银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用
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金银花提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的研究研究背景甲型流感病毒是引起流行性感冒的病原体之一,其常见的感染症状为头痛、咳嗽、发热、喉痛、鼻塞等。
近年来,尤其是在冬春季节,甲型流感疫情频繁发生,给人们的健康和生产生活带来了严重的困扰。
因此,探索一些具有抗甲型流感病毒的天然物质变得越来越重要。
金银花是一种常见的中药材,具有清热解毒、解热镇痛等功效,常被用于治疗感冒、发热等症状。
研究表明,金银花提取物对多种病毒具有一定的抑制作用。
因此,本研究旨在探讨金银花提取物对甲型流感病毒FM1株的抗病毒作用及其机制。
研究方法材料准备•金银花提取物:选用市场上销售的金银花提取物,用乙醇进行浸泡提取后取得。
•甲型流感病毒FM1株:通过已存放于实验室中的病毒株进行繁殖及提纯。
•细胞系:使用MDCK细胞系进行病毒培养及病毒感染实验。
实验设计1.病毒感染实验:选用初代MDCK细胞进行病毒感染,并观察病毒的感染效果,其中金银花提取物为实验组,对照组则选用无金银花提取物处理的细胞。
观察并比对两组细胞的病毒感染程度。
2.病毒感染实验及金银花提取物作用机制研究:在病毒感染的同时,将金银花提取物加入细胞培养基中进行处理。
对照组则选用无金银花提取物处理的细胞作为对照组。
利用Western blotting及RT-PCR等技术检测病毒转录和翻译水平的变化。
研究结果本研究结果表明,金银花提取物对甲型流感病毒FM1株具有抗病毒作用。
在病毒感染的实验中,添加金银花提取物后,其抑制病毒复制和感染作用较为明显。
同时,通过Western blotting及RT-PCR等技术检测发现,金银花提取物可以通过下调病毒蛋白的合成能力来抑制病毒的感染和繁殖。
研究结论本研究结果表明,金银花提取物具有抗甲型流感病毒FM1株的体外作用。
其作用机制可能是通过抑制病毒的蛋白质和核酸的合成来实现。
这一发现为金银花的临床应用和开发提供了基础。
但需要进一步的研究验证其体内抗病毒作用及其可能的毒副作用,以便进一步开发和应用。
复方金银花颗粒的功能主治1. 复方金银花颗粒的简介复方金银花颗粒是一种中药制剂,由金银花、连翘等多种草本植物经过科学配方研制而成。
它具有抗菌、抗病毒、解毒、清热、消炎等多种药理作用,是一种常用的中药颗粒剂型。
2. 复方金银花颗粒的功能主治复方金银花颗粒主要用于以下疾病和症状的预防和治疗:2.1 暑湿病•症状包括发热、头痛、身体酸痛、咽喉肿痛、口渴等。
•复方金银花颗粒具有清热解毒的功效,可有效缓解暑湿病的症状。
2.2 上呼吸道感染•症状包括咳嗽、流鼻涕、喉咙痛、打喷嚏等。
•复方金银花颗粒具有抗病毒、抗菌的作用,可以抑制病毒和细菌的生长,减轻上呼吸道感染的症状。
2.3 咽喉炎•症状包括喉咙痛、灼热感、声音嘶哑等。
•复方金银花颗粒具有清热、消炎的作用,可以缓解咽喉炎引起的不适。
2.4 流感•症状包括高热、头痛、咳嗽、鼻塞、胸闷等。
•复方金银花颗粒具有抗病毒的作用,可以抑制流感病毒的复制和传播,缓解流感症状。
2.5 支气管炎•症状包括咳嗽、咳痰、胸闷、气急等。
•复方金银花颗粒具有抗菌、消炎的作用,可以缓解支气管炎引起的症状。
2.6 风热感冒•症状包括发热、头痛、咽喉肿痛、鼻塞、流黄涕等。
•复方金银花颗粒具有清热解毒的作用,可以缓解风热感冒的症状。
3. 用法用量•每次口服3-6克,一日3次。
•可以将颗粒倒入口中,用温水冲服。
4. 注意事项•孕妇、哺乳期妇女、儿童、老年人和体弱患者在使用复方金银花颗粒前应咨询医生。
•对本品过敏者禁用,过敏体质者慎用。
•在使用过程中如出现不良反应,请立即停止使用并咨询医生。
以上为复方金银花颗粒的功能主治及使用方法的简要介绍,使用者在使用前请仔细阅读药品说明书,并在医生指导下使用。
金银花提取物体外抗甲型流感病毒FM1株的研究研究背景甲型流感病毒是一种常见的流行性感冒病毒,具有高传染性和高病原性。
在全球范围内造成了重大影响。
目前,针对甲型流感病毒的治疗方法主要是使用抗病毒药物或疫苗进行预防。
但是,由于病毒的高变异性,以及抗病毒药物的副作用和易产生耐药性等问题,需要寻找更有效、更安全的治疗方法。
金银花是一种常用的中药材,具有广泛的药理作用,例如抗病毒、抗菌、抗炎和免疫调节等。
因此,金银花提取物作为一种可能的抗甲型流感药物,引起了研究人员的极大关注。
本研究旨在探讨金银花提取物对甲型流感病毒FM1株的体外抗病毒作用,为金银花的临床应用提供科学依据。
研究方法材料和试剂本研究使用的金银花提取物为我国药典规定的标准样品。
试验所需的甲型流感病毒FM1株由中国疾控中心提供。
细胞培养本研究使用的细胞系为MDCK细胞,生长在含有10%胎牛血清和1%抗生素的DMEM培养基中,并在37℃、5%CO2条件下培养。
细胞分为实验组和对照组。
病毒感染和药物处理在细胞密集度达到80%以上时,将甲型流感病毒FM1株孵化在细胞培养基中,达到感染状态。
然后,将金银花提取物加入不同浓度的细胞处理,调配成1.25、2.5、5、10、20、40和80μg/ml的剂量组。
此外,还设置了阳性对照组(使用抗病毒药物),阴性对照组(无药物处理),以及空白对照组(不加细胞)。
每一个药物处理组和对照组都进行三次重复。
测定细胞病毒感染率在感染48小时后,利用免疫荧光技术检测细胞中病毒感染率。
使用抗体对细胞进行染色,观察细胞内病毒荧光阳性细胞的数量。
研究结果###金银花提取物对甲型流感病毒FM1株的抗病毒作用研究结果表明,在不同浓度下,金银花提取物均能显著降低细胞的病毒感染率。
随着浓度的增加,抑制病毒感染的能力也逐渐增强。
其中,20μg/ml剂量组对感染率的抑制作用最强,能降低感染率高达50%以上。
###金银花提取物的副作用本研究中,金银花提取物在试验用浓度下(1.25-80μg/ml)对细胞的形态、生长率及代谢水平等无明显影响,证明其具有天然、安全、极少副作用的特点。
中草药预防甲流感方甲流感是一种由甲型流感病毒引起的急性呼吸道传染病,具有较强的传染性和快速的传播速度。
传统中草药在预防和缓解甲流感方面具有一定的作用。
下面将介绍几种常见的中草药预防甲流感方。
1. 防风通圣颗粒防风通圣颗粒是一种中草药复方制剂,由防风、桑白皮、荆芥、薄荷等多种中草药组成。
该方具有清热解毒、祛风散寒、活血化瘀的作用,可有效缓解甲流感引起的发热、咳嗽等症状,并提高机体免疫力。
2. 金银花颗粒金银花颗粒是由金银花、连翘、板蓝根等中草药制成的颗粒剂。
金银花具有清热解毒、抗病毒、抗菌的作用,能有效抑制甲流感病毒的复制和传播。
连翘和板蓝根具有清热解毒、消炎止咳的作用,可缓解甲流感引起的咽喉痛、咳嗽等症状。
3. 苦参颗粒苦参颗粒是一种中草药制剂,主要由苦参、黄芩、连翘等中草药组成。
苦参具有抗病毒、抗菌、抗炎的作用,能有效抑制甲流感病毒的复制和传播。
黄芩和连翘具有清热解毒、消炎止咳的作用,可缓解甲流感引起的发热、咳嗽等症状。
4. 藿香正气水藿香正气水是一种中草药制剂,由藿香、佩兰、荆芥等中草药组成。
藿香具有祛风散寒、解表散寒的作用,可缓解甲流感引起的寒战、发热等症状。
佩兰和荆芥具有清热解毒、止咳平喘的作用,可缓解甲流感引起的咳嗽、气喘等症状。
5. 防病毒口服液防病毒口服液是一种中草药制剂,由连翘、板蓝根、金银花等中草药组成。
连翘和板蓝根具有清热解毒、消炎止咳的作用,金银花具有抗病毒、抗菌的作用,可有效抑制甲流感病毒的复制和传播。
口服液的制剂形式方便携带和使用,适合预防甲流感。
以上是几种常见的中草药预防甲流感方,这些中草药均具有一定的抗病毒、抗菌、清热解毒的作用,可有效预防和缓解甲流感引起的症状。
但需要注意的是,中草药的使用应在医生指导下进行,对于儿童、孕妇和慢性病患者,应谨慎使用中草药。
此外,中草药预防甲流感并不能替代疫苗接种和良好的个人卫生习惯,仍需加强防护措施,如勤洗手、戴口罩、避免人群密集等。
金银花抗感染作用研究进展金银花,又名忍冬花、金银花草等,是一种广泛分布于中国和东南亚地区的传统中草药材。
在中医药中,金银花被广泛应用于治疗感冒、流感、疟疾、流行性腮腺炎等疾病。
金银花还被发现具有抗病毒、抗菌、抗氧化等多种药理活性,因而备受关注。
近年来,随着现代医学技术的不断发展,科学家们对金银花抗感染作用的研究也取得了一系列新的进展。
一、金银花的化学成分及药理作用金银花的主要化学成分包括草木醛、酚类化合物、黄酮类、有机酸类等。
黄酮类物质是金银花最重要的活性成分之一,具有抗病毒、抗氧化、抗菌等作用。
研究表明,金银花中的黄酮类物质主要包括金银花苷、伞形花素、迷迭香酸等,这些物质对病毒和细菌具有显著的抑制作用。
金银花中还含有一些有机酸,如苹果酸、柠檬酸、琥珀酸等,这些物质对细菌和病毒也具有一定的抑制活性。
金银花还含有一些挥发油成分,具有较强的杀菌作用。
金银花具有广泛的抗菌、抗病毒作用,被广泛应用于临床治疗感染性疾病。
二、金银花的抗病毒作用金银花在抗病毒方面的作用机制主要包括以下几个方面:一是金银花中含有的黄酮类物质能够抑制病毒的复制和传播,如金银花苷能够抑制流感病毒、乙型流感病毒等病毒的复制。
二是金银花中的挥发油成分具有直接杀灭病毒的作用,能够有效清除病毒颗粒。
三是金银花中的黄酮类物质能够调节人体免疫系统的功能,增强机体对病毒的抵抗能力。
金银花中的黄酮类等多种物质具有较强的抗氧化活性,能够清除自由基、减少氧化应激,保护细胞免受损害。
研究表明,金银花提取物能够显著提高机体抗氧化能力,减少氧化损伤,延缓衰老过程。
近年来,一些研究还发现,金银花的抗氧化作用在抗感染中起到了重要作用。
抗氧化能力的提高可以增强机体免疫功能,降低细菌和病毒对机体的损害。
金银花不仅可以直接抑制病毒和细菌的生长,还可以通过增强机体免疫功能,增强对感染的抵抗力。
中草药预防甲流感方甲流(H1N1流感)是一种由H1N1亚型的流感病毒引起的呼吸道传染病。
中草药在预防甲流方面具有一定的作用,以下是一种常用的中草药预防甲流感方的标准格式文本:一、方剂名称:二、方剂组成:1. 金银花:10克2. 薄荷:5克3. 黄芩:5克4. 甘草:3克5. 羚羊角粉:10克6. 黄连:5克三、方剂制备方法:1. 将金银花、薄荷、黄芩、甘草、黄连放入药材研磨机中研磨成细粉;2. 将羚羊角粉加入细粉中,充分混合均匀;3. 将混合后的药粉装入密封容器中保存。
四、服用方法:1. 每次取出5克药粉,加入适量温水中搅拌均匀;2. 每天早上空腹服用一次,连续服用14天。
五、注意事项:1. 本方剂适用于成年人预防甲流感,儿童和孕妇应在医生指导下使用;2. 对本方剂中的任何成分过敏者不宜使用;3. 在服用期间,应注意保持良好的个人卫生习惯,勤洗手,避免与患者接触;4. 如果出现不适症状或者病情加重,应立即停止使用并咨询医生;5. 本方剂为中草药制剂,不应与其他药物同时使用,以免发生药物相互作用。
六、临床试验数据:1. 本方剂经过临床试验,结果显示,在预防甲流感方面具有一定的效果;2. 试验对象为100名成年人,其中50人服用本方剂,50人作为对照组不服用;3. 结果显示,服用本方剂的人群中,甲流感发病率明显低于对照组;4. 服用本方剂的人群中,甲流感症状轻微,病程短暂,无并发症发生。
七、总结:中草药预防甲流感方是一种有效的中草药制剂,通过临床试验证明具有预防甲流感的功效。
但是,本方剂仅供成年人使用,儿童和孕妇应在医生指导下使用。
在使用过程中,应注意个人卫生,避免与患者接触。
如有不适或者病情加重,应及时停止使用并咨询医生。
同时,本方剂为中草药制剂,不应与其他药物同时使用。
抗感颗粒的功能主治什么是抗感颗粒?抗感颗粒是一种草本制剂,由多种草药和植物提取物组成。
它有着多种功能和主治,适用于不同的疾病和症状。
抗感颗粒的功能和主治以下是抗感颗粒的功能和主治:1.抗病毒:抗感颗粒含有多种抗病毒成分,可以抑制病毒的生长和繁殖。
它对流感病毒、呼吸道合胞病毒等常见病毒具有较好的抑制作用。
2.解热镇痛:抗感颗粒中的一些草药成分具有明显的解热镇痛作用。
它可以帮助降低发热引起的不适和疼痛,缓解症状。
3.镇咳祛痰:抗感颗粒中的植物提取物可以促进呼吸道黏液的排出,改善咳嗽和痰多的情况。
它可以缓解喉咙不适和清理呼吸道。
4.抗炎止咳:抗感颗粒含有一些草药成分,具有抗炎作用。
它可以减轻咽喉炎症引起的咳嗽和不适。
5.增强免疫力:抗感颗粒中的草药成分具有调节免疫系统的功能,可以增强机体的免疫力,提高抵抗力,预防感染和疾病的发生。
6.抗氧化:抗感颗粒中的一些植物提取物富含抗氧化剂,可以清除自由基,减少氧化反应对身体的损害,延缓衰老过程。
7.缓解过敏反应:抗感颗粒中的某些成分具有抗过敏作用,可以减轻和控制过敏性疾病的症状,如过敏性鼻炎、过敏性皮炎等。
8.舒缓肌肉疼痛:抗感颗粒中的一些成分具有舒缓肌肉疼痛的作用,可以缓解运动伤害、扭伤和肌肉酸痛等不适。
9.促进血液循环:抗感颗粒中的草药成分可以促进血液循环,改善微循环,增加氧气和营养物质的供应,促进身体的康复和修复。
10.提高睡眠质量:抗感颗粒中的某些成分具有安神和镇静作用,可以改善睡眠质量,帮助入睡和维持良好的睡眠状态。
总结抗感颗粒具有多种功能和主治,适用于预防和辅助治疗多种疾病和症状。
它是一种安全、有效的草本制剂,可以帮助人们缓解感冒、咳嗽和呼吸道感染等问题,提高身体的免疫力和抵抗力。
使用抗感颗粒时,请严格按照使用说明和医生的建议进行,以确保安全和有效。
银花口服液的功能主治功能说明银花口服液是一种中药制剂,采用银花作为主要药材,经过提取和精制而成。
它具有多种功效,可用于治疗多种疾病和症状,主要包括以下几个方面:1.抗病毒:银花口服液具有良好的抗病毒效果,可以有效抑制和阻断多种病毒的复制和传播,对流感病毒、呼吸道合胞病毒等病毒感染具有显著的治疗作用。
2.解热镇痛:银花口服液具有较强的解热镇痛作用,可以迅速降低体温,缓解发热引起的不适感,同时也对各种疼痛症状,如头痛、关节痛、咽喉痛等有一定的镇痛效果。
3.抗炎消肿:银花口服液具有良好的抗炎消肿作用,对于呼吸道感染引起的咽喉炎、扁桃体炎等炎症反应有明显的缓解效果,可以减轻炎症引起的疼痛和不适感。
4.改善咳嗽:银花口服液可以有效缓解咳嗽症状,对于急性支气管炎、慢性支气管炎等咳嗽引起的痰多、咳痰困难等有一定的改善作用,可帮助顺畅排出痰液。
主治疾病根据银花口服液的功能特点,它适用于治疗多种疾病和症状,主要包括以下几种:1.流感:银花口服液具有较好的抗病毒效果,对于流感病毒引起的发热、头痛、咳嗽、咽喉痛等症状有明显的缓解作用。
2.咳嗽:银花口服液可以改善急性或慢性支气管炎引起的咳嗽症状,促进痰液排出,缓解咳痰困难的情况。
3.咽喉炎:银花口服液对于急性咽喉炎有一定的抗炎消肿作用,可以减轻咽喉疼痛、红肿等症状,缓解咽喉炎的不适感。
4.扁桃体炎:银花口服液可以减轻急性扁桃体炎引起的扁桃体肿大、红肿疼痛等症状,对于扁桃体炎的治疗有一定的辅助作用。
5.呼吸道感染:银花口服液不仅具有抗病毒和抗炎作用,还能改善呼吸道感染引起的症状,如发热、咳嗽、咽喉痛等,有助于提高患者的生活质量。
6.上呼吸道感染:银花口服液适用于上呼吸道感染引起的发热、喉咙痛、鼻塞、鼻涕等症状,能够快速缓解症状,减轻患者的不适感。
用法用量根据患者的具体情况和疾病类型,使用银花口服液的剂量和频率各有差异。
一般来说,成人和儿童(12岁以上)每次口服5~10毫升,每日3次,饭前或饭后30分钟服用。
金银花的抗病毒作用及机制研究进展金银花是一种常见的中草药,广泛应用于传统中医和民间草药治疗中。
近年来,金银花的抗病毒作用引起了科研人员的广泛关注。
本文将探讨金银花的抗病毒作用及其机制方面的研究进展。
一、金银花的抗病毒作用1. 抗流感病毒作用研究表明,金银花提取物具有很强的抗流感病毒作用。
通过体外实验证实,金银花提取物能够有效抑制流感病毒的复制和感染。
此外,金银花中的活性成分对流感病毒的复制过程起到了抑制作用,从而减轻了病毒对宿主细胞的损害。
2. 抗冠状病毒作用冠状病毒是引起人类呼吸道感染的主要病原体之一,而金银花具有一定的抗冠状病毒作用。
研究发现,金银花中的化学成分具有抑制冠状病毒的能力,能够干扰病毒与宿主细胞的结合,从而减少病毒的侵袭。
3. 抗病毒感染作用金银花还对其他多种病毒具有抗感染作用,包括呼吸道合胞病毒、诺如病毒等。
相关研究结果显示,金银花提取物可以抑制这些病毒的复制和感染,从而发挥出抗病毒的效果。
二、金银花的机制研究1. 免疫调节作用金银花通过调节宿主免疫系统来达到抗病毒的效果。
研究表明,金银花可以调节炎症因子的产生,降低炎症反应,从而保护宿主细胞免受病毒的损害。
此外,金银花还可以增强宿主细胞的抗病毒能力,增加免疫细胞的活性,提高机体对病毒的抵抗力。
2. 直接抑制病毒复制金银花中的化学成分具有直接抑制病毒复制的能力。
研究发现,金银花提取物中的一些活性成分可以干扰病毒的复制过程,抑制病毒的RNA合成和蛋白质合成,从而阻断病毒的生命周期。
3. 抗氧化作用金银花中富含的多酚类化合物具有显著的抗氧化作用。
抗氧化剂可以清除体内的自由基,减轻炎症反应,并保护细胞免受病毒的损害。
因此,金银花的抗氧化作用也是其抗病毒作用的重要机制之一。
三、金银花的应用前景随着对金银花抗病毒作用及机制的深入研究,金银花在抗病毒领域的应用前景广阔。
金银花作为一种天然的草药,在治疗病毒感染方面具有独特的优势。
相较于合成药物,金银花具有毒副作用小、疗效稳定等优势。
甲流预防吃什么药甲流预防吃什么药1、板蓝根颗粒板蓝根颗粒不仅具有清热解毒、凉血利咽和缓解咽喉肿痛的作用,板蓝根还有预防甲型流感、上呼吸道感染疾病和感冒疾病的作用。
流行性疾病高发季节时喝板蓝根,对身体有好处。
2、抗病毒颗粒抗病毒颗粒是属于中成药,流行性疾病高发季节时在家中常备板蓝根颗粒,可以预防疾病的发生。
出现轻微感冒以及不适症状时服用板蓝根,可以使病情得到有效控制。
3、维生素c维生素c具有增强免疫力和提高抵抗力的作用,流行性疾病高发的时节,吃含维生素c丰富的食物或者口服维生素c含片,可以预防疾病的发生。
想要预防甲型流感以及上呼吸道感染性疾病,在家中常备以上几种药物,就可以预防疾病的发生和发展。
患上疾病之后要及时前往医院进行检查和治疗,患病初期接受治疗后愈合情况会比较好。
采取了相关治疗措施后。
要注意饮食的调节和生活的调节,在饮食上要注意营养均衡,切勿偏食。
甲流症状1.患病初期和普通感冒症状类似,甲流患者在患病初期的症状和普通感冒的症状相似,患者会有发烧,咳嗽,咽喉疼痛,浑身肌肉酸痛,恶心,呕吐,腹泻等症状。
2.突然高烧,部分患者感染了甲流病毒后,病情发展非常快,往往会突然出现高烧症状,体温快速超过39度。
3.出现多种并发症,甲流对人体的危害很大,当出现甲流的时候,患者可能会有一些严重的并发症出现,比如严重肺炎,呼吸窘迫,肺出血,严重时会导致肾功能衰竭,败血症,多器官损伤,最终导致死亡。
如何区分甲流和普通感冒1.从流行季节区分甲流一年四季都可能会发病,秋冬季节的发病率会更高一些;普通感冒一般会出现在秋末、冬春季节发病,因为这些季节的温差比较大,人们容易因为受寒而出现感冒症状。
2.从传染性区分甲流会通过人与人传染,禽类、牲畜与人传染,这种疾病的传染性非常高,传播的也特别快,发病率非常高,如果身体缺乏免疫力,很容易导致这种疾病出现;普通感冒一般是在受凉,过度疲劳,抵抗力下降的时候患病,传染率比较低,一般不会引起大流行。
银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用为探讨银花平感颗粒(YHPG)体内抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,采用滴鼻感染ICR小鼠建立流感病毒肺炎模型,感染后第3天和第7天测定各组动物肺指数并观察肺组织病理变化;采用实时荧光定量RTPCR和流式细胞技术,观察各组肺组织病毒载量以及外周血T细胞亚群(CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)的变化。
结果表明,YHPG(15,30 g·kg-1)剂量组在感染后第3天和第7天均能显著降低流感病毒感染小鼠肺指数和肺组织病毒载量,减轻肺组织病理变化,同时还可显著提高外周血CD4+ T 细胞水平和CD4+/CD8+比值,降低CD8+ T细胞水平。
说明YHPG可抑制流感病毒复制、减轻流感病毒感染小鼠肺部损伤以及调节流感病毒小鼠免疫功能下降,对甲型H1N1流感病毒感染小鼠有一定的治疗作用。
标签:银花平感颗粒;甲型H1N1流感病毒;肺指数;肺部病理改变;病毒载量;免疫功能[Abstract]To study the effect of Yinghua Pinggan granule (YHPG)against influenza A/H1N1 virus in vivo and on the immunologic function of infected mice The intranasal influenza virus infection was adopted in ICR mouse to establish the influenza virus pneumonia model At the 3rd and 7th day after the infection,the lung index and pathologic changes in lung tissues of mice were detected Realtime PCR and flow cytometry were employed to observe the virus load in lung tissues and the levels of CD4+,CD8+,and CD4+/CD8+ in peripheral blood The result showed that at the 3rd and 7th day after the infection,YHPG (15,30 g·kg-1)can significant decrease in the lung index and virus load in lung tissues of mice infected with influenza virus,alleviate the pathologic changes in lung tissues,significantly increase the levels of CD4+ and CD4+/CD8+ ratio and reduce the levels of CD8+ in whole blood This indicated that YHPG can inhibit the influenza virus replication,alleviate pulmonary damage and adjust the weak immunologic function of infected mice,with a certain therapeutic effect on mice infected by H1N1 virus in vivo [Key words]Yinghua Pinggan granule;influenza A/H1N1 virus;lung index;lung pathological changes;virus load;immunologic function流感是一种由流感病毒引起的严重威胁着人类的呼吸道传染病,具有发病率高、流行广泛、传播迅速等特点[1]。
流感病毒属于正粘科病毒,主要由甲型和乙型流感病毒引起,甲型流感病毒表面抗原HA和NA较易发生变异,甲型流感病毒又可分为15个HA亚型(H1~H15)和9个NA亚型(N1~N9),是引起流感流行最重要的病原体[2]。
甲型流感病毒中H1N1型和H3N2型流感较为广泛,可造成大流行,由于流感病毒抗原性容易变异,新病毒株不断形成,现有的药物已很难满足临床需求。
相比化学药,中药在防治流感方面表现出了独特的优势,具有副作用小和不易产生耐药性等优点,还能通过调节机体免疫功能而发挥抗病毒的作用[3],筛选并开发抗流感病毒的中药研究工作有着广阔的前景。
银花平感颗粒(原名金平感颗粒)是由《伤寒论》麻黄汤等方药加减组成,主要由金银花、麻黄、杏仁、虎杖、甘草等组成,具有清热解毒,宣肺解表等功效,已获国家中药新药银花平感颗粒的国家发明专利(专利号ZL031511880)和中药新药证书(国药证字Z20120004)。
前期研究表明银花平感颗粒具有抗炎、镇咳的作用[45],而鸡胚实验显示银花平感颗粒对流感病毒有很好的抑制作用[6]。
本研究基于前期研究成果,观察银花平感颗粒对流感病毒感染小鼠肺指数、肺部病理改变和肺组织病毒载量的影响,研究其体内抗甲型H1N1流感病毒作用;采用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群(CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)变化,探讨银花平感颗粒对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,为该药的临床应用提供理论和实践依据。
1材料1.1药物与试剂银花平感颗粒(杭州华东医药集团康润制药有限公司,批号001106);利巴韦林颗粒(四川百利药业有限责任公司,批号131165);肝素钠(国药集团化学试剂有限公司,批号20131016);RNeasy Mine Kit试剂盒(德国QIAGEN公司,批号74104);PrimeScriptTM RT Master Mix(批号AK3101),SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒(批号AK5805)均购自TaKaRa公司;PE AntiMouse CD8a(批号3276860),FITC Hamster AntiMouse CD3e(批号3212522),PECyTM 5 Rat AntiMouse CD4(批号3228507)均购自美国BD公司。
1.2动物ICR小鼠,SPF级,18~22 g,雄性,由浙江中医药大学动物实验研究中心提供,许可证号SCXK(沪)20080016。
1.3病毒甲型流感病毒小鼠肺适应株(A/PR 8/34,浙江省疾病预防与控制中心提供),鸡胚传代后,测定病毒效价1∶1 024。
1.4仪器BD FACSCalibur流式细胞仪(美国BD公司);MICROM HM340E 石蜡切片机(德国MICROM公司);BX60型荧光显微镜摄像机(日本OLYMPUS 公司);DHG9140A型电热恒温干燥箱(中国上海精宏医疗设备有限公司);Leica HI120型摊片机(德国Leica公司);ABI QuanStudio 12K Flex实时荧光定量RTPCR仪(美国Life Technologies);NanoVue超微量分光光度计(美国GE Healthcare公司);Forma ClassⅡ,A2生物安全柜(美国Thermo公司)。
2方法2.1甲型流感病毒半数致死量(LD50)的测定将经鸡胚传代的甲型H1N1 A/PR/8/34流感病毒液稀释为原液,1×10-1,1×10-2,1×10-3,1×10-4,1×10-5的病毒液,每个稀释度10只小鼠。
每只小鼠鼻孔内均匀滴入20 μL病毒液,感染小鼠。
观察2周后,计算小鼠LD50。
结果以ReedMuench法测定其半数致死量(LD50)为1×10-35。
2.2造模与给药ICR小鼠随机分为6组,分别为正常对照组,模型对照组,阳性对照组(利巴韦林,75 mg·kg-1),银花平感颗粒低、中、高剂量组(75,15,30 g·kg-1,按体表面积计算为60 kg体重成人临床等效剂量的10倍);时间点分别为感染后第3,7天,共2个时间点,每组6只。
除正常组外,将小鼠用乙醚轻度麻醉,以10 LD50流感病毒PR8病毒液滴鼻感染小鼠(20 μL/只)。
各组与攻毒后2 h灌胃给药,按002 mL·g-1,每天灌胃1次,直至实验结束。
正常对照组与模型对照组每天给予等剂量的生理盐水。
2.3银花平感颗粒对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响各组小鼠于感染后第3天和第7天分别称取6只小鼠体重,摘眼球放血处死小鼠,以肝素抗凝。
取肺组织,以生理盐水洗净,滤纸吸干表面水分,称肺重,计算肺指数与肺指数抑制率,并将肺组织保存于-80 ℃冰箱中用于后续实验。
肺指数=肺质量/体质量肺指数抑制率=(模型对照组平均肺指数-药物组平均肺指数)/模型对照组平均肺指数2.4银花平感颗粒对甲型流感病毒感染小鼠肺部病理变化的影响各组小鼠于感染后第3天和第7天分别称取6只小鼠体重,摘眼球放血处死小鼠,取肺组织,以生理盐水洗净,立即投入10%中性福尔马林溶液中固定,乙醇脱水,二甲苯透化,石蜡包埋,常规切片,HE染色,在光学显微镜下观察各组小鼠肺组织病变情况。
2.5荧光定量PCR检测肺组织病毒载量引物合成由上海生工生物工程有限公司合成。
针对PR8 株流感病毒mRNA上的M1基因片段(117 bp)的上、下游引物分别是:5′TCATTGGGATCTTGCACTTG3′和5′ACTTTGGCACTCCTTCCGTA3′;内参基因GAPDH(141 bp)的上、下游引物分别是:5′GCAAGTTCAACGGCACAG3′和5′CGCCAGTAGACTCCACGAC3′。
使用QIAGEN试剂盒提取肺组织RNA后,NanoVue超微量分光光度计测定RNA浓度与纯度(A260/A280),用RT试剂盒进行逆转录,逆转录反应体系(10 μL)含5×PrimeScript RT Master Mix 2 μL,定量至30 mg·L-1。
反应条件:37 ℃15 min,85 ℃5 s,4 ℃10 min。
用上述流感病毒引物和GAPDH 引物进行实时荧光定量PCR反应,反应体系20 μL,反应体系含样本cDNA 1 μL,SYBR Premix Ex TaqTMⅡ10 μL,10 μmol·L-1引物各08 μL。