小室迁移实验

细胞迁移实验报告一、实验目的本实验旨在研究细胞在不同条件下的迁移能力，深入了解细胞迁移的机制和影响因素，为相关疾病的治疗和药物研发提供理论依据。

二、实验原理细胞迁移是一个复杂的动态过程，涉及细胞骨架的重组、黏附分子的调节以及细胞内外信号传导等多个方面。

在本实验中，我们利用划痕实验和 Transwell 小室实验两种方法来观察和定量分析细胞的迁移情况。

划痕实验是通过在细胞单层上制造线性划痕，模拟细胞损伤，然后在一定时间内观察细胞向划痕区域迁移的过程。

Transwell 小室实验则是利用具有通透性的膜将上下室隔开，细胞在上室接种后，能够通过膜上的小孔向下室迁移，通过对下室细胞的计数来评估细胞的迁移能力。

三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞株：选用了_____细胞株。

2、主要试剂：包括细胞培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PBS 缓冲液、结晶紫染液等。

3、实验器材：培养皿、Transwell 小室、移液器、显微镜等。

（二）实验方法1、细胞培养将_____细胞株接种在含有 10%胎牛血清的培养基中，置于 37°C、5% CO₂的培养箱中培养，待细胞融合度达到 80% 90%时进行传代和实验。

2、划痕实验（1）在 6 孔板中接种细胞，培养至融合度达到 90%以上。

（2）使用无菌的200 μL 移液器枪头在细胞单层上垂直划痕，形成无细胞的划痕区域。

（3）用 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞 2 3 次，去除脱落的细胞。

（4）加入无血清培养基，置于培养箱中培养，在 0 h、12 h、24 h 时分别在显微镜下观察并拍照，测量划痕宽度，计算细胞迁移率。

3、 Transwell 小室实验（1）将 Transwell 小室放入 24 孔板中，在上室加入无血清培养基预处理 30 分钟。

（2）消化收集细胞，用无血清培养基重悬，调整细胞浓度为_____个/mL。

（3）在上室加入200 μL 细胞悬液，下室加入600 μL 含 10%胎牛血清的培养基。

Transwell小室实验是一种常用于细胞学研究中的实验方法，主要用于研究细胞迁移、侵袭、成血管和细胞-细胞相互作用等细胞生物学现象。

本文将详细介绍Transwell小室实验的原理及其在细胞学研究中的应用。

一、Transwell小室实验原理Transwell小室实验是通过一种特殊的小室装置进行的，该装置由两个分隔的小室组成，上下两个小室之间通过一片具有微孔的多孔膜相连。

这片多孔膜的孔径可以根据实验需要进行选择，常见的孔径有3um、8um等。

在实验过程中，我们将需要观察的细胞或细胞外基质放置在上小室中，而下小室中则向其添加一定浓度的化学物质或药物。

待实验进行一定时间后，我们可以通过上下小室之间的多孔膜来观察细胞的迁移、侵袭或是其他相关现象。

在Transwell小室实验中，我们可以根据实验需要对多孔膜进行功能修饰，比如涂覆胶原蛋白、基质蛋白等物质，或是加入不同浓度的化学刺激物质，以模拟细胞在不同生理环境下的行为。

这种设置能够更真实地反映细胞在体内的生理活动，进一步帮助我们理解细胞的生理与病理过程。

二、Transwell小室实验在细胞学研究中的应用1.细胞迁移和侵袭研究Transwell小室实验广泛应用于细胞迁移和侵袭研究中。

我们可以将需要研究的细胞悬浮在上小室中，然后在下小室中添加诱导因子，比如趋化因子、血浆成分等，通过多孔膜对细胞进行筛选，并观察细胞在多孔膜上迁移扩散的情况。

这种实验能够模拟体内细胞在不同环境中的迁移和侵袭过程，帮助我们更好地理解细胞在肿瘤转移、炎症反应等生理和病理过程中的行为。

2.成血管研究Transwell小室实验也常用于细胞成血管相关的研究。

我们可以在上小室中培养内皮细胞或其他与血管生成相关的细胞，然后在下小室中添加适当的生长因子或细胞因子，观察细胞在多孔膜上形成管状结构。

这种实验方法有助于我们深入了解血管生成的分子机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。

3.细胞-细胞相互作用研究在细胞-细胞相互作用研究中，Transwell小室实验也具有重要的应用价值。

Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。

更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。

但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。

这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。

将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。

常用0.4、3.0µm。

我们实验室用的是0.4µm。

boyden小室法原理
BoydenChamberAssay（小室实验）:
Boyden小室实验是一种用于研究细胞迁移和侵袭的经典实验方法之一。

该实验通常涉及使用Boyden小室（BoydenChamber），其中包含两个相邻的室，它们之间通过一个微孔分隔。

这个微孔的大小和特性可以控制。

这个实验主要用于评估细胞的迁移能力，特别是细胞穿越微孔进入另一个室，模拟细胞在体内组织中的侵袭过程。

Boyden小室实验的基本步骤:
1.制备小室：使用Boyden小室，通常有两个室，它们之间通过一个孔隙分隔。

2.涂覆基底膜：在孔隙的底部涂覆基底膜，模拟细胞在组织中的侵袭环境。

3.准备细胞：将待测试的细胞放置在上室中。

4.孵育：孵育一段时间，允许细胞迁移到孔隙中。

5.固定和染色：固定细胞，然后通过染色技术，例如Giems染色，来观察和计数细胞在底部室的数量。

这个实验可以用于研究肿瘤细胞的侵袭能力、免疫细胞的迁移等。

这是一个常见的实验技术，被广泛应用于细胞生物学和肿瘤研究领域。

请注意，如果你确实在谈论不同的"Boyden小室法"或者其他主题，提供更多背景信息可能有助于我更好地回答你的问题。

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细胞迁移和侵袭实验实验准备：细胞，24孔板，transwell小室（8µm，24孔板专用），ECM Gel，10%FBS+培养基，无血清培养基，10 µ、200 µL、1000 µL移液器及配套枪头，1.5 mL EP 管，冰盒实验设计：实验分组一般分为阴性组（上下层均没有趋化因素），实验组（按照实验需要，上层或者下层加入趋化因素），对照组（趋化因素与实验组中的相反）。

如果有特别需要，可以再加上阳性组（上下层都有趋化因素）。

实验操作（请细读注意事项）：一、细胞侵袭实验1.ECM Gel原液提前1 h放在4 ℃冰箱中解冻，实验前转移到冰盒中。

2.将1.5 mL EP、枪头盒、transwell放在24孔板里面后，置于冰上预冷。

3.根据自己的使用量，按照ECM Gel : 无血清培养基=1 : 7.5在冰上稀释成使用液。

4.把枪头剪去一小段（约3 µm）后在冰上吸取40 µL/孔ECM Gel使用液轻轻加入transwell上室中，加入时慢慢移动枪头，保证液体平铺在底部。

5.放在37 ℃孵箱15 min，让胶凝固。

6.消化、离心、计数细胞后，按照2.5x104 / mL用无血清培养基稀释细胞，制成细胞悬液（如果细胞很多，这一步可以提前，在4、5之前做）。

7.按照每孔200 µL，将细胞悬液加入transwell上室，同时在transwell下室加入10%FBS+培养基500 µL，放入37 ℃孵箱培养。

8.若干小时后取出，吸去transwell上室多余液体，用PBS清洗两次，用棉棒在上室中轻轻转动，吸干水分并擦去膜内侧的细胞。

9.在上室中加入结晶紫染液，染色5 min，回收染液，用流水缓缓冲去染液，再次用棉棒在上室中轻轻转动，吸干水分。

10.在正置显微镜上放置一块载玻片，将transwell小孔倒置放在上面，拍照。

11.在100倍视野下，对膜的上下左右及中间计数，做平均数。

附件一：实验室搬迁工作要求
一、实验室搬迁实施前期准备要求
1、搬迁的实验室，在搬迁前应做好登记，并仔细核对帐物，防止仪器设备遗漏或丢失。

搬迁前应做好各方面准备，目的房间应具备存放设备的条件及安全保障；
2、施工人员必须熟悉现场环境:了解水、气、电力控制的操作位置，拆卸时必须明确停断状态方能操作；
3、施工人员需提前对途经的通道事先都走一遍，做好预案:如转弯、进出门口时门框尺寸、货梯轿厢与地面间的空隙或高低差等；
4、仪器设备搬运前应分类打包，采取防震、防磕碰、防压、防水、防潮、防腐蚀等措施，防止损坏；包装完成后要求在外包装箱上注明“物品性质”如：液体、高精密仪器、玻璃器皿等；
6、大型贵重仪器设备等对搬运有特殊技术要求的仪器设备，应与所在单位认真对接，核对仪器技术指标，以便采取必要措施，提前做好搬运方案，保证完好搬运。

二、实验室搬迁实施阶段要求
1、拆卸仪器设备时，施工人员必须先熟悉相关图纸及设备特性，禁止盲目操作，仪器设备的拆机搬迁过程应遵守仔细、谨慎、安全的原则，爱护迁出和迁入房舍的环境及基础设施，不得损坏实验室设施；
2、搬迁现场应配备专职安检员，及时检查和清除不安全因素；
3、化学药品及气体，特别是易燃、易爆、有毒的化学危险品及危险气体，在搬运过程中应妥善包装、控制车速、小心运输，防止撒落流失及发生燃烧、爆炸、泄漏等事故，避免造成污染和危险。

三、实验室搬迁项目收尾要求
1、仪器设备搬至目的房间后，应及时清点，避免丢失;
2、设备搬运完成后，进行全面检查、安装以及调试，保证仪器设备正常工作。

3、搬迁完毕，应及时与所在单位做好交接手续。

迁移实验（cell migration assay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

实验步骤：1材料准备：可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。

细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。

使用前进行基底膜水化。

2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。

但这一步并不是必须的。

②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。

调整细胞密度至5×105/ml。

2.3接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。

②24孔板下室一般加入600µl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。

一、实验目的本研究旨在通过Transwell小室共培养技术，观察细胞间的相互作用及其对细胞迁移能力的影响，为进一步研究细胞间的信号传导和肿瘤转移机制提供实验依据。

二、实验材料1. 细胞：人肝癌细胞系HepG2、人正常肝细胞系L022. Transwell小室：Corning公司产品，孔径为8.0 μm3. 培养基：DMEM培养基，含10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100 U/mL4. 其他试剂：胰蛋白酶、EDTA、无菌水、细胞计数板、酶标仪等三、实验方法1. 细胞培养：将HepG2和L02细胞分别接种于6孔板，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后进行实验。

2. Transwell小室共培养：将Transwell小室置于6孔板中，在上室中加入1 mL 含10%胎牛血清的DMEM培养基，下室中加入2 mL含10%胎牛血清的DMEM培养基。

将HepG2细胞接种于上室，L02细胞接种于下室，共培养24小时。

3. 细胞迁移实验：将Transwell小室取出，用棉签轻轻刮去上室中的细胞，用1 mL PBS洗涤3次，然后用4%多聚甲醛固定30分钟。

将固定后的Transwell小室放入显微镜下观察，计算上室中迁移至下室的细胞数量。

4. 数据分析：采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，实验数据以均值±标准差表示，采用t检验进行组间比较。

四、实验结果1. HepG2细胞在Transwell小室共培养条件下，迁移至下室的细胞数量明显多于L02细胞，表明HepG2细胞具有较强的迁移能力。

2. 与单独培养的HepG2细胞相比，共培养后的HepG2细胞迁移至下室的细胞数量显著增加，表明L02细胞对HepG2细胞的迁移具有促进作用。

3. 共培养后的HepG2细胞中，与L02细胞直接接触的细胞数量明显多于未接触的细胞，表明细胞间的直接接触对HepG2细胞的迁移具有促进作用。

五、讨论本研究通过Transwell小室共培养技术，观察了HepG2和L02细胞间的相互作用及其对细胞迁移能力的影响。

迁移实验（cell migration assay）实验材料（1）Transwell小室，孔径8μm (Corning) ,细胞培养板24孔板 ,培养板应当与购买的Transwell 小室相配套（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养,PBS，2.5%FBS（3）固定液：4%多聚甲醛固定液或者甲醇（4）染色液：Giemsa染液或结晶紫染色（5）其他：小镊子，棉棒1材料准备：无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。

但这一步并不是必须的。

②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。

调整细胞密度至5×105/ml。

2.2接种细胞①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。

细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；②24孔板下室一般加入600µl含2.5%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。

③种板，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。

④培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。

24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。

2.3染色计数①取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无菌的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。

② 0.1%结晶紫染色20 min，或Giemsa染色（5－10min，室温0.5h），用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。

③400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。

迁移实验(ｃell ｍｉgratiｏn ａssay)实验介绍ﻫ细胞迁移与侵袭实验将Traｎswell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究得细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中得成分可以影响到上室内得细胞,应用不同孔径与经过不同处理得聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面得研究。

1材料准备:ﻫ可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶得(Ｃoｓter与实验步骤:ﻫCorning公司得也较常用),Ｔrａnswelｌ迁移实验得细胞培养板24孔板。

细胞培养板应当与购买得Trａnｓwｅｌl小室相配套,BD公司得Matrigel,无血清ＤMＥM,(1%胎牛血清)ＤMEM与1640培养基,ＤMEM完全培养基,１6４0完全培养基(也可加到20%血清),无菌P ＢＳ,棉签,胰酶,４％多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0、1％(g/ml)PBS结晶紫)ﻫ2步骤与流程ﻫ2。

1基质胶铺板:用BＤ公司得Mａｔｒigel1:8(根据细胞产生mmp得量来决定)稀释,包被Ｔraｎswell小室底部膜得上室面,置3７℃30min使Ｍaｔrigeｌ聚合成凝胶、使用前进行基底膜水化。

ﻫ２、2制备细胞悬液ﻫ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12—24h,进一步去除血清得影响。

但这一步并不就是必须得、②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用ＰBS洗1－2遍),用含ＢSA得无血清培养基重悬、调整细胞密度至5×10５/ml。

ﻫ２。

3接种细胞①取细胞悬液１00µl加入Trａnｓwelｌ小室、ﻫ②24孔板下室一般加入600µl含20％ＦBS 得培养基,特别注意得就是,下层培养液与小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液得趋化作用就减弱甚至消失了,在种板得时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。