly 七氨基酸序列。

rTEV 蛋白酶与肠激酶U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比，具有高活性、高特异性的双重特点，rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特异性，已成为融合蛋白表达后去除融合tag 的首选蛋白酶。

该酶经6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签)，纯度达99％，剪切反应完毕后可通过His 标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010)去除。

产品内容：试剂名称规格保存温度rTEV 蛋白酶（5U/μL）200μL -80℃250×rTEV Protease Buffer1mL -20℃说明书1份保存条件：rTEV 蛋白酶-80℃长期保存，可存储2年；首次使用后可置于-20℃保存，可储存6个月，避免反复冻融。

250×rTEV Protease Buffer 可置于-20℃保存。

酶活定义：在1×rTEV Protease Buffer 中，30℃反应1h，剪切>85%的3μg 底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

使用方法说明：1.推荐使用溶液：50mM NaH 2PO 4,150mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,10%甘油，pH 8.0buffer 中进行剪切。

2.250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA,250mM DTT,PH 8.03.rTEV 蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：1004.酶切体系：融合蛋白1000μg 250×rTEV Protease Buffer4μL rTEV 蛋白酶2μL 定容至1000μL定容缓冲液：50mM NaH 2PO 4,150mM NaCl5.酶切条件：在16℃酶切6hr。