激素溶解方法

常用激素溶解方法
1、吲哚乙酸（IAA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
2、吲哚丁酸(IBA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
3、萘乙酸（NAA）：溶于乙醇、碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解；
4、玉米素（ZT)：溶于乙醇或碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解
5、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）：溶于碱性溶液或酸性溶液；一般使用0.1molHCl或NaOH溶液溶解；
6、赤霉素（GA3）：溶于乙醇，使用95%酒精溶解
备注：生长素一般使用95%乙醇或NaOH 溶解；
分裂素一般使用NaOH溶液、95%乙醇或稀HCl溶解；。

培养基配⽅及配置培养基配⽅及配置根据其作⽤不同，培养基分为：诱导培养基增殖培养基⽣根培养基根据其营养⽔平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。

基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。

完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加⼀些物质，如⽣长调节物质和其他复杂有机物质等。

N6培养基特点：1974年朱⾄清等为⽔稻等⽲⾕类作物花药培养⽽设计成分简单KNO3 和(NH4)2SO4含量⾼⼴泛应⽤于⼩麦、⽔稻及其它植物的花药培养等White培养基特点：1943年由Ｗhite为培养番茄根尖⽽设计的。

1963年⼜作了改良，称作Ｗhite改良培养基。

特点：⽆机盐含量较低适⽤：⽣根培养。

B5培养基特点：含较低的铵双⼦叶植物尤其⽊本植物组培可选择MS培养基特点：⽆机盐、离⼦浓度⾼，硝酸盐含量较⾼。

MS培养基是⽬前应⽤最多最普遍的培养基。

⽆机盐的浓度较⾼，能保证组织培⽣长所需的矿物质营养。

并且因为离⼦浓度⾼，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出⼊，也不致影响培养基中的离⼦平衡培养基配⽅明细表：培养基成分：⼀、⽆机盐：氮枝叶⽣长需要氮素，缺氮⽼叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛。

磷缺磷，植株⽣长缓慢，⽼叶暗紫⾊。

钾促进花卉⽣长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。

缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶⽚呈皱曲状，⽼叶发黄或⽕烧状。

钴缺钴，叶⽚失绿⽽卷曲，整个叶⽚向上弯曲凋枯。

⼆、有机物碳⽔化合物：选⽤种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%⼤⽣产时可⽤⽩糖糖在培养基的作⽤：1）为细胞提供合成新物质的碳⾻架2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3）维持渗透压维⽣素种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏⾎酸浓度：0.1－1.0mg/L作⽤：VB1 促愈伤组织产⽣，提⾼活⼒VB6 促根⽣长Vc 防组织褐变VB3 与植物代谢和胚的发育有关系氨基酸：⽢氨酸、精氨酸、⾕氨酸、⾕氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。

常用激素溶解方法
1、吲哚乙酸（IAA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
2、吲哚丁酸(IBA)：溶于乙醇、热水、碱性溶液，碱性溶液中稳定；一般使用95%酒精、NaOH溶液溶解；
3、萘乙酸（NAA）：溶于乙醇、碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解；
4、玉米素（ZT)：溶于乙醇或碱性溶液；一般使用95%酒精或NaOH溶液溶解
5、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）：溶于碱性溶液或酸性溶液；一般使用0.1molHCl或NaOH溶液溶解；
6、赤霉素（GA3）：溶于乙醇，使用95%酒精溶解
备注：生长素一般使用95%乙醇或NaOH 溶解；
分裂素一般使用NaOH溶液、95%乙醇或稀HCl溶解；。

●可高压灭菌：IBA，NAA ，6-BA，2,4-D●不可高压灭菌：IAA，GA3●水杨酸不是很清楚，参考wiki上“科尔贝－施密特反应（Kolbe-Schmitt反应）是干燥的酚钠或酚钾与二氧化碳在加温（125-150°C）加压（100atm）下生成羟基苯甲酸的反应。

它是向芳环上引入羧基的一种常用方法，常用的工业原料水杨酸（邻羟基苯甲酸）就是利用此法，通过苯酚盐与二氧化碳作用制得的。

”而高压灭菌锅的温度和压强分别为121°C和0.15Mpa（压力表的数值，实际为0.25MPa即2.5atm），我个人认为水杨酸高压灭菌会分解。

因为从上可以看出水杨酸的分解就是科尔贝－施密特反应的逆反应，看反应式便明白加压有利于正反应，而减压有利于逆反应，而121°C的灭菌温度基本与合成反应的温度相持，2.5atm的压强却远小于合成反应，明显是有利于逆反应进行。

故我认为水杨酸不宜高压灭菌。

如果不确定的话可以做个实验，配一小瓶水杨酸溶液高压灭菌，灭过后观察其会不会有粉红色，有的话就说明产生苯酚并氧化成对苯醌了。

●配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。

●细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。

●配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。

一般来说感觉用醇溶后较容易析出，而且溶解也不容易，还是用少量酸或碱溶，再用蒸馏水定容●植物激素配制方法●植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。

由于多数激素难溶于水，它们的配法如下：●生长素：1 IAA，IBA用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。

1）0.1 %升汞的配制方法:
称取0.5 g升汞粉末，加入少量浓HCL（1 M）溶解，然后定容至500 ml容量瓶中
2）0.5 mg/ml 6-BA：
用少量1 mol/L的NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
3）0.5 mg/ml NAA:
用少量1 mol/L NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
4）0.5 mg/ml 2，4-D:
用少量1 mol/L 少量95 %乙醇溶解，然后定容至容量瓶中
5）1 mg/mlTDZ
用少量1 mol/L NaOH溶解，然后定容至容量瓶中
6）Picloram
以无菌水溶解后过滤灭菌
7）IBA 配制0.2 mg/ml
用95 %酒精溶解，再用蒸溜水稀释后分别配制成0.2 mg/ml的母液。

要注意，配制时，要把溶解有IBA的酒精倒入水中，不要把水倒入溶解有IBA的酒精中，否则会引起沉淀。

发生沉淀后不可使用。

8）1 mg/ml 6-KT的溶解方法
用少量1 mol/LNaOH溶解，然后用蒸馏水稀释。

HPLC 测定内源激素样品处理：各类试材均是在生长季的某一个或两个时期摘取1-5个新梢的中部叶片4-6片，做好标记存放于冰瓶中迅速带回实验室，在室内洗净灰尘杂物并吸干水分后，放入冷冻离心机冷冻干燥，研碎放入小塑料袋中置于-30℃冰箱中备用。

（1）激素的提取：秤取0.1g由不少于4片叶子或其他部分构成，将称好的样品放入离心管中，用含有30ug/ml的二乙基二硫代氨基甲酸钠（抗氧化剂）的100%冷乙腈为浸提液，浸提三次，第一次加入10ml浸提液晃匀后将离心管密封置于0℃冰箱中静止浸提12小时左右，离心，上清液倒入小玻璃瓶，第二次加入5ml，在振荡器上以230转/分速度震荡提取2小时后离心，第三次加入3ml提取液清洗残渣，离心，都倒入小玻璃瓶中。

（2）第一次减压浓缩及溶解将合并后的提取液倒入蒸馏瓶中，在37-40℃条件下减压浓缩至干，而后加入PH为8.0的0.4M的磷酸缓冲液2ml和2ml的三氯甲烷洗涤，倒入小玻璃瓶中。

用3ml 0.4M的磷酸缓冲液洗涤两次，再加入2ml三氯甲烷刷洗蒸馏瓶，倒入小玻璃瓶中。

（3）去除色素首先将盛有溶解液的玻璃瓶封口在振荡器上振荡20min,而后用移液器抽取下层三氯甲烷，弃去，然后加入2ml三氯甲烷进行第二次去除色素。

如果水相中仍有色素则可重复上一步进行第二次色素去除。

(4)去除酚类杂质对三氯甲烷萃取的水相溶液，倒入离心管，加入150mg不溶性的聚乙烯吡咯烷酮（pvpp）,上下震荡，离心8000rpm,10min.(5) 植物激素的萃取移液器取上清液3ml, 滴加纯甲酸直至PH试纸为3.0，（经验值100ul左右），往此水相中加入乙酸乙酯振荡（3ml），移液器提取酯相（上层），其水相再用乙酸乙酯萃取两次（2ml, 2ml），合并所得酯相。

（6）第二次浓缩及进一步纯化所得酯相倒入蒸馏瓶中，在37-40℃下减压蒸干，蒸干物用1ml色谱流动相溶解。

（7）溶解及过滤办法由于最后溶解液1ml流动相即是HPLC上机样品，所以一定要在蒸馏瓶完全蒸干前提下一次性用移液管准确加入1ml,并充分溶解瓶内蒸干物质，尽量是瓶内溶液浓度均一，而后直接倒入干燥无水的滤膜过滤器的针筒中进行加压并使溶液通过直径为0.45um的水相微孔滤膜，压滤液存放于1.5ml离心管中用于上机测定。

第1节激素与内分泌系统第1课时激素的发现及研究实例[学习目标] 1.分析激素的发现过程。

2.归纳概括研究内分泌腺和激素功能的基本方法。

一、激素的发现1．外分泌腺和内分泌腺(1)外分泌腺①概念：凡是分泌物经由导管而流出体外或流到消化腔的，称为外分泌腺。

②实例：汗腺、唾液腺、胃腺等。

(2)内分泌腺①概念：凡是没有导管的腺体，其分泌物——激素直接进入腺体内的毛细血管，并随血液循环输送到全身各处的，称为内分泌腺。

②实例：甲状腺、肾上腺等。

2．激素的发现(1)促胰液素的发现使人们认识到，机体除了神经调节，还存在激素调节。

(2)激素调节：是指由内分泌器官或细胞分泌的化学物质——激素进行调节的方式。

判断正误(1)内分泌腺分泌的激素经导管运输到相应部位()(2)内分泌腺和外分泌腺分泌的化学物质都是内环境的成分()(3)促胰液素是由胰腺分泌的激素()答案(1)×(2)×(3)×特别提醒促胰液素是在稀盐酸的刺激下，由小肠黏膜分泌的，其作用是促进胰腺分泌胰液。

任务一：评价促胰液素的发现1．科学背景(1)事实与问题：胰腺分泌胰液，胰液(含消化酶)经导管流向十二指肠，促进食物的消化。

胰液的分泌是如何调节的呢？(2)理论依据：内脏器官大多同时接受交感神经和副交感神经的双重支配。

(3)实验证据：刺激迷走神经(副交感神经)能引起胰腺的分泌。

2．相关实验(1)沃泰默的实验(小肠如何把盐酸到来的消息传给胰腺)a．稀盐酸→狗的小肠肠腔→胰腺分泌胰液b．稀盐酸→狗的血液→胰腺不分泌胰液c．稀盐酸→狗的小肠肠腔(切除神经只留血管)→胰腺分泌胰液①请运用神经调节的知识尝试解释a组的实验现象，并完善下图。

②a、b组形成对照实验，自变量、因变量、对照组分别是什么？提示自变量是稀盐酸的作用部位，因变量是胰腺是否分泌胰液，对照组是a组。

③根据a、b组对照实验的结果你能得出什么结论？提示稀盐酸不通过血液直接作用于胰腺，直接接受盐酸刺激的部位是小肠。