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GC-ECD法测定中药配方颗粒中20种有机氯农药残留量白桂昌; 吕轶峰; 罗轶; 何颂华【期刊名称】《《广西科学》》【年(卷),期】2019(026)005【总页数】7页(P532-538)【关键词】中药配方颗粒; 有机氯农药; GC-ECD; Florisil固相萃取; 硫酸【作者】白桂昌; 吕轶峰; 罗轶; 何颂华【作者单位】广西壮族自治区食品药品检验所广西南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R9170 引言中药配方颗粒是利用现代生产技术，以中药饮片为原料，按照一定的生产工艺与适宜的辅料或药材细粉制成的供临床调配处方用的颗粒状制剂[1]。
中药配方颗粒在传统中药饮片疗效确切、副作用小的优势基础上，增加了免煎煮、操作方便、安全卫生等优势，是一项祖国传统医学与现代制药工艺紧密结合的药品产业，是对传统中药饮片的重大改革，已经发展到美国、澳大利亚、韩国、日本等多个国家，具有相当的影响力[2-3]。
有机氯类农药作为高效广谱的杀虫剂，曾被世界各国广泛使用，在我国虽已禁用20余年，但由于其挥发性低、化学性质稳定、不易分解，至今土壤[4]、水体[5]、中成药[6]、中药材[7-11]中仍有检出。
目前有关农药残留报道多见于中成药[6]、中药材[7-11]，鲜见对中药配方颗粒中有机氯类农药测定的报道。
《中国药典》2015版收录了有机氯类的气相色谱测定方法[12]，该方法第一法采用硫酸磺化净化，但只局限于六六六、滴滴涕、五氯硝基苯等较少种类的有机氯农药；第二法采用凝胶渗透色谱及Florisil固相萃取小柱净化，但需要比较复杂的实验操作并消耗大量的溶剂。
《中国药典》2015版同时收录农药残留量的GC-MS/MS及LC-MS/MS测定方法，但该方法定量需要使用难以获得的空白基质[12]，因此有关有机氯类的测定方式仍待改进。
本文根据各类农药的化学结构及物理性质，采用Florisil固相萃取小柱及硫酸磺化净化，内标法定量，气相色谱法测定中药配方颗粒中20种有机氯农药残留量，并将其应用于实际样品的检测中。
残留溶剂测定法药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。
药品中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一，第二，第三类溶剂的残留限度应符合附表1中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范，药品生产质量管理规范（GMP）或其他基本的质量要求。
本法照气相色谱法（通则0521）测定。
色谱柱1，毛细管柱除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互换使用。
（1）非极性色谱柱固定液为100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
（2）极性色谱柱固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。
（3）中极性色谱柱固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷、（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷、（35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷、（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷、（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱等。
（4）弱极性色谱柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5%）二苯基-（95%）二甲基聚硅氧烷共聚物的毛细管柱等。
2,填充柱以直径为0.18~0.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。
系统适用性试验（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于5000,；填充柱的理论板数一般不低于1000。
（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
（3）以内标法测定时，对作品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD应不大于10%。
供试品溶液的制备1，顶空进样除另有规定外，精密称取供试品0.1~1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N,N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。
中文名称英文名称CAS乙酰甲胺磷Acephate30560-19-1啶虫脒Acetamiprid135410-20-7甲草胺Alachlor15972-60-8涕灭威Aldicarb116-06-3涕灭威砜Aldicarb sulfone1646-88-4涕灭威亚砜Aldicarb-sulfoxide1646-87-3莠灭净Ametryn834-12-8莠去津Atrazine1912-24-9益棉磷; 乙基谷硫磷; 乙基保棉磷Azinphos-ethyl2642-71-9保棉磷Azinphos-methyl86-50-0嘧菌酯Azoxystrobin131860-33-8苯霜灵Benalaxyl71626-11-4联苯肼酯Bifenazate149877-41-8生物丙烯菊酯Bioallethrin260359-57-7联苯三唑醇Bitertanol55179-31-2啶酰菌胺Boscalid188425-85-6噻嗪酮Buprofezin 69327-76-0丁草胺Butachlor23184-66-9硫线磷Cadusafos95465-99-9甲萘威Carbaryl63-25-2多菌灵Carbendazim10605-21-7克百威Carbofuran1563-66-2 3-羟基-呋喃丹; 3-羟基克百威Carbofuran-3-hydroxy16655-82-6灭螨猛Chinomethionate2439-01-2氯虫苯甲酰胺Chlorantraniliprole500008-45-7毒虫畏Chlorfenvinphos470-90-6烯草酮Clethodim99129-21-2蝇毒磷Coumaphos56-72-4氰氟草酯Cyhalofop-butyl122008-85-9嘧菌环胺Cyprodinil121552-61-2内吸磷Demeton8065-48-3二嗪磷Diazinon333-41-5除线磷Dichlofenthion97-17-6百治磷Dicrotophos141-66-2苯醚甲环唑Difenonazole119446-68-3除虫脲Diflubenzuron35367-38-5二甲酚噻草胺Dimethenamid87674-68-8乐果Dimethoate60-51-5烯唑醇Diniconazole83657-24-3乙拌磷Disulfoton298-04-4乙拌磷砜Disulfoton-sulfone2497-06-5乙拌磷亚砜Disulfoton-sulfoxide2497-07-6敌瘟磷Edifenphos17109-49-8苯硫磷EPN2104-64-5乙硫甲威Ethiofencarb29973-13-5乙硫磷Ethion563-12-2灭线磷Ethoprophos13194-48-4醚菊酯Etofenprox80844-07-1乙嘧硫磷Etrimfos38260-54-7苯线磷Fenamiphos22224-92-6苯线磷砜Fenamiphos sulfone31972-44-8苯线磷亚砜Fenamiphos sulfoxide31972-43-7氯苯嘧啶醇Fenarimol60168-88-9腈苯唑Fenbuconazole114369-43-6氧皮蝇磷Fenchlorphos-oxon3983-45-7唑螨酯Fenpyroximate111812-58-9丰索磷Fensulfothion115-90-2氧丰索磷Fensulfothion-oxon6552-21-2氧丰索磷砜Fensulfothion-oxon-sulfone6132-17-8丰索磷砜Fensulfothion-sulfone14255-72-2倍硫磷Fenthion55-38-9倍硫磷亚砜Fenthion sulfoxide3761-41-9氧倍硫磷Fenthion-oxon6552-12-1倍硫磷氧砜Fenthion-oxon-sulfone14086-35-2倍硫磷氧亚砜Fenthion-oxon-sulfoxide6552-13-2倍硫磷砜Fenthion-sulfone3761-42-0精吡氟禾草灵Fluazifop-P-butyl79241-46-6氟硅唑Flusilazole85509-19-9氟酰胺Flutolanil66332-96-5地虫硫磷Fonofos994-22-9噻唑磷fosthiazate98886-44-3呋线威Furathiocarb65907-30-4氟吡甲禾灵Haloxyfop-methyl69806-40-2己唑醇Hexaconazole79983-71-4环嗪酮Hexazinone51235-04-2抑霉唑Imazalil35554-44-0吡虫啉imidacloprid138261-41-3茚虫威Indoxacarb144171-61-9异菌脲Iprodione36734-19-7氯唑磷Isazofos42509-80-8异柳磷Isofenphos25311-71-1甲基异柳磷Isofenphos-methyl99675-03-3异丙威Isoprocarb2631-40-5稻瘟灵Isoprothiolane50512-35-1马拉氧磷Malaoxon1634-78-2马拉硫磷Malathion121-75-5灭蚜磷Mecarbam2595-54-2灭锈胺Mepronil55814-41-0甲霜灵Metalaxyl57837-19-1虫螨畏Methacrifos62610-77-9甲胺磷Methamidophos10265-92-6杀扑磷Methidathion950-37-8灭虫威Methiocarb2032-65-7灭多威Methomyl16752-77-5甲氧虫酰肼Methoxyfenozide161050-58-4异丙甲草胺Metolachlor51218-45-2速灭威Metolcarb1129-41-5嗪草酮Metribuzin21087-64-9速灭磷Mevinphos7786-34-7禾草敌Molinate2212-67-1久效磷Monocrotophos6923-22-4腈菌唑Myclobutanil88671-89-0敌草胺Napropamide15299-99-7 N-去乙基甲基嘧啶磷N-Desethyl-pirimiphos-methyl 67018-59-1氧乐果Omethoate1113-02-6噁草酮Oxadiazon19666-30-9噁霜灵Oxadixyl77732-09-3杀线威Oxamyl23135-22-0多效唑Paclobutrazol76738-62-0乙基对氧磷Paraoxon-ethyl311-45-5甲基对氧磷Paraoxon-methyl950-35-6稻丰散Phenthoate2597-03-7甲拌磷Phorate298-02-2甲拌磷砜Phorate sulfone2588-04-7氧甲拌磷Phorate-oxon2600-69-3氧甲拌磷砜Phorate-oxon-sulfone 2588-06-9伏杀硫磷Phosalone2310-17-0亚胺硫磷Phosmet732-11-6磷酰胺酮 Phosphamidon13171-21-6辛硫磷Phoxim14816-18-3增效醚Piperonyl butoxide51-03-6抗蚜威Pirimicarb23103-98-2嘧啶磷Pirimiphos-ethyl23505-41-1甲基嘧啶磷Pirimiphos-methyl29232-93-7丙草胺Pretilachlor51218-49-6咪鲜胺prochloraz67747-09-5丙溴磷Profenofos41198-08-7猛杀威Promecarb2631-37-0敌稗Propanil 709-98-8炔螨特Propargite2312-35-8胺丙畏Propetamphos31218-83-4丙环唑Propiconazol60207-90-1残杀威Propoxur114-26-1丙硫磷Prothiophos34643-46-4百克敏Pyraclostrobin175013-18-0哒螨灵Pyridaben96489-71-3吡丙醚Pyriproxyfen95737-68-1喹硫磷Quinalphos13593-03-8虫死净RH 5849112225-87-3治螟磷Sulfotep3689-24-5戊唑醇Tebuconazol107534-96-3虫酰肼Tebufenozide112410-23-8胺菊酯Tetramethrin7696-12-0噻苯哒唑Thiabendazole148-79-8噻虫啉Thiacloprid111988-49-9噻虫嗪Thiamethoxam153719-23-4甲基立枯磷Tolclofos-methyl57018-04-9甲苯氟磺胺Tolylfluanid731-27-1三唑磷Triazophos24017-47-8敌百虫Trichlorphon52-68-6三环唑Tricyclazole41814-78-2肟菌酯Trifloxystrobin141517-21-7氟胺氰菊酯τ-Fluvalinate102851-06-9。
xxxxxxxxxxx有限公司GMP文件文件名称：农药残留量测定法标准操作规程文件编号：************起草人日期年月日第 1 页，共7页审核人日期年月日分发号QA审核日期年月日生效日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部分发部门化验室1 范围：本标准规定了农药残留量测定法，适用于本公司检品采用农药残留量测定法的质量检测。
2 引用标准：《中华人民共和国药典》2015年版四部通则23413 仪器与用具：4 标准内容：本方法系用气相色谱法(通则0521 )和质谱法(通则0431)测定药材、饮片及制剂中部分农药残留量。
除另有规定外，按下列方法测定。
4.1有机氯类农药残留量测定法-色谱法4.1.1 9种有机氯类农药残留量测定法色谱条件与系统适用性试验以(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管(30mX0.32mmX0.25um)，63Ni~ECD 电子捕获检测器。
进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。
程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃,，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。
理论板数按α-BHC峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品贮备溶液的制备精密称取六六六(BHC)(α-BHC ，β-BHC，γ-BHC ，δ-BHC)滴滴涕(DDT) (p，p '-DDE，p，p '-DDD，o，p '-DDT ，p，p '-DDT) 及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每lm l约含4~5ug的溶液，即得。
混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60~90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚( 6 0~90℃)制成每1L分别含0ug、1ug、5ug、10ug、50ug、100ug、250ug的溶液，即得。
《中国药典》2015年版实施公告有关问题的解读（一）1. 问：国家食品药品监督管理总局关于实施《中华人民共和国药典》2015年版（以下简称“2015年版药典”）有关事宜的公告（以下简称“公告”）（2015年第105号）中规定，为符合2015年版药典而需进行补充申请的，应在2015年12月1日前进行申报，2015年12月1日后是否仍可提交相应补充申请？答：对2015年版药典发布前已上市药品，生产企业应在2015年12月1日前完成原标准与新版药典相关要求的研究和比对，并应按公告要求进行相应的备案或补充申报。
2015年12月1日以后仍可以提交相应补充申请。
2. 问：企业的注册标准已经对2010年版药典相关品种进行评估的，且2010年版与2015年版药典品种质量标准和检测方法无变化的，是否需要重新对产品进行评估？答：虽然品种正文内容与2015年版药典品种规定无变化，但由于2015年版药典通用性要求，包括凡例、通则、制剂通则以及通用性检验方法等进行了全面的增修订，因此，生产企业仍需针对2015年版药典通用性要求方面对本产品进行相应的评估。
3. 问：关于药品执行标准的表述方式的问题答：对于注册标准不低于《中国药典》项目的制品，执行注册标准，其执行标准表示方式为：“执行药品注册标准且符合《中国药典》2015年版要求”。
4. 问：对于进口药品生产企业，能否使用注册代理公司出具的说明信来代替国外的声明信，进行备案或补充申请的申报？答：原则上注册代理公司应出具持证商的声明信。
如使用说明信代替国外的声明信，应同时提供进口药品生产企业出具的委托注册代理公司办理该事项的委托书。
5. 问：国家食药总局2015年第67号公告中规定，2015年版药典自2015年12月1日起实施”。
如何界定产品的执行日期？答：按是历版药典执行惯例要求，自2015年12月1日起生产或进口的药品应符合2015年版药典的相关规定。
6. 问：按照实施公告要求提出备案或补充申请的品种，审评审批期间是否仍可执行原标准，期间若有进口再注册申请的是否可按原注册标准核发新证。
2015版药典主要的七个方面变化七大变化提升总体水平张伟表示，2015版药典主要有七个方面的变化：一是收载品种增幅达到27.4%。
2015版药典拟收载5800个品种，比2010版药典增加1200多个，修订品种751个。
二是通过药典凡例、通则、总论的全面增修订,从整体上进一步提升了对药品质量控制的要求，完善了药典标准的技术规定，使药典标准更加系统化、规范化。
三是健全了药品标准体系。
特别是药用辅料品种增加至260个，新增相关指导原则;在归纳、验证和规范的基础上实现了《中国药典》各部共性检测方法的协调统一。
四是2015版药典附录(通则)、辅料独立成卷，构成《中国药典》四部的主要内容。
五是药用辅料品种收载数量显著增加。
拟新增128个，共计260个，增长率高达97%。
六是安全性控制项目大幅提升。
中药：制定了中药材及饮片中二氧化硫残留量限度标准，推进建立和完善重金属及有害元素、黄曲霉毒素、农药残留量等物质的检测限度标准;加强对重金属以及中药材的有毒有害物质的控制等。
化学药：有关物质加强了杂质定性和定量测定方法的研究，实现对已知杂质和未知杂质的区别控制，优化抗生素聚合物测定方法，设定合理的控制限度，整体上进一步提高有关物质项目的科生物制品：增加相关总论的要求，严格生物制品全过程质量控制要求，以保证产品的安全有效性，同时增订“生物制品生产用原辅材料质量控制通用性技术要求”，加强源头控制，最大限度降低安全性风险等。
七是进一步加强有效性控制。
中药材加强了专属性鉴别和含量测定项设定。
化学药适当增加了控制制剂有效性的指标，研究建立科学合理的检查方法。
生物制品进一步提高效力测定检测方法的规范性，加强体外法替代体内法效力测定方法的研究与应用，保证效力测定方法的准确性和可操作性。
2015版<药典>中药材标准的变化新药典变化概述：1.药典一部收载药材和饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂等，品种共计2598种，其中新增440种，修订517种，不收载7种。
附录 IX Ｕ■二氧化硫残留量测定法1本法系用酸碱滴定法、离子色谱法、气相色谱法分别作为第一法、第二法、第三法测定经硫磺熏蒸处理过的药材或饮片中二氧化硫的残留量。
对于具体品种， 可根据情况选择适 宜方法进行二氧化硫残留量测定。
离子色谱法作为复试方法；检测结果为限度 150 ppm（μg/g）±30%（即 105~195 ppm） 和限度 400 ppm（μg/g）±20%（即 320~480 ppm）时，应采用离子色谱法复试作为最终测定 结果。
鉴于二氧化硫在样品中的不均匀性和随时间挥发的特点，二氧化硫残留量的检测结果 不予复验。
■[增订]■第一法（酸碱滴定法）2本方法系将中药材以水蒸汽蒸馏法进行处理， 样品中的亚硫酸盐系列物质加酸处理后转 化为二氧化硫，随水蒸气蒸馏，并被双氧水吸收、将其氧化为硫酸根离子，采用酸碱滴定法 测定，最后折算二氧化硫计算结果。
仪器装置 如图 1。
A 为 1000ml 两颈圆底烧瓶；B 为竖式回流冷凝管；C 为(带刻度)分液漏斗；D 为连接氮气流入口；E 为二氧化硫气体导出口。
另配磁力搅拌器、电热套、氮 气源及气体流量计。
图1酸碱滴定法仪器装置1 2修订原蒸馏滴定法为酸碱滴定法，增订离子色谱法和气相色谱法。
原为蒸馏滴定法，见 2010 年版药典第一增补本修订稿，拟取消，由酸碱滴定法代替。
测定法取药材或饮片细粉约 10g（如二氧化硫残留量较高，超过 1000 mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于 5g） ，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水 300～400ml。
打开与自来 水连接的回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端 E 口处连接一橡胶导气管置于 250 ml 锥形 瓶底部。
锥形瓶内加入 20 ml 的 3%过氧化氢溶液作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收 液液面以下） ，并置于磁力搅拌器上不断搅拌。
开通氮气，使用流量计调节气体流量至约 0.2 L/min。
