脑缺氧缺血新生鼠TGF-β_1、Bcl-2表达与凋亡的关系和GM_1的保护作用
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２
ＧＭ，治疗组较未治疗组①凋亡细胞数显著减少：ＧＭＩ治疗组
细胞凋亡的时程与未治疗组一致、分布极其相似，从治疗后８ｈ开始至 ７２ｈ各观察时间点凋亡细胞数目明显减少，与未治疗组比较，其差异 具有显著性意义（Ｐ（０．０１），表明外源性ＧＭ，治疗明显减轻了皮质和 海马神经细胞凋亡。②ＧＭｌ治疗组与未治疗组比较．ＴＧＦ．Ｂ
皮质 海马
Ｃｅｍｒａｌ Ｃｏｎｅｘ Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ
ｎｅｒｖｏｕｓ
ｓｙｓｔｅｍ（ＣＮｓ）
第匹军医大学硕士学位论文
脑缺氧缺血新生鼠ＴＧＦ—Ｂ ｌ、Ｂｃｌ．２表达与凋亡的关 系及ＧＭｌ的保护作用
研究生
导
齐宇红 王玲副教授 内科学（儿科） 第四军医大学唐都医院儿科西安７１
００３８
师
业 位
专 单
中文摘要
ｌ
缺氧缺血 缺氧缺血性脑损伤 缺氧缺血性脑病 Ｂｃｌ．２蛋白 转化生长因子一Ｂ 神经节苷脂
ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ（ＨＩＥ）
Ｔｒａｎｓｆ０Ⅱｎｉｎｇ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ
Ｇｒｏ州ｈ Ｆａｃｔｏｒ．０ ｌ（ＴＧＦ—Ｂ １）
单唾液酸四己糖神经节苷脂Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｔｅｔｌ曲ｅｘｏｓｙｌｇ柚ｇｌｉｏｓｉｄ《ＧＭｌ） 中枢神经系统
第四军医人学硕士学位论文
２ｈ，建立缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）模型。①制各新生鼠缺氧缺血性 脑损伤（未治疗组）模型。②制备ＧＭｌ治疗组模型，脑缺氧缺血（ＨＩ） 后每日腹腔注射ＧＭｌ注射液。应用苏木素一伊红（ＨＥ）染色、原位缺 口末端标记（ＴｕＮＥＬ Ｊ及ｓＰ免疫组化方法检测新生鼠脑缺氧缺血后 存活不同时间ＴＧＦ—Ｂ Ｉ、Ｂｃｌ．２及凋亡细胞在大鼠皮质和海马表达的动 态变化及ＧＭｌ对其影响。 结果：１．新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型组较对照组ＴＧＦ．日．、Ｂｃｌ．２ 表达及凋亡细胞数显著增强：①脯缺氧缺血后２ｈ大脑皮质和海马开 始出现凋亡细胞，８ｈ较为明显，２４ｈ达到高峰后渐下降。直至１２０ｈ 仍可见少许凋亡细胞。②脑缺氧缺血后８ｈ，大脑皮质和海马开始｝｝｛ 现ＴＧＦ．Ｂ ｌ表达，１２ｈ和４８ｈＴＧＦ—Ｂ ｌ出现两次表达高峰。晚期表达ＴＧＦ． Ｂ，的免疫阳性细胞与凋亡细胞均出现在缺血半暗带内。③脑缺氧缺 血后２ｈ，大脑皮质和海马Ｂｃｌ一２的表达丌始增加，４８ｈ达到高峰，７２ｈ 开始下降，至１２０ｈ降至较低水平。
关键词：脑缺血；脑缺氧：凋亡；ＢｃＩ．２蛋自：转化生长因子－§１（ＴＧＦ—
Ｂ
１）：单唾液酸四己糖神经节苷脂（ＧＭｌ）：ＴＬⅢＥＬ：免疫细胞化学
苇四军医大学硕士学位论文
Ｔｈｅ ｒｅＩａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ
ＴＧＦ－Ｂ
ｌ’Ｂｃｌ－２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｆｂｌｌｏｗｉｎｇ ｃｅｒｅｂｒａｌ
第四军医大学硕士学位论文
２．ＴＧＦ—Ｂ，、Ｂｃｌ．２表达的高峰均为缺氧缺血后４８ｈ，稍后于神经 细胞凋亡的高峰，表明ＴＧＦ．Ｂ １可能通过上调ＢｃＩ．２表达间接调控神 经细胞凋亡。 ３．ＧＭ，治疗后神经细胞凋亡数目显著减少，表明神经节苷脂ＧＭ Ｊ 可部分抑制缺氧缺血性脑损伤诱导的神经细胞凋亡，对缺氧缺血性脑 损伤后的脑组织确有保护作用：而ＧＭ．治疗后ＴＧＦ—Ｂ １、Ｂｃｌ一２表达 未见明显改变，表明ＧＭｌ抑制神经细胞凋亡的机制与ＴＧＦ—日ｌ、Ｂｃｌ一２ 表达无关。神经节苷脂ＧＭＩ抑制神经凋亡细胞可能是其临床治疗缺氧 缺血性脑损伤的分子机制之一，但其具体机制尚待进一步研究。
目的：细胞凋亡是缺氧缺血性脑损伤（Ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ，
ＨＩＢＤ）过程中神经细胞死亡的～种形式，特别在迟发性神经元死亡
（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ
ｄｅａｔｈ，ＤＮＤ）过程中起十分重要的作用。目前研究
认为细胞凋亡与凋亡相关基因Ｂｃｌ．２家族表达的变化密切相关，转化
ｌ、Ｂ意义（Ｐ＞００５），表明ＧＭ。抑制 神经细胞凋亡的机制与ＴＧＦ。Ｂ ｌ、ＢｃＩ一２表达无关。 结论：１．缺氧缺血性脑损伤后ＴＧＦ．Ｂ １、Ｂｃｌ－２表达及凋亡细胞数显著 增强，表明缺氧缺血性脑损伤可诱导ＴＧＦ．Ｂ ｌ、Ｂｃｌ．２表达及神经细胞 凋亡。ＴＧＦ一０ Ｉ、Ｂｃｌ．２在缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡中起重要 作用。
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中英文对照关键词
凋亡Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 迟发性神经元死亡 程序性细胞死亡 脑缺氧
脑缺血
Ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｌｌｒｏｎａｌ ｄｅａ血（ＤＮＤ）
ＰｍＦ咖ｅｄ
ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ
（ＰｃＤ）
ｃｅｒｅｂｒａｌ ａ１１０ｘｉａ Ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ Ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｓｃｈｅｎｌｊａ（ＨＩ） Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ（ＨＩＢＤ） Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｂｃｌ－２ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉＶｅ ｅｆｆ．ｅｃｔ ｏｆ Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：Ｑｉ
Ｙｈ—Ｈｏｎｇ
ＧＭｌ
Ｔｍｏｒ：Ｗａｎｇ Ｌｉｎｇ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，１＿ａｎｇｄｕ Ｈｏｓｐｊｔａｌ，Ｔｈｅ Ｆｏｕｎｈ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ ａｎ，７１００３８，Ｓｈａａｎｘｉ ＰｒｏＶｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ
生长因子．Ｂ ｌ（ＴＧＦ．Ｂ Ｉ）通过增加Ｂｃｌ一２产物可间接调控神经细胞的
凋亡ｍ１。神经节苷脂（ＧａＪｌｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是一种糖鞘脂，为大多数哺乳动物 细胞膜的组成成分，在神经系统中尤为丰富。而单唾液酸四己糖神经 节苷脂（Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｔｅｔｒａｌｌｅｘｏｓｙｌｇａｌｌｇｌｉｏｓｉｄｅ，ＧＭｌ）是哺乳类神经节苷脂 的主要种类，它对神经细胞的分化、生长、轴浆转运和再生起着重要 作用。但ＴＧＦ－０ ｌ在新生儿缺氧缺血性脑病（Ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｘ ＨＩＥ）中的作用及ＧＭｌ脑保护作用的机制尚不清楚。 本研究通过观察新生鼠ＨＩＢＤ脑内ＴＧＦ—Ｂ １蛋白、凋亡相关蛋白ＢｃＩ一２ 的表达与神经细胞凋亡的变化规律及应用ＧＭｌ治疗后对其影响，探讨 新生鼠ＨＩＢＤ时ＴＧＦ．Ｂ Ｉ、Ｂｃｌ．２表达与细胞凋亡的关系及神经节苷脂 ＧＭｌ脑保护作用的机制。 方法：结扎新生７日龄ＳＤ大鼠左颈总动脉后吸入８０ ｍ１．Ｌ。１浓度氧
ＧＭ，治疗组较未治疗组①凋亡细胞数显著减少：ＧＭＩ治疗组
细胞凋亡的时程与未治疗组一致、分布极其相似，从治疗后８ｈ开始至 ７２ｈ各观察时间点凋亡细胞数目明显减少，与未治疗组比较，其差异 具有显著性意义（Ｐ（０．０１），表明外源性ＧＭ，治疗明显减轻了皮质和 海马神经细胞凋亡。②ＧＭｌ治疗组与未治疗组比较．ＴＧＦ．Ｂ
皮质 海马
Ｃｅｍｒａｌ Ｃｏｎｅｘ Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ
ｎｅｒｖｏｕｓ
ｓｙｓｔｅｍ（ＣＮｓ）
第匹军医大学硕士学位论文
脑缺氧缺血新生鼠ＴＧＦ—Ｂ ｌ、Ｂｃｌ．２表达与凋亡的关 系及ＧＭｌ的保护作用
研究生
导
齐宇红 王玲副教授 内科学（儿科） 第四军医大学唐都医院儿科西安７１
００３８
师
业 位
专 单
中文摘要
ｌ
缺氧缺血 缺氧缺血性脑损伤 缺氧缺血性脑病 Ｂｃｌ．２蛋白 转化生长因子一Ｂ 神经节苷脂
ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ（ＨＩＥ）
Ｔｒａｎｓｆ０Ⅱｎｉｎｇ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ
Ｇｒｏ州ｈ Ｆａｃｔｏｒ．０ ｌ（ＴＧＦ—Ｂ １）
单唾液酸四己糖神经节苷脂Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｔｅｔｌ曲ｅｘｏｓｙｌｇ柚ｇｌｉｏｓｉｄ《ＧＭｌ） 中枢神经系统
第四军医人学硕士学位论文
２ｈ，建立缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）模型。①制各新生鼠缺氧缺血性 脑损伤（未治疗组）模型。②制备ＧＭｌ治疗组模型，脑缺氧缺血（ＨＩ） 后每日腹腔注射ＧＭｌ注射液。应用苏木素一伊红（ＨＥ）染色、原位缺 口末端标记（ＴｕＮＥＬ Ｊ及ｓＰ免疫组化方法检测新生鼠脑缺氧缺血后 存活不同时间ＴＧＦ—Ｂ Ｉ、Ｂｃｌ．２及凋亡细胞在大鼠皮质和海马表达的动 态变化及ＧＭｌ对其影响。 结果：１．新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型组较对照组ＴＧＦ．日．、Ｂｃｌ．２ 表达及凋亡细胞数显著增强：①脯缺氧缺血后２ｈ大脑皮质和海马开 始出现凋亡细胞，８ｈ较为明显，２４ｈ达到高峰后渐下降。直至１２０ｈ 仍可见少许凋亡细胞。②脑缺氧缺血后８ｈ，大脑皮质和海马开始｝｝｛ 现ＴＧＦ．Ｂ ｌ表达，１２ｈ和４８ｈＴＧＦ—Ｂ ｌ出现两次表达高峰。晚期表达ＴＧＦ． Ｂ，的免疫阳性细胞与凋亡细胞均出现在缺血半暗带内。③脑缺氧缺 血后２ｈ，大脑皮质和海马Ｂｃｌ一２的表达丌始增加，４８ｈ达到高峰，７２ｈ 开始下降，至１２０ｈ降至较低水平。
关键词：脑缺血；脑缺氧：凋亡；ＢｃＩ．２蛋自：转化生长因子－§１（ＴＧＦ—
Ｂ
１）：单唾液酸四己糖神经节苷脂（ＧＭｌ）：ＴＬⅢＥＬ：免疫细胞化学
苇四军医大学硕士学位论文
Ｔｈｅ ｒｅＩａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ
ＴＧＦ－Ｂ
ｌ’Ｂｃｌ－２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｆｂｌｌｏｗｉｎｇ ｃｅｒｅｂｒａｌ
第四军医大学硕士学位论文
２．ＴＧＦ—Ｂ，、Ｂｃｌ．２表达的高峰均为缺氧缺血后４８ｈ，稍后于神经 细胞凋亡的高峰，表明ＴＧＦ．Ｂ １可能通过上调ＢｃＩ．２表达间接调控神 经细胞凋亡。 ３．ＧＭ，治疗后神经细胞凋亡数目显著减少，表明神经节苷脂ＧＭ Ｊ 可部分抑制缺氧缺血性脑损伤诱导的神经细胞凋亡，对缺氧缺血性脑 损伤后的脑组织确有保护作用：而ＧＭ．治疗后ＴＧＦ—Ｂ １、Ｂｃｌ一２表达 未见明显改变，表明ＧＭｌ抑制神经细胞凋亡的机制与ＴＧＦ—日ｌ、Ｂｃｌ一２ 表达无关。神经节苷脂ＧＭＩ抑制神经凋亡细胞可能是其临床治疗缺氧 缺血性脑损伤的分子机制之一，但其具体机制尚待进一步研究。
目的：细胞凋亡是缺氧缺血性脑损伤（Ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ，
ＨＩＢＤ）过程中神经细胞死亡的～种形式，特别在迟发性神经元死亡
（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ
ｄｅａｔｈ，ＤＮＤ）过程中起十分重要的作用。目前研究
认为细胞凋亡与凋亡相关基因Ｂｃｌ．２家族表达的变化密切相关，转化
ｌ、Ｂ意义（Ｐ＞００５），表明ＧＭ。抑制 神经细胞凋亡的机制与ＴＧＦ。Ｂ ｌ、ＢｃＩ一２表达无关。 结论：１．缺氧缺血性脑损伤后ＴＧＦ．Ｂ １、Ｂｃｌ－２表达及凋亡细胞数显著 增强，表明缺氧缺血性脑损伤可诱导ＴＧＦ．Ｂ ｌ、Ｂｃｌ．２表达及神经细胞 凋亡。ＴＧＦ一０ Ｉ、Ｂｃｌ．２在缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡中起重要 作用。
第四军医大学硕士学位论文
中英文对照关键词
凋亡Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 迟发性神经元死亡 程序性细胞死亡 脑缺氧
脑缺血
Ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｌｌｒｏｎａｌ ｄｅａ血（ＤＮＤ）
ＰｍＦ咖ｅｄ
ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ
（ＰｃＤ）
ｃｅｒｅｂｒａｌ ａ１１０ｘｉａ Ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ Ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｓｃｈｅｎｌｊａ（ＨＩ） Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ（ＨＩＢＤ） Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｂｃｌ－２ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉＶｅ ｅｆｆ．ｅｃｔ ｏｆ Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：Ｑｉ
Ｙｈ—Ｈｏｎｇ
ＧＭｌ
Ｔｍｏｒ：Ｗａｎｇ Ｌｉｎｇ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，１＿ａｎｇｄｕ Ｈｏｓｐｊｔａｌ，Ｔｈｅ Ｆｏｕｎｈ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ ａｎ，７１００３８，Ｓｈａａｎｘｉ ＰｒｏＶｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ
生长因子．Ｂ ｌ（ＴＧＦ．Ｂ Ｉ）通过增加Ｂｃｌ一２产物可间接调控神经细胞的
凋亡ｍ１。神经节苷脂（ＧａＪｌｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是一种糖鞘脂，为大多数哺乳动物 细胞膜的组成成分，在神经系统中尤为丰富。而单唾液酸四己糖神经 节苷脂（Ｍｏｎｏｓｉａｌｏｔｅｔｒａｌｌｅｘｏｓｙｌｇａｌｌｇｌｉｏｓｉｄｅ，ＧＭｌ）是哺乳类神经节苷脂 的主要种类，它对神经细胞的分化、生长、轴浆转运和再生起着重要 作用。但ＴＧＦ－０ ｌ在新生儿缺氧缺血性脑病（Ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｘ ＨＩＥ）中的作用及ＧＭｌ脑保护作用的机制尚不清楚。 本研究通过观察新生鼠ＨＩＢＤ脑内ＴＧＦ—Ｂ １蛋白、凋亡相关蛋白ＢｃＩ一２ 的表达与神经细胞凋亡的变化规律及应用ＧＭｌ治疗后对其影响，探讨 新生鼠ＨＩＢＤ时ＴＧＦ．Ｂ Ｉ、Ｂｃｌ．２表达与细胞凋亡的关系及神经节苷脂 ＧＭｌ脑保护作用的机制。 方法：结扎新生７日龄ＳＤ大鼠左颈总动脉后吸入８０ ｍ１．Ｌ。１浓度氧
