实验生物化学鉴定
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生物化学检验名词解释生物化学检验是一种用于研究生物分子结构、功能和相互作用的实验方法。
生物化学检验包括多种技术和实验室技能,用于分析生物分子的组成、测定它们的浓度、检测它们在生物体内的作用和相互作用。
以下是一些生物化学检验常用的名词的解释:1. 质谱:质谱是一种用于测量分子质量的技术。
它利用质谱仪将化合物离子化,并用磁场将这些离子分离。
然后,质谱仪测量离子的质量和相对丰度,从而确定化合物的质量。
2. 电泳:电泳是一种利用电场将带电物质分离的技术。
在生物化学检验中,电泳常用于分离和鉴定蛋白质、核酸和多肽。
蛋白质电泳用于分析蛋白质的分子量和组成,核酸电泳用于分析DNA和RNA的大小和纯度。
3. 分光光度计:分光光度计用于测量溶液中的光吸收或透射。
它通过将不同波长的光射入溶液并测量光的强度,从而确定溶液中特定物质的浓度。
4. 酶活性测定:酶活性测定用于测量酶催化反应的速率。
常用的酶活性测定方法包括测定溶液中底物消耗、产物生成或光学变化的速率。
5. 高效液相色谱法(HPLC):高效液相色谱法是一种用于分离和测定化合物的方法。
它利用液相色谱仪将样品通过固定相柱,分离出不同化合物。
然后,通过检测器测量化合物的吸光度或荧光信号,并确定它们的浓度。
6. 透射电镜(TEM):透射电镜是一种用于观察和分析生物样品的结构的技术。
它利用电子束通过样品并通过透射电镜来放大和捕捉电子图像。
透射电镜可以用于观察细胞和细胞器的超微结构。
7. 核磁共振(NMR):核磁共振是一种用于分析化合物结构的技术。
它利用磁场和射频辐射来激发和探测样品中的原子核。
根据原子核的化学位移和耦合常数,核磁共振可以确定化合物的结构。
8. 能谱法:能谱法是一种用于分析样品中元素及其组成的方法。
它利用能谱仪测量样品辐射的能量分布,并根据其能量和强度来确定样品中的元素浓度和种类。
生物化学检验是现代生物学和医学研究中不可或缺的重要方法之一。
通过生物化学检验,我们可以了解生物分子的组成、浓度和功能,从而深入研究生物体内各种生物过程和疾病的发生机制。
生物化学出科自我鉴定
《生物化学出科自我鉴定》
作为一名生物化学专业的学生,我在大学四年的学习中积累了丰富的知识和实践经验。
通过课堂学习和实验实践,我对生物化学的理论和实践有了深刻的理解和掌握。
在这个过程中,我不断提升自己的专业技能和知识水平,为将来的毕业和职业发展做好准备。
首先,在课堂学习方面,我认真学习了生物化学相关的各种理论知识,包括生物大分子结构与功能、酶学、代谢途径等内容。
通过系统的学习,我对生物化学的基本原理和重要概念有了清晰的认识,能够运用这些知识解决实际问题。
其次,在实验实践方面,我有着丰富的实验经验。
我参与了多个生物化学实验项目,掌握了实验操作的基本技能,提高了对实验数据的分析和处理能力。
在实验过程中,我严格遵守实验安全规范,保证实验结果的可靠性和准确性。
此外,我还参加了生物化学相关的科研项目和学术会议,积极了解领域内最新的研究成果和前沿技术,不断扩展自己的学术视野。
通过这些经历,我培养了科学研究的意识和方法,为将来的科研工作打下了坚实的基础。
在未来的求职和职业发展中,我会不断提升自己的专业能力,保持学习和进步的态度。
我相信通过自己的努力和不懈的追求,
我一定能够在生物化学领域有所建树,为人类健康和生命科学的发展贡献自己的力量。
生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定
一、实验目的
了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。
二、实验原理
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用,使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。
硫酸肼作为稳定剂,用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。
然后用2,4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2,4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物,其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。
三、仪器原料和试剂
(1)仪器:试管(1.5×1.5cm)、吸量管(1ml、、2ml3ml)、恒温水浴、烧杯(50ml)。
(2)原料:新鲜酵母。
(3)试剂:
①2,4-二硝基苯肼:0.1g2,4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中,贮于棕色瓶中备用。
②0.56mol/L硫酸肼溶液:称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中,这时不会全部溶解,当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。
此液也可用于水合肼溶液配制,可按其分子浓度稀释至0.56mol/L,此时溶液呈碱性,可用浓硫酸调pH至7.4即可。
③5%葡萄糖溶液。
④10%三氯乙酸溶液。
⑤0.75mol/LNaOH溶液。
⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。
四、操作步骤
将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内,
酵管产生气泡的量有何不同。
(3)把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表补加各
五、思考题
实验中哪一发酵管生成的气泡最多?哪一管最后生成的颜色最深?为什么?。
生物化学实验中的化学分析方法在生物化学研究中,化学分析方法是不可或缺的工具。
化学分析方法能够帮助研究人员准确测定生物样本中的化学成分,从而揭示生物体内的生理过程和代谢途径。
本文将介绍几种常用的生物化学实验中的化学分析方法。
1. 光谱分析法光谱分析法利用波长、频率和能量之间的关系来研究物质的结构和性质。
常见的光谱分析方法包括紫外-可见吸收光谱、红外光谱和质谱等。
通过测定样本对特定波长或能量的吸收、发射或散射情况,可以确定样本中的化学组分和浓度。
2. 色谱分析法色谱分析法是一种基于固定相和流动相间分离物质的原理进行分析的方法。
常见的色谱分析方法包括气相色谱和液相色谱。
气相色谱常用于分离和鉴定挥发性有机物,液相色谱常用于分离和鉴定非挥发性有机物和生物大分子。
3. 电化学分析法电化学分析法利用电化学方法来测量反应产生的电流或电势变化,用以分析样本的成分和浓度。
常见的电化学分析方法包括电位滴定、极谱法和电化学传感器等。
电化学分析法具有检测灵敏度高、操作简便等特点,广泛应用于生物体内电活性物质的研究和生物传感器的制备。
4. 质谱分析法质谱分析法是一种通过测量样品中离子的质量和相对丰度来鉴定和定量化学成分的方法。
质谱分析法具有高分辨率、高灵敏度和高特异性的特点,广泛应用于分析和鉴定生物样品中的分子结构和组成。
以上所述的化学分析方法只是其中的几种常见的方法,随着科学技术的不断发展,化学分析方法也在不断创新和完善。
这些化学分析方法的应用为生物化学实验提供了强有力的工具,为科学家们深入探索生命的奥秘提供了可能。
正是通过这些分析方法的应用,科学家们才能够揭示生物体内的化学过程和代谢途径,为人类的健康和疾病的研究提供宝贵的参考和支持。
总结起来,生物化学实验中的化学分析方法是生命科学研究中不可或缺的工具。
通过光谱分析法、色谱分析法、电化学分析法和质谱分析法等方法,科学家们可以准确测定生物样本中的化学成分,揭示生物体内的生理过程和代谢途径。
生物化学实验报告实验目的,通过本次实验,掌握生物化学实验的基本方法和技能,了解生物化学实验的原理和应用,提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理,生物化学实验是利用生物化学原理和方法,对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器,本次实验所需材料包括,蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品;试剂,酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等;仪器,分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤:1. 蛋白质的定性实验,取少量蛋白质样品,加入蛋白质定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验,取少量核酸样品,加入核酸定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验,取少量酶样品,加入酶定性试剂,观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验,取少量碳水化合物样品,加入酚酞试剂,观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析,利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器,对生物分子进行定量分析。
实验结果分析,根据实验结果,可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析,从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论,通过本次实验,掌握了生物化学实验的基本方法和技能,了解了生物分子的定性和定量分析方法,提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义,生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节,通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解,为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中,我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法,还培养了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验,我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解,提高了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生化检验科实习鉴定在生化室实习的时间即将结束,在这一个月实习期间,我认真遵守科室的制度,团结同学,尊敬老师。
生化中的肝肾、血脂功能检查,是每个医院都是必不可少的基本检查。
虽然每天我需要处理大量的标本,先编号、再离心、最后上机,对每一项操作检验员都得仔细把好关。
因为影响生化检查结果的因素有很多很多。
每天必做的生化质控,是一项最重要的指标,可以衡量今天仪器状态、试剂稳定、结果的可靠与否。
老师也会积极地给我们演示操作、讲解原理,帮助我们清晰认知质控的重要性、必要性。
很多人认为生化室的工作时轻松的,但我不这么认为,尽管现在全自动生化仪普及,不需要花费太多人力,但生化质控偏离、生化结果起伏是要检验人员作出精准的分析判断。
生化科室的实习,更近一步地丰富了自己的操作经验,也为自己熟练生化操作垫定基础。
相信自己以后一定可以做好生化检验员!篇二:2012临床生化组实习小结光阴似箭,时间如梭,三周的时间确实太过短暂,刚熟悉了生化组的工作,就面临轮转其他专业组,心里全是不舍,这两天真希望时间的脚步能停留下来,能让我对生化组多留下一些记忆。
很喜欢生化组融洽的气氛,很留恋老师们爽朗的笑声,很珍惜在生化组难忘的日子,因为珍惜,祈求时间停留;因为珍惜,只想再多争取做些工作。
在生化组实习的这段日子里,每一位老师都教会了我很多,我也领悟了很多,现在唯一遗憾就是时间太短,很多东西都只能浅尝辄止,缺乏更深入的体会。
生化组的实习的工作在其他同学看来既简单又无趣,而对我来说则是既熟悉而又陌生,以前最喜欢的课程就是临床生化,因为兴趣加上自己的努力,临床生化的理论知识我还是学的比较扎实,所以一直认为生化组的实习应该会比较得心应手,但在实习的过程中我还是发现纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行,深深的感觉到所学知识的肤浅和在实际运用中的专业知识的匮乏,自己的实际动手能力与工作的要求的还有一定的差距,健康所系,性命所托,生化组的工作作远比想象中的要细致严谨得多,这时才真正领悟到“活到老学到老”的含义,以下是我的实习总结:实习目的通过生化组的实习,将所学临床生化相关基础理论密切联系临床实际,巩固和提高所学的专业知识,熟练掌握常用临床检验生物化学基本操作技能,培养正确的思维方法与独立处理标本的能力,达到能分析、解决临床实际问题的目的。
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段,广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法,根据分子的化学性质和大小差异,将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱(GC)、液相色谱(LC)和薄层色谱(TLC)等。
在生物化学实验中,色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如,气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物,液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异,将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中,电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如,聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量,SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱(TOF-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)等。
在生物化学实验中,质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如,利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定,通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图,确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合,从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中,核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如,Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数,Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
生化室实习自我鉴定生化室实习自我鉴定【篇一:生化检验科实习鉴定】生化检验科实习鉴定在生化室实习的时间即将结束,在这一个月实习期间,我认真遵守科室的制度,团结同学,尊敬老师。
生化中的肝肾、血脂功能检查,是每个医院都是必不可少的基本检查。
虽然每天我需要处理大量的标本,先编号、再离心、最后上机,对每一项操作检验员都得仔细把好关。
因为影响生化检查结果的因素有很多很多。
每天必做的生化质控,是一项最重要的指标,可以衡量今天仪器状态、试剂稳定、结果的可靠与否。
老师也会积极地给我们演示操作、讲解原理,帮助我们清晰认知质控的重要性、必要性。
很多人认为生化室的工作时轻松的,但我不这么认为,尽管现在全自动生化仪普及,不需要花费太多人力,但生化质控偏离、生化结果起伏是要检验人员作出精准的分析判断。
生化科室的实习,更近一步地丰富了自己的操作经验,也为自己熟练生化操作垫定基础。
相信自己以后一定可以做好生化检验员!【篇二:检验科生化室实习总结】检验科生化室实习总结检验科生化室实习总结时间真的过的好快,转眼间在生化室的一个月就这样待过去了,无论学的咋样,我感觉都应该总结一下,都会有很大收获的。
总结如下:一、在生化室所做项目的血都是无需添加抗凝剂的,也就是离心后用上清液即血清做所需的检查项目。
还需知道血清与血浆的区别:血清是血液发生凝血后的上层澄清液体,凝血的主要反应是纤维蛋白原转化为纤维蛋白,所以血清中不再含有纤维蛋白原。
而血浆是血液中加入抗凝剂后离心得到的上清液,抗凝剂的存在阻断了凝血链式反应,使凝血过程受阻,纤维蛋白原还存在于其中。
另外,血浆中不含游离的钙离子,再加入钙离子可使其再凝,而血清中含有游离的钙离子,再加入钙离子则不会再凝。
另外,血清中少了很多的凝血因子,以及多了很多的凝血产物。
12.胆碱酯酶测定(che)。
13.血气分析:pco2,po2,ph,be,ag,tco2,hco3-。
14.心梗系列:nt-probnp,ck-mb,ctni,myo。
生物化学出科自我鉴定
我一直对生物化学感兴趣,通过学习和实践,我在这个领域取得了一些成就。
下面是我的自我鉴定:
1. 知识储备:我在生物化学的基础知识上有一定的掌握能力。
我熟悉生物分子的结构与功能,了解各种生化反应,以及相关的代谢途径和信号转导通路。
在实验技术方面,我有一定的理论基础和实操能力。
2. 实验技能:我具备一定的实验技能,能够独立操作各种生物化学实验,包括蛋白质纯化、酶动力学研究、基因表达和调控实验等。
我熟悉常用的分析仪器和技术,如聚合酶链式反应(PCR)、凝胶电泳等。
3. 问题解决能力:在实验过程中,我能够积极思考和解决遇到的问题。
我具备快速学习新技术和新方法的能力,在面对困难时能够主动寻求解决方案,并能够灵活应对实验中的变化。
4. 团队合作:我善于与他人合作,并具备团队合作的精神。
在实验室中,我能够与其他团队成员紧密合作,共同完成实验任务。
我能够有效沟通和协调,积极参与团队讨论,并与他人共同解决问题。
5. 解读与沟通:我能够熟练阅读与理解生物化学文献,并准确提取和总结重要信息。
我能够将复杂的科学问题以简明易懂的方式解释给非专业人士,并能够与他们进行有效的沟通。
综上所述,我在生物化学领域具备较为扎实的理论基础和实践技能,我渴望在这个领域中不断学习和成长。
我相信我的求知欲和实践能力将使我在未来的学习和工作中取得更大的成功。
返回目录一、糖发酵试验【原理】各种细菌所含有地分解糖(苷、醇)地酶类不同,对糖(苷、醇)地分解能力各有差异.对某一种糖有地细菌不分解,有地分解后仅产酸,有地分解后既产酸又产气,据此可用以鉴别细菌.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、伤寒沙门菌.培养基葡萄糖和乳糖发酵管【操作步骤】将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖发酵管内,℃培养~观察结果.【结果】观察结果时,首先确定细菌是否生长,若细菌生长则培养基混浊,然后再观察细菌对糖类分解地结果:①不分解糖:培养基颜色与接种前相比无变化,记录时以“一”表示;②分解糖只产酸不产气:培养基中地指示剂(溴甲酚紫)由紫色变为黄色,液体培养基中地倒管未发现气泡;若为半固体培养基,则培养基内未见气泡或琼脂断裂,记录时以“”表示;③分解糖既产酸又产气:除培养基中地指示剂颜色改变外,液体培养基中地倒管见有气泡;若为半固体培养基,则培养基内出现气泡或琼脂断裂,记录时以“⊕”表示.本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气“⊕”,伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“”,不分解乳糖“”.【注意事项】配制糖发酵管时内装地小倒管在接种细菌前应是无气泡存在地,否则不宜接种细菌.【思考题】糖发酵试验地原理及其结果判断.二、甲基红试验【原理】甲基红是一种指示剂,在以下时显示红色,在以上是为黄色.某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质,使培养基地降至以下,此时,加入甲基红指示剂后培养基呈红色(阳性).另一些细菌分解葡萄糖产生地酸可以进一步转化为醇、酮等非酸性物质,使培养基地在以上,加入甲基红试剂后呈黄色(阴性).【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、产气肠杆菌.培养基葡萄糖蛋白胨水.试剂甲基红试剂【操作步骤】. 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中,℃培养,观察结果..结果:在培养物中加入甲基红指示剂滴~滴,立即观察,呈现红色者为阳性,呈现黄色者为阴性.本试验大肠埃希菌为阳性,产气肠杆菌为阴性.【思考题】甲基红试验地原理及其结果判断.三、()试验【原理】某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸,丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境下被氧化成为二乙酰,后者与蛋白胨中精氨酸所含地胍基起作用,生成红色地胍缩二乙酰而呈现红色,为试验阳性.若培养基中胍基含量少,可加入少量含胍基地化合物如肌酸肌酐等(本试验加入α萘酚)可以加速其反应.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、产气肠杆菌.培养基葡萄糖蛋白胨水.试剂试验甲液(α萘酚酒精溶液)和乙液(溶液)【操作步骤】法:将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中,℃培养~,于培养物中加入试验甲液(α萘酚酒精溶液)和乙液(溶液)各滴,充分摇动试管,观察结果.结果:如立即或于数分钟内出现红色反应者为阳性;若不出现红色反应,可将试管置℃孵育后再行观察,仍无红色出现者为阴性.本试验大肠埃菌为阴性、产气肠杆菌为阳性.【注意事项】滴加试剂甲液和乙液后需摇匀,静置后才能看到红色化合物出现.【思考题】()试验地原理及其结果判断.四、吲哚()试验(又称靛基质试验)【原理】有些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中地色氨酸产生吲哚.吲哚本身无色,不能直接观察结果,但可与吲哚试剂中地对位二甲氨基苯甲醛形成红色地玫瑰吲哚,而呈现红色被肉眼识别.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、伤寒沙门菌.培养基蛋白胨水.试剂吲哚(靛基质)试剂【操作步骤】将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中,℃培养~.结果:沿培养管壁缓缓加入吲哚试剂数滴,静置半分钟,使成界面清楚地两层溶液,仔细观察培养液与吲哚试剂交界处,出现玫瑰红色者为吲哚试验阳性,不变色者为阴性.本试验大肠杆菌为阳性,伤寒沙门菌为阴性.【思考题】吲哚试验地原理及其结果判断.五、明胶液化试验【原理】某些细菌具有明胶酶,能分解明胶为多肽,多肽进一步分解为氨基酸,使明胶失去凝固力. 【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、普通变形杆菌.培养基明胶培养基【操作步骤】将普通变形杆菌和大肠埃希菌分别穿剌接种于明胶培养基中,置℃培养天~天,逐日观察结果(也可放℃培养,但在此温度下,明胶培养基呈液体状态,应将培养物置℃冰箱后再观察结果).结果:半固体状态地明胶培养基变为液体状态者为阳性,仍为半固体状态者为阴性.本试验大肠埃希菌为阴性,普通变形杆菌为阳性.【思考题】明胶液化试验试验地原理及其结果判断.六、苯丙氨酸脱氨酶试验【原理】某些细菌(如变形杆菌属),可产生苯丙氨酸脱氨酶,使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮酸,称为脱氨反应.加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸鳌合后即形成绿色化合物.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、普通变形杆菌.培养基苯丙氨酸琼脂斜面.试剂三氯化铁溶液()【操作步骤】将大肠埃希菌和普通变形杆菌分别接种于苯丙氨酸琼脂斜面上,于℃培养~.在斜面培养物上滴加三氯化铁溶液()观察结果.结果:出现绿色者为阳性,不出现绿色者为阴性.本试验变形杆菌为阳性,大肠埃希菌为阴性.【思考题】苯丙氨酸脱氨酶试验试验地原理及其结果判断.七、氨基酸脱羧酶试验【原理】具有氨基酸脱羧酶地细菌,分解氨基酸时可使氨基酸脱去羧基、生成胺和,称为脱羧反应,并使培养基变碱性,用指示剂即可检出.最常用地氨基酸有三种:赖氨酸,鸟氨酸,精氨酸. 【试剂与器材】.菌种普通变形杆菌、乙型副伤寒沙门菌.培养基氨基酸脱羧酶培养基.其他液体石蜡【操作步骤】将乙型副伤寒沙门菌和普通变形杆菌分别接种于氨基酸脱羧酶培养基和对照培养基内,并加入无菌液体石蜡,于℃培养天~天,每天观察结果.结果:培养~后对照培养基应保持黄色,而氨基酸脱羧酶培养基由黄变紫(溴甲酚紫为指示剂)或由绿变蓝(浪麝香草酚蓝为指示剂)者为阳性,仍为黄色者为阴性.若对照管为阳性则所有氨基酸脱羧酶试验皆无效,不能作出判定.沙门菌属中除伤寒沙门菌和鸡沙门菌外,其余沙门菌地鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均呈阳性;志贺菌属中除宋内志贺菌外,其余志贺菌鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试验均呈阴性.本试验乙型副伤寒沙门菌为阳性,普通变形杆菌为阴性.【思考题】氨基酸脱羧酶试验地原理及其结果判断.八、尿素酶试验【原理】具有尿素酶地细菌能分解尿素产生氨,使培养基呈碱性,酚红指示剂变为红色.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、普通变形杆菌.培养基尿素培养基.【操作步骤】将大肠埃希菌和普通变形杆菌分别接种于尿素培养基中,℃培养~观察结果.结果:培养基变红者为阳性.不变色者为阴性.本试验产气肠杆菌为阳性,大肠埃希菌为阴性. 【思考题】尿素酶试验地原理及其结果判断.九.枸橼酸盐(柠檬酸盐)利用试验【原理】细菌能利用铵盐和枸橼酸盐作为唯一氮源和碳源时,则可在枸橼酸盐培养基上生长,并分解枸橼酸盐为碳酸盐,使培养基变为碱性,指示剂(溴麝香草酚蓝)由绿色变为深蓝色者为枸橼酸盐(柠檬酸盐)利用试验阳性,若细菌不能利用枸橼酸盐作为碳源时,则细菌不能生长,培养基不变颜色(仍为绿色),为橼酸盐利用试验阴性.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、产气肠杆菌..培养基枸橼酸盐培养基.【操作步骤】将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于枸橼酸盐培养基中,℃培养~观察结果.结果:若有菌苔出现,培养基呈深蓝色者为阳性.细菌不能生长,培养基不变色(仍为绿色)者为阴性.本试验产气肠杆菌为阳性,大肠埃希菌为阴性【思考题】枸橼酸盐(柠檬酸盐)利用试验地原理及其结果判断.十、硝酸盐还原试验【原理】某些细菌能还原培养基中地硝酸盐,生成亚硝酸盐和氮气等.硝酸盐还原试验系测定还原过程中生成地亚硝酸盐.如培养基中有亚硝酸盐存在,则亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸,亚硝酸与对氨基苯磺酸作用,生成重氮苯磺酸,后者与α萘胺结合成为红色地–α萘胺偶氮苯磺酸.肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐.有些细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮气,如假单胞菌等,硝酸盐或亚硝酸盐还原生成气体氮或氧化氮,此为脱硝化或脱氮化作用. 【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、醋酸钙不动杆菌、铜绿假单胞菌..培养基硝酸盐培养基..试剂硝酸盐还原试剂甲液:对氨基苯磺酸醋酸乙液:α萘胺醋酸【操作步骤】将大肠埃希菌、醋酸钙不动杆菌、铜绿假单胞菌分别接种于硝酸盐培养基内,℃培养天~天,每天吸取培养液~,加入硝酸盐还原试剂(甲、乙液等量混合)观察结果.结果:加入硝酸盐还原试剂后即刻或内呈现红色者为阳性,不变色者为阴性.如欲检查有无氮气产生,可在试管内先加一只小倒管,再加入培养液,并使小倒管内充满培养液,然后滴加硝酸盐还原试剂,观察管内有无气泡产生,若有气泡表示有氮气生成.肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐,铜绿假单胞菌能产生氮气,醋酸钙不动杆菌为阴性.【注意事项】若加入硝酸盐试剂不出现红色,需检查硝酸盐是否已被还原,可于原试管内再加入少许锌粉,如出现红色,表示硝酸盐仍然存在.若不出现红色,表示硝酸盐已被还原为氨和氮.肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐,铜绿假单胞菌能产生氮气,醋酸钙不动杆菌为阴性.【思考题】硝酸盐还原试验地原理及其结果判断.十一、氧化酶试验【原理】某些细菌(如脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌等)具有氧化酶,能将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺氧化成紫红色地醌类化合物.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌..试剂氧化酶试剂,过氧化氢水溶液(临用前配制).其他滤纸条【操作步骤】用滤纸条分别沾取被检地铜绿假单胞菌和大肠埃希菌菌落,用毛细管吸取氧化酶试剂,滴加于滤纸条菌苔上(或直接将试剂滴加于培养皿菌落上).结果:阳性者立刻出现红色,继而逐渐加深(如加地试剂是盐酸四甲基对苯二胺,阳性呈蓝色).阴性不变色.脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌为阳性,肠杆菌科细菌为阴性.【注意事项】做氧化酶试验时,应避免接触含铁物质,否则易出现假阳性;氧化酶试剂在空气中易氧化,应经常更换配制地试剂.【思考题】氧化酶试验原理及其结果判断.十二、过氧化氢酶(触酶)试验【原理】有些细菌具有过氧化氢酶,能分解过氧化氢,释放出初生态氧,生成氧分子而出现气泡. 【试剂与器材】.菌种金黄色葡萄球菌和链球菌..试剂过氧化氢水溶液(临用前配制)..洁净玻片【操作步骤】分别挑取固体培养基上地待检菌落,置于洁净玻片上,滴加过氧化氢溶液数滴,观察结果. 结果:于半分钟内有气泡产生者为阳性,不产生气泡者为阴性.本试验金黄色葡萄球菌为阳性,链球菌为阴性.【思考题】过氧化氢酶(触酶)试验原理及结果判断.十三、酶试验【原理】酶可使长链水解成几个单核苷酸,组成寡核苷酸链.长链可被酸沉淀,而水解后形成地寡核苷酸则溶于酸,故于琼脂平板上加入盐酸后,可在菌落周围形成透明环.【试剂与器材】.菌种普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌..培养基琼脂平板..试剂盐酸【操作步骤】将普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌点种于琼脂平板上,于℃培养~后,用盐酸倾注平板,观察结果.结果:于菌落周围有透明环者为阳性,无透明环者为阴性.肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌为阳性,球菌中金黄色葡萄球菌也产生酶.本试验变形杆菌和金黄色葡萄球菌均呈阳性反应. 【思考题】酶试验原理及其结果判断.十四、克氏双糖铁()复合试验【原理】该培养基用酚红作指示剂,在酸性时呈黄色,碱性时呈红色.细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气,则斜面与底层均呈黄色,且有气泡.如只发酵葡萄糖不发酵乳糖,因培养基中葡萄糖含量较少(占乳糖量地十分之一),斜面所生成地少量酸可因接触空气被氧化挥发,因而斜面部分保持原来地红色;底层由于是在相对缺氧状态下,细菌发酵葡萄糖所生成地酸类物质不被氧化挥发而仍保持黄色.如细菌分解蛋白质产生硫化氢,则与作用生成黑色地,培养基变黑.【试剂与器材】.菌种乙型副伤寒沙门菌.培养基克氏双糖铁培养基.【操作步骤】将乙型副伤寒沙门菌接种于克氏双糖铁培养基(底层穿刺,上层斜面划线),℃培养.结果:细菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气,则上层和底层均呈黄色且有气泡产生;若细菌只发酵葡萄糖而不发酵乳糖,则底层变黄,上层仍为红色.如底层变黑,说明该菌能产生硫化氢,生成黑色地沉淀.【思考题】克氏双糖铁()复合试验地原理及其结果判断.十五、动力、吲哚及脲酶()复合试验【原理】培养基为含尿素、蛋白胨成分地半固体培养基,指示剂为酚红.具有色氨酸酶地细菌能分解蛋白胨中地色氨酸产生吲哚,加入吲哚试剂后,培养基与吲哚试剂地界面会变红;具有脲酶地细菌能分解尿素产氨,使整个培养基变碱呈红色;有动力地细菌沿穿刺线扩散生长.【试剂与器材】.菌种大肠埃希菌、普通变形杆菌..培养基培养基等..试剂吲哚(靛基质)试剂.【操作步骤】将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺接种于培养基,℃孵育~,观察动力和脲酶反应后,再滴加吲哚试剂.结果:大肠埃希菌动力阳性,吲哚阳性,脲酶阴性;普通变形杆菌动力阳性,吲哚阳性,脲酶阳性.【注意事项】.滴加吲哚试剂需沿管壁徐徐滴入,稍待片刻即观察培养基与吲哚试剂地界面是否出现红色化合物,随着时间地推移,红色化合物会扩散以至不清晰..滴加试剂甲液和乙液后需摇匀,静置后才能看到红色化合物出现..配制糖发酵管时内装地小倒管在接种细菌前应是无气泡存在地,否则不宜接种细菌..做氧化酶试验时,应避免接触含铁物质,否则易出现假阳性;氧化酶试剂在空气中易氧化,应经常更换配制地试剂.【思考题】动力、吲哚及脲酶()复合试验地原理、结果判断. 资料个人收集整理,勿做商业用途。