胡萝卜组织培养系统实验
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胡萝卜组织培养教学设计
引言概述:
胡萝卜组织培养是生物学实验中常见的实验项目之一,通过培养胡萝卜组织,
可以观察细胞的生长和分化过程,为学生深入了解植物细胞生物学提供了实践机会。
本文将介绍胡萝卜组织培养教学设计的相关内容,包括实验目的、实验材料、实验步骤、实验结果分析和实验注意事项。
一、实验目的
1.1 观察植物细胞的生长和分化过程。
1.2 理解植物细胞培养的原理和方法。
1.3 学习细胞培养技术的操作步骤。
二、实验材料
2.1 需要准备的材料包括:胡萝卜、琼脂培养基、生长激素等。
2.2 实验器材包括培养皿、移液器、显微镜等。
2.3 实验环境要求无菌条件,确保实验结果的准确性。
三、实验步骤
3.1 从胡萝卜中取出组织样本,进行消毒处理。
3.2 将组织样本切割成小块,放入含有生长激素的琼脂培养基中。
3.3 将培养皿放置在恒温箱中,定期观察组织的生长情况。
四、实验结果分析
4.1 观察胡萝卜组织在培养基中的生长情况。
4.2 分析细胞的分化和增殖情况。
4.3 结合显微镜观察细胞的形态和结构,进行实验结果的定量分析。
五、实验注意事项
5.1 实验过程中要注意无菌操作,避免细菌污染。
5.2 实验结束后要及时清理实验器材,保持实验室整洁。
5.3 学生在进行实验时要注意安全,避免发生意外情况。
结语:
通过胡萝卜组织培养教学设计,学生可以深入了解植物细胞的生长和分化过程,提高实验操作能力和科学素养。
希望本文的介绍可以帮助教师更好地设计和开展胡萝卜组织培养实验,为学生的学习提供更多的实践机会。
胡萝卜组织培养教学设计引言概述:胡萝卜是一种常见的蔬菜,其组织培养在生物学教学中具有重要意义。
通过胡萝卜组织培养实验,学生可以了解植物生长发育的基本原理,培养实验操作能力和科学研究精神。
因此,设计一套科学合理的胡萝卜组织培养教学方案至关重要。
一、实验目的1.1 匡助学生了解植物细胞培养的基本原理和技术。
1.2 培养学生的实验操作能力和观察分析能力。
1.3 培养学生的科学研究意识和团队协作能力。
二、实验材料和仪器2.1 胡萝卜组织样本:新鲜胡萝卜块或者悬浮液。
2.2 培养基:含有适当营养物质和植物激素的培养基。
2.3 实验器材:培养皿、移液器、显微镜等。
三、实验步骤3.1 准备工作:将胡萝卜组织样本切割成小块,消毒处理。
3.2 培养基配置:根据实验要求配置含有适当植物激素的培养基。
3.3 培养操作:将胡萝卜组织样本置于培养基中,定期观察生长情况。
四、实验观察和分析4.1 观察胡萝卜组织的生长情况:记录组织的颜色、形态和大小变化。
4.2 分析培养结果:根据观察结果分析植物细胞的分化和增殖情况。
4.3 讨论实验意义:与学生一起讨论实验结果,引导学生总结子验经验。
五、实验总结与展望5.1 总结子验成果:总结子验过程中遇到的问题和解决方法,总结子验结果。
5.2 展望未来研究:探讨胡萝卜组织培养在生物学研究中的应用前景。
5.3 提出改进建议:根据实验过程中的经验,提出改进教学设计的建议。
通过以上胡萝卜组织培养教学设计方案,可以匡助学生深入了解植物细胞培养的原理和技术,培养他们的实验操作能力和科学研究意识,为未来的科学研究打下坚实基础。
同时,教师在实施教学过程中也要根据学生的实际情况进行调整和改进,不断提高教学质量和教学效果。
胡萝卜植物组织培养植物组织培养实验教案一、实验目的和要求1、了解和掌握植物组织培养的原理、方法和应用2、将胡萝卜根培养成愈伤组织二、主要实验仪器与器材1、电子天平2、灭菌锅3、无菌操作台4、植物组织培养室5、新鲜胡萝卜根6、配制培养基的化学药品及器材三、实验内容1、MS培养基母液的配置和器材的准备由实验员配制和准备。
2、植物组织培养的原理、方法和应用的讲解(1)原理:植物细胞的全能性。
(2)方法:取外植体→灭菌→接培养基→诱导愈伤组织→诱导生根发芽→植株→移栽。
(3)应用:①理论方面;②实际应用。
(4)实验过程中特别注意的问题:无菌。
3、MS培养基的配制与灭菌1升培养基:大量元素 100 毫升、微量元素 10毫升、铁盐 10毫升、有机物 10毫升、肌醇 100 毫克、10% 2,4-D 10毫升、琼脂10克、pH 5.8。
分装100毫升三角烧瓶,每瓶15毫升,牛皮纸包扎后于121℃下灭菌20分。
4、胡萝卜根外植体的接种、培养和愈伤组织诱导取胡萝卜根→用自来水冲洗→削皮→切取中间约50毫米一段→放70%乙醇中浸泡5分→用酒精烧表面及两端→刮去烧掉的皮及两端→切成5毫米圆片→切成5立方毫米组织块(保留形成层)→接种培养基→25℃下培养→观察愈伤组织生长情况(包括污染状况)。
5、写出实验报告四、实验分组及准备材料本实验每组分若干小组,每小组5人,每小组须准备如下材料:(1)500毫升试剂瓶 1只(包扎灭菌)(2)配1000毫升70%酒精(3)做棉花球(装1000毫升试剂瓶中)(4)包扎10套培养皿(灭菌)(5)包扎100毫升烧杯1只(灭菌)(6)包扎接种器材1套(包括镊子6把、解剖刀柄4把)(7)配MS培养基500毫升,分装20只100毫升三角瓶,每人4只,包扎灭菌。
胡萝卜组织培养教学设计引言概述:胡萝卜是一种常见的蔬菜,其组织培养技术在植物生物技术研究中起着重要作用。
本文将介绍胡萝卜组织培养的教学设计,包括实验目的、实验步骤、实验材料和实验结果的分析等内容。
一、实验目的:1.1 了解胡萝卜组织培养的原理和意义;1.2 学习培养胡萝卜愈伤组织的方法;1.3 掌握胡萝卜愈伤组织的分化与再生过程。
二、实验步骤:2.1 材料准备:2.1.1 胡萝卜种子的消毒处理;2.1.2 培养基的制备。
2.2 组织培养的操作步骤:2.2.1 胡萝卜愈伤组织的诱导;2.2.2 胡萝卜愈伤组织的培养与增殖;2.2.3 胡萝卜愈伤组织的分化与再生。
2.3 实验观察和记录:2.3.1 观察愈伤组织的形态和颜色变化;2.3.2 记录愈伤组织的生长速度和增殖情况;2.3.3 分析愈伤组织的分化和再生能力。
三、实验材料:3.1 胡萝卜种子;3.2 无菌培养基;3.3 愈伤组织诱导剂;3.4 培养器具(包括培养皿、培养瓶、移液器等);3.5 显微镜。
四、实验结果的分析:4.1 胡萝卜愈伤组织的诱导效果;4.2 胡萝卜愈伤组织的生长速度和增殖情况;4.3 胡萝卜愈伤组织的分化和再生能力。
五、实验的意义和应用:5.1 胡萝卜组织培养技术在植物生物技术研究中的应用;5.2 胡萝卜组织培养技术在植物育种中的意义;5.3 胡萝卜组织培养技术在植物病害防治中的潜力。
总结:通过本文的介绍,我们了解了胡萝卜组织培养教学设计的内容和步骤。
胡萝卜组织培养技术的掌握对于植物生物技术研究、植物育种和植物病害防治等领域具有重要意义。
希翼本文能够为胡萝卜组织培养教学提供一定的参考和指导。
本科学生综合性实验报告
学号:姓名:
学院:生命科学学院专业、班级:班
实验课程名称:胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞
悬浮及体细胞胚胎发生培养实验
教师:
开课学期:至学年学期
填报时间:年月日
云南师范大学教务处编印
一.实验设计
二.实验报告
记录污染情况及原因分析
可能是在超净工作台中操作时不规范,导致了污染。
(三)胡萝卜愈伤组织继代增殖培养
(1)实验现象
图1胡萝卜愈伤组织继代增殖培养结果
(2)实验结果
表3胡萝卜愈伤组织继代增殖培养结果
总接种瓶数
2 总接种块数30
污染瓶数0 污染块数0
未污染瓶数 2 未污染块数30
未污染愈伤组织发生块数30 愈伤组织发生率100%
愈伤组织发生情况两个瓶内的胡萝卜愈伤组织长势较好
记录污染情况及原因分析两瓶愈伤组织均未被污染,长势较好,愈伤组织
疏松透明
(四)胡萝卜细胞悬浮培养
(1)实验现象
图2胡萝卜细胞悬浮培养结果
(2)实验结果
结果可由上图所示,细胞长势较好,经过过滤之后,将滤液在显微镜下观察,可看到单细胞。
(五)胡萝卜愈伤组织器官分化培养
现象:本实验还在进行当中,但是初步可以观察到的现象是:细胞在见光的情况下,进行叶绿体的组建,愈伤组织已经由乳白色渐变为淡绿色。
(如图3所示)
图3胡萝卜愈伤组织器官分化培养初步现象。
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍:胡萝卜是一种常见的蔬菜,具有丰富的营养价值和药用价值。
为了提高胡萝卜的产量和质量,需要进行胡萝卜组织培养的教学设计。
本文将详细介绍胡萝卜组织培养的步骤、实验材料和方法,以及预期结果和教学评价。
一、实验目的:通过胡萝卜组织培养实验,使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术,培养学生的实验操作能力和科学研究意识。
二、实验材料:1. 胡萝卜种子2. 细菌消毒液3. 无菌培养基4. 培养皿5. 无菌操作器具(镊子、剪刀等)三、实验步骤:1. 准备工作:a. 将胡萝卜种子放入细菌消毒液中浸泡10分钟,然后用蒸馏水冲洗3次,以去除种子表面的细菌。
b. 使用无菌操作器具将胡萝卜种子切成小块(约0.5cm)。
c. 准备无菌培养基,将培养基倒入无菌培养皿中,每一个培养皿放入适量的培养基。
2. 组织培养:a. 将切好的胡萝卜种子块放入培养皿中的培养基上。
b. 盖上培养皿盖,密封好。
c. 将培养皿放入恒温培养箱中,设置适当的温度和光照条件。
3. 观察和记录:a. 每天观察培养皿中胡萝卜组织的生长情况,记录生长速度和组织的颜色变化。
b. 每隔一段时间,取出培养皿,观察并记录胡萝卜组织的形态和质地。
四、预期结果:经过一段时间的培养,估计胡萝卜组织将开始生长,并浮现白色或者黄色的小苗。
随着培养的进行,胡萝卜组织将逐渐增多,并形成较大的胡萝卜组织块。
五、教学评价:1. 实验操作能力:学生是否能够熟练操作无菌技术,是否能够正确使用实验器具。
2. 实验数据记录:学生是否能够准确记录实验过程中的观察结果,并进行合理的数据分析。
3. 实验讨论能力:学生是否能够根据实验结果进行讨论和分析,提出合理的结论,并与理论知识相结合。
六、教学延伸:1. 学生可以进一步探索胡萝卜组织培养的影响因素,如不同培养基成份、不同温度和光照条件等对胡萝卜组织生长的影响。
2. 学生可以进行胡萝卜组织培养的实验设计和结果分析,提出自己的研究问题,并进行实验验证。
胡萝卜的组织培养-北师大版选修1 生物技术实践教案一、实验目的1.了解植物的组织培养技术,掌握常用植物的组织培养方法;2.学习如何构建植物组织培养的基本实验流程;3.初步探究不同植物体部位对于组织培养的影响。
二、实验设备和物料1. 设备不锈钢工作台、蒸馏水机、显微镜、移液器、扩展罐、手套箱、烧杯、移液管、无菌操作台等。
2. 物料•pH=5.8~6.2的MS培养基•10~20g/L蔗糖•不同部位的胡萝卜组织,还包括含有胡萝卜素的幼茎、幼芽、茎叶、幼根等部位。
•NaN3或酒精(用于杀死胡萝卜的外界细菌)•过氧化氢•活性炭(用于吸收干燥剂带来的湿度)三、实验流程1. 组织消毒将胡萝卜取出,剪去较老的部分,然后将鲜活的胡萝卜以及所需要的其他部位进行取样切碎,然后液体表面无菌处理(消毒),传统方法为用70%的乙醇漂流消毒,维持采样器具无菌工作等级。
2. 组织培养取一个无菌组织,放入MS培养液中,控制装置培养10d ~ 14d。
3. 生长检测可以用显微镜观察植物组织的生长情况。
4. 分析分析组织培养的成功率以及植物组织的生长情况,探究胡萝卜不同组织的生长特性。
四、实验注意事项1.操作前要进行完备无菌措施,保证实验结果的准确性;2.胡萝卜取样均要使用锐利的工具,并保证其在取样工具的范围内;3.胡萝卜的处理、培养、检测各个环节都要严格按照操作规范进行,否则会影响实验结果;4.植物组织培养液的温度、光照、湿度应当根据实验情况进行调整,操作时要进行多次调整。
五、实验结果分析经过实验,胡萝卜的组织培养成功率较高,可以通过MS培养液为基础进行培养。
同时,在实验中发现,不同部位的胡萝卜组织对于生长的影响较大,含胡萝卜素的部位如茎叶组织生长较快,而幼根组织生长较缓慢。
胡萝卜组织培养系统实验标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称:细胞工程实验院系:生命科学学院2013级生物技术(国家生命科学与技年级专业:术基地班)姓名:杨梦梅选课号:学号:座号:A2开课日期:学期:2015秋季学期任课教师:吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者:杨梦梅同组实验者:赵姗(云南大学生命科学学院, 昆明 650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT;继代培养1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系;细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期(生长平台)。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspensioncell lines of Carrots’ callusAbstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, wecan obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus inhigh density胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富,约含有88%的水、6%~8%糖、1%~2%植物纤维,0.7%~1.2%蛋白质、1%灰份及0~3%脂肪,及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国, 胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。
因此, 加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来, 随着生物技术与分子生物学技术的快速发展, 作为生物技术研究的理想材料, 许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展, 特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多, 因此继续深入研究还是很有必要的。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基和细胞悬浮培养的条件进行探讨, 为其次生代谢产物α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素(维生素A前体)的生产以及将来的工厂化和分子生物学研究打下基础。
1材料和方法1. 1 材料来源胡萝卜肉质根自农贸市场购买.1. 2 方法1. 2. 1 MS培养基的配制1000ml1)用大烧杯取蒸馏水100-120ml2)依次用移液管量取加入母液:100ml大量(10x)、100ml大量钙盐(10x)、10ml微量I(100x)、1ml微量II(1000x)、10ml铁盐(100x)、10ml有机(100x)、100ml有机肌醇(10x)、以及适当含量植物激素。
3)称取30g蔗糖加入,搅拌直至全部溶解,作为1号溶液备用。
4)称取9g琼脂,用量筒量取500ml蒸馏水一起加入1000ml体积白瓷缸中,放在电炉上一边加热一边搅拌,加热直至清澈无沉淀。
将1号溶液加入,继续加热搅拌,至将要沸腾,离火。
5)用pH试纸调pH至。
6)在白瓷缸中定容至1000ml,搅拌均匀。
7)分装至350ml培养瓶中每瓶约40~50ml。
121℃高压灭菌20min。
探究实验:( 1) 以胡萝卜肉质根形成层为外植体诱导。
用自来水洗净胡萝卜肉质根, 用小刀切成长约6~7cm块段, 将其在 75% 的酒精中消毒 60s, 再用0. 1% 的升汞消毒 10min或用20%次氯酸钠水溶液消毒20min, 最后用无菌水漂洗三遍每遍5~10min..(2)消毒好的胡萝卜根块, 切去形态学下端的5~10mm厚的一片, 留下部分用消毒好的小刀, 沿截面横切成厚度 3~5mm 左右的小圆片, 然后将小圆片的韧皮部和木质部切去, 留下形成层, 再切成长 3mm, 宽 1. 5mm, 高 3~5mm 的小长块, 分别接种在M1、M2、M3、M4的诱导培养基上.(3)获得愈伤后进行继代培养, 培养环境条件与诱导培养相同.1. 2. 3胡萝卜愈伤组织的继代(1)从培养瓶中取出愈伤组织,置于无菌培养皿内,用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒,放在无激素的新鲜培养基表面,用镊子轻轻压实,每个培养瓶接种2~3个切块。
用记号笔标注操作者、组别和日期。
(2)3~4周后在相同培养基上继代培养1次。
1. 2. 4胡萝卜细胞无菌系的建立悬浮培养(1)用镊子夹取在固体继代培养基上继代 10d 左右的胚性愈伤组织即分散性好、疏松的愈伤, 称取鲜重2g左右的胡萝卜愈伤组织,在灭过菌的培养皿中用无菌镊子尽量将其拨散。
(2)将散碎的愈伤组织转移入盛有20ml液体无激素MS培养基的三角瓶中。
(3)置于80~120r/min摇床上25℃暗培养。
(4)每隔3天换液1次,用吸管吸去3/4旧培养液,再加入等量新鲜培养液。
连续培养2 代~ 4 代后逐渐形成稳定的细胞系。
——胡萝卜愈伤组织的“器官分化”与“体细胞胚发生”(1)在超净工作台上,用镊子去除继代培养1~2次的疏松愈伤组织,在无菌载台上分割成长 3mm, 宽 1. 5mm, 高 3~5mm 的小长块,去除黑色、灰色或棕色的坏死细胞部分。
(2)接种在M5、M6培养基上,每瓶1~3块,轻轻压实,以保证和培养基充分接触。
(3)标注清楚组别和日期。
26℃,光照16h/d,4周后观察实验结果。
2实验结果2. 1 实验结果记录:我们组负责配置的是M1,M2,M3,M4每种各接种两瓶。
因实验培养时间问题,还未观察到具体结果。
预测实验结果为:如果愈伤组织脱分化以后进行再分化,则应当先时愈伤组织下部分化出根,在上部发育出芽,随着不断地生长,最终发育成完整的植株;如果是体细胞胚发生,则可以不经过愈伤组织阶段就可以发育为体细胞胚;但是体细胞胚比愈伤组织难生成得多,很多植物还无法进行体细胞胚的诱导生成,体细胞胚一旦形成,便可慢慢的分化为完整的植株。
与愈伤组织发生相比,体细胞胚更不容易发生遗传变异,从而诱导分化发育成的植株更稳定。
实验结果图片第一次培养M1-1 M2-1 M2-2 M4-1 M3-1 培养成功M4-2 霉菌M1-2 细菌污染M3-2 细菌污染烫伤污染情况:接种8瓶,污染3瓶,5瓶未污染第二次培养1-2烫伤2-1霉菌1-1 愈伤组织2-2愈伤组织继代实验情况因未观察到,所以未附图。
3.分析讨论:对实验现象、实验结果的分析及其结论然后再在继代培养基上可以增殖得到更多更好的愈伤组织。
实验总结4.展望拓展:这次的实验总体来说还是失败的,第一次实验成功率低原因在于在做实验前没有好好了解实验流程,虽然老师在上课时做了相应的讲解,但一些细节上的操作和技巧还是没有弄明白,对于无菌操作的重要性还是没有深刻的意识。
在第二次实验中我更加注意了这个问题,将无菌操作台上的物品按最合理的方式放置,既不影响操作,也方便拿取,操作过程不离实验台,仪器轻拿轻放,尽量不带起空气大幅度流动,将酒精灯移到空气滤膜附近,在整个过程都在酒精灯旁操作;另一方面,在以后的实验中自己一定要提前对实验内容有所了解,将课件及实验讲义上的知识吃透,理清实验思路。
这是能做出成功实验的基础,否则,在老师讲解时听不懂,自己思路不清晰,这将使我们在做实验时的难度加大,浪费做实验的宝贵时间,实验也不易做成功。
经过这次的测试技术实验,我个人得到了不少的收获,一方面加深了我对课本理论的认识,另一方面也提高了实验操作能力。
这次的实验跟我们以前做的实验不同,因为这次实验大部分是个人操作,我觉得这次我是真真正正的自己亲自去完成,所以是我觉得这次实验最宝贵,最深刻的。
比较高兴的一点是我的愈伤组织成活率在同班同学里还是比较高的,在准备愈伤组织的扩大化培养中,大多数同学用的都是我的材料,心里感到很自豪。
在这次的实验中我也深深体会到课本上的纯理论知识对于实践的指导作用:弄懂实验原理,然后通过实验的操作的靠自己亲自动手,亲自开动脑筋,亲自去请教别人才能得到提高的。
临近期末,非常感谢牛芸老师和吕琦老师在本学期给予我们的细致生动的教学,也许以后不见得会再学习更多更加专业的后续课程,但是它对于我们拓展专业及相关知识面、温习所学的细胞工程内容、应用理论分析问题、解决问题的方面体现的思维方式却让我受益匪浅。
特别是牛芸老师在指导我实验操作时说的那一句“这样来控制会比较省力,可爱的孩子!”谢谢老师的悉心教导,在此,学生提前祝福老师新年快乐,身体健康!参考文献:[1] 汪洪;夏鸿亮;李校;杨树林. 胡萝卜愈伤组织诱导培养的研究[J].北方园艺,2012(06):103~105.[2] 尹文兵;李丽娟;黄勤妮;李艳红. 胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究[J].山西师范大学学报(自然科学版版),2004(06):71~76.[3] 莫德鑫;郭玉华;孙静;耿惠莉. 胡萝卜组织培养[J]. 教学仪器与实验,2010,7(26):42~43.[4] 曾小美;王凌健;夏镇澳;沈允钢. 胡萝卜光自养型愈伤组织的诱导培养及其光合特性[J].实验生物学报, 2003,36(1):18~22.[5] 胡蓉. 胡萝卜愈伤组织建立中的几个问题探讨[J]. 川北教育学院学报(自然科学版),1995(02):7~9.[6] 吴石君;林忠平;马诚;王玉秀;赵玉锦;刘红军. 从胡萝卜愈伤组织分离的原生质体获得再生植株[J]. 遗传学报, 1977,4(04):363~365.[7] 周玲艳;秦华明. 胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立[J]. 安徽农业科学, 2006,34(16):3929~3931.[8] 李浚明;朱登云. 植物组织培养(第3版).中国农业大学出版社,2005,2(01):36~39.[9] 潘瑞炽.植物组织培养(第三版). 广州:广东高等教育出版社,2003(01):243~247.[10] 郭勇;崔堂兵;谢秀帧编着.植物细胞培养与应用.北京:科学出版。