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金黄色葡萄球菌的3种凝固酶鉴定方法研究比较高振祥;胡继红;胡云建;张然【摘要】目的评价3种鉴定金黄色葡萄球菌方法的敏感度和特异性.方法临床分离的651株革兰阳性球菌,经革兰染色、触酶试验、VITEK2鉴定后,对试管法、玻片法、乳胶血凝法(slidexstaph-kit),鉴定葡萄球菌3种实验方法进行评价.3种实验方法结果不一致的菌株进行重复试验.用VITEK2作为“金标准”,比较其他3种凝固酶方法的敏感度、特异性、准确性.结果试管法1株菌鉴定假阳性；玻片法有8株菌鉴定假阳性,乳胶血凝法有株4假阳性.结论试管法敏感度和特异性最好,其次是乳胶血凝法,玻片法的假阳性较高.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2013(042)006【总页数】3页(P197-199)【关键词】金黄色葡萄球菌;试管法;玻片法;乳胶凝集法;VITEK2系统【作者】高振祥;胡继红;胡云建;张然【作者单位】100730 卫生部北京医院临床检验中心;100730 卫生部北京医院临床检验中心;100730 卫生部北京医院临床检验中心;100730 卫生部北京医院临床检验中心【正文语种】中文对象与方法1.菌株来源:临床标本分离培养收集革兰阳性球菌651株，其中357株金黄色葡萄球菌，58株表皮葡萄球菌，39株溶血葡萄球菌，11株人葡萄球菌，玫瑰色葡萄球菌2株，路登葡萄球菌2株，克氏库克菌3株，科氏葡萄球菌2株，金黄色/产色葡萄球菌35株，腐生葡萄球菌2，山羊葡萄球菌2，松鼠葡萄球菌1株，缓慢葡萄球菌1株，耳葡萄球菌2株，沃氏葡萄球菌4株，藤黄葡萄球菌2株，产色葡萄球菌3株，头状葡萄球菌2株，变异/克氏库克3株;粪肠球菌40株，屎肠球菌52株，鹑鸡肠球菌1株，鸟肠球菌1株;无乳链球菌15株，肺炎链球菌7株，星座链球菌2株，血液链球菌1株，猪链球菌1株。
2.培养基的选择:使用含5%羊血的哥伦比亚琼脂培养基由XOID有限公司提供。
3.细菌鉴定:对收集的651株革兰阳性球菌进行革兰染色、触媒试验等常规鉴定，之后做乳胶凝集试验及全自动细菌鉴定分析系VITEK2－COMPACT(均是法国生物梅里埃公司产品)，细菌鉴定到种，剔除同一患者相同部位的重复菌株，标本按《全国临床检验操作规程》［1］进行接种和培养。
三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较【目的】比较三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。
【方法】分别使用Baird-Parker培养基（BP）、兔血浆纤维蛋白原培养基（RPF）和科玛嘉葡萄球菌显色培养基（CHROMagarTMStaph aureus）对标准菌株、食品分离株以及食品样品进行对比检测。
【结果】三种选择性培养基对金黄色葡萄球菌的回收率均达到95%以上；RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基的检测效率明显高于BP培养基；且两种培养基敏感性、特异性均优于传统的BP培养基。
【结论】应用RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基检测食品中金黄色葡萄球菌，较传统的BP培养基具有更好的检测效果，建议将RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基作为可靠的分离检测培养基应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。
标签：金黄色葡萄球菌；Baird-Parker培养基；兔血浆纤维蛋白原培养基（RPF）；科玛嘉葡萄球菌显色培养基；检测效果引用格式：顾其芳，张红芝，朱颖莹，等.三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较[J].上海预防医学，2018，30（1）：69-73.Detection effects compared between three types of selective media for Staphylococcus aureus GU Qi-fang，ZHANG Hong-zhi，ZHU Ying-ying，LU Jun-yan，YU Ying，LIU Cheng，LIU Yue，CHEN Min（Shanghai Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shanghai 200336，China）Abstract：[Objective] To compare the detection effects between three kinds of selective media for Staphylococcus aureus. [Methods] Baird-Parker （BP）agar，Rabbit Plasma Fibrinogen （RPF）agar and CHROMagarTMStaph aureus were selected to test the standard strains，food-isolated strains as well as food samples. [Results] More than 95% recovery efficiency could be reached by utilization of all the three types of media. However，the detection effects of RPF and CHROMagarTMStaph aureus were significantly higher than that of BP agar.Moreover，their sensitivity and specificity were also superior to that of conditional BP agar. [Conclusion] Better detection effect is obtained from RPF and CHROMagarTMStaph aureus when compared to that from BP agar，suggesting that RPF and CHROMagarTMStaph aureus agar are more reliable for the detection of Staphylococcus aureus in food.Keywords：Staphylococcus aureus；Baird-Parker agar；Rabbit Plasma Fibrinogen agar（RPF）；CHROMagarTMStaph aureus；detection effect金黃色葡萄球菌是引起人类食源性疾病的重要病原菌之一，对其的微生物检测方法目前仍以常规分离培养为主。
葡萄球菌凝固酶的检测及临床应用【摘要】葡萄球菌凝固酶(staphylocoagulase)能使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。
葡萄球菌凝固酶的检测方法主要有玻片法、试管法、乳胶凝集法(slidex staph-kit)和基因扩增法。
葡萄球菌凝固酶可用于鉴定致病性葡萄球菌，为金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）分型。
经生物技术加工后的金葡菌滤液，是一种含有多种生物学活性物质的生物制剂，可用于治疗难治性溃疡、皮肤缺损和骨折等。
【关键词】葡萄球菌凝固酶；实验室技术与方法；临床应用葡萄球菌(staphylococcus)是革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界的空气、水、土壤中,是最常见的化脓性球菌，也是医院和社区感染常见病原菌之一［1］。
据2006年3月原核生物名录(list of prokaryotic names with standing in nomenclature, lpsn)公布，葡萄球菌属包含39个种，其中11个种可分亚种［2］。
葡萄球菌凝固酶，是与葡萄球菌致病力有关的一种侵袭性酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固，以抵抗吞噬细胞的吞噬，此过程亦是血浆凝固的过程［3］。
在凝固酶阳性葡萄球菌中，金黄色葡萄球菌是全球性医院和社区获得性感染最常见的病原菌之一，每年引起全世界范围250万例肺炎，700万例耳部感染和3千例脑膜炎等［4］。
因此，及时准确的了解是否有葡萄球菌凝固酶产生并选择合适的检测方法，对准确鉴定致病性葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌，具有重要意义。
结合近年来国内外相关文献，本文就葡萄球菌凝固酶的特点，检测方法及其临床应用三方面进行综述。
1葡萄球菌凝固酶的特点1.1 理化性质葡萄球菌凝固酶的相对分子质量约为350 000，糖含量为18.1%，主要紫外吸收峰位于260nm处,α-螺旋含量占27.3%，含甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸等17种氨基酸， n-末端为天冬氨酸。
实验一葡萄球菌属的检验金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)在食品污染病例中占据十分重要的位置，同时也是医院临床感染导致肺炎及伤口感染的主要病原菌，占医院感染病例的l0％；而抗生素的广泛应用导致了耐药菌株尤其是耐甲氧西林葡萄球菌的大量出现，使其成为与艾滋病、乙型肝炎并列的世界三大感染顽疾。
因此对金葡菌的检测研究一直以来备受重视，其研究方向主要集中在两个方面：耐甲氧西林金葡菌的检测及产致病性毒素金葡菌的检测。
传统的检测方法先做选择性培养，然后做鉴定试验，包括血浆凝固酶试验、免疫学试验、耐热核酸酶活性试验及各种糖、醇发酵试验及新生霉素敏感试验等，其优点是操作简便，所需设备简单，但一般都存在耗时长、灵敏性差等缺点，且Baird-Parker选择性培养时无法识别受热处理而损伤的菌体；凝固酶试验及耐热核酸酶试验与传统的经典方法有很好的对应性，但一些凝固酶及耐热核酸酶阴性菌同样可以产生致病性毒素，或其他少数葡萄球菌也可以产生耐热核酸酶或相似酶而导致假阳性，一定程度上限制了酶活性检测的应用；成品凝集检测试剂盒虽有很好的特异性，但在实际样品的检测时灵敏性差异明显，且成本较高。
随着分子生物学技术的广泛应用，对金葡菌的检测也从传统方法过渡到以PCR及杂交探针、基因芯片为主的现代技术手段，从基因水平更准确、灵敏地检测病原菌的存在。
表4-1-1 三种葡萄球菌的主要性状和生化反应表4-1-2 葡萄球菌属常用试验的用途【实验目的】1. 熟悉葡萄球菌的形态、染色及培养特征。
2. 掌握葡萄球菌血浆凝固酶试验的原理、方法和临床意义。
3. 了解葡萄球菌肠毒素的测定。
【实验器材和材料】1. 菌种金黄色葡萄球菌A TCC25923、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌液体培养物（接种用、新生霉素试验用、肠毒素试验用）、沸水浴加热灭活的三种菌液1滴/组（耐热核酸酶试验用）2. 培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管甲苯胺蓝核酸琼脂、10g/L盐水琼脂、液体培养基（肠毒素试验用）3. 试剂新鲜兔血浆或人血浆、3%H2O2、致敏胶乳试剂、新生霉素纸片、生理盐水、载玻片、小试管、革兰染色液、肠毒素血清、标准抗毒素血清4. 接种环、打孔器、尺子5. 沸水浴6. 投影仪【方法和步骤】1. 划线接种：用接种环将三种葡萄球菌分别划线接种普通平板和血琼脂平板。
鉴定葡萄球菌的方法葡萄球菌是一种常见的细菌，常常引起各种感染。
因此，准确鉴定葡萄球菌对于临床治疗和疾病控制至关重要。
本文介绍了几种常见的鉴定葡萄球菌的方法。
下面是本店铺为大家精心编写的5篇《鉴定葡萄球菌的方法》，供大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
《鉴定葡萄球菌的方法》篇1一、生化试验生化试验是鉴定葡萄球菌的一种常用方法。
通过检测葡萄球菌的生化反应，可以初步鉴定其种类。
常见的生化试验包括:1. 葡萄糖发酵试验：葡萄球菌可以发酵葡萄糖，产生酸和气体。
将葡萄球菌接种到含有葡萄糖的培养基上，观察是否产生酸和气体，可以初步鉴定其是否为葡萄球菌。
2. 乳糖发酵试验：葡萄球菌不能发酵乳糖。
将葡萄球菌接种到含有乳糖的培养基上，观察是否产生酸和气体，可以进一步确认其是否为葡萄球菌。
3. 尿酸酶试验：葡萄球菌可以产生尿酸酶，将尿酸分解为尿酸盐和氨。
将葡萄球菌接种到含有尿酸的培养基上，观察是否产生尿酸盐和氨，可以进一步鉴定其种类。
二、药敏试验药敏试验是鉴定葡萄球菌的另一种常用方法。
通过检测葡萄球菌对不同抗生素的敏感性，可以初步鉴定其种类。
常见的药敏试验包括: 1. 盘状药敏试验：将葡萄球菌接种到含有不同抗生素的培养基上，观察葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。
2. 纸片药敏试验：将含有不同抗生素的纸片贴在含有葡萄球菌的培养基上，观察葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。
三、分子生物学方法近年来，分子生物学方法也被广泛应用于鉴定葡萄球菌。
常见的分子生物学方法包括:1. PCR 法：利用 PCR 技术，检测葡萄球菌的特异性基因，可以快速、准确地鉴定葡萄球菌。
2. 质谱法：利用质谱技术，检测葡萄球菌的蛋白质指纹，可以鉴定其种类。
鉴定葡萄球菌的方法有多种，包括生化试验、药敏试验和分子生物学方法等。
《鉴定葡萄球菌的方法》篇2鉴定葡萄球菌的方法包括直接镜检、分离培养、PCR 方法等。
直接镜检可通过革兰染色镜检，观察菌体形态和排列方式，判断是否为葡萄球菌。
1. 掌握葡萄球菌的检验方法。
2. 了解葡萄球菌的生物学特性及致病性。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作能力。
二、实验原理葡萄球菌是一类革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界及人体皮肤、黏膜等部位。
其中，金黄色葡萄球菌是引起人类感染的重要病原菌之一，可引起多种局部和全身感染。
本实验通过对葡萄球菌的分离、培养、鉴定和计数，了解其生物学特性及致病性。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验仪器：显微镜、培养皿、培养箱、培养瓶、灭菌锅、试管、无菌水、葡萄球菌标准菌株等3. 实验试剂：葡萄球菌检验试剂盒、氯化钠、肉汤、胰酪胨大豆肉汤、兔血浆、细菌培养箱等四、实验方法1. 样品采集：取小白鼠血液、尿液、粪便等样品。
2. 样品处理：将样品进行无菌操作处理，制成1:10样品混悬液。
3. 分离培养：将样品混悬液接种于葡萄球菌检验试剂盒中的血平板和Baird-Parker平板，置于36±1℃培养箱中培养24小时。
4. 菌落观察：观察血平板和Baird-Parker平板上的菌落特征，记录金黄色、白色或柠檬色菌落。
5. 革兰氏染色：挑取金黄色、白色或柠檬色菌落进行革兰氏染色，观察菌体形态。
6. 血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌培养物与兔血浆混合，观察凝固现象。
7. 生化试验：进行触酶试验、葡萄糖发酵试验等，观察生化反应结果。
8. 计数：根据平板菌落数进行葡萄球菌计数。
1. 菌落观察：血平板和Baird-Parker平板上观察到金黄色、白色或柠檬色菌落。
2. 革兰氏染色：金黄色葡萄球菌呈革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状。
3. 血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌与兔血浆混合后，出现凝固现象。
4. 生化试验：金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，葡萄糖发酵试验阳性。
5. 计数：葡萄球菌计数为每克样品含10^6 CFU。
六、实验分析1. 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，与实验结果相符。
2. 血浆凝固酶试验阳性，表明金黄色葡萄球菌具有致病性。
葡萄球菌属检验方法及临床意义摘要】目的：探讨葡萄球菌属检验方法及临床意义。
方法：选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，对其检验方法及临床意义进行回顾性的分析。
结果：经过实验室检验后，所有患者的样本中均存在葡萄球菌属，葡萄球菌属的实验室检验对病因的确定具有较高的指导意义。
结论：同人类疾病相关的葡萄球菌属主要有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及头状葡萄球菌，其会导致化脓性感染及病毒性休克等。
【关键词】葡萄球菌属；检验方法；临床意义【中图分类号】R378.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）08-0088-02葡萄球菌属细菌为一类革兰氏阳性球菌，因其常堆集排列呈葡萄串状而取名葡萄球菌属[1]。
葡萄球菌自然界与人体中广泛的存在，其大多数是非致病菌，少数于人与动物皮肤黏膜内存在的菌株会致使多种化脓性的感染，例如菌血症、痈、疖、脓肿等，其还可导致烫伤样的皮肤综合征与毒性的休克综合征等[2]。
葡萄球菌为较为常见的化脓性球菌，同时也是医源性感染中较为常见的细菌。
1.资料与方法1.1 一般资料选取2014年2月至2016年1月期间，我所检查的葡萄球菌属感染患者31例，其中男性患者16例，女性患者15例，患者年龄15至75岁，平均（43.9±15.1）岁。
31例患者中皮肤软组织感染11例，内脏器官感染10例，全身感染8例，尿路感染2例。
1.2 标本采集根据患者发生感染的疾病的不同，可采集其伤口分泌物、脓汁、渗出液、血液、痰液、粪便及脑脊液等[3]。
因葡萄球菌广泛的分布在人体皮肤及黏膜上，因此在采集时需注意避免患者病灶周围的正常菌群的污染。
2.检验2.1 标本的直接检查取患者的痰、渗出物、脓汁及脑脊液在进行离心后取其沉渣进行涂片，经过革兰染色后进行镜检，若在检查后发现革兰阳性菌，即可初步报告为疑为葡萄球菌[4]。
因在正常情况下，关节穿刺液、脑脊液等为无菌的，当检查时发现细菌则具有重要的价值，其他的体液标本中在检查时发现炎性细胞同样具有参考价值。
凝固酶试验
（1）原理：致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。
一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集：可用玻片法测出。
另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶。
作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变为凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。
（2）方法：
1）玻片法：取兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。
2）试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，于37℃水浴3～4h.
（3）结果：玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固判为阳性。
（4）应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。
三种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的比较目的评价3种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的敏感性和特异性。
方法临床分离的110株葡萄球菌，经过革兰染色，显色培养基显色培养，触酶试验，VITEK32鉴定后，用试管法、玻片法、商品乳胶血凝法（slidex staph-kit），鉴定葡萄球菌和评价凝固酶试验方法。
3种方法结果不一致的菌株进行重复试验。
用兔血浆试管法作为标准，比较其它凝固酶方法的敏感性、特异性。
结果兔血浆试管法检测到65株阳性菌株，以此为标准，兔血浆玻片法有3株假阳性，人血浆玻片法和乳胶血凝法的假阳性分别为8株和2株。
人血浆试管法的鉴定符合率为100%，其余各种方法的敏感性均为100%，而特异性（兔血浆和人血浆玻片法，乳胶凝集试验）分别为95.6%，88%，和98.5%。
结论人血浆凝固酶试管法敏感性特异性均较高，是鉴定葡萄球菌凝固酶试验的好方法，适合于各基层临床实验室对葡萄球菌的鉴定。
标签：金黄色葡萄球菌；血浆凝固酶；乳胶试剂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院内感染的重要病原菌，然而临床标本中金黄色葡萄球菌鉴定中往往困扰者广大检验工作者，血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的重要方法之一。
鉴定的准确性直接关系到进一步上机鉴定及药敏试验判断及MRS纸片法筛选判断。
凝固酶分为两种：游离性凝固酶，结合型凝固酶，游离型凝固酶常用试管法鉴定，结合型凝固酶常用玻片法鉴定。
随着现代微生物技术的不断发展，许多医院开始选用法国梅里埃公司生产的葡萄球菌乳胶凝集试剂作为检出金黄色葡萄球菌的常规筛选试验试剂，虽然乳胶试剂盒简便，快速，但是易出现假阳性且价格昂贵。
为寻找一种适合广大基层医院实验室对葡萄球菌鉴定经济，简便的鉴定方法。
本文以兔血浆试管法为标准[1]，对110株临床分离的葡萄球菌凝固酶分别进行兔血浆，人血浆凝固酶试验和乳胶凝集试验。
评价其敏感性，特异性。
1 材料与方法1.1材料1.1.1菌株来源110株葡萄球菌均来自于我院2011年12月～2013年9月临床分离菌株，保存于-20℃低温冰箱，实验前接种于5%羊血基础平板，取对数生长期菌落进行试验。
