当前位置：文档之家 › 尤瑞克林对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

尤瑞克林对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

  • 格式：pdf
  • 大小：430.46 KB
  • 文档页数：3

尤瑞克林对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究席海龙1，皇甫卫忠2，万红梅1，王水珠1(1新余市人民医院，江西新余338000;2内蒙古医科大学第一附属医院)摘要：目的观察尤瑞克林对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制。

方法新西兰大白兔48只，随机均分成假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、尤瑞克林治疗组（Y组）。

术中观察心电图变化，测定各组不同时间点血清中肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、内皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的含量；再灌注结束后I/R组、Y组各取8只兔心肌组织，进行相应染色后通过光学显微镜观察形态学变化，电境观察超微结构变化。

结果与I/R组相比，Y组的CK-MB、cTnI、IL-6、TNF-α、ET-1水平明显降低（P均＜0．05），NO生成增加（P均＜0．05）；心肌组织形态学及超微结构损伤明显减轻。

结论尤瑞克林对兔缺血再灌注损伤心肌具有明显保护作用，并能明显减轻心肌细胞和组织的损伤，其作用机制可能与其抗炎、保护血管内皮功能有关。

关键词：再灌注损伤；尤瑞克林；白细胞介素-6；肿瘤坏死因子；内皮素-1；一氧化氮；兔doi：10．3969/j．issn．1002-266X．2013．01．009中图分类号：R542．2文献标志码：A文章编号：1002-266X（2013）01-0027-03心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是指缺血心肌在恢复血流再灌注后，反而加重其损伤，引起细胞死亡，表现为再灌注心律失常、心肌微循环障碍、心肌舒缩功能障碍、梗死范围扩大，造成心功能的进一步损害，严重时影响患者预后；其防治是长期以来MI-RI治疗研究领域的热点课题。

目前的研究认为，氧自由基的产生、心肌细胞内Ca2+超负荷及炎症反应等因素是造成MIRI的主要原因［1］。

尤瑞克林是自人尿液中提取的一种蛋白水解酶，能将激肽原转化为激肽和血管舒张素，目前主要用于轻—中度急性脑梗死，临床上取得了一定的疗效［2］，因此用于MI-RI保护具有很大潜力。

2011年6月 2012年5月，本研究通过观察尤瑞克林对MIRI兔模型的影响，旨在探讨其对兔MIRI的保护作用及机制。

1材料与方法1．1材料成年健康新西兰大白兔48只（3 4个月龄，由南昌大学医学院动物医学部提供），体质量2．0 2．5kg。

尤瑞克林粉针由广东天普生化医药股份有限公司提供（国药准字H20040356，0．15 PNA/支）。

肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I （cTnI）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及一氧化氮（NO）检测试剂盒均购自南京建成生物制品研究所。

内皮素-1（ET-1）检测试剂盒购自北京通讯作者：皇甫卫忠华英生物技术研究所。

1．2模型制作及分组将动物随机分为3组（每组16只）：假手术组（Sham组），缺血再灌注组（I/R 组），尤瑞克林治疗组（Y组）。

用生理盐水将尤瑞克林溶解后稀释成0．15PNA/支/15mL。

从兔耳缘静脉注入戊巴比妥钠（30mg/kg）进行麻醉，左股静脉建立静脉通路供给药物及采血。

以标准Ⅱ导联监测兔心电图；Sham组开胸暴露心脏，完成全部操作，用丝线绕过左冠状动脉前降支（LAD），但不予结扎，40min后经股静脉滴入生理盐水1mL/kg，15 min内滴完后观察120min。

I/R组用丝线结扎LAD，缺血40min后给予生理盐水1mL/kg滴入，完全松开结扎线后再灌注120min。

Y组用尤瑞克林针（1mL/kg）代替生理盐水，余同上。

各组给药后缝合胸壁，分别于缺血前5min、缺血后40min、再灌注后60min、再灌注后120min经股静脉采血4mL。

以缺血后ST段和（或）T波抬高＞0．1mV，或R波波幅增高和左心室苍白作为判定缺血成功的标准；松开LAD血管结扎线后，抬高的ST段下降和（或）T波回落＞50%以上作为再灌注成功的标准。

实验白兔的排除标准：结扎LAD失败或发现未再灌注者，各种原因导致的心力衰竭者。

1．3血清CK-MB、cTnI、IL-6、TNF-α、ET-1、NO的测定用酶动力学方法在全自动分析仪上测定CK-MB浓度，ELISA法检测cTnI、IL-6及TNF-α浓度，72山东医药2013年第53卷第1期放射免疫分析法测定ET-1浓度，硝酸还原酶法测定NO浓度，操作按照试剂盒说明书进行。

1．4光学显微镜观察心肌大体形态学指标各组再灌注末剪下8只白兔心脏，取缺血区中央部位心内膜心肌（Sham组取相应部位心肌），予10%甲醛溶液固定后，石蜡包埋，予以常规组织学处理，HE 染色后，制作心肌切片标本，通过光学显微镜观察心肌组织形态学变化。

1．5电子显微镜观察心肌超微结构各组再灌注结束末剪下另8只白兔心脏，在缺血区中央部位取1mmˑ1mmˑ1mm心肌标本（Sham组取相应部位心肌），2．5%的戊二醛处理，1%的饿酸固定45 min，脱水、渗透、包埋得到超薄电镜切片，然后用透射电镜观察心肌细胞膜、细胞质、肌原纤维、线粒体等超微结构的变化。

1．6统计学方法采用SPSS16．0软件，计量资料以珋xʃs表示，多组间比较采用重复测量的方差分析，两两比较用SNK-q检验。

P≤0．05为差异有统计学意义。

2结果2．1各组不同时间点血清CK-MB、cTnI、IL-6、TNF-α、ET-1、NO水平的变化见表1。

表1各组不同时间点血清CK-MB、cTnI、IL-6、TNF-α、ET-1、NO水平的变化（珔xʃs）组别n CK-MB（U/L）cTnI（μg/L）IL-6（ng/L）TNF-α（ng/L）ET-1（ng/L）NO（mmol/L）Sham组16缺血前5min650．3ʃ37．61．67ʃ0．2696．7ʃ16．7173．5ʃ8．6421．5ʃ54．8133．3ʃ11．68缺血后40min663．1ʃ40．51．78ʃ0．30107．2ʃ18．2218．4ʃ9．6452．8ʃ47．6122．7ʃ12．13再灌注后60min689．1ʃ41．31．99ʃ0．32124．6ʃ24．8236．2ʃ11．9483．7ʃ56．2108．5ʃ9．86再灌注后120min728．4ʃ47．82．15ʃ0．33137．6ʃ22．1267．9ʃ14．3531．4ʃ67．3101．9ʃ11．34 I/R组16缺血前5min642．7ʃ38．51．73ʃ0．2589．3ʃ17．8180．1ʃ9．1389．2ʃ56．2118．7ʃ10．46缺血后40min1618．2ʃ120．1*3．64ʃ0．41*168．8ʃ24．8*782．5ʃ22．6*843．6ʃ83．7*89．1ʃ9．23*再灌注后60min2634．9ʃ282．1*7．27ʃ0．59*365．5ʃ36．3*1759．2ʃ37．6*1543．7ʃ120．5*65．8ʃ7．32*再灌注后120min3556．8ʃ424．7*8．94ʃ0．82*483．5ʃ45．8*2136．2ʃ49．6*1868．2ʃ136．2*48．7ʃ6．45* Y组16缺血前5min657．5ʃ39．31．70ʃ0．2393．6ʃ18．4185．4ʃ8．7405．6ʃ49．5126．6ʃ11．87缺血后40min1686．7ʃ127．4*3．56ʃ0．46*175．4ʃ23．6*762．4ʃ23．4*789．4ʃ90．9*94．9ʃ10．22*再灌注后60min1967．1ʃ186．4*#5．17ʃ0．48*#278．1ʃ31．5*#1346．7ʃ35．3*#789．4ʃ90．9*83．5ʃ9．78*#再灌注后120min2767．9ʃ313．2*#6．32ʃ0．49*#369．3ʃ34．2*#1635．2ʃ41．8*#1363．7ʃ124．3*#71．4ʃ7．72*#注：与同时间点Sham组比较，*P＜0．05；与同时间点I/R组比较，#P＜0．052．2形态学结果Sham组：心肌组织无变性、坏死，心肌间质无明显水肿；I/R组：心肌组织变性、坏死，心肌间质明显水肿、出血；Y组：心肌组织轻度变性、坏死，心肌间质有水肿。

2．3心肌的超微结构Sham组：心肌纤维排列连续规则，Z线清楚，线粒体结构完整、清晰，嵴排列整齐，嵴间隙明显；I/R组：心肌纤维排列紊乱，部分肌纤维溶解、断裂，Z线消失，线粒体严重肿胀，空泡样变性；Y组：心肌纤维排列轻度紊乱，Z线清楚，线粒体轻度肿胀，少数空泡样变性。

3讨论急性MIRI与炎症密切相关，早期急性炎症反应在急性MIRI中起重要作用［3］。

炎症反应产生大量炎性细胞因子，其在MIRI中发挥重要作用。

IL-6是白细胞和内皮细胞产生的重要炎性介质之一，处于炎症调控的枢纽位置；在MIRI中，IL-6被视为应激反应程度的指标；IL-6大量产生可诱导中性粒细胞进入缺血区，刺激黏附分子CD11b/CD18、细胞间黏附分子-l的表达，介导中性粒细胞与心肌细胞结合，致使缺血心肌损伤加重［4］。

TNF-α是MIRI炎症反应中的关键介质，可以触发其他炎性细胞因子的产生，如IL-6、IL-8等；同时对心肌有负性肌力作用，表现为抑制心肌收缩力，减少射血分数，降低血压；TNF-α诱导心肌细胞凋亡、坏死，增加心肌梗死面积，参与心肌损伤及重构［5］。

IL-6、TNF-α是MI-RI局部和外周血液循环的炎症标志物。

ET是由内皮细胞合成和释放的一种血管活性肽，其亚型ET-1是迄今发现的一种最强的内源性缩血管活性多肽，其通过激活钙通道增加Ca2+内流，促进血管平滑肌收缩；同时作为一种生长因子，ET-1可刺激血管平滑肌细胞增殖［6］。

ET-1促使冠状动脉强有力的收缩导致心肌缺血。

NO是血管内皮合成并释放的一种内源性舒张因子，它通过c-GMP途径降低细胞内Ca2+浓度或阻断Ca2+内流使平滑肌细胞舒张，具有扩张冠状动脉、抑制血小板聚集、抗血栓形成、抑制中性粒细胞的黏附与激活、抑制平滑肌增殖等作用［7］。

炎症反应损伤血管内皮，导致ET-1生成增加、NO合成与释放减少。

CK-MB是一种存在于心肌细胞内的蛋白酶，cTnI是存在于心肌肌原纤维中细肌丝上的收缩调节蛋白，当细胞损伤或坏死时，82山东医药2013年第53卷第1期CK-MB、cTnI便从细胞内释放到血液中，因此，测定血清中CK-MB、cTnI浓度可作为反映心肌坏死程度的一个指标，可以比较准确地反映心肌细胞受损的程度。

本实验建立了兔MIRI模型，心电图、心肌酶学均显示模型构建成功。

基础研究发现，激肽原酶能通过抑制细胞凋亡和炎症细胞浸润减轻心脏、肾脏和脑等器官损伤［8］。

体外研究显示，尤瑞克林对离体动脉具有舒张作用，并可抑制血小板聚集和血液凝固，增强红细胞变形能力和氧解离能力，促进组织葡萄糖利用。

合集下载

尤瑞克林对心脏骤停后综合征兔脑保护作用的研究

尤瑞克林对心脏骤停后综合征兔脑保护作用的研究

尤瑞克林对心脏骤停后综合征兔脑保护作用的研究李昌盛;闵喆;杨贤义;郭辉;柴林;肖敏【摘要】目的:探讨尤瑞克林(UK)对心脏骤停后综合征(PCAS)兔脑的保护作用及机制.方法:将42只日本大耳白兔随机分为假手术组(n=6)、PCAS组(n=12)、UK大剂量(UK-H)组(n=12)、UK小剂量(UK-L)组(n=12).采用窒息性心脏骤停法制备兔PCAS模型,假手术组不造成窒息.复苏成功后UK-H、UK-L组立即给予UK17.5×10-3PNAU/kg、3.5×10-3PNAU/kg,PCAS组注射等量生理盐水.分别于复苏前、复苏后6h、24h、48h检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE),并进行神经功能缺损评分.48 h后取兔脑组织,应用Western blot方法测定脑组织Caspase-3、Caspase-9表达.结果:与假手术组比,PCAS组、UK-H组、UK-L组血清NSE水平在复苏后6h、24h、48h均明显升高(P<0.01).与PCAS组比,UK-H组、UK-L组血清NSE水平、神经功能损伤评分在复苏后24h、48h明显减少,复苏后48h Caspase-3、Caspase-9表达水平减低(P<0.05),且在复苏后48h UK-H组较UK-L组减低更为明显(P<0.05).结论:UK能减少复苏后脑炎性因子表达,改善神经功能,其机制可能与抑制细胞凋亡有关.%Objective: To investigate the brain protective effects and mechanism of urinary kallidinogenase (UK) in rabbits with post-cardiac arrest syndrome (PCAS). Methods: Japanese white rabbits were random divided into the sham group (n=6), PCAS group(n=12), UK high-dose group (UK-H group, n=12), and UK low-dosegroup(UK-L group,n=12).PCAS models were established by using asphyxia-induced cardiac arrest;the sham group was not subjected to asphyxia. Immediately after ROSC, UK-H and UK-L groups were given17.5×10-3 PNAU/kg and 3.5×10-3 PNAU/kg doses of UK,and the PCASgroup was injected with an equal amount of saline.Serum level of neuron specificity enolization enzyme(NSE)was examined before ROSC and 6 h,24 h, and 48 h after ROSC respectively. Functional outcomes were measured by neurological deficit score. Rabbit brain tissue was collected after 48 h, and Western blot was performed to determine brain tissue Caspase-3 and Caspase-9 expression.Results:Compared to the sham group,serum level of NSE was significantly elevated in the PCAS group,UK-L group,and UK-H group 6 h,24 h,and 48 h after ROSC(P<0.01).Compared to PCAS group,serum level of NSE and neurological deficit score was clearly decreased in the UK-L group and UK-H group 24 h and 48 h after ROSC;the expression level of Caspase-3 and Caspase-9 was significantly attenuated in the two groups 48 h after ROSC (P<0.05), with the UK-H group showing a greater reduction than the UK-L group (P<0.05). Conclusion: UK reduced brain inflammation and alleviated neurological deficit, and the mechanism may be related to inhibition of apoptosis.【期刊名称】《神经损伤与功能重建》【年(卷),期】2018(013)005【总页数】4页(P221-224)【关键词】心脏骤停后综合征;尤瑞克林;炎症;凋亡【作者】李昌盛;闵喆;杨贤义;郭辉;柴林;肖敏【作者单位】十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)急诊医学科,湖北十堰442000;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉430030;十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)急诊医学科,湖北十堰442000;十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)急诊医学科,湖北十堰442000;十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)急诊医学科,湖北十堰442000;十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)急诊医学科,湖北十堰442000【正文语种】中文【中图分类】R741;R741.05心脏骤停后综合征（post-cardiac arrest syndrome，PCAS）是指心肺复苏后引起的全身多器官功能障碍[1]，其中以脑功能障碍最难恢复。

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响李庆;李彤;杨景学;李悟;杨秀玲;谭红梅【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2002(023)020【摘要】目的评价缺血再灌注(I/R)对心肌肌浆网(SR)钙释放功能的影响. 方法将16只新西兰兔完全随机平分为对照组、缺血再灌注组;采用langendorff离体心脏灌注模型;蔗糖密度梯度离心法制备心肌肌浆网;微孔滤膜过滤技术测定心肌肌浆网钙转运功能改变;半定量RT-PCR检测相应蛋白质mRNA表达水平改变. 结果与对照组相比,缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少,而Ryanodine受体2 (RYR2) mRNA表达水平明显减少. 结论缺血再灌注后心肌肌浆网Ryanodine受体2基因表达减少,然其总的释钙量未见减少.【总页数】3页(P1874-1876)【作者】李庆;李彤;杨景学;李悟;杨秀玲;谭红梅【作者单位】第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院心血管外科中心,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R654.1【相关文献】1.大鼠心肌肌浆网和核被膜ryanodine受体动力学特性的比较 [J], 王培勇;杨军;董林旺;庞永政;唐朝枢2.心肌肥厚大鼠心肌肌浆网和核被膜ryanodine受体变化的研究 [J], 王培勇;杨军;董林旺;庞永政;苏静怡;唐朝枢;刘乃奎3.PKA信号通路与ryanodine受体介导的心肌肌浆网钙泄漏关系的研究 [J], 刘关省;沈亚峰;王永亮;胡淑婷;汤莹;杨勇骥4.顿抑心肌肌浆网Ryanodine受体的变化及CGRP对其的影响 [J], 吴宏超;李志梁;钱学贤;唐朝枢5.败血症大鼠心肌核被膜和肌浆网ryanodine受体的变化 [J], 王培勇;杨军;董林旺;王晓红;唐朝枢;刘乃奎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

乳化异氟烷预处理对在体兔心肌缺血再灌注损伤的影响

乳化异氟烷预处理对在体兔心肌缺血再灌注损伤的影响

乳化异氟烷预处理对在体兔心肌缺血再灌注损伤的影响刘训芹;顾尔伟;张雷;陈巧玲【摘要】目的观察乳化异氟烷预处理对在体兔心肌缺血再灌注损伤的影响.方法32只雄性、新西兰白兔随机分为4组,每组8只.缺血对照组(CON组);缺血预处理组(IP组);乳化异氟烷预处理组(EI组);脂肪乳组(INT组).新西兰白兔均经历缺血30 min、复灌180 min过程.记录心率(HR)、平均动脉压(MAP),计算心率收缩压乘积(RPP).于复灌180 min时抽取颈内动脉血3 ml,测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性.复灌180 min后2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)法测定心肌梗死面积.结果四组HR、MAP、RPP值组间比较差异无统计学意义(P>0.05),与平衡期末比较,缺血及复灌后四组HR、MAP、RPP值均呈进行性下降(P<0.05).与CON组和INT 组比较,IP组和EI组心肌梗死面积明显降低(P<0.05).复灌180 min时IP组和EI 组血清CK、LDH活性明显低于CON组和INT组(P<0.05).结论乳化异氟烷预处理对在体兔心肌缺血再灌注损伤具有保护作用.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2010(014)001【总页数】3页(P28-30)【关键词】乳化异氟烷;缺血预处理;再灌注损伤;心肌【作者】刘训芹;顾尔伟;张雷;陈巧玲【作者单位】安徽医科大学第一附属医院麻醉科,安徽,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院麻醉科,安徽,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院麻醉科,安徽,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院麻醉科,安徽,合肥,230022【正文语种】中文1986年Murry等[1]首次提出了心肌缺血预处理(Ischem ic Preconditioning,IPC)的概念,即在长时间心肌缺血前予以短暂的缺血/复灌共3个循环可以减轻心肌损伤、降低心肌梗死面积。

医学论文：心脉龙对缺血再灌注损伤兔的保护作用

医学论文：心脉龙对缺血再灌注损伤兔的保护作用

【摘要】目的：研究心脉龙注射液对家兔低血容量性休克致缺血再灌注的保护作用及其机制。

方法：实验动物16只随机分两组，制备缺血再灌注（ischemiareperfusion，I-R）模型，心脉龙（XML）组8只，缺血30min，在灌注时从静脉快速输入自体血和20mL生理盐水（心脉龙注射液加入其中，1.5ml/kg）（I-R+SM）；对照组8只，缺血30min，静脉输入自体血和等量生理盐水（I-R+SM）。

各组动物除回输血液外，外加100 mL液体补充丢失的水分。

观察缺血前（BT），I-R后30min，1h，2h血中超氧化物岐化酶（SOD）活力，NO-2/NO-3含量，血液pH值和尿量变化，结果：XML组血浆NO-2/NO-3含量高于对照组，I-R2h，对照组（4.08±1.95）цmol/L，XML组（7.56±1.21）цmol/L（P＜0.01）；SOD活力也高于对照组；XML组（70.05±9.87）Nu/mL；对照组（43.17±10.93）Nu/mL（P＜0.01）。

随着SOD 活力，NO-2/NO-3水平升高，酸中毒有所纠正，pH值逐渐上升，循环血流状态改善，尿量增加。

结论：心脉龙注射液对低血容量性休克致缺血再灌注兔有一定保护作用，其机制与增加SOD活力，促进NO产生有关。

【关键词】心脉龙；再灌注损伤；兔；超氧化物岐化酶；一氧化氮缺血后再灌注，不仅不能使组织、器官的功能恢复，反而加重技能机构的损害，目前研究认为其发生与体内超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）活力，一氧化氮（nitric oxide,NO）水平变化有关［1，2］。

心脉龙注射液（Xinmailong injecrion,XML）是我院药学院发明的国家二类新药（中药），其在临床上主要用于改善缺血导致的微循环障碍，对缺血再灌注方面的影响，目前研究尚少，本研究旨在探讨心脉龙注射液对低血容量休克缺血再灌注兔的保护作用及其机制。