试验四植物组织
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植物组织培养实验报告学院:生命科学技术学院班级:11生物技术(制品)学号:**********姓名:**植物组织培养实验报告实验一植物组织培养母液的配制一、实验目的1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。
2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。
二、实验原理培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。
大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物(碳源、维生素、肌醇、氨基酸等)、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。
无机盐类由大量元素和微量元素组成。
大量元素中,氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在,但在培养基中多用硝酸类,也可以将硝酸类和铵类混合使用;磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供;钾是培养基中主要的阳离子;钙、钠、镁的需要量较少。
微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。
培养基中的铁离子,大多数以螯合物的形式存在,即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。
有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。
培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱,因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。
培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。
蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。
在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。
一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。
肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。
常用的植物生长调节物质包括以下三类:①生长素类:吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、二氯苯氧乙酸(2,4-D)②细胞分裂素:玉米素(ZT)6-苄基嘌呤(6-BA)和激动素(KT)。
③赤霉素:组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。
培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。
其中最为常见的为酵母提取物。
琼脂作为培养基的支持物,也是最常用的邮寄附加物,他可以是培养基呈固体状态,以利于组织和细胞的培养。
植物组织培养是否成功,在很大的程度上取决于培养基的选择之上。
摘要:以大豆子叶为外植体,在MS 培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素,以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响,并练习无菌操作。
实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即 MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高,为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词:大豆;植物组织培养;无菌操作;愈伤组织1.1 实验材料:大豆子叶1.2 实验试剂与仪器〔1〕试剂: 75%酒精、MS 干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2,4-D、KT、6-BA〕、无菌水、升汞、 NaOH 溶液〔2〕仪器:超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3 实验方法培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段〔1〕准备 80 个培养试管及封口膜, 2 个小培养皿、 1 个大培养皿,用洗衣粉、自来水洗净,再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号 1-80;〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取 1.5g 琼脂 4 份, 7.5g 蔗糖 4 份,在烧杯里用千分之一天平上称取 1.185g MS 干粉 4 份〔烧杯不要清洗〕;〔3〕剪小圆纸片 40,均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜;剪大圆纸片10,均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基〔1〕在装有 MS 干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为 0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA N A A K T2,4-D1 23 4 MS+6-BA〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.00.250.50.250.50.51.0〔2〕用量筒量取250ml 〔稍多〕蒸馏水,取一个不锈钢杯子参加150ml 蒸馏水和称量好的琼脂,在电炉子加热沸腾 2min,再参加混合好的 MS 培养基 1 号和蔗糖,混合沸腾 2min,用剩余的蒸馏水定容至 250ml;〔3〕当温度降到 60℃摆布时,将溶液 pH 调至 5.8,普通加 4 滴 NaOH 溶液即可;〔4〕取编号 1-20 的培养试管,用大量注射器以每瓶 12.5ml 摆布培养基分装在培养试管中,用封口膜封口, 4 支一捆捆扎好。
植物组织综合实验报告实验背景植物组织是由细胞根据其形态和功能特点而组合形成的。
了解植物组织的结构和功能对于理解植物生长发育过程以及进行植物病理、遗传育种等研究具有重要意义。
本次实验旨在通过对植物组织的观察,研究和分析,了解植物的各种组织结构的特点和功能。
实验材料与方法实验材料:1. 鲜嫩茎尖2. 刚切取的展叶3. 玉米种子和大豆种子4. 10%的乙醇溶液5. 透明盖玻片6. 透明胶带7. 显微镜8. 实验刀片9. 注射器10. 大片的滤纸实验步骤:1. 取适量鲜嫩茎尖,用镊子夹取茎尖,将其放置在切细胞的带有标度的注射器内,加入1 mL的10%乙醇溶液。
2. 断面制片:取部分茎尖,用微型手术刀切成薄片。
3. 用切片液清洗切片:将切好的茎尖片用去离子水清洗3次,每次5分钟。
4. 涂片:用镊子夹住切好的茎尖片,将其沿透明盖玻片边缘滑动式涂布,使之均匀覆盖透明盖片,并保持片子在透明盖片的正中央。
5. 干片:用手轻轻地把透明胶带贴到茎尖上,使片子牢固固定在透明盖片上,避免出现空气的残留。
6. 观察:将制好的干片放到显微镜台上,用低倍镜和高倍镜进行观察。
实验结果与分析茎尖的解剖结构观察在显微镜下,我们观察到茎尖的解剖结构主要由表皮、栅栏细胞、松质细胞、木质部和韧皮部组成。
1. 表皮:茎尖表皮由密集的表皮细胞构成,表皮细胞的外侧上有一层透明的角质层,保护植物内部细胞不受外界环境的影响。
2. 栅栏细胞:栅栏细胞位于表皮细胞下方,通常呈长型,在显微镜下可看到细胞间有空隙,这些空隙被称为栅栏细胞间隙。
3. 松质细胞:松质细胞更靠内部,形状多样,由于含有大量气孔,从松质细胞中可以看到许多气孔。
4. 木质部:木质部由维管束组成,维管束主要由纤维细胞和导管细胞构成。
纤维细胞形似长纤维,排列整齐,而导管细胞则通常呈管状。
5. 韧皮部:韧皮部位于木质部的外部,是茎尖的最外层,主要由具有延伸性的韧皮细胞构成。
通过观察茎尖的解剖结构,我们可以了解植物茎尖的生长方式以及各层组织的功能。
一、实验目的1. 了解植物细胞的基本结构。
2. 观察并分析植物组织(如叶片、茎、根)的结构特点。
3. 掌握显微镜使用技巧,提高观察和分析能力。
二、实验原理植物组织结构是指植物体内各种组织在形态、结构和功能上的差异。
植物组织主要由细胞组成,细胞间通过细胞壁和胞间连丝相互连接,形成具有一定结构和功能的组织。
通过显微镜观察植物组织,可以了解植物细胞的基本结构及其在组织中的排列和功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:植物叶片、茎、根切片。
2. 实验仪器:显微镜、载玻片、盖玻片、切片刀、染色液、滴管等。
四、实验步骤1. 制作切片:将植物叶片、茎、根等部位用切片刀切成薄片,厚度约为5-10微米。
2. 染色:将切片放入染色液中浸泡,使细胞核和细胞壁着色。
3. 观察与记录:a. 首先观察叶片切片,观察叶片的表皮、叶肉和叶脉结构。
b. 然后观察茎切片,观察茎的表皮、皮层、维管束和髓组织结构。
c. 最后观察根切片,观察根的表皮、皮层、维管束和根毛结构。
4. 分析与讨论:根据观察结果,分析不同组织的特点和功能。
五、实验结果与分析1. 叶片切片:a. 表皮:叶片表皮细胞呈扁平状,排列紧密,具有保护作用。
b. 叶肉:叶肉细胞呈圆柱状,排列疏松,富含叶绿体,负责光合作用。
c. 叶脉:叶脉中含有维管束,负责水分和养分的运输。
2. 茎切片:a. 表皮:茎表皮细胞呈长方形,排列紧密,具有保护作用。
b. 皮层:皮层细胞呈多边形,排列紧密,富含储存物质。
c. 维管束:维管束由韧皮部和木质部组成,负责水分和养分的运输。
d. 髓组织:髓组织细胞呈多边形,排列疏松,具有储存营养物质的作用。
3. 根切片:a. 表皮:根表皮细胞呈长方形,排列紧密,具有保护作用。
b. 皮层:皮层细胞呈多边形,排列紧密,富含储存物质。
c. 维管束:维管束由韧皮部和木质部组成,负责水分和养分的运输。
d. 根毛:根毛是根表皮细胞向外突起的部分,负责吸收水分和养分。
第1篇一、实验目的1. 了解植物根、茎、叶的基本结构及其功能。
2. 掌握植物内部构造的观察方法。
3. 比较不同植物器官的结构差异。
二、实验原理植物内部构造是指植物器官的内部组织结构,主要包括细胞、组织、器官三个层次。
通过观察植物根、茎、叶的横切面和纵切面,可以了解其内部构造和功能。
三、实验材料1. 根:胡萝卜、土豆2. 茎:向日葵、玉米3. 叶:白菜、荷叶4. 实验器材:显微镜、解剖刀、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、酒精灯、火柴、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 根部观察(1)将胡萝卜和土豆分别切成薄片,置于载玻片上。
(2)滴加适量的水,盖上盖玻片。
(3)在显微镜下观察根的内部结构,包括表皮、皮层、维管束等。
(4)记录观察结果。
2. 茎部观察(1)将向日葵和玉米的茎分别切成薄片,置于载玻片上。
(2)滴加适量的水,盖上盖玻片。
(3)在显微镜下观察茎的内部结构,包括表皮、皮层、维管束等。
(4)记录观察结果。
3. 叶部观察(1)将白菜和荷叶分别切成薄片,置于载玻片上。
(2)滴加适量的水,盖上盖玻片。
(3)在显微镜下观察叶的内部结构,包括表皮、叶肉、叶脉等。
(4)记录观察结果。
五、实验结果与分析1. 根部结构胡萝卜根和土豆根的内部结构基本相似,包括表皮、皮层和维管束。
表皮细胞排列紧密,起到保护作用;皮层细胞排列疏松,有利于水分和养分的运输;维管束负责水分和养分的输送。
2. 茎部结构向日葵茎和玉米茎的内部结构基本相似,包括表皮、皮层和维管束。
表皮细胞排列紧密,起到保护作用;皮层细胞排列疏松,有利于水分和养分的运输;维管束负责水分和养分的输送。
玉米茎具有发达的气腔,有利于呼吸作用。
3. 叶部结构白菜叶和荷叶的内部结构存在一定差异。
白菜叶的内部结构包括表皮、叶肉和叶脉,叶肉细胞排列紧密,有利于光合作用;荷叶的内部结构包括表皮、叶肉和叶脉,叶肉细胞排列疏松,有利于水分蒸发和光合作用。
六、实验结论通过本次实验,我们了解了植物根、茎、叶的基本结构及其功能。
一、实验目的1. 熟悉植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握无菌操作技术,学会配制培养基。
3. 学习诱导愈伤组织形成的方法,并观察其生长情况。
4. 了解植物细胞的全能性及其在组织培养中的应用。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性,将植物的器官、组织或细胞在人工控制的条件下,诱导分化再生为完整植株的过程。
该实验主要包括以下几个步骤:外植体消毒、接种、愈伤组织诱导、再分化、生根、移栽等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:小麦幼苗、MS培养基、愈伤诱导培养基、生根培养基、消毒剂(如70%酒精、无菌水等)、消毒工具(如解剖刀、镊子等)。
2. 实验仪器:超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、显微镜、天平、烧杯、三角烧瓶、培养皿等。
四、实验步骤1. 外植体消毒:将小麦幼苗洗净,用70%酒精浸泡30秒,再用无菌水冲洗3次。
用解剖刀将幼苗切成1-2mm的段,用无菌滤纸吸干水分。
2. 配制培养基:按照实验要求,配制MS培养基、愈伤诱导培养基和生根培养基。
将培养基分装到培养皿中,高压灭菌30分钟。
3. 接种:将消毒好的外植体接种到愈伤诱导培养基中,每皿接种3-5段,每个处理重复3次。
4. 愈伤组织诱导:将接种好的培养皿放入培养箱中,在适宜的温度(25-28℃)和光照条件下培养。
观察愈伤组织形成情况。
5. 再分化:当愈伤组织形成后,将愈伤组织转移到再分化培养基中。
在适宜的条件下培养,观察愈伤组织再分化为芽和根。
6. 生根:当芽和根形成后,将植株转移到生根培养基中。
在适宜的条件下培养,观察植株生根情况。
7. 移栽:当植株生根良好后,将其从培养皿中取出,用无菌水冲洗根部,然后移栽到土壤中。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织形成情况:实验结果表明,小麦幼苗在愈伤诱导培养基中能形成愈伤组织,愈伤组织生长旺盛。
2. 再分化情况:愈伤组织在再分化培养基中能分化出芽和根,再分化效果良好。
3. 生根情况:植株在生根培养基中生根良好,根长且粗壮。
一、实验目的1. 了解植物组织的结构特点及其功能。
2. 掌握植物组织切片的制作方法。
3. 通过显微镜观察植物组织的形态结构,加深对植物组织学知识的理解。
二、实验原理植物组织是由具有相同形态结构和功能的细胞群组成的,它们共同完成一定的生理功能。
植物组织主要包括:分生组织、保护组织、输导组织、营养组织、机械组织等。
本实验主要观察以下几种组织:1. 分生组织:具有强烈的分裂能力,不断产生新的细胞,使植物体不断生长。
2. 保护组织:具有保护植物体内部组织的作用,如表皮组织。
3. 输导组织:负责植物体内水分、养分、激素等的运输,如导管和筛管。
4. 营养组织:储存和合成营养物质,如叶肉组织。
5. 机械组织:提供植物体支撑和保护作用,如木质部和韧皮部。
三、实验材料与仪器材料:1. 植物叶片、茎、根等新鲜样品2. 酒精、盐酸、碘液等试剂仪器:1. 显微镜2. 刀片3. 刮刀4. 压片器5. 烧杯6. 烧瓶7. 试管8. 烧杯架四、实验步骤1. 样品处理:- 将新鲜植物样品放入烧杯中,加入适量酒精和盐酸,浸泡一段时间。
- 用刀片将浸泡好的样品切成薄片,厚度约为0.1-0.2mm。
- 将切好的薄片用刮刀刮到玻片上。
2. 染色:- 在玻片上滴加碘液,染色2-3分钟。
- 用蒸馏水冲洗玻片,去除多余的碘液。
3. 制片:- 将染色后的玻片放入压片器中,用压片器压紧。
- 将压紧后的玻片取出,放在显微镜下观察。
4. 观察与记录:- 观察植物组织的形态结构,记录不同组织的特征。
- 分析不同组织的功能及其与植物生长发育的关系。
五、实验结果与分析1. 分生组织:- 具有明显的细胞分裂现象,细胞核大,染色质浓。
- 细胞排列紧密,细胞壁薄。
2. 保护组织:- 细胞排列紧密,细胞壁厚,具有保护作用。
- 细胞内含有叶绿体,可以进行光合作用。
3. 输导组织:- 导管和筛管细胞排列紧密,细胞壁厚,具有输导作用。
- 导管细胞内含有导管,筛管细胞内含有筛孔。
植物组织实验报告引言植物组织实验是研究植物的组成和结构的一种常用方法。
通过观察和研究植物的组织结构,可以深入了解植物的生长发育过程、形态特征以及其在环境适应中的作用。
本次实验旨在通过显微镜观察和描述植物的不同组织类型,并对其结构特征进行分析。
实验材料与方法材料•高倍显微镜•洋葱切片•左旋糖•盐水•盐酸•甘油酚溶液方法1.将洋葱切片放入盐酸中浸泡10分钟,然后用盐水洗净。
2.取一片浸泡在盐酸中的洋葱切片放入玻璃滴管中,加入左旋糖溶液。
3.将玻璃滴管封闭后,放入甘油酚溶液中加热,然后转移到细胞上,覆盖载玻片。
4.在高倍显微镜下观察洋葱切片的不同组织类型,并记录所观察到的结构特征。
实验结果与讨论经过观察和记录,我们发现洋葱切片中存在着多种类型的组织,包括表皮组织、维管束组织和地下组织等。
表皮组织洋葱切片的外层由表皮组织构成。
在高倍显微镜下观察,我们可以看到表皮细胞具有矩形形状,排列整齐,细胞膜清晰可见。
部分表皮细胞外侧存在着具有浮士德气孔的结构,起到气体交换和蒸腾的作用。
维管束组织洋葱切片中的维管束组织负责植物体内水分和养分的输送。
在显微镜下观察,我们可以看到维管束细胞的结构呈现管状,由导管组织和木质部组织组成。
导管细胞的特点是形成连续的管道,负责植物体内水分和溶质的输送。
木质部细胞具有较厚的细胞壁,起到支持植物体的作用。
地下组织洋葱切片中的地下组织主要由根组织构成。
在显微镜下观察,我们可以看到根尖区域存在着根毛,起到吸收水分和养分的作用。
根毛细胞形状细长,排列有序。
此外,根的内部我们可以观察到形成横隔的横向细胞。
这些细胞结构有助于增加根的吸收面积,并提供了物质交换的通道。
结论通过本次植物组织实验,我们成功观察和分析了洋葱切片中的不同组织类型,并描述了它们的结构特征。
表皮组织具有矩形细胞、气孔的结构;维管束组织由导管细胞和木质部细胞组成;地下组织主要由根组织构成,包括根毛和横向细胞。
这些组织各自承担着不同的功能,共同维持着植物的正常生长发育。
一、实验目的1. 了解植物组织的分类及其功能。
2. 通过显微镜观察植物组织的显微结构,加深对植物组织类型和特征的认识。
3. 掌握显微镜的使用方法及注意事项。
二、实验原理植物组织是构成植物体的基本单位,它们具有不同的形态、结构和功能。
根据其功能,植物组织可分为营养组织、输导组织、机械组织、保护组织和分生组织等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:洋葱鳞片叶、小麦叶片、玉米茎段、柳树茎皮、橡胶树的韧皮部等。
2. 仪器设备:显微镜、切片机、染色剂、载玻片、盖玻片、镊子、滴管等。
四、实验步骤1. 切片制备(1)取洋葱鳞片叶,用切片机切取薄片。
(2)将切片放入染色剂中染色,如苏木精-伊红染色。
(3)用镊子将染色的切片取出,放入载玻片中。
(4)在载玻片上滴一滴水,用盖玻片覆盖。
2. 显微镜观察(1)调节显微镜,观察洋葱鳞片叶的表皮组织、叶肉组织和输导组织。
(2)观察小麦叶片的表皮组织、叶肉组织和输导组织。
(3)观察玉米茎段的表皮组织、机械组织和输导组织。
(4)观察柳树茎皮的表皮组织、韧皮部和木质部。
(5)观察橡胶树的韧皮部组织。
3. 观察记录(1)记录不同植物组织的形态、结构和功能特点。
(2)描述显微镜下的观察结果,包括细胞形态、细胞间隙、细胞壁等。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶(1)表皮组织:细胞扁平,排列紧密,细胞壁较厚,具有保护作用。
(2)叶肉组织:细胞呈圆柱形,排列紧密,富含叶绿体,进行光合作用。
(3)输导组织:细胞呈长条形,排列紧密,具有运输水分和营养物质的作用。
2. 小麦叶片(1)表皮组织:细胞扁平,排列紧密,细胞壁较厚,具有保护作用。
(2)叶肉组织:细胞呈圆柱形,排列紧密,富含叶绿体,进行光合作用。
(3)输导组织:细胞呈长条形,排列紧密,具有运输水分和营养物质的作用。
3. 玉米茎段(1)表皮组织:细胞扁平,排列紧密,细胞壁较厚,具有保护作用。
(2)机械组织:细胞呈长条形,排列紧密,具有支撑作用。
一、实验目的1. 了解植物组织的结构及其功能;2. 掌握显微镜的使用方法;3. 培养观察、分析问题的能力。
二、实验原理植物组织是构成植物体的基本单位,它们具有各自独特的结构和功能。
通过对植物组织的观察,可以了解植物的生长发育规律和生理功能。
显微镜是一种重要的观察工具,可以放大植物组织,使其结构更加清晰。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:洋葱鳞片叶、紫甘蓝叶片、胡萝卜根、花生种子等;2. 仪器设备:显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、酒精灯、刀片、剪刀、镊子、显微镜载物台、显微镜光源等。
四、实验步骤1. 制作洋葱鳞片叶切片:(1)取洋葱鳞片叶,用刀片切成薄片;(2)将切片放入载玻片上,滴一滴清水;(3)盖上盖玻片,用镊子轻轻压平;(4)观察洋葱鳞片叶细胞结构。
2. 制作紫甘蓝叶片切片:(1)取紫甘蓝叶片,用刀片切成薄片;(2)将切片放入载玻片上,滴一滴清水;(3)盖上盖玻片,用镊子轻轻压平;(4)观察紫甘蓝叶片细胞结构。
3. 制作胡萝卜根切片:(1)取胡萝卜根,用刀片切成薄片;(2)将切片放入载玻片上,滴一滴清水;(3)盖上盖玻片,用镊子轻轻压平;(4)观察胡萝卜根细胞结构。
4. 制作花生种子切片:(1)取花生种子,用刀片切成薄片;(2)将切片放入载玻片上,滴一滴清水;(3)盖上盖玻片,用镊子轻轻压平;(4)观察花生种子细胞结构。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶切片观察结果:洋葱鳞片叶细胞呈长方形,细胞壁较厚,细胞核较大,细胞质较透明。
细胞之间有细胞间隙,细胞间隙内充满细胞间物质。
2. 紫甘蓝叶片切片观察结果:紫甘蓝叶片细胞呈长方形或椭圆形,细胞壁较薄,细胞核较小,细胞质较绿色。
细胞间隙较小,细胞间物质较少。
3. 胡萝卜根切片观察结果:胡萝卜根细胞呈长方形,细胞壁较厚,细胞核较大,细胞质较透明。
细胞间隙较大,细胞间物质较多。
4. 花生种子切片观察结果:花生种子细胞呈圆形或椭圆形,细胞壁较薄,细胞核较小,细胞质较透明。
植物组织培养实习报告篇一:植物组织培养实验报告植物组织培养实验报告一、实验目的1.掌握无菌操作的植物组织培养方法;2.通过配置ms培养基母液,掌握母液的配置和保存方法;3.通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法;4.通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法;5.了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理(一)植物组织培养植物组织培养是把植物的器官,组织以至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下,能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下,原来已经分化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。
(二)植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
(三)组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后,经过继代培养,可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团,然后,再分化成不同的器官原基。
有些情况下,外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
(四)培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素(生长调节剂)和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70%酒精、0.1%升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、84消毒液、蔗糖、琼脂等。
《植物组织培养》实验指导教师:任峻目录实验一参观植物组织培养实验室实验二培养基母液配制实验三培养基配制与灭菌实验四植物快速繁殖培养实验考核一、课程的性质与任务植物细胞工程实验技术一般包括植物细胞组织离体培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、外源基因转移技术等一系列重要的基础技术。
通过实验课程的学习,实验方法立足于初学者的专业基础和一般实验室的条件,将《植物细胞组织培养技术》课程的理论知识、一般的实验技能和科学研究的初步方法融为一体。
培养学生理论联系实际、独立思考及实践动手能力。
二、实验的目的与基本要求通过本课程的学习使学生掌握植物细胞工程技术的基本原理和实验操作方法,掌握植物细胞体外培养技术,结合科研和生产实际,提高学生分析问题、解决问题的能力。
以适应今后在教学、科研和生产开发等各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。
在实验教学过程中,要求学生学习态度严谨,操作动作规范,观察记录耐心细致,独立思考,综合分析实验结果,充分理解后认真地完成实验报告。
09本《植物组织培养》实验考核一、考核方式:实验操作。
二、考核时间:三、考核地点:四、监考教师:实验考核以实验操作形式进行,根据实验4或实验5实验的实验结果(失败或成功)决定实验方案,如果失败,分析失败原因,提出改进措施,在重做中进行实验操作考核,如果成功则继续下一步的实验,实施实验操作考核。
二.考核办法:考核方法主要观察学生的实验操作是否正确,污染率是否高,并要求学生写出实验报告,总结实验中常出现的问题。
在3个课时内小组协作完成实验内容。
包括以下几个方面:1.对实验仪器设备的选择及操作。
湿热灭菌操作过程;无菌操作过程。
2.培养基的配制试剂的配制;母液的移取;实验配方计算。
3.培养条件的设置。
4.实验报告的规范性与科学性。
实验一 参观植物组织培养实验室一、实验的目的和要求掌握植物组织培养实验室的设计要点和必备的仪器设备。
二、实验内容:1. 植物组织培养实验室的设计要点。
第1篇一、实验目的1. 掌握植物组织培养的无菌操作技术。
2. 熟悉植物组织培养的基本原理和过程。
3. 通过实验,了解植物细胞脱分化、再分化以及器官形成的过程。
4. 培养实验操作能力和观察能力。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性,通过特定的培养条件,使离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织,再分化为具有根、茎、叶等器官的完整植株。
该实验依据以下原理:1. 植物细胞的全能性:每个植物细胞都含有该植物的全套遗传信息,在一定条件下可以发育成一个完整的植株。
2. 脱分化:在适宜的培养条件下,已分化的细胞可以恢复分裂能力,形成无定形的愈伤组织。
3. 再分化:愈伤组织在适宜的激素和营养条件下,可以分化形成具有特定功能的器官。
三、实验材料与仪器材料:1. 植物外植体(如叶片、茎段、芽等)2. MS培养基母液3. 琼脂4. 灭菌水5. 70%酒精6. 碘伏7. 无菌操作台8. 显微镜9. 灭菌锅仪器:1. 离心机2. 高压蒸汽灭菌器3. 电子天平4. 移液器5. 培养皿6. 移植针四、实验步骤1. 外植体消毒:将植物外植体用70%酒精消毒30秒,然后用碘伏消毒1分钟,最后用无菌水冲洗3次。
2. 制备培养基:按照MS培养基配方配制母液,然后用琼脂制成固体培养基。
3. 接种:将消毒后的外植体切成小块,接种到固体培养基上。
4. 培养:将接种后的培养基放入培养箱中,培养条件为:温度25℃、光照12小时/天。
5. 观察:定期观察愈伤组织的形成和器官的分化情况。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织形成:接种后3-5天,外植体表面出现白色愈伤组织。
2. 再分化:愈伤组织在培养过程中逐渐分化出根、茎、叶等器官。
3. 器官形成:经过一段时间培养,愈伤组织分化出完整的植株。
六、实验讨论1. 外植体消毒是植物组织培养成功的关键环节,消毒效果直接影响愈伤组织的形成和植株的再生。
2. 培养基的配方和培养条件对愈伤组织的形成和器官的分化有重要影响。
植物组织结构实验报告引言植物组织结构是植物体内的组织和器官的层次结构,对于我们了解植物的生长和发育起着重要的作用。
本次实验旨在观察植物茎和根的组织结构,通过显微镜观察和染色技术,探索植物体内的细胞构成和功能。
材料与方法材料:1. 青蒿植物茎和根的组织切片2. 显微镜和相关配件3. 碘酒4. 水合氯醛溶液5. 给药针6. 甘油7. 双氧水溶液方法:1. 将植物茎和根的组织切片分别放置在显微镜物镜下,调节合适的放大倍数。
2. 用碘酒对切片进行染色处理,以增强细胞和组织的对比度。
3. 在切片上滴加水合氯醛溶液,用给药针轻轻吹拂以除去切片上的气泡。
4. 将封片的四个边缘部分轻轻涂上甘油,并用另一块封片盖在上面,用手轻轻按压使甘油扩散均匀。
5. 将已封好的切片放置在显微镜下进行观察和拍照。
结果茎的组织结构:经过观察,在茎的横切面上,可以看到茎内有一个环状的结构,称为年轮。
年轮分为两部分,一部分是较暗的木质部,一部分是较亮的韧皮部。
木质部主要由导管细胞和木质纤维组成,功能是负责植物的水分和养分的输送。
韧皮部主要由韧皮细胞和韧皮纤维组成,形成茎的外皮,起到保护茎的作用。
根的组织结构:在根的横切面上,可以看到根的外层是一个较为光滑的表皮,表皮中有许多根毛。
根的内部由多个层次的细胞组成,最内层的细胞为中央柱,中央柱具有细胞分裂和分化功能,是根的生长中心。
讨论经过实验观察,我们对植物茎和根的组织结构有了一定的了解。
茎的组织结构包括木质部和韧皮部,木质部负责水分和养分的运输,韧皮部则起到保护茎的作用。
根的组织结构包括根表皮和根的内部组织,根表皮上有许多根毛,可以增加根的表面积,提高水分和养分的吸收效率。
中央柱是根的生长中心,负责根的生长和分化。
通过本次实验,我们了解到植物组织结构的复杂性和多样性,不同的组织和细胞在植物体内发挥着不同的功能。
进一步的研究可以探索植物组织结构与植物生长发育的关系,对于植物生物学领域的研究和农业生产具有重要的意义。
一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法;2. 通过配置MS培养基母液,掌握母液的配置和保存方法;3. 通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织,学习愈伤组织的建立方法;4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理植物组织培养是一种利用无菌操作,将植物器官、组织或单个细胞在人工条件下培养,使其继续生长甚至分化发育成完整植株的技术。
在培养过程中,植物组织经历脱分化作用和再分化作用。
1. 脱分化作用:植物组织在培养条件下,原本已分化停止生长的细胞重新分裂,形成无组织结构的细胞团,即愈伤组织。
2. 再分化作用:脱分化后的愈伤组织在一定条件下,重新分化形成输导系统、根和芽等组织和器官。
植物细胞的全能性是指每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下,每个细胞都可以发育成一个与母体一样的植株。
三、实验器材与试剂1. 试剂:乙醇、IAA或2,4-D、HgCl2(或次氯酸钠)、6-苄基氨基腺嘌呤(6-BA)、MS培养基2. 仪器设备:培养室、高压灭菌锅、水浴锅、解剖刀、三角烧瓶(100mL)、烧杯、量筒、培养皿、超净工作台、分析天平、长镊子、剪刀、橡皮筋等四、实验步骤1. 配制培养基(1)愈伤组织诱导培养基:将MS培养基(蔗糖含量为10g/L,2,4-D含量为2mg/L,琼脂10g/L)进行高压灭菌。
(2)试验培养基:将MS培养基(蔗糖含量为10g/L,6-BA含量为0.5mg/L,琼脂10g/L)进行高压灭菌。
2. 无菌操作(1)将豌豆种子浸泡在75%乙醇中消毒30秒,然后用无菌水冲洗3次。
(2)将消毒后的豌豆种子用解剖刀切成小块,放入含有70%酒精的三角烧瓶中消毒30秒,再用无菌水冲洗3次。
(3)将消毒后的豌豆种子放入含有HgCl2的三角烧瓶中消毒10分钟,再用无菌水冲洗5次。
3. 愈伤组织诱导(1)将消毒后的豌豆种子接种到愈伤组织诱导培养基中,置于培养室内,培养温度为25℃,光照时间为12小时/天。
实验四植物叶片愈伤组织的诱导培养(理论)一、概念愈伤组织(callus)◆自然状况下指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。
◆植物组织培养中,指在人工培养基上由外植体组织增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。
二、植物愈伤组织及形成过程外植体形成愈伤组织,标志着植物组织培养的开始。
1、形态结构◆形状不规则,结构疏松◆有大量的分生中心◆细胞排列毫无次序◆内有大量的细胞间隙◆颜色不一致优良的愈伤组织所具备的特性:A、高度的胚性或再分化能力,以便从愈伤组织得到再生植株B、易散碎,可建立优良的悬浮体系,并可分离出全能性的原生质体C、旺盛的自我增殖能力,可建立大规模的愈伤组织无性系D、经过长期继代保存而不丧失胚性,可进行各种遗传操作2、愈伤组织形成过程A、诱导期◆细胞准备分裂◆合成代谢活动加强◆细胞大小基本不变诱导期时间长短因植物种类、外植体生理状况及外部因素而异B、分裂期◆一分为二,不断增殖◆形态结构与生理生化发生变化主要表现:◆数目迅速增加◆细胞平均鲜重下降◆细胞体积小◆核与核仁增至最大◆ RNA减少,DNA保持不变◆组织总干重、蛋白质与核酸含量增加◆新细胞壁合成极快C、形成期细胞经诱导、分裂形成无序结构愈伤组织的时期。
细胞特点:◆大而不规则、高度液泡化◆无次生细胞壁与胞间连丝◆整个组织松散◆表面以下约5~10个细胞生长中心本时期的愈伤组织是最适合获得单细胞或原生质体的,是建立悬浮体系的最好时期。
D、分化期停止分裂的细胞发生生理代谢变化,导致形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。
本期愈伤组织特点:◆细胞分裂部位由表层转变到深层◆分裂方向由单周分裂变为深层局部分化◆分化组织瘤状结构形成◆维管组织形成瘤状结构的出现使愈伤组织逐渐形成具有维管组织,呈分散的节状结构形成,出现各类组织细胞。
细胞分裂素对促进维管化组织有重要作用3、愈伤组织的继代培养◆长期保存愈伤组织的一种方法◆直径到2~3cm时与外植体分离,单独培养◆选取其生长迅速的部位作继代培养◆分化与再生植株时,应选生长较慢的愈伤组织◆每一继代培养时间取决于其生长速度◆一般可在3~6周继代一次三、植物愈伤组织的遗传变异1、引起异质性的原因A、外植体染色体倍数性与遗传组成不同的细胞经诱导后的分裂B、培养条件引起的不规则性它们常同时发挥作用2、初生愈伤组织接种到培养基上后,细胞核内的变化:A、正常有丝分裂B、先核内复制,后有丝分裂C、先核碎裂,后有丝分裂◆初生愈伤组织的异质细胞群体性反映了外植体中的染色体状况反映了愈伤组织诱导期间核变异的结果◆在诱导中,会出现二倍体、多倍体、单倍体、非整倍体与染色体结构变异体等3、建成愈伤组织◆选择作用的结果◆只有一种主要核型占优势◆培养基成分和培养类型的影响◆异质群体中细胞间的竞争与互作的影响四、影响因子及培养条件1、培养基2、组织原有的倍数性3、培养环境的条件五、愈伤组织的发生方式发生方式:1、器官发生指细胞或愈伤组织通过形成不定芽再生成植株的过程。
实验四植物组织
一、目的与要求
掌握各类植物组织的形态结构特点,学会在植物的器官中识别各种组织。
二、材料与用具
新鲜材料:蚕豆、天竺葵、向日葵、八宝、紫竹梅等植物叶,柑橘果皮、芹菜叶柄、梨果实和秋海棠的叶,马铃薯块茎、南瓜茎和蓖麻茎皮的组织离析材料。
永久制片:玉米或洋葱根尖纵切,茎尖顶芽纵切,小麦、玉米叶的表皮,接骨木幼茎和老茎的横切,小麦、玉米种子的纵切,水稻、黑藻、眼子菜的茎横切,南瓜茎横切及纵切,松茎三切面,多年生椴树茎横切。
用具:显微镜、放大镜、剪刀、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、I2-KI染液。
三、内容与方法
(一)分生组织
1.根尖分生组织观察
取玉米或洋葱根尖纵切永久制片观察,先用低倍镜找出细胞最小、染色最深,核大、细胞质浓厚、没有明显的液泡的区域为分生区,即为根端生长锥,细胞没有任何的分化,有着强烈持久的分裂能力,称原分生组织。
在其前端有一帽状的根冠,注意观察有无正在分裂的细胞,如果有是处于哪一个分裂期?根尖的后一部分的细胞已有初步的分化,其最外一层细胞为原表皮,在其与原表皮之间的区域为基本分生组织,中央染色较深的部位为原形成层(图4-1)。
图4-1 洋葱根尖
2.茎尖分生组织观察
取黑藻茎尖纵切永久制片观察(图4-2),在切片中有很多幼叶,幼叶之中包藏着顶端分生组织,即茎的生长锥。
它比根尖分生区复杂,因为在生长锥周围有叶原基和腋芽原基的发生和形成。
注意识别叶原基突起仅有两层细胞厚,而腋芽原基有多层细胞的半圆形突起。
图4-2 黑藻茎尖
1.生长锥
2.腋芽原基
3.叶原基
4.幼叶
观察丁香等陆生植物茎尖纵切永久制片,寻找茎尖分生组织所在的部位,可见茎尖生长锥上叶原基和腋芽原基的发生均靠近前端,结构复杂,但它们的原形成层分化明显,为纵向伸长的、着色较深的维管组织的前身,胞质浓厚。
3.居间分生组织观察
取玉米茎尖没有拔节时的嫩茎节间基部的居间分生组织纵切片观察,可见大部分染色浅的细胞,相当于基本分生组织,薄壁的细胞多呈横向伸长的扁平状态,除纵向分裂者外,横向分裂极为明显,而且出现了程度不同的液泡化。
而局部相当于原形成层束的细胞纵列呈索状,细胞呈等直径形或细长形,胞核密集、染色很深,并常见有原生木质部贯穿于其中的原始维管束。
(二)保护组织
1.取新鲜的植物叶(豌豆、天竺葵、向日葵等),撕取下表皮一小块,制成临时装片观察。
可以见到表皮细胞形状不规则,表皮细胞之间有气孔器分布。
每一气孔器有一对肾形的保卫细胞,内含一细胞核和较多的叶绿体,保卫细胞之间的缝隙即为气孔(图4-3)。
可用I2-KI 溶液染色,使含淀粉的叶绿体变成紫黑色,而细胞核呈暗黄色来区分叶绿体和细胞核。
图4-3 豌豆叶下表皮
1.气孔
2.保卫细胞
3.表皮细胞
2.取一些具有表皮毛的植物如天竺葵的叶,撕其表皮制成临时装片,观察不同形态的表皮毛。
3.取小麦或玉米叶的下表皮装片观察。
其表皮主要由排列紧密的长方形的表皮细胞组成,在长细胞之间夹有成对的短细胞、表皮毛和气孔器。
气孔器的两个保卫细胞呈哑铃形,它的两端壁薄,膨大成球状,其胀缩变化直接影响气孔的启闭,中部狭窄,壁较厚,在哑铃
形的保卫细胞外侧是两个副卫细胞,形状近三角形,有明显的细胞核。
4.观察接骨木幼茎和老茎的横切永久制片,区分表皮和周皮,比较两者的细胞组成和结构上的差异。
(三)薄壁组织
1.同化组织:取新鲜的植物叶(天竺葵、鸭趾草等)横切,制成临时装片或永久制片,观察在叶肉细胞中含有大量的叶绿体,是进行光合作用制造有机养料的场所。
2.贮藏组织:取马铃薯块茎,制成徒手切片,观察在薄壁细胞内充满了卵圆形的淀粉粒。
也可取小麦、玉米种子的纵切片,观察在胚乳中贮藏着大量的同化产物。
3.通气组织:取水稻、黑藻、眼子菜等任一水生植物茎的横切永久制片,观察发达的胞间隙或气腔、气道(图4-4)。
图4-4 水稻老茎,示气腔
(四)输导组织
1.取南瓜茎横切的永久制片,用放大镜观察找到10束排列成星状的维管束,这些维管
束分布在薄壁组织中。
内轮5束较大,在靠近髓腔的部分,外轮5束较小,正对着茎的五个棱。
图4-5 南瓜茎横切
A.南瓜茎横切,示维管束
B.筛板及筛孔
在低倍镜下,观察一个维管束。
在维管束中间部分是木质部,其中染成红色的是导管(图
4-5A),木质部的内外两端都是韧皮部,筛管和伴胞分布在韧皮部中。
可移动玻片在外韧皮部中寻找筛管,筛管为多边形的薄壁细胞,口径较大,常被固绿染成蓝绿色。
在它的旁边还贴生着一个小的伴胞。
个别筛管正好切在筛管板处,可见染色很深的筛板及其上的筛孔(图4-5B)。
在观察上述切片时,可见在外韧皮部与木质部之间有扁长形的几层细胞,此为形成层区,其中只有一层细胞具有分生能力。
南瓜茎的维管束由外到内依次是外韧皮部、形成层、木质部、内韧皮部,这样的维管束称为双韧维管束。
取少许南瓜茎的离析材料,制成临时装片,在显微镜下观察。
区分哪些是导管分子,哪
些是筛管分子,哪些是薄壁细胞,注意导管分子的不同类型。
(五)机械组织
1.厚角组织:取南瓜茎横切永久制片,在显微镜下观察,表皮细胞以内有几层细胞壁加厚的细胞,其壁的加厚主要在角隅处,在南瓜茎中常连续成圆筒状。
取芹菜叶柄作徒手切片,挑选薄的放在载玻片上,在显微镜下观察在棱处有厚角组织分布。
然后用1/5000钌红液把果胶质的中层染成红色,呈明显的红线,把相邻细胞壁的角隅加厚部分分隔开来,十分清晰(图4-6)。
图4-6 芹菜叶柄的厚角组织
2.厚壁组织:
⑴纤维:取蓖麻茎皮的组织离析材料少许,制成临时装片观察。
纤维细胞细长而两头尖,壁厚而细胞腔狭窄,原生质体解体。
也可用亚麻等茎皮按上述方法制片,同样能观察到纤维细胞。
图4-7 梨果肉石细胞
⑵石细胞:取梨果肉一小块,挑取其中粒状的组织一小粒,置载玻片上用镊子柄压平,可见大型的薄壁细胞包围一种暗色的石细胞群,壁异常加厚,细胞腔很小,明显的纹孔常具分枝(图4-7)。
(六)分泌组织
1.取松树茎横切永久片,观察树脂道(分泌道)。
2.柑橘果皮横切永久片,观察油囊(分泌腔)。
四、思考题
(一)观察南瓜茎的横切片,说明从外到内依次包括哪些组织类型。
(二)说明厚角细胞与厚壁细胞的异同。
(三)说明在各种不同类型的导管中,它们的细胞壁加厚方式的异同。
(四)比较表皮和周皮在性质、来源、组成上的不同。