凝固酶阳性的葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌

葡萄球菌凝固酶的检测及临床应用【摘要】葡萄球菌凝固酶(staphylocoagulase)能使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。

葡萄球菌凝固酶的检测方法主要有玻片法、试管法、乳胶凝集法(slidex staph-kit)和基因扩增法。

葡萄球菌凝固酶可用于鉴定致病性葡萄球菌，为金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）分型。

经生物技术加工后的金葡菌滤液，是一种含有多种生物学活性物质的生物制剂，可用于治疗难治性溃疡、皮肤缺损和骨折等。

【关键词】葡萄球菌凝固酶；实验室技术与方法；临床应用葡萄球菌(staphylococcus)是革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界的空气、水、土壤中,是最常见的化脓性球菌，也是医院和社区感染常见病原菌之一［1］。

据2006年3月原核生物名录(list of prokaryotic names with standing in nomenclature, lpsn)公布，葡萄球菌属包含39个种，其中11个种可分亚种［2］。

葡萄球菌凝固酶，是与葡萄球菌致病力有关的一种侵袭性酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固，以抵抗吞噬细胞的吞噬，此过程亦是血浆凝固的过程［3］。

在凝固酶阳性葡萄球菌中，金黄色葡萄球菌是全球性医院和社区获得性感染最常见的病原菌之一，每年引起全世界范围250万例肺炎，700万例耳部感染和3千例脑膜炎等［4］。

因此，及时准确的了解是否有葡萄球菌凝固酶产生并选择合适的检测方法，对准确鉴定致病性葡萄球菌，特别是金黄色葡萄球菌，具有重要意义。

结合近年来国内外相关文献，本文就葡萄球菌凝固酶的特点，检测方法及其临床应用三方面进行综述。

1葡萄球菌凝固酶的特点1.1 理化性质葡萄球菌凝固酶的相对分子质量约为350 000，糖含量为18.1%，主要紫外吸收峰位于260nm处,α-螺旋含量占27.3%，含甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸等17种氨基酸， n-末端为天冬氨酸。

西医综合练习试卷79(总分：58.00，做题时间：90分钟)一、 A1/A2型题(总题数：14，分数：28.00)1.社区获得性肺炎最常见的类型是（分数：2.00）A.葡萄球菌肺炎B.肺炎链球菌肺炎√C.肺炎支原体肺炎D.病毒性肺炎解析：解析：最常见的社区获得性肺炎是肺炎链球菌肺炎(占50％左右)。

葡萄球菌肺炎占11％～25％。

2.成人肺炎链球菌中毒性最强的是（分数：2.00）A.第1型B.第3型√C.第6型D.第12型解析：解析：肺炎链球菌为革兰染色阳性球菌，根据荚膜多糖的抗原性，肺炎链球菌可分为86个血清型。

成人致病菌多属1～9及12型，其中以第3型毒力最强；儿童中以6、14、19及23型为多。

3.肺炎链球菌的致病力主要是由于（分数：2.00）A.细菌内毒素的作用B.细菌外毒素的作用C.细菌荚膜对组织的侵袭作用√D.细菌抗原性强解析：解析：肺炎链球菌不产生毒素，不引起原发性组织坏死或空洞形成。

其致病力是由于多糖荚膜对组织的侵袭作用。

首先引起肺泡壁水肿，出现白细胞和红细胞渗出，含菌的渗出液经Cohn孔向肺的中央部分扩展。

甚至累及几个肺段或整个肺叶。

4.男性，25岁，高热、咳嗽3天，咯铁锈色痰。

体温39．4℃。

胸片示右上肺片状阴影。

血白细胞20×10 9／L，中性粒细胞0．91。

给予青霉素治疗后体温降至正常，两天后体温再次升高。

体温再次升高的原因可能为（分数：2.00）A.细菌耐药B.药物热C.未及时加用退热剂D.产生了并发症√解析：解析：铁锈色痰是肺炎链球菌肺炎的特征性痰液，本例有外周血白细胞增高、胸片示右上肺片状阴影，可诊断为肺炎链球菌肺炎。

首选青霉素治疗。

一般经过治疗后，高热常在24小时内消退，或数日内逐渐下降。

如体温降而复升或3天仍不下降，应考虑肺外感染，如并发脓胸、心包炎或关节炎等。

5.可产生血浆凝固酶的细菌是（分数：2.00）A.表皮葡萄球菌B.金黄色葡萄球菌√C.腐生葡萄球菌D.流感嗜血杆菌解析：解析：葡萄球菌是革兰染色阳性球菌，可分为凝固酶阳性的葡萄球菌(主要为金黄色葡萄球菌)和凝固酶阴性的葡萄球菌(如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等)。

葡萄球菌属（Sta phylococcus）细菌为革兰阳性球菌，因常堆积、排列成葡萄串状而得名，广泛分布于自然界、人、动物的体表及与外界相通的腔道中，大部分是不致病的腐物寄生菌，少数为致病菌。

一、分类葡萄球菌属目前有51个种和亚种，引起人类疾病的重要菌种包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、路登葡萄球菌、施氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌等。

临床上常根据能否产生凝固酶而将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌（主要为金黄色葡萄球菌）和凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase-negative staphylococci,CNS）两大类。

根据噬菌体分型，可将金黄色葡萄球菌分为5个群和26个型。

噬菌体分型在流行病学调查、追查传染源和研究菌体分型与疾病类型间的关系方面均有重要作用。

此外，还有利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA分型等。

该菌属细菌DNA的GEC的摩尔分数为30％～39％。

二、生物学特性（一）形态与染色菌体球形或略呈椭圆形，直径0．5～1.5 um，典型的葡萄球菌排列成葡萄串状，也可呈单个、成双、短链（液体培养基或脓汁中），无鞭毛，无芽胞，体外培养时一般不形成荚膜。

为革兰阳性菌，但衰老、死亡、被中性粒细胞吞噬后或受作用于细胞壁的药物影响时，菌体常转为革兰阴性。

（二）培养特性营养要求不高，在普通培养基上生长良好。

兼性厌氧或需氧，最适生长温度35～37℃。

最适pH7.4～7.6。

在普通平板上经37℃孵育24 h，形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，直径2 mm左右。

因不同菌种产生的色素不同，菌落所呈颜色也不同，金黄色葡萄球菌菌落为金黄色或橙色，表皮葡萄球菌菌落为白色或无色，腐生葡萄球菌菌落为柠檬色或无色。

色素均为脂溶性，培养基不着色。

在血平板上多数金黄色葡萄球菌菌落周围有透明溶血环（β溶血），能在含10％～15％ NaCl培养基中生长。

在高盐甘露醇平板上金黄色葡萄球菌形成一黄色菌落。

病原性球菌主要引起化脓性炎症，故又称为化脓性球菌病原性球菌。

主要包括3个属葡萄球菌属链球菌属、和奈瑟球菌属。

1.形态与染色为革兰染色阳性球菌，直径0.5～1.2μm，成葡萄状排列，无鞭毛，无芽胞，不形成荚膜。

2.分类（1）根据色素、生化反应等不同，葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌（金葡萄）、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。

其中金黄色葡萄球菌多为致病菌，表皮葡萄球菌偶尔致病，腐生葡萄球菌一般不致病。

（2）根据有无凝固酶，也可将葡萄球菌分为凝固酶阳性菌株和凝固酶阴性菌株两大类。

凝固酶阳性的葡萄球菌可被相应的噬菌体裂解，可分为4个噬菌体群。

葡萄球菌肠毒素中毒主要由Ⅲ群菌株引起；Ⅰ群菌株常是医院中严重败血症的流行株；Ⅱ群菌株可产生表皮剥脱毒素。

3.抗原构造以葡萄球菌A蛋白（SPA）较为重要。

SPA是存在于葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白，90%以上的葡萄球菌有此抗原；SPA可与人和动物的IgG的Fc段非特异性结合，采用含SPA的葡萄球菌作为载体，可开展简易快速的协同凝集试验，广泛应用于多种微生物抗原的检出；SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、损伤血小板和引起超敏反应等多种生物学活性。

眼科常见的致病菌一、革兰阳性球菌1.葡萄球菌属（staphylococci）葡萄球菌又分为凝固酶阴性球菌和凝固酶阳性球菌。

凝固酶阳性的均是金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性的主要是表皮葡萄球菌。

（1）金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）:普通琼脂板培养，形成圆形、表面光滑湿润、不透明的菌落。

典型的菌株产生金黄色的色素而使菌落呈金黄色。

可见于正常结膜囊，正常免疫情况下暂时存在。

金黄色葡萄球菌是眼部感染的最常见的细菌之一，它所引起的感染性眼病有眼睑炎症、睑缘炎、麦粒肿、泪小管炎、结膜炎、角膜炎眼内炎以及眼眶蜂窝织炎。

（2）表皮葡萄球菌（staphylococci epidermidis）: 普通琼脂板培养，菌落呈白色，血浆凝固酶阴性，致病性较弱。

它是正常眼睑和结膜的常在菌，曾被认为无致病性，但临床和实验室工作证明，表葡是眼部重要的致病菌，而且耐药性比金葡更强。

现在已成为眼内人工晶体植入术后慢性眼内炎、眼外伤、眼内异物、内眼手术后眼内感染以及佩戴角膜接触镜后所致的角膜溃疡等眼病的常见致病菌。

表皮对万古霉素大部分仍然敏感。

2.链球菌属（streptococci）该菌属在眼部的致病菌包括甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型溶血性链球菌和肺炎链球菌。

菌体呈球形或椭圆形，链状排列，在普通琼脂培养基上，菌落较小，表面湿润光滑。

其中化脓性链球菌，是人类细菌感染常见的病原菌之一。

有多种毒素和很强的侵袭能力。

化脓性链球菌所导致的眼部疾病主要包括眼睑炎症、急性泪囊炎、结膜炎、角膜溃疡、眼内炎、眶蜂窝织炎和变态反应性眼病。

链球菌对青霉素、先锋霉素和万古霉素等敏感。

二、革兰阴性球菌1.奈瑟菌属（neisseria）(1) 淋球菌（gonococcus）:是人类淋病的病原菌。

菌体呈肾形或卵圆形，专性需氧，需要二氧化碳刺激。

营养要求较高，巧克力血琼脂平板是适宜培养基。

菌落呈圆形、灰白色。

淋球菌可引起新生儿或成人超急性化脓性结膜炎，化脓性角膜溃疡及眼内炎等。

临床微生物学检验技术考试题库及答案2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。

3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素）4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白）5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。

结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。

是溶菌酶、青霉素作用部位）6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。

②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。

高渗环境生长。

（环丙沙星）9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。

10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。

11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。

13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法；14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。

15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。

16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。

17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体着色）。

18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。

病原性球菌及检验一、葡萄球菌属（一）生物学特性1.形态与结构本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。

无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。

2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。

最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。

在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。

可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。

在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。

在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。

3.生化反应本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。

多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。

4.抗原葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。

（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。

存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA相关性表型特征等将葡萄球菌分为19个种。

继之，各国学者又相继从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。

（2）古典分类法：根据其在固体培养基上产生的不同色素分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。

1965年，国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。

CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。

凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。

6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。