红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织抗氧化能力的影响
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红景天对大鼠力竭游泳能力和心肌线粒体的抗氧化能力的影响周海涛;曹建民;林强【摘要】当前红景天已经在中医药界大量应用,以改善人们抗疲劳的能力,运动界关于红景天复方的研究也有报道,但是关于红景天对心肌线粒体抗氧化能力的研究尚未见报道.通过对大鼠灌服红景天煎服液以观察其对大鼠运动能力以及心肌线粒体抗氧化能力的影响,探索红景天清除大鼠力竭运动后心肌线粒体自由基代谢产物,减弱和避免自由基对心肌线粒体的损伤,消除疲劳增强运动能力的作用,为红景天更好地应用于运动营养食品领域提供实验依据.【期刊名称】《沈阳体育学院学报》【年(卷),期】2010(029)005【总页数】4页(P57-60)【关键词】红景天;大鼠;抗自由基【作者】周海涛;曹建民;林强【作者单位】北京联合大学,生物化学工程学院,北京,100023;北京体育大学,北京,100084;北京联合大学,生物化学工程学院,北京,100023【正文语种】中文【中图分类】G804.7红景天是景天科多年生草木或灌木植物,生长在海拔800~2 500米高寒无污染地带的珍稀野生植物。
由于生长环境恶劣,使其从遗传上具备了特殊的适应性物质,与人参、刺五加、绞股蓝并称为植物性滋补强壮剂,具有适应原样(Adoptogen)作用,也是亚洲地区常用传统药材,具有刺激神经系统、增加工作效率、消除疲劳和预防高山症等作用。
我国古代第一部医学典籍《神农本草经》,将红景天列为药中上品。
服用红景天轻身益气,不老延年,无毒多服,久服不伤人。
能补肾,理气养血,主治周身乏力、胸闷等;还具有活血止血、清肺止咳、解热的功效。
《本草纲目》记载“红景天,本经上品,祛邪恶气,补诸不足”,“已知补益药中所罕见”。
当前红景天已经在中医药界大量应用,以改善人们抗疲劳的能力,运动界关于红景天复方的研究也有报道,但是关于红景天对心肌线粒体抗氧化能力的研究尚未见报道。
通过对大鼠灌服红景天煎服液以观察其对大鼠运动能力以及心肌线粒体抗氧化能力的影响,探索红景天清除大鼠力竭运动后心肌线粒体自由基代谢产物,减弱和避免自由基对心肌线粒体的损伤,消除疲劳增强运动能力的作用,从而为红景天更好地应用于运动营养食品领域提供实验依据。
红景天对血管性痴呆大鼠行为学及海马CA1区Bcl-2及Bax表达的影响(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)作者:杨发明董联玲曹娟冀俊虎【摘要】:目的观察红景天对血管性痴呆大鼠认知功能及海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨红景天的神经保护作用。
方法采用双侧颈总动脉永久结扎法制备前脑缺血致血管性痴呆模型,以Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;以免疫组化检测大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达。
结果造模组与对照组相比,认知能力明显下降(P0.01),Bcl-2、Bax 蛋白表达增加(P0.01);治疗组与模型组相比,认知能力明显改善(P0.01),Bcl-2蛋白表达明显增加(P0.01),Bax蛋白表达明显减少(P0.01)。
结论血管性痴呆大鼠给予红景天后,可以通过调节海马Bcl-2及Bax蛋白表达,抑制神经细胞凋亡,保护神经细胞,促进脑功能的恢复,从而改善大鼠学习记忆能力。
【关键词】红景天血管性痴呆认知障碍大鼠;Bcl-2 Bax Abstract:Objective To study the effects of Rhodiola herb on behavior and the expression of Bcl-2 and Bax protein inhippocamps of vascular dementia rat induced by chonic cerebral ischemia. And the protective effect of Rhodiola herb was studied. Methods VD model was formed by adopting the permanent occlusion of bilateral carotid arteries in Wistar rats to produce the forebrain ischemia. Cognitive ability of rats were studied with the Morris water maze. The expression of Bcl-2 and Bax protein in the hippocampus were determined with immunohistochemical staining. Results VD model may decrease cognitive ability (P0.01), increase the expression of Bcl-2 and Bax protein in the hippocampus (P0.01). Rhodiola herb alleviated cognitive ability significantly (P0.01), increased the expression of Bcl-2 protein (P0.01) and reduced the expression of Bax protein (P0.01). Conclusion Rhodiola herb can inhibit apoptosis through regulating the expression of Bcl-2 and Bax protein in the hippocampus. Rhodiola herb may improve cognitive ability in Vascular Dementia rats.Key words:Rhodiola herb;vascular dementia;cognitive functions;rat;Bcl-2;Bax血管性痴呆(vascular dementia,VD)是由于脑出血性或缺血性引起的智能障碍性综合征,已经成为严重影响人类生活质量的疾病之一。
Clinical Journal of Chinese Medicine 2019 V ol.(11) No.34 -20-[11]韦衮政.“血不利则为水”病机含义之我见[J].环球中医药,2011,4(06):455-456.[12]杨刚.益气活血法临床运用综述[J].云南中医学院学报,1988,11(01):48-52.[13]王玉惠.中药干预微循环障碍研究进展[J].亚太传统医药,2014, 10(18):53-55.[14]赵荣莱.功能性胃肠病中医诊治与调理[M].北京:人民军医出版社,2007:221-228.基金项目:云南省科技计划项目中医联合专项:《芪黄栓治疗腹泻型肠易激综合征临床药效学研究》[项目编号:2015FB205(-039)]研究成果。
编辑:田杏茹编号:EA-4190412111(修回: 2019-12-08)红景天苷减轻STZ诱导的大鼠学习记忆减退A study on alleviating learning and memory impairment from STZ in rats with salidroside黄燕燕(南阳医学高等专科学校,河南南阳,473000)中图分类号:R338.64文献标识码:A文章编号:1674-(2019)34--02【摘要】目的:观察红景天苷对双侧脑室内注射链脲菌素(STZ)诱导的认知损害模型大鼠认知功能和脑内氧化应激的影响,并初探其可能的作用机制。
方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及红景天苷组。
红景天苷组灌胃红景天苷50mg/kg,每日1次,自造模开始第1天给药,连续14d,假手术组、模型组灌胃等体积的生理盐水。
跳台试验和水迷宫试验测试大鼠认知功能;并测定大鼠脑组织一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性。
结果:红景天苷可明显改善认知损害模型大鼠的认知功能障碍(P<0.05),并可不同程度的降低小鼠脑组织的NO含量和NOS活性(P<0.05)。
红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织抗氧化能力的影响(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)作者:冀俊虎,董联玲,曹娟,杨发明,王健【摘要】目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的干预效果和作用机理。
方法采用腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成浓度为10 mg/mL)和灌胃AlCl3(用蒸馏水配成浓度为20 mg/mL),并一次性注射东莨菪碱建立AD动物模型。
通过Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆能力变化,抗超氧阴离子和总抗氧化能力测定检测各组大鼠脑组织抗氧化水平,常规HE染色和免疫组化测Aβ1-40的表达,观察大鼠海马及皮质的形态学改变。
用红景天以灌胃方式对实验大鼠进行干预,并以喜得镇做对照观察其干预效果。
结果模型组大鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质出现β-淀粉样蛋白沉积及老年斑。
中药组、西药组及空白组大鼠在水迷宫测试中,逃避潜伏期明显缩短,原平台象限比、跨平台次数明显增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组抗超氧阴离子和总抗氧化能力活性较其他组明显降低(P<0.05)。
结论红景天可以有效改善AD大鼠空间学习记忆能力损害,同时在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效,具有神经保护作用。
【关键词】红景天;阿尔茨海默病;行为学;抗氧化能力;大鼠Abstract:Objective To study the intervention effect and mechanism of integripetal rhodiola herb (IRH) on Alzheimer’s disease model rats. Methods Alzheimer’s disease model was made by injecting D-galactose (10 mg/mL) in abdominal cavity and taking AlCl3 (20 mg/mL) by intragastric administration, and injecting scopolamine. Morris water maze testing system was undertaken to observe the change of learning and memory ability in rats, biochemical indicator tested was to contrast the state of oxidative stress, common HE staining and immunohistchemistry staining were to observe the morphology change of the hippcampus and cortex cell. The model rats were administrated IRH by means of intragastric administration contrasting with hydergine to compare the effect. Results The memory ability of model group was obviously decreased, cellula nervosa were damaged badly. Aβand senile plaques appeared on hippcampus and cortex. All of the test indexes in Morris water maze showed that the abilities of space search, learning and memory in different groups remarkably improved compared with that of the model group (P<0.05). The anti-02·- and T-AC activity of the model group was lower than othergroups obviously (P<0.05). Conclusion IRH has significant relieving effect on the lesion of the abilities of space search, learning and memory in AD model rats and good protecting effect on cellula nervosa of AD rats by eliminating free radical and improving the anti-oxydation potential.Key words:integripetal rhodiola herb;Alzheimer’s disease;ethology;anti-oxydation potential;rat阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的脑退行性疾病。
红景天素抗老化和抗痴呆效应的实验研究姜文华;孟晓婷;郝利铭;崔丽;董智勇;王淑兰【期刊名称】《吉林大学学报(医学版)》【年(卷),期】2001(027)002【摘要】目的:探讨药用植物红景天提取物--红景天素(Rhodosin)抗老化和抗痴呆效应。
方法:采用大鼠跳台、水迷宫实验,测定海马内乙酰胆碱(Ach)含量及胆碱乙酰转移酶(ChAT )活性和脑组织内LPO含量、SOD活性,同时对海马神经细胞进行结构状态及超微结构观测。
结果:红景天素对大鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用,能增强海马中Ach含量及ChAT活性,降低脑组织LPO含量,增强SOD活性,阻抑大脑、海马的锥体细胞细胞器的退行性变化。
结论:红景天素对老龄大鼠有明显抗老化作用,对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD )模型鼠具有防治、保护和抗痴呆效应。
%Objective:To discuss the effects of Rhodosin,the extractant of medical plants na med Rhodiola Sachinonsis A.Bor,on aging rats and the model rats of Alzheier′s d isease(AD).Methods:Step down and water maze tests were used to determine the content of ace tylcholine (Ach) and the activity of acetylcholine transferase (ChAT) of hippoca mpus,lipid peroxide (LPO) and activity of superoxide dismute (SOD) of the cerebr al cortex,and cerebellar cortex and spinal cord were observed respectively.At th e same time,the general light microscope and eletron microscope were used to obs erve the changes in morphology.Results:The Rhodosin as an antioxidant could enhance the content of Ach and the activity of ChAT,reduce the formation of LPO,andincrease activity of SOD.The Rh odosin could facilitate metabolism,enhance activity,and inhibit degeneration of aging rat cells.Conclusion:Rhodosin had obvious anti-aging effects on aing rats and also had preventive,protective,anti-dementia effects on experimental dementia.【总页数】3页(P127-129)【作者】姜文华;孟晓婷;郝利铭;崔丽;董智勇;王淑兰【作者单位】吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,;吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,;吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,;吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,;吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,;吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室,【正文语种】中文【中图分类】R-332;R285【相关文献】1.红景天对血管性痴呆大鼠行为学影响的实验研究 [J], 吴栋;杨发明;樊改英;燕浩杰2.红景天素抗皮肤老化作用的实验研究 [J], 郝利铭;李秀兰3.红景天,人参抗老化作用的实验研究 [J], 王淑兰;孙嵘珍4.红景天素抗老化作用的实验研究 [J], 王淑兰;王宜5.红景天对血管性痴呆大鼠血清SOD、MDA及海马组织白细胞介素-1β影响的实验研究 [J], 陈燕清;郝志红因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
藏药红景天抗氧化作用在阿尔兹海默病中的研究进展
吴涛;石镜明;孙正启
【期刊名称】《中国民族医药杂志》
【年(卷),期】2017(023)007
【摘要】红景天作为传统藏药,其抗氧化性能够有效的抗自由基、抗脂质过氧化,降低体内自由基对细胞的氧化损害,抗衰老作用已经通过大量的细胞实验和动物实验得到证实;而阿尔兹海默病恰恰是与年龄相关的神经退行性中枢疾病,虽然目前发病机制尚不明确,但氧化应激对脑细胞的损伤被认为是重要的原因.研究发现红景天能发挥线粒体膜保护作用,提高机体自由基清除酶的表达,起到了清除细胞内活性氧聚集,减轻氧化应激的作用,从而减轻阿尔兹海默病患者的脑损伤.
【总页数】4页(P65-68)
【作者】吴涛;石镜明;孙正启
【作者单位】西藏民族大学,陕西咸阳712082;西藏民族大学,陕西咸阳712082;西藏民族大学,陕西咸阳712082
【正文语种】中文
【中图分类】R291.4
【相关文献】
1.Aβ蛋白在阿尔兹海默病中的损伤机制以及研究进展 [J], 沈怡君
2.犬尿氨酸通路在阿尔兹海默病中的研究进展 [J], 吕炜; 韩彦青; 郭小宇; 王荣杰; 王志荣
3.T细胞在阿尔兹海默氏病中的研究进展 [J], 侯青松;霍燕;方焕焕(综述);段淑荣(审校)
4.T细胞在阿尔兹海默氏病中的研究进展 [J], 侯青松;霍燕;方焕焕
5.T细胞在阿尔兹海默氏病中的研究进展 [J], 侯青松;霍燕;方焕焕
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
网络出版时间:2023-05-0914:45:09 网络出版地址:https://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20230508.1430.028.html◇神经精神药理学◇红景天苷预防给药对MCAO大鼠的神经保护作用黄私迎,聂婧雯,罗 锐,周彬彬,余正双,黄嘉慧,赖文芳,洪桂祝(福建中医药大学药学院,福建福州 350122)收稿日期:2023-01-09,修回日期:2023-03-01基金项目:国家自然科学基金资助项目(No82174001,81973503);福建省自然科学基金项目(No2021J02014,2020J01727);福建省卫健委中青年骨干人才培养项目(No2019 ZQN 74)作者简介:黄私迎(1997-),女,硕士生,研究方向:心脑血管药理学,E mail:huangsiying02@163.com;赖文芳(1985-),女,博士,副教授,研究方向:中药心脑血管药理学,通信作者,E mail:laiwenfang08@163.com;洪桂祝(1966-),女,博士,教授,博士生导师,研究方向:心脑血管药理学,通信作者,E mail:13559102126@163.comdoi:10.12360/CPB202205003文献标志码:A文章编号:1001-1978(2023)05-0890-07中国图书分类号:R 332;R284 1;R322 81;R329 25;R392 12;R743 3摘要:目的 研究红景天苷(salidroside,Sal)预防给药对MCAO大鼠的神经保护作用。
方法 SD成年雄性大鼠52只,随机分:假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、红景天苷预给药组(MCAO+Sal)。
Sal给药剂量为50mg·kg-1。
连续腹腔注射给药7d,d7给药0 5h后,线栓法制作MCAO模型,24h后麻醉取材。
TTC染色检测大鼠脑梗死体积,TUNEL染色测定神经细胞凋亡数,Westernblot测定脑组织中Bax、Bcl 2、cleavedCaspase 3和总Caspase 3蛋白的表达,萘酚AS D氯乙酸酯酶检测脑组织中性粒细胞的表达,RT qPCR法分析IL 1β、IL 6、TNF α的mRNA表达,免疫荧光法分析脑组织中NeuN的表达。
高山红景天甙对血管性痴呆大鼠学习记忆及外周血ACh含
量的影响的开题报告
研究背景:
血管性痴呆是一种常见的老年疾病,其主要特点为皮层功能下降、记忆力减退和认知障碍等。
与此同时,研究表明血管性痴呆与乙酰胆碱(ACh)的水平下降有关。
高山红景天是一种中药,其有效成分为甙类化合物,具有明显的神经保护作用。
因此,本研究旨在探究高山红景天甙对血管性痴呆大鼠的学习记忆和ACh含量的影响。
研究目的:
本研究旨在探究高山红景天甙对血管性痴呆大鼠的学习记忆和ACh含量的影响,为治疗和预防血管性痴呆提供新的临床治疗方案。
研究方法:
1.实验动物:40只SD大鼠,随机分为正常对照组(10只)、模型组(10只)、高山红景天甙组(10只)和阿托品组(10只)。
2.模型建立:通过颈总动脉单侧颈内注射硝酸异丙酯(NBP)建立血管性痴呆大
鼠模型。
3.药物处理:高山红景天甙组和阿托品组分别给予高山红景天甙和阿托品治疗,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水。
4.行为学测试:使用Morris水迷宫测试大鼠的空间记忆和认知功能,以观察高山红景天甙对大鼠的学习记忆的影响。
5.检测外周血ACh含量:采用比色法检测外周血ACh含量的变化。
研究预期结果:
预计高山红景天甙组较模型组大鼠在Morris水迷宫测试中的学习记忆表现更好,ACh含量也将增加,证明高山红景天甙能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆和ACh水
平下降的问题。
红景天苷的生物学功能及应用前景高刚1,2(1.伊犁师范大学体育学院新疆伊宁839300;2.新疆师范大学体育学院新疆乌鲁木齐830054)摘要:近年来,各种代谢性疾病和心血管疾病已经影响了人们的生命健康和安全。
红景天苷是一种具有极高药用价值的生物活性成分,它作为一种天然化合物,对代谢和心血管具有显著治疗作用。
红景天苷具有广泛的药理活性,包括抗癌、抗炎、抗氧化、抗缺氧、抗疲劳、抗衰老、抗病毒、抗运动性疲劳,红景天苷的潜在作用机制主要与调节基因和蛋白表达有关,该文就红景天苷对代谢和心血管疾病的影响,探索红景天苷在相关疾病中潜在的治疗作用。
关键词:红景天苷 生物学功能 应用 前景中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:2095-2813(2023)17-0009-05 Biological Functions and Application Prospects of SalidrosideGAO Gang1,2(1.College of Physical Education, Yili Normal University, Yining, Xinjing Uygur Autonomous Region, 839300China;2.Institute of Physical Education, Xinjiang Normal University, Urumqi, Xinjing Uygur AutonomousRegion, 830054 China)Abstract: In recent years, various metabolic diseases and cardiovascular diseases have affected people's life health and safety. Salidroside is a biologically active ingredient with high medicinal value. As a natural compound, it has significant therapeutic effects on metabolism and cardiovascular system. Salidroside has a wide range of pharmacological activities, including anti-cancer, anti-inflammation, anti-oxidation, anti-hypoxia, anti-fatigue, anti-aging, anti-virus, and anti-exercise fatigue, and the potential mechanism of action of salidroside is mainly related to regulator gene and protein expression. For the effect of salidroside on metabolism and cardiovascular diseases, this paper explores the potential therapeutic effects of salidroside in related diseases.Key Words: Salidroside; Biological function; Application; Prospect红景天,俗称“金根”或“玫瑰根”,属于景天科植物,具有抗糖尿病、抗癌、抗衰老、心脏保护和神经保护等作用。
红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织抗氧化能力的影响作者:冀俊虎,董联玲,曹娟,杨发明,王健【摘要】目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的干预效果和作用机理。
方法采用腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成浓度为10 mg/mL)和灌胃AlCl3(用蒸馏水配成浓度为20 mg/mL),并一次性注射东莨菪碱建立AD动物模型。
通过Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆能力变化,抗超氧阴离子和总抗氧化能力测定检测各组大鼠脑组织抗氧化水平,常规HE染色和免疫组化测Aβ1-40的表达,观察大鼠海马及皮质的形态学改变。
用红景天以灌胃方式对实验大鼠进行干预,并以喜得镇做对照观察其干预效果。
结果模型组大鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质出现β-淀粉样蛋白沉积及老年斑。
中药组、西药组及空白组大鼠在水迷宫测试中,逃避潜伏期明显缩短,原平台象限比、跨平台次数明显增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组抗超氧阴离子和总抗氧化能力活性较其他组明显降低(P<0.05)。
结论红景天可以有效改善AD大鼠空间学习记忆能力损害,同时在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效,具有神经保护作用。
【关键词】红景天;阿尔茨海默病;行为学;抗氧化能力;大鼠Abstract:Objective To study the intervention effect and mechanism of integripetal rhodiola herb (IRH) on Alzheimer’s disease model rats. Methods Alzheimer’s disease model was made by injecting D-galactose (10 mg/mL) in abdominal cavity and taking AlCl3 (20 mg/mL) by intragastric administration, and injecting scopolamine. Morris water maze testing system was undertaken to observe the change of learning and memory ability in rats, biochemical indicator tested was to contrast the state of oxidative stress, common HE staining and immunohistchemistry staining were to observe the morphology change of the hippcampus and cortex cell. The model rats were administrated IRH by means of intragastric administration contrasting with hydergine to compare the effect. Results The memory ability of model group was obviously decreased, cellula nervosa were damaged badly. A β and senile plaques appeared on hippcampus and cortex. All of the test indexes in Morris water maze showed that the abilities of space search, learning and memory in different groups remarkably improved compared with that of the model group (P <0.05). The anti-02·- and T-AC activity of the model group was lower than other groups obviously (P<0.05). Conclusion IRH has significant relieving effect on the lesion of the abilities ofspace search, learning and memory in AD model rats and good protecting effect on cellula nervosa of AD rats by eliminating free radical and improving the anti-oxydation potential.Key words:integripetal rhodiola herb;Alzheimer’s disease;ethology;anti-oxydation potential;rat阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的脑退行性疾病。
近年来,随着老龄化进程的加速,本病已严重威胁人类生活健康,对本病的防治工作迫在眉睫。
具有清热解毒、益气养血、补肾健体的中药红景天在防治痴呆、健忘方面一直备受关注。
现代医学研究表明,红景天在抗氧化损伤、清除自由基和促进细胞代谢, 增强细胞活力等方面有独特的功效[1],已经成为目前国内外医药界研究的热点。
本实验通过建立AD动物模型,观察红景天的干预效果和可能作用机理,为该药防治AD提供实验依据。
1 实验材料1.1 动物SD雄性大鼠60只,山西医科大学实验动物研究中心提供,体重250~300 g,普通饲料饲养,自由饮水。
1.2 主要药物与试剂西藏红景天购自山西医科大学第二医院中药房;甲磺酸双氢麦角毒碱片(喜得镇)由天津华金制药厂和瑞士诺华制药有限公司合作生产;D-半乳糖为AMRESCO公司产品,批号D8310;结晶AlCl3为天津市福晨化学试剂厂产品;氢溴酸东莨菪碱为上海禾丰制药有限公司产品,批号070302;水合氯醛(分析纯)为天津市福晨化学试剂厂产品,批号20060320;考马斯亮蓝(批号20080107)、总抗氧化能力(T-A℃)测试盒(批号20080105)和抗超氧阴离子(批号20080107)均由南京建成生物工程研究所生产。
兔抗大鼠β-淀粉样蛋白1-40 (amyloidβ-protein 1-40,Aβ1-40)抗体和SABC免疫组化试剂盒均由武汉博士德公司提供。
1.3 主要仪器MT-200 Morris水迷宫视频跟踪分析系统(S7200,成都泰盟科技有限公司);数显恒温水浴锅(上海申腾生物技术有限公司);低速台式离心机(上海安亭),型号:80-2C;旋涡振荡器,型号:MSI;美国VARIAN 紫外分光光度计,型号:Cary50;电子天平(上海友声衡器有限公司)。
2 实验方法2.1 药物制备红景天由山西省中医药研究院制剂室制备为干燥粉末。
将500 g 红景天煎煮3次,第1次加水2 500 mL,煎煮2 h;第2次加水2 000 mL,煎煮1 h;第3次加水1 500 mL,煎煮1 h,过滤,合并3次提取液,80 ℃用水浴锅蒸发浓缩成浓度为1 g/mL进行灌胃。
2.2 造模及分组SD雄性大鼠(60只)经水迷宫测验试掉不符合条件者。
将52只大鼠随机分成空白对照组(13只)、药物造模组(39只)。
药物造模组以50 mg/(kg·d)腹腔注射D-半乳糖和2 mL/d灌胃AlCl3,持续6周,并进行水迷宫测试做出模型评价。
模型评价标准:以空白组大鼠逃避潜伏期的均值为参考值,计算每只大鼠的平均逃避潜伏期值与参考值之差占该鼠的平均逃避潜伏期时间的比值,>20%则表示造模成功。
将造模成功的大鼠(35只)分为模型组(11只)、中药组(12只)和西药组(12只)。
第7周开始同时给予干预:中药组用红景天灌胃,西药组用喜得镇以1 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组以10 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,持续4周。
行为学测试前10 min对药物造模组以2 mg/kg腹腔注射东莨菪碱[2]制作AD大鼠复合模型。
2.3 水迷宫行为学测试参照Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验方法测定大鼠空间识别能力(包括定位航行实验和空间搜索实验)。
实验室温度保持在24~25 ℃,水迷宫中加入奶粉1 kg,用热水冲开,水面高过安全平台1 cm,水温保持在22 ℃左右。
先进行5 d定位航行实验,每日分别从4个象限入水进行训练,大鼠面向池壁入水,每次入水点相同,记录大鼠寻找并爬上平台所需时间(潜伏期),潜伏期上限为60 s,每日取4次潜伏期平均值作为当天学习记忆成绩。
第6日进行空间搜索实验(时间为120 s),评价各组大鼠记忆能力的改变。
2.4 生化指标的测定行为学测试完毕后处死大鼠,取半脑进行组织匀浆,采用比色法测定脑组织的总抗氧化能力和抗超氧阴离子活性,操作步骤按试剂盒说明书进行。
蛋白测定采用考马斯亮蓝法。
另一半脑经固定液固定后,进行海马区域切片,常规HE染色和Aβ1-40免疫组化染色,光学显微镜下观察形态学变化。
3 统计学方法实验数据采用SPSS13.0统计软件包处理,结果采用x±s表示,显著性检验采用方差分析,用q检验进行两两比较。
Morris水迷宫定位航行实验记录采用重复测量数据的多因素方差分析[3]。
4 结果4.1 大鼠海马区域切片HE染色和免疫组化染色结果HE染色结果示:空白组神经细胞排列整齐,少数细胞浓染;模型组可见小胶质细胞增多,神经细胞数量减少,细胞散失,排列不成行,组织疏松;西药组和中药组可见神经细胞普遍细长,细胞排列较规整。
免疫组化染色结果示:空白组反应阴性,说明Aβ1-40在正常状态下几乎不表达或表达量极少;模型组在海马及皮质均可见β淀粉样蛋白沉积以及形成的老年斑,其周围可见肿胀变形的神经元;而中药组和西药组病理学改变不明显,可见少量变形的神经元细胞。
4.2 Morris水迷宫行为学测试结果(见表1~表3)表1 各组大鼠原平台象限游泳时间与总时间比值和跨平台次数比较(略)注:与模型组比较,*P<0.05;与空白对照组比较,◇P<0.05(下同)表2 各组大鼠抗超氧阴离子和总抗氧化能力比较(略)表3 各组大鼠在隐藏平台实验中的平均逃避潜伏期(略)5 讨论氧化紧张为在氧自由基和/或氧化强化剂与抗氧化系统之间的不平衡。
氧化紧张是一系列复杂链式事件的重要触发点,他们共同导致了神经退行性疾病的发生。