实验四 植物组织中核酸的提取和测定

核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。

2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。

3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。

4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。

二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。

核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。

DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。

酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。

盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。

RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。

Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。

核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。

紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。

A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。

琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。

大肠杆菌菌液。

2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。

酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。

无水乙醇、75%乙醇。

3M 醋酸钠（pH 52）。

Trizol 试剂。

异丙醇。

RNA 酶抑制剂。

琼脂糖。

50×TAE 电泳缓冲液。

核酸染料（如 EB 或 GelRed）。

核酸的提取与鉴定实验报告核酸的提取与鉴定实验报告引言：核酸是生命的基础，它存在于细胞的核内，承载着遗传信息的传递和表达。

在现代生物学研究中，核酸的提取与鉴定是非常重要的实验步骤。

本实验旨在探究核酸提取的方法以及鉴定核酸的质量和纯度。

一、核酸提取方法核酸的提取方法有多种，本实验采用了常用的酚-氯仿法。

首先，将待提取的细胞或组织样品加入细胞裂解液中，通过离心将细胞碎片沉淀下来。

然后，使用酚和氯仿进行提取，酚层中含有核酸和脂质，氯仿层中含有蛋白质。

通过离心将酚层和氯仿层分离，进一步提取纯净的核酸。

二、核酸的鉴定1. 纯度检测核酸的纯度是指核酸溶液中核酸与其他杂质的比例。

常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。

本实验中使用了光谱法，即通过测量核酸溶液的吸光度来评估其纯度。

纯度越高，吸光度比值（A260/A280）越接近1.8。

实验结果显示，所提取的核酸样品的纯度在可接受范围内。

2. 浓度测定核酸的浓度是指单位体积核酸溶液中核酸的含量。

浓度测定常用的方法有比色法和荧光法。

本实验中采用了比色法，即通过比较核酸溶液的吸光度与标准曲线的关系来确定核酸的浓度。

实验结果显示，所提取的核酸样品的浓度为Xμg/μl。

3. 碱基组成分析核酸的碱基组成是指核酸中腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）的相对含量。

碱基组成分析可以通过核酸测序技术来完成。

本实验中使用了Sanger测序技术，通过测序结果可以确定所提取核酸的碱基组成。

4. 凝胶电泳分析凝胶电泳是一种常用的核酸分析方法，可以根据核酸的大小和电荷来分离核酸。

本实验中使用琼脂糖凝胶电泳，将提取的核酸样品与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶槽中，通电分离。

通过观察凝胶上的DNA条带，可以初步判断核酸的大小和纯度。

结论：通过本实验，我们成功提取了核酸样品，并进行了一系列的鉴定实验。

通过纯度检测、浓度测定、碱基组成分析和凝胶电泳分析，我们确定了所提取核酸的质量和纯度。

实验四植物DNA的提取[定稿]第一篇：实验四植物DNA的提取[定稿]实验四植物DNA的提取一、实验目的掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。

采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。

二、实验原理1、核酸提取的基本原理核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。

在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。

在浓氯化钠溶液(1～2 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液(0.14 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。

因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。

分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。

用两倍体积的无水乙醇溶液将DNA 钠盐沉淀出来。

如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。

②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。

③用苯酚处理，然后离心分层，DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内。

吸出上面水层，加两倍体积的无水乙醇溶液，得到白色纤维状DNA沉淀。

反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。

为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。

生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。

在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0～11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。

四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA一、实验目的1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。

二、实验原理1.在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；2.SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来；3.苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。

DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。

DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。

因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。

三、实验材料1.设备移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心管2.材料植物幼嫩叶片3.试剂（1）细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.25%SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）（2）氯仿:异戊醇（24:1）（3）其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液四、方法和步骤0C水浴（金属浴）中加热备用；μ500L细胞提取液于651、取2、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水冲洗干），去除叶脉，剪成细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；0C预热的细胞提取液中，迅速摇匀，65500、取0.1g粉末（大约两勺半）转移至μL3水浴（金属浴）中保温30min，10min左右温和颠倒混匀一次；第 1 页四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA4、从水浴（金属浴）中取出离心管，加等体积(约500μL)氯仿/异戊醇（24:1），室温下10000rpm×10min；5.将上清液转移到另一1.5mL离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等2/3体积的异丙醇，轻轻混匀，静置1min,使核酸沉淀下来，12000r/min× 5min，倒掉上清液；6、加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，静置5min,12000r/min× 2min,去除上清液，再加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，放置5min;7、12000r/min× 10min后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉，室温静置干燥；8、干燥后，加入20μLTE缓冲液，溶解DNA，做好标记；9、取5μL溶液，0.7%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小和质量。

核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。

II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。

利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。

此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。

III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。

最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。

2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。

IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。

一、实验目的1. 熟悉核酸提取试剂的使用方法。

2. 掌握核酸提取的原理和操作步骤。

3. 了解不同核酸提取试剂的优缺点。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。

DNA主要存在于细胞核中，负责储存遗传信息；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。

核酸提取是将核酸从生物样本中分离出来的过程，常用的提取方法有酚-氯仿法、磁珠法等。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，该方法利用酚和氯仿的变性作用，将蛋白质与DNA 分离，然后通过离心、沉淀等步骤，获得纯化的DNA。

三、实验材料1. 样本：细菌、真菌、植物、动物组织等。

2. 试剂：酚-氯仿、氯仿、无水乙醇、NaCl溶液、TE缓冲液等。

3. 仪器：离心机、电子天平、移液器、离心管等。

四、实验步骤1. 样本处理：将样本剪碎，加入适量TE缓冲液，充分研磨，制成匀浆。

2. 混合：将匀浆液加入等体积的酚-氯仿，充分振荡，静置10分钟。

3. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，取上清液。

4. 沉淀：在上清液中加入等体积的氯仿，充分振荡，静置10分钟。

5. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，取上清液。

6. 沉淀：在上清液中加入1/10体积的3mol/L NaCl溶液和2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀，静置2小时。

7. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，弃上清液。

8. 洗涤：用75%乙醇洗涤沉淀，以12,000 rpm离心5分钟，弃上清液。

9. 洗涤：用无水乙醇洗涤沉淀，以12,000 rpm离心5分钟，弃上清液。

10. 溶解：将沉淀溶于适量TE缓冲液，混匀，即为提取的DNA。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过酚-氯仿法提取的DNA呈白色絮状沉淀，溶解于TE缓冲液后，在紫外分光光度计下，A260/A280比值在1.8-2.0之间，表明DNA纯度较高。

2. 结果分析：实验结果表明，酚-氯仿法能够有效提取DNA，且提取的DNA纯度较高。

实验四肝组织中核酸的提取和鉴定一、实验目的：1.了解核酸提取的主要原理和方法。

2.掌握核酸提取实验操作技能。

3.掌握核酸鉴定实验操作技能。

二、实验原理：核酸提取是生物学中的常用操作，其中DNA 和 RNA 分别用于分子生物学和生物信息学研究中。

肝作为重要的代谢器官，其中含有大量的核酸。

肝组织中核酸的提取主要步骤包括细胞破碎、蛋白质去除、核酸溶解和纯化等。

随着生物技术的不断发展，目前常用的核酸提取方法主要包括酚-氯仿法、CTAB 法、盐法等。

本实验将采用CTAB 法提取肝组织中的总核酸。

酚-氯仿法：酚和氯仿在一般情况下是不混溶的，但当二者混合时，由于酚的分子大小和分子内极性变化，使酚分子具有两种不同的极性，可以在解理体系中表现出较强的亲和性，因此酚能沉淀核酸和蛋白质复合物，而使DNA、RNA清洗得更纯。

氯仿是羰基、亚胺、脂肪类等物质的溶剂，可以分解蛋白质，同时它又是疏水性溶剂，与酚结合在一起可以减少酚水相中环氧树脂的含量。

CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子型的表面活性剂，由于其可与核酸形成稳定的复合物，在NaCl的介质中能选择性分离出核酸。

CTAB 的选择性可以用于除去单细胞内存在的大量DNA。

(1)样品制备将待测组织取一定的量(一般为1g)，切成小块，加入离心管中，加入等量体积的CTAB 提取缓冲液(2×CTABBuffer)，加入必要量的β- 巯基乙醇后混匀，用RNA酶水解剂处理，使核酸不经RNase酶处理即不能降解，然后将其混匀，放入水浴中温育30min。

温育完后，加入一定量的氯仿和异戊醇，混匀后离心。

在上层水相与下层有机相之间，出现一层白色的粘稠界面，界面中夹杂有蛋白质和DNA。

吸取上层水相，在里面加入等量异丙醇，轻轻地倾斜离心管，使异丙醇与水相分层，将上层异丙醇吸出后，加入90%的乙醇混匀，瞬间形成白色凝胶状物，成为所提取的DNA。

将其用75%酒精洗涤数次，直至酒精中没有崩解压缩改变形状的物质，使其干燥。

植物组织遗传物质的提取与检测实验报告实验目的：了解植物组织遗传物质的提取方法和常用的检测方法。

实验原理：1. 植物组织遗传物质的提取方法：（1）CTAB法：该方法可用于提取植物组织中的DNA，具有简便快捷、价格低廉、纯度高、适用于大量样品等优点。

（2）酚/氯仿法：该方法主要用于提取植物种子和干燥植物材料中的DNA。

（3）柱层析法：该方法可用于DNA的纯化和寡核苷酸的制备。

2. 常用的植物组织遗传物质检测方法：（1）凝胶电泳法：该方法可用于检测DNA和RNA，是目前最常用的分离和检测遗传物质的方法之一。

（2）PCR法：该方法可用于扩增某一片段的DNA，具有灵敏度高、特异性强、适用于少量或低浓度的样品等优点。

（3）Southern blotting法：该方法可用于检测某一特定基因的存在与否，并可以估算基因的拷贝数和分析结构等。

实验材料：PCR仪、琼脂糖凝胶、DNA提取试剂盒、电泳仪、紫外线照相仪、PCR试剂盒等。

实验步骤：1. 提取DNA：（1）取一片新鲜的植物叶片放入研钵中，加入适量的CTAB提取液，进行研磨。

（2）将研磨好的样品转移到离心管中，进行蛋白质酶处理、乙醇沉淀等步骤。

（3）使用紫外线照相仪测定DNA浓度和质量。

2. 准备琼脂糖凝胶：（1）按照琼脂糖凝胶的要求调配好琼脂糖缓冲液。

（2）将琼脂糖缓冲液煮沸，将琼脂糖加入其中，搅拌至溶解。

（3）将混合物冷却至约60℃，倒入凝胶板中，在其表层形成凝胶。

3. 进行电泳分析：（1）将DNA样品通过电泳进行分离。

（2）将分离好的DNA样品转移到凝胶板电泳槽中，通电分离。

（3）运用特殊技术进行荧光探针和显色剂的染色，测定目标位点的大小和数量等信息。

实验结果：通过琼脂糖凝胶电泳分析，可以检测到植物叶片中的DNA条带（大小约为7kb），说明提取到了植物组织中的遗传物质。

实验结论：通过本实验可以了解植物组织遗传物质的提取方法和常用的检测方法，掌握凝胶电泳、PCR扩增等技术的操作流程，此外还应注意实验的安全和环保问题，避免对环境产生负面影响。

植物基因组的提取实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握从植物组织中提取高质量基因组 DNA 的方法，为后续的分子生物学实验如 PCR 扩增、基因克隆和测序等提供纯净的DNA 模板。

二、实验原理植物细胞包含细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核等结构，基因组DNA 存在于细胞核中。

提取植物基因组 DNA 的基本原理是通过物理和化学方法破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后去除蛋白质、多糖、多酚等杂质，最后通过沉淀和洗涤获得纯净的 DNA。

在实验中，通常使用液氮研磨植物组织来破碎细胞壁，然后使用裂解液（如 CTAB 或 SDS 等）使细胞膜破裂，释放出 DNA 和其他细胞成分。

接着，加入蛋白酶 K 消化蛋白质，用酚/氯仿抽提去除蛋白质，再用乙醇或异丙醇沉淀DNA，最后用70%乙醇洗涤去除盐离子等杂质。

三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的植物叶片（如菠菜、豌豆等）（二）实验试剂1、 CTAB 提取缓冲液（2% CTAB，14 M NaCl，20 mM EDTA，100 mM TrisHCl pH 80，02% β巯基乙醇）2、氯仿/异戊醇（24:1）3、异丙醇4、 70%乙醇5、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl pH 80，1 mM EDTA）6、蛋白酶 K（20 mg/ml）（三）实验仪器1、研钵和研杵2、离心机3、移液器4、恒温水浴锅5、紫外分光光度计6、电泳仪和琼脂糖凝胶四、实验步骤（一）材料预处理选取新鲜、健康的植物叶片，用蒸馏水洗净，吸干表面水分，剪成小块备用。

（二）细胞破碎与 DNA 释放1、在研钵中加入适量液氮，将预处理好的植物叶片迅速放入研钵中，研磨成粉末状。

2、将研磨好的粉末迅速转移至预冷的离心管中，加入预热至 65℃的 CTAB 提取缓冲液，轻轻颠倒混匀，65℃水浴保温 30 60 分钟，期间每隔 10 15 分钟轻轻颠倒混匀一次。

（三）去除蛋白质和杂质1、加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀 10 15 分钟，使其充分乳化。