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植物低聚糖提取和生物活性鉴定
李宏潮;王虹;胡道芬;余露
【期刊名称】《华北农学报》
【年(卷),期】1992(000)001
【总页数】1页(P60)
【作者】李宏潮;王虹;胡道芬;余露
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S1
【相关文献】
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果糖及低聚果糖的分离、纯化目录一、除杂 (3)二、脱色 (3)1.活性炭脱色 (3)2.新生态碳酸钙法脱色 (3)3.树脂脱色 (3)3.1 LSA-8吸附树脂 (3)3.2 D318树脂 (3)4.离子交换 (3)三、提纯 (4)1．分子量不同的糖的分离 (4)1.1 纳滤分离 (4)1.2 分级纳滤分离 (4)1.3 柱层析凝胶分离 (5)2.相同分子量的糖的分离 (5)2.1 葡萄糖和果糖的分离 (5)2.1.1化学试剂法 (5)2.1.2吸附分离 (5)2.1.3 GOD-CAT双酶法氧化 (6)2.1.4复盐法 (6)2.1.5连续色谱分离（CSEP） (6)3.手性拆分 (7)3.1分子印迹聚合物分离手性分子 (7)3.1.1功能单体的选择 (7)3.1.2 M I P s的制备 (7)3.2手性膜拆分法 (8)3.3优先结晶方法 (8)3.4 化学拆分法 (9)3.4.1生成非对应异构体拆分法 (9)3.4.2生物化学拆分法 (9)参考文献 (10)一、除杂1.通过低温下冷冻和用乙醇-正己烷除去油脂和脂类物质；2.加入磷酸和氢氧化钙，絮凝沉淀出果胶；3.用盐析法、等电点法、溶剂沉淀法（sevage法）除去蛋白质；4.加淀粉酶除去淀粉；5.用阳离子聚丙烯酞胺吸附溶液中带负电荷的部分如蛋白质、多糖、蹂质、树胶、淀粉和单宁等，最佳条件52℃，pH=6，CPAM添加量为0.08%，絮凝时间3h.二、脱色1.活性炭脱色通过极差最优化分析，确定出最佳影响因素pH>脱色温度>脱色时间>活性炭用量，最优化工艺条件为:活性炭用量1.4%，脱色温度70℃，pH值3.8，脱色时间50min.【1】经试验验证的透光率为99.7%，同时在实验过程中用高效液相色谱方法检测活性炭脱色后的低聚果糖溶液中低聚果糖含量，结果显示低聚果糖在脱色前后并无损失.2.新生态碳酸钙法脱色在低聚果糖液中加入Ca(OH)2混合均匀后，再缓慢通入CO2来反应生成碳酸钙，这时新生态碳酸钙便与低聚果糖液中的色素发生吸附作用，从而达到脱色的效果.在原样液锤度:190Bx透光率:92.31%，pH值:6.4电导率:26mV的条件下，测试结果不如活性炭.【1】3.树脂脱色3.1 LSA-8吸附树脂在温度为70℃，pH为6的条件下用脱色2h，实验结果色素的吸附率高达92.35%；【14】3.2 D318树脂树脂用量为低聚果糖样品溶液的3.7%，pH=5.2，脱色时间3h，脱色温度为52℃.4.离子交换钟振声等选择了D392大孔阴离子交换树脂对大豆低聚糖进行脱色，在与低聚糖比为1:11的条件下，常温脱色3-4小时，色素的吸附率达86%.【14】三、提纯低聚果糖溶液中非有效成分葡萄糖、果糖、蔗糖，其相对分子质量分别为180，180，342；有效成分蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的相对分子量分别为504，666，828.1．分子量不同的糖的分离1.1 纳滤分离最佳条件：跨膜压差为1.1 MPa，料液浓度为10 g/100 g，温度40℃，循环流量6 L/min， pH=6.【13】物料初始浓度30g/L、操作压力0.2Mpa、纯化15倍.【12】1.2 分级纳滤分离先将样品通过0.3微米的微滤膜，将其透过液作为分级纳滤的母液.【1】采用全回流方式，对样品共进行两级纳滤膜分离处理和一次反渗透膜回收处理.第一级纳滤膜分离，在0.3MPa，25℃，初始料液浓度为10倍稀释下，选用JN 1812-34纳滤膜，对原始料液进行分离，之后三倍洗脱，截留蔗果五糖；第二级纳滤膜分离，在0.4MPa，25℃下，选用DK1812C-47D纳滤膜，对一级纳滤的透过液进行分离，截留蔗果三糖与蔗果四糖；经过两级纳滤和反渗透分离，可以将低聚果糖溶液按其所含溶质的不同分为三部分，分别>800部分为蔗果五糖、200^800部分为低聚果糖和<200部分为葡萄糖、果糖及部分蔗糖混合物.最后对二级透过液进行反渗透膜过滤，回收其中的葡萄糖、果糖等成分和大量的水.工艺流程图如下：为了避免因膜污染而造成的实验误差，每处理完一次样品后，均用蒸馏水对纳滤装置和纳滤膜进行3次清洗，每次清洗时间约为8min.如果长时间(大于一周)应该先用浓度为2%的表面活性剂进行清洗，最后用蒸馏水冲洗至无泡沫为止.将清洗干净的膜管保存在0.5%的甲醛溶液或1%的亚硫酸氢钠溶液中，以防止长霉长菌，损坏膜表面层.实验证明，冲洗时间和浸泡时间分别为60 min和90 min时二者都可使膜的纯水透过通量恢复系数达到100%左右.【13】1.3 柱层析凝胶分离吸取一定量低聚果糖(过0.45微米的膜)均匀滴加在层析柱聚丙烯酞胺凝胶表面，打开底部阀门，待低聚果糖刚好渗入凝胶时关闭阀门，用少量的脱气超纯水洗下残留在柱壁上的糖液，打开阀门让洗脱液刚好渗入凝胶表面后关闭.接上泵开始洗脱，同时将柱下端接在蒸发光散射检测器(N流速为2.5L/min，温度为100℃)上直接进行检测分析.2【1】在1.6cm*100cm的玻璃柱上最佳的层析条件:洗脱速度0 2 mL/min上样量0. 5 mI_(样液质量浓度0.4g/ml)、柱温40℃，以Megaz]aae公司的标准品为对照，经HPLC 和MS分析，证明层析分离所得组分峰4峰、3和峰2分别是蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。
低聚果糖分析方法及其检测标准的探讨低聚果糖（fructo-oligosacchrides，FOS）又名蔗果低聚糖、寡果糖或蔗果三糖族低聚糖。
近年研究发现，低聚果糖具有双向调节人体肠道微生态的功能，既能增加肠道内双歧杆菌的数量，又能同时抑制其他有害菌的生长[1-4]。
而且低聚果糖很难被人体消化吸收，是一种低能量的糖，不会引起肥胖[5]。
因此，低聚果糖成为近年来功能食品的研发热点之一。
目前检测低聚果糖含量的方法主要有纸色谱分离法、气相色谱法和高效液相色谱法[6]，其中，高效液相色谱法最为简便和准确。
但该法在实际使用中，包括国标规定的方法中，仍存在某些值得商榷的定性定量问题。
本文拟根据我们的研究结果与经验就这些问题进行初步的探讨。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器乙腈（色谱纯），美国天地公司；果糖、葡萄糖、蔗糖，纯度≥98%，美国Sigma公司；低聚果糖样品、超纯水实验室制备。
FA1104电子天平，上海精天电子仪器厂；Waters 600 高效液相色谱仪，配Waters 2414示差折光检测器，美国Waters 公司；Waters synapt UPLC-Q-TOF质谱仪，美国Waters公司。
1.2 色谱条件色谱柱：Waters NH2 分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈/水=70/30；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
1.3 UPLC-Q-TOF串联质谱条件(1) UPLC条件：色谱柱：Waters NH2 分析柱（4.6mm×200mm，3μm）；流动相：乙腈/水=70/30；流速：0.4mL/min；柱温：30℃；进样量：2μL。
(2) Q-TOF MS条件：质谱采用电喷雾电离源(ESI)，TOF离子飞行方式采用V模式。
四极杆质量扫描范围m/z 150~2000，一次扫描时间为0.1s，离子源温度100℃，脱溶剂氮气流速400 L/h。
功能性低聚糖分离纯化方法点击次数： 307 发布时间： 2007-2-1功能性低聚糖是指对人、动物、植物等具有特殊生理作用的单糖数在2~10之间的一类寡糖.它的甜度一般只有蔗糖的30%~50%,具有低热量、抗龋齿、防治糖尿病、改善肠道菌落结构等生理作用,在功能性食品的配料中十分重要,正日益受到消费者的青睐.功能性低聚糖的生产一般是以淀粉或蔗糖为原料利用糖苷酶的糖基转移作用进行的.由于糖苷酶对底物专一性要求不高的催化特性,功能性低聚糖的转化率一般在50%左右,产品中除含有目标产品功能性低聚糖外,随产品种类不同还含有大量的葡萄糖、蔗糖、麦芽低聚糖等副产物.这些副产物的存在,在很大程度上降低了功能性低聚糖的生理功能.因此,功能性低聚糖的分离纯化已成为生产厂家亟待解决的研究课题.然而,由于功能性低聚糖产品成分复杂且往往性质较为接近,其分离纯化就变得比较困难,常规分离法如结晶法难以适用.目前虽已有数种功能性低聚糖产品的纯度达到90%以上,但由于生产成本高而产销量极低.开发功能性低聚糖的新型低成本分离方法将大有前途. 1、常见功能性低聚糖的组成酶法生产的功能性低聚糖除含有功能性低聚糖外,往往还含有大量非功能性低聚糖成分,如葡萄糖、蔗糖、乳糖等,这些成分在很大程度上削弱了功能性低聚糖的生理功能和保健作用.例如,葡萄糖和麦芽低聚糖的存在,不仅降低了低聚异麦芽糖难发酵、低热量的特性,而且削弱了其抗龋齿作用和对双歧杆菌的增殖功能。
2、功能性低聚糖的分离纯化方法⑴色谱柱分离法色谱柱分离法是基于混合物中各组分与色谱柱的填料间结合力强弱的差异,即各组分在固定相(填料)与流动相间分配系数不同的性质而使混合物中难吸附与易吸附组分分离的技术.适用于分离糖类的色谱柱填料有铝矾土、碱式铝矾土、硅胶、石英砂、海砂、沸石、活性炭、离子交换树脂等色谱柱分离法的主要优点在于通过数百次连续循环操作、重复使用吸附剂,可以充分利用材料、能量和时间.但迄今为止,只有以离子交换树脂为填料的色谱柱成功用于糖类的工业化分离纯化。
