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gentleMACS™操作步骤1.背景信息在许多实验中，需要用到单细胞悬液，如用MACS®技术分选细胞时，要想获得高纯度和回收率的话，单细胞悬液就很重要。
德国美天旎生物技术有限公司开发的gentleMACS™分离器能够提供优化的程序，用于从不同的组织中获取单细胞悬液。
这些组织包括小鼠脾脏，肝脏，肺脏，脑组织等。
使用C管，能够在一个密闭的系统中进行全自动的组织分离，可以保证组织操作的无菌，以及能够同时处理2个组织样本。
2. 分离小鼠脾脏的操作步骤2.1 需要的试剂和仪器●gentleMACS 分离器●gentleMACS C 管(# 130-093-237)●细胞滤器，如30 μm n尼龙滤网（Pre-Separation Filters# 130-041-407)●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)2.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠脾脏的重量约为80–120 mg (BALB母鼠, 6–7 周龄).1. 将小鼠脾脏转移到gentleMACS C 管中，按照脾脏的数量加入缓冲液:1–2 个小鼠脾脏: 3 mL3–4个小鼠脾脏: 6 mL5–6 个小鼠脾脏: 9 mL2. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域3. 开机，选择合适的分离程序：1–2 个小鼠脾脏: m_spleen_01.3–6个小鼠脾脏: m_spleen_04.4. 运行gentleMACS 程序m_spleen_01. 或m_spleen_04.5. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管6. (可选) 以300×g 室温下离心2分钟。
7. 去除分离的组织块，将细胞悬液通过一个预分选滤器（1-2个脾脏），该预分选滤器放置于15mL管子中。
美天旎公司磁珠分选产品标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads）MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用2 0－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。
此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column）MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。
此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。
CD133是近年在干细胞领域研究较为活跃的细胞膜糖蛋白之一,常表达于未成熟的造血干细胞或祖细胞,新近有报道认为它在脑肿瘤、前列腺癌、小鼠的Lewis肺癌、B16黑色素瘤的干细胞中均有表达,已被认为是这些肿瘤干细胞的标志之一。
miltenyi biotec（德国美天旎）拥有CD133全系列的全球专利。
美天旎部分CD133：一.CD133的分子结构人CD133抗原为5次跨膜糖蛋白，目前发现的同源性抗原有CD133_1和CD133_2，其基因分别定位在人类的4号和2号染色体上，分析CD133的基因结构发现，CD133_1基因至少含有27个外显子，CD133_2基因比CD133_1基因少1个27 bp的4号外显子。
CD133_1抗原cDNA全长为3 794 bp，其中5′端有37 bp的非翻译区，3′端有1 159 bp的UTR，中间为2 598 bp的开放阅读框，编码865个氨基酸的蛋白。
转录起始密码子ATG位于38bp 处，ATG之后还有一编码19个氨基酸的信号肽序列,终止密码子位于第2 763位,第3 906核苷酸处有一长20 bp的polyA序列。
CD133_1与CD133_2的相对分子质量分别为120 KD 和112 KD，CD133_2由含856个氨基酸的肽链组成，比CD133_1少9个位于E1区的氨基酸[2]。
在发现人CD133的同年，在小鼠中也发现了CD133_1的同源性抗原并命名为Prominin_1，二者具有60％的相似结构，之后，成功克隆出Prominin_2，与Prominin_1和人CD133分别有29％和26％的相似结构，认为是Prominin_1的同源性抗原。
CD133的功能目前尚不清楚，存在于C端的酪氨酸暗示它可能是通过酪氨酸残基磷酸化作用而发挥级联效应的生长因子受体。
二. CD133阳性的肿瘤干细胞利用某些干细胞标志物与肿瘤细胞标志物相结合的方法确定肿瘤干细胞特异性的标志物，是当前肿瘤干细胞筛选的主要手段。
单核细胞诱导DC研究工具——全套解决方案Mo-DCs、Monocyte Derived Macrophage（MDM）的研究工具——美天旎为您的研究提供全套解决方案1、样本制备——成功实验的良好开端• 专门用于去除细胞团块的预选滤器，单细胞悬液的保证，高质量分选的开始。
Product Order Nop re-Separation Filters,30 μm #130-041-4072、细胞分选——MACS技术，细胞分选的金标准• 高纯度、高得率的细胞分选；• 50nm磁珠、无毒、可生物降解；• 与下游实验相兼容，e.g.流式检测、细胞培养、分子分析等。
Product Order NoCD14 MicroBeads, human #130-050-201CD14 MicroBeads, human –lyophilized# 130-097-052 Monocyte Isolation Kit II,human# 130-091-153 Pan Monocyte Isolation Kit,human# 130-096-5373、细胞分析——精确流式检测的理想试剂• Vio-Dye系列流式抗体，亮度高，补偿小，特异性高，多色流式检测的新选择；• 传统荧光素系列流式抗体，特异性高，亮度高，性价比高，流式检测的理想试剂。
Mo-DCs 检测相关流式抗体，试剂盒Product Order NoMo-DC Differentiation Inspector #130-093-567CD14，Human（FITC，APC，PE，PerCP，VioBlue，VioGreen，PE-Vio770，APC-Vio770，PerCP-Vio700）CD209，Human（FITC，APC，PE）CD83，Human（PE，APC）CD86，Human（FITC，APC，PE，APC-Vio770，PerCP-Vio700）CD80，Human（PE,APC）HLA-DR，Human（FITC,APC,PE, VioBlue, PerCP）4、细胞培养——品质高，种类全，可定制细胞因子•从科研到临床，提供科研级、优质级和GMP级细胞因子可供选择；•包装大小灵活，可顾客定制。
有了美天旎，我反手就是一批理想的单细胞悬液！对大家来说，实体组织处理成单细胞悬液最难的是什么？目前，把实体组织样本处理成单细胞悬液，最长用的两大方法：物理法：简单粗暴！可以用剪刀剪、昂贵的研磨器磨，但是在实际工作过程中，我们会发现这种方法目前并不是万能的，有些组织（比如：骨骼神经皮肤等）还是需要配合酶消化。
酶消化法：就涉及到选择什么酶，用多少浓度，消化多少时间，如何中止等等细节，考虑这些问题也耗费了我们大量的时间和精力。
但是有了美天旎全自动组织处理器，情况就不一样了！仪器全称是：GentleMACS Octo Dissociator with Heaters中文名称是：全自动八通道加热组织处理器使用Gentle能够能够温和、高效的解离实体组织，如肝脏、肺脏、脑、肿瘤、拟胚体、骨骼肌、神经组织、脐带、皮肤等，得到完美的单细胞悬液！50多种程序供您选择！#样本制备#小助手一：组织解离试剂盒预先滴定好浓度的酶溶液及酶解时间，即用型组织解离试剂盒让您的实验更高效、可重复性更高；同时，酶溶液已经实验验证，可以很好地保护细胞表面抗原，因此得到的单细胞活力高、表位完整，不影响下游流式等实验。
现有肿瘤组织解离试剂盒、新生鼠心脏解离试剂盒、骨骼肌、皮肤、脑、神经球等近30种组织解离试剂盒，常见组织均可找到相应的解离试剂盒。
#样本制备#小助手二：细胞滤器用于去除组织解离后的细胞团块和碎片；三种规格（30µm，70µm和100µm）；有排气槽的设计，因此不会出现液体俘获和溢出，适用于不同规格的试管和分选柱。
#样本制备#小助手三：混悬仪✧自带充电电池，运行不依附电源插头，能独立的运行于各种环境中：既能使用在普通的实验台上，也能穿梭于冰箱与孵箱之间（2 –42℃）！✧使用灵活：配有不同的试管架，可放置不同规格的管子：0.5 –50 mL。
✧转速可调：机器自设三种旋转速度，间隔时间亦可调，可以温和、缓慢的旋转，有利于脆弱样本的混悬。
美天旎细胞治疗平台CliniMACS系统简介第一部分、德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍第二部分、CliniMACS系统在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACS细胞分选仪及其配件介绍二、CliniMACS CD34系统的安全性德国美天旎生物技术有限公司上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301室200051电话：（86 21）62351005传真：（86 21）62350953服务热线：800 820 2606北京市东城区朝阳门内大街银河SOHO D座50723室100010电话：（86 10）64107101传真：（86 10）64100990第一部分德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍德国美天旎生物技术有限公司（Miltenyi Biotec GmbH）是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗为我公司专利产品。
我公司总部位于德国科隆，在科隆和德国北部罗斯托克均有cGMP生产机构。
我们的产品有免疫磁珠、特异性细胞及蛋白质或者DNA/RNA分选用的MACS分选设备、单克隆抗体、无菌溶液、基础和特殊培养基、血液/血浆治疗用的生物学吸附剂、LIFE18血浆分离机、流式细胞仪及相关耗材。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了可在每个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术原理MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司的专利产品，是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
