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农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。
二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。
按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。
培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。
灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。
灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。
热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。
湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。
湿热灭菌比干热灭菌效率高。
病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。
本实验是练习在固体培养基上接种。
固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。
接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。
三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。
]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。
四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。
基本原理：昆虫在取食正常食物的同时将药剂摄入消化道，经肠壁细胞汲取进入血液，随血液循环到达作用部位而使昆虫中毒。
它采用昆虫的贪食性，因此要尽量避开药剂与昆虫体壁接触而产生其它毒杀作用。
测定方法有（1）液滴饲喂法；（2）口腔注射法;（3）叶片夹毒法。
一、叶片夹毒法基本原理：在两叶片中间匀称地夹入肯定量的杀虫剂，饲喂目标昆虫，药剂随叶片被昆虫取食，然后由被吞食的叶片面积，计算出吞食的药量。
优点是可以削减目标昆虫与杀虫剂的接触，避开发生触杀作用，操作便利，结果比较精确。
叶片夹毒法只适用于植食性的，取食量大的咀嚼口器目标昆虫，如粘虫、蝗虫.玉米螟等。
1、试验材料：药剂：90%敌百虫溶剂：丙酮试虫：菜青虫或斜纹夜娥幼虫：30~50头用具：培育皿30~50个，木塞钻（口径2cm）,微量注射器10微升1支，浆糊或明胶生物材料：甘蓝叶、翅麻叶等。
2、试验方法：用木塞钻制成直径2cm的圆心叶片60片，把圆叶片放在潮湿的培育皿中待用。
夹毒叶的制备：用丙酮将敌百虫稀释成有效成分为0.筮的药液，用微量注射器吸敌百虫丙酮液10微升，匀称滴在叶片上，计算出每张圆叶片药量（mg∕厘米2）。
用浆糊（或明胶）涂在无药的圆叶片上，两相对合，即成夹毒叶片，同时制备不夹毒叶片2~4片作对比。
每培育皿中放一片，另放一团湿棉花或湿水草纸一小块保湿，然后编号。
采回的试虫先饥饿数小时，每头虫称重，每培育皿放一头虫，饲喂夹毒叶片。
3、结果观看及计算：观看试虫取食状况，掌握食叶量一部份虫食叶片1/3,一部分虫食叶片1/2,一部分食叶片3/4或全部叶片。
然后取出剩余的夹毒叶片，饲喂新奇叶片，经3-24小时后，检查死亡率。
食量的计算：将剩余的叶片放在直径2cm的方格纸上，计数被吃去的方格数（1亳米'/I格），然后按每张圆叶片上的总药量，计算每一方格的剂量，即可求出取食药量。
从而求得每头虫单位体重所取食的剂量（mg 或微g/g体重）。
致死中量的计算：按每头虫食剂量的大小挨次排列。
（整理）农药⽣物测定实验指导.农药⽣物测定实验指导（⾃编试⽤1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药⼯程专业⽤⼭东农业⼤学植物保护学院2008年9⽉棉铃⾍⼈⼯饲料制备⼀、实验⽬的学习棉铃⾍⼈⼯饲料制备技术和⽅法。
本⽅法还适合⽟⽶螟等⼈⼯饲料的制备。
⼆、实验⽤品和仪器设备仪器设备：天平、⾼压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛⼦（40⽬）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、⼭梨酸钾、兽⽤链霉素、⽔等三、实验⽅法1. 配⽅：2. ⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、酵母粉和棉叶装⼊罐头瓶中，⾼压灭菌40min.（120℃）3. ⽔+琼脂煮开冷却⾄70℃，加⼊Vc、防腐剂、棉油混匀，再加⼊混合好的其他成分，充分混匀。
4. 倒⼊搪瓷盘，加盖冷却后放⼊冰箱中备⽤。
四、质量检查饲料冷却后观察颜⾊和固化成型情况。
五、实验报告农药⽣物测定药剂配制⼀、实验⽬的学习⽣物测定药剂配制的实验操作技术和⽅法。
⼆、实验⽤品和仪器设备电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡⾍啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施⽥补EC(w/v)三、实验⽅法1. 原药母液的配制与稀释（1）⽤丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。
（2）⽤丙酮配制1％吡⾍啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡⾍啉按照5：2的⽐例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。
2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
（3）33%施⽥补EC，稀释成150mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理将以上每⼀种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
农学专业植物化学保护实验教案2013-2014学年第二学期农学院植保教研室实验一农药常用剂型的加工制备一般由农药厂或化工厂制造出来的未经加工的农药产品统称为原药。
固体的原药叫原粉，液体的原药叫原油。
一、实验目的：掌握农药常用剂型的加工原理及方法。
进一步了解它们的组成成分、物理性状及使用特点。
二、实验材料及试剂六六六、敌敌畏、多菌灵、呋喃丹、高岭土、肥皂粉、乳化剂、苯、二甲苯等。
三、实验仪器粗天平、研钵、60目、200目标准筛、恒温水浴锅、温度计、移液管、烧杯、玻璃棒等。
四、实验方法及步骤1、粉剂制备（制备2%六六六粉剂）粉剂（dust）系用农药原药和填料，经过机械粉碎而成的粉状混合制剂。
粉剂的规格标准为细度要求95%粉粒可通过200号筛目，水分含量不超过1.5%，pH值为6-8。
原料配比（a.i）实验用量六六六2份高岭土100份将过200目筛的六六六称取实验需用量，并称过200目筛的高岭土实验用量，置研钵内，混合研磨均匀，即成。
注：该法制备粉剂，要特别注意所用填料密度和比重应与所用的高浓度粉剂尽量保持一致，否则，当喷粉时可能会造成填料粉粒与药剂粉粒分离，即先喷出和后喷出粉状物的有效成分含量不一致。
2、可湿性粉剂（制备25%多菌灵可湿性粉剂）可湿性粉剂（wettable powder）系用农药原药、湿润剂和填料，经机械粉碎而制成的粉状混合物制剂。
它易被水湿润，可分散和悬浮与水中，供喷雾使用。
其标准为粉粒细度要求99.5%通过200目筛，水分含量不超过2.5%，湿润时间要求小于1.5min，悬浮率达50%以上。
原料配比（a.i）实验用量叶蝉散25份茶枯粉10份肥皂粉1份陶土（干燥）加足到100份实验用量，分别称取过200目筛的各原料置研钵内，充分研至混匀，即成25%多菌灵可湿性粉剂。
注：其与粉剂制备不同之处为粉碎（研磨）时间较粉剂长，转速要慢，若原药受热易软化，要间歇作业，“慢工出巧活”。
它与乳油相比，由于该剂不含二甲苯等有机溶剂而利于环保，降低成本，而且具有包装运输方便，安全等优点。
