α-淀粉酶-酶活力GB24401-2009

于660nm波长下，用10mm比色皿迅速测定其吸光度值（A）
根据吸光度表C1，查得所测酶液的酶活力
5.1.3 计算酶活力
X=c×n
其中：X—样品的酶活力，单位为u/g c—测试酶液的酶活力，单位为u/g n—样品的稀释倍数
5.3 注意事项
✓ 酶反应时间应准确计算。 ✓ 试剂加入按规定顺序进行。
6.实验报告
✓ 记时器
每组 1台
3.2 器材（每组）
✓ 15ml大试管10支 ✓ 5ml移液管10支 ✓ 1ml移液管5支 ✓ 10ml移液管10支 ✓ 比色皿1套（4个） ✓ 双蒸水1瓶（50ml） ✓ 洗瓶1个 ✓ 玻璃平皿1套 ✓ 50ml小广口瓶（棕色）2个 ✓ 50ml 容量瓶 1个 ✓ 100ml 容量瓶 1个 ✓ 500ml 试剂瓶2个 ✓ 100ml 试剂瓶2个 ✓ 250ml 三角瓶2个 ✓ 200ml烧杯2个 ✓ 500ml烧杯1个 ✓ 记号笔1支、吸耳球、称量纸、药勺、试管架、
生物技术专业系统实验（四）
——酶（蛋白质）工程实验II
二、α-淀粉酶活力的测定
--国家标准GB 8275-2009
1.目的意义 2.实验原理 3.试剂和溶液 4.仪器和器材 5.实验方法 6.实验报告 7.思考题
1.目的意义
➢ 淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6糖 苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的 主要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、 纺织工业的基本原料。
➢ 例如，生产葡萄糖需要葡萄糖淀粉酶，但 仅有葡萄糖淀粉酶作用，不能液化淀粉溶 液，葡萄糖的生成速度非常慢。此时，α淀粉酶的使用就成为必要条件。
➢ α-淀粉酶的活性测定，在理论 研究和实际应用中具有重要的 意义。
➢ 通过本实验，学习一种测定α淀粉酶酶活力的方法，巩固并 熟练分光光度计的使用方法。

实验五激活剂、抑制剂、温度及PH 对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定a-淀粉酶活力的方法。

二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。

酶催化的反应称为酶促反应。

生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。

能提高酶活力的物质，称为激活剂。

激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。

使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。

氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。

应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。

如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。

酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。

温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。

同样，反应中某一PH 范围内酶活力可达最高，在最适PH 的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。

食品级a - 淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。

但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。

a -淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的a -1,4 糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称 a -淀粉酶为液化淀粉酶。

a -淀粉酶不能水解淀粉支链的 a -1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和a -1,6 键的寡糖。

本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6 个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪a -淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。

1.2 ti-淀粉酶的应用史及现状早在1833年payen从麦芽抽提液中用洒精沉淀出白色沉淀,可以使200倍的淀粉液化，取需为“diastase”，并岀售用于棉布的退浆。

1894年tadamin用隸皮培养米曲鑫制造淀粉酶作为消化剂，建立了高蜂制药厂一现miles公司的前身。

1913年法国Bioden与Effront发明用枯草杆菌生产a 一淀粉酶，以其耐热性取代了麦芽淀粉酶用于棉布的退浆，创建了rapedase I：J （现并入了gist brocades公司）。

从此酶制剂工业揭开序幕。

第二次世界大战后，随着抗生素工业的发展,微生物的培养技术、发酵工艺和发酵罐的革新，酶制剂工业有了飞跃的发展，进人了工业化大生产的阶段。

1949年日本采用深层通风培养法生产。

一淀粉酶。

1959年，日本采用淀粉酶和糖化酶进行淀粉的液化和糖化，确定了酶法制造術萄糖浆的工艺，革除了沿用100年酸水解工业，使淀粉出糖率由80%提高到100% » 1973耐热性a-淀粉酶投人生产。

从此淀粉酶的生产又进入了一个新阶段［2）。

据统计』一淀粉酶和糖化酶是酶制剂的主要品种。

如美国1975年酶制剂总产值为5151万美元，淀粉酶类为1550万美元,1980年总产值是668［万美元，艮中淀粉酶类约占20%。

在日本,1976年酶制剂总销售额为2999百万日元,a —淀粉酶为1530百万日元占50%。

将淀粉用a-淀粉酶液化、糖化酶糖化进而提取匍萄糖的工艺奠世了果糖浆和淀粉糖浆生产的基础，因而改变了糖品种的结构，开辟了淀粉加工的新途径。

：1980年，美国果葡萄浆用量已达40亿磅，折合成湿淀粉为280万吨,若加上未统计的数字，估计实际可达500万吨。

仅生产可口可乐毎年则需用糖浆100万吨［3］。

目前，除开展大量常规诱变育种工作外，国外已初步搞淸了0 一淀粉酶的调控基因，探讨了有关转导转化和基因克隆等育种技术。

将枯草芽抱杆菌重组体的基因引入生产菌株阴，使a 一淀粉酶产量提高7 -W倍，并已应用于食品和制酒工业，给选冇高产a 一淀粉酶菌株开创了新的途径［4］。

关键词：蜂蜜；冷冻干燥；ɑ-淀粉酶活力；测定方法改进
蜂蜜是我们生活中常见的天然营养佳品，含有与人体血 清浓度相近的多种无机盐、维生素及铁、钙、铜、锰等等多 种有益人体健康的微量元素，具有滋养、润燥、解毒、美白 养颜、润肠通便等功效，对少年儿童咳嗽有一定治疗效果[1]， 还有抗菌、改善新陈代谢、增强体质、提高人体免疫力、抑 制肿瘤等药理作用[1]。一些被利益驱使的商人通过在蜂蜜中 加入葡萄糖、果糖、高果玉米糖浆等价格低廉的甜味物质来 提高蜂蜜的产量[2]。目前也有许多种鉴别蜂蜜的方法，但是 都有一定缺陷[3]。真蜂蜜具有花蜜和蜜蜂的某些特殊成分[4]， 掺假蜂蜜的这些特殊成分含量则降低。本文选择其中的ɑ－ 淀粉酶作为研究对象，测定蜂蜜中ɑ－淀粉酶的活性，就能 准确辨别蜂蜜的真假。
表 1 淀粉溶液的标定结果
加水量（mL） 5 10 15 20 21 22 23
吸光度
2.386 1.973 1.457 0.834 0.797 0.783 0.768
由表 1 可知，加水 23mL 时吸光度在 0.760 士 0.02 之间， 所以在样品测定时稀释系数为 23mL。
淀粉溶液冷冻干燥后肉眼观察的形貌如图 1。由图 1 可 以看出，淀粉冷冻干燥后体积膨胀变大，相互连在一起，不 再呈现松散的颗粒状。
表 5 蜂蜜样品中淀粉酶测定随冷冻干燥淀粉存放时间的结果
蜂蜜样品中淀粉酶含量测定值
蜂蜜样品
（mL/(g·h)）
平均值
标准 偏差
RSD (%)
一周 二周 三周 四周
1
26.14 26.34 25.88 26.57 26.23 0.29 1.1
2
22.55 22.03 23.11 22.65 22.59 0.44 2.0