艾滋病初筛中心实验室标准操作程序(SOP)
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HIV抗体初筛实验室SOP文件适用部门:检验科目录第一部分工作制度.................................................................................................................... - 1 -实验室工作制度.................................................................................................................. - 1 - HIV标本采集与接收登记制度.......................................................................................... - 1 - 艾滋病实验室保密制度...................................................................................................... - 2 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度...................................................................... - 2 - 差错事故处理制度.............................................................................................................. - 3 - 报告单签发审核制度.......................................................................................................... - 3 - 设备管理制度...................................................................................................................... - 4 - 试剂管理制度...................................................................................................................... - 4 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度...................................................................................... - 5 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案.................................................................................. - 5 -第二部分标准操作规程............................................................................................................ - 8 -第二章样品采集与处理.................................................................................................... - 8 - 第二章标准操作程序........................................................................................................ - 8 -一、北京金豪.............................................................................................................. - 8 -二、上海科华生物...................................................................................................... - 9 -三、英科新创............................................................................................................ - 10 -第三章结果报告与注意事项.......................................................................................... - 12 - 第三部分设备SOP文件 ........................................................................................................ - 13 -一、多功能自动酶标仪RT-2100C .................................................................................. - 13 -二、KHB ST-36W洗板机............................................................................................. - 16 -三、电热恒温水箱............................................................................................................ - 18 - 第四部分流程图...................................................................................................................... - 20 -一、HIV抗体筛查流程图................................................................................................ - 20 -二、暴露级别的评估........................................................................................................ - 21 - 附件:血清加样表.................................................................................................................... - 22 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清晰,有良好的通风设备。
艾滋病初筛检测实验标准操作程序〔SOP文件〕一、目的保证艾滋病病毒抗体ELISA实验的准确性。
二、适用范围艾滋病病毒抗体ELISA实验。
三、具体要求3.1样品采集样品采集安试剂盒要求采集。
采血时注意平安,用一次性注射器谨慎操作,防止发生刺伤和造成外界污染。
血样如即时用可存于普通冰箱,如要长期保存,别离血清置于-20 及以下。
同时做好记录。
3.2样品运送样品转送,除特殊需要外,必须是血清或血浆,置于带有盖帽的试管内,或将塑料试管用酒精灯封死,防止样品流出。
试管上标明姓名、时间、编号,将试管放入专门带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理,在所放试管周围||上下垫有软性物质,以免碰碎,容器外标有HIV检测专用字样和生物危害标志。
路途较远或气候炎热时,容器应置于4 以下运送。
这样同时附送检单。
3.3样品登记和处理收到样品后,及时填写标本登记记录表,送样人、收样人签字,如已进行过初检,登记初检结果和实验方法及所用试剂情况。
对从其他实验室送来的样品,检查并注明送检单与标本记录的符合、样品管破损、溢漏等情况。
如有溢漏应立即将尚存的血样移出,并对管壁和盛器消毒。
检查并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。
对实验室自采的样品,最好将血液先放置1-2个小时,再用3000 离心15分钟,吸出上清液备用,如在几天内检测可放在2-8 冰箱中,如要贮存,置于-20冰箱。
3.4实验准备将试剂从冰箱中取出,按试剂盒要求时间恢复室温。
检查并记录冰箱、温箱温度。
按照试剂盒要求准备实验原始记录表,标明空白、阴性对照、阳性对照、外部质控血清以及检测样本的位置:登记日期和实验起止时间,记录环境条件及试剂盒厂家、批号、效期:整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。
按照试剂盒的要求配置洗液及其他所需要的试剂。
3.5加样和稀释根据样品数量将适宜数量的酶标板条固定在板架上,为了不损坏洗扳机,每道上的酶标板条必须保持完整{缺乏局部可用废弃的微孔添充},检查加样器加样刻度是否与||试剂盒要求的加样量相符,按照原始记录表说明的位置参加各种质控品和检测样品,注意:空白只加标本稀释液。
HIV抗体初筛实验室SOP文件安国市医院检验科目录第一部分工作制度.................................................................................................................... - 2 -实验室工作制度.................................................................................................................. - 2 - HIV标本采集与接收登记制度.......................................................................................... - 3 - 艾滋病实验室保密制度...................................................................................................... - 4 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度 ...................................................................... - 5 - 差错事故处理制度.............................................................................................................. - 6 - 报告单签发审核制度.......................................................................................................... - 7 - 设备管理制度...................................................................................................................... - 8 - 试剂管理制度...................................................................................................................... - 9 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度.................................................................................... - 10 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案................................................................................ - 11 -第二部分标准操作规程.......................................................................................................... - 14 -第一章样品采集与处理.................................................................................................. - 14 - 第二章标准操作程序...................................................................................................... - 15 - 第三章结果报告与注意事项.......................................................................................... - 17 -第三部分设备SOP文件......................................................................................................... - 19 -一、START FAX—2100酶标分析仪 .............................................................................. - 19 -二、RT3000洗板机.......................................................................................................... - 21 -三、电热恒温水箱............................................................................................................ - 26 - 第四部分流程图- 27 -一、HIV抗体筛查流程图................................................................................................ - 27 -二、暴露级别的评估........................................................................................................ - 28 -第一部分工作制度实验室工作制度1、室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清晰,有良好的通风设备。
HIV抗体初筛实验室SOP文件适用部门:检验科编制:审核:刘启明批准:刘启明生效日期:2011年10月01日兴隆县人民医院检验科目录第一部分工作制度.................................................................................................................... - 2 -实验室工作制度.................................................................................................................. - 2 - HIV标本采集与接收登记制度.......................................................................................... - 2 - 艾滋病实验室保密制度...................................................................................................... - 3 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度...................................................................... - 3 - 差错事故处理制度.............................................................................................................. - 4 - 报告单签发审核制度.......................................................................................................... - 4 - 设备管理制度...................................................................................................................... - 5 - 试剂管理制度...................................................................................................................... - 6 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度...................................................................................... - 6 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案.................................................................................. - 7 -第二部分标准操作规程............................................................................................................ - 9 -第二章样品采集与处理.................................................................................................... - 9 - 第二章标准操作程序...................................................................................................... - 10 -一、北京金豪............................................................................................................ - 10 -二、上海科华生物.................................................................................................... - 11 -三、英科新创............................................................................................................ - 12 -第三章结果报告与注意事项.......................................................................................... - 14 - 第三部分设备SOP文件 ........................................................................................................ - 15 -一、多功能自动酶标仪RT-2100C .................................................................................. - 15 -二、KHB ST-36W洗板机............................................................................................. - 18 -三、电热恒温水箱............................................................................................................ - 20 - 第四部分流程图...................................................................................................................... - 22 -一、HIV抗体筛查流程图................................................................................................ - 22 -二、暴露级别的评估........................................................................................................ - 23 - 附件:血清加样表.................................................................................................................... - 24 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清晰,有良好的通风设备。
韩城市中医院HIV初筛实验室SOP文件一、样本接收登记、处理程序1.样本的接收1.本院的样品接收2.来自本院门诊和病房的标本由门诊和病房的护士采集,先由检验科标本验收者收取。
规定时间内,由HIV筛查实验室进行登记接收。
3.检查样品的状况,记录有无溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。
对于不合格标本(如溶血、乳糜血等),及时通知护士重新采集。
4.院外的样本接收5.含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开,用后的包裹应进行消毒。
6.核对标本与送检单,检查样品管有无破损和溢漏。
如有发现溢漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒,同时还要报告有关领导和专家。
7.检查样品的状况,记录有无严重溶血,微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况,如果污染过重或者认为样品不能被接受,则应将样品安全废弃,并要将样品情况通知送样人。
8.打开标本容器时要小心,以防内容物泼溅。
样品处理时若内容物有可能溅出,则应在生物安全柜中戴手套进行。
同时应戴口罩,防护镜,以防皮肤或黏膜污染。
9.因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不能用于荧光方法测试。
10.接收样品是应填写HIV筛查试验室标本接收登记。
2.样本的登记记录HIV筛查试验室样本登记表,实验室收到标本后应及时进行有关参数登记,包括受检者的姓名、性别、人群类别、试管编号、检验结果(初筛)、送检日期、报告日期和3.样本的处理标本在室温下自然放置1-2小时,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,吸出血清备用。
3.样本的保存用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于-20℃以下,短期(1周内)进行检测的样品可存放于2-8℃。
5.样品的运送实验室间传递的样品应为血清或血浆,除特殊情况外一般不运送全血。
1.应采用WHO提出的三级包装系统1.1第一层容器:装样品,要求防渗漏。
样品应置于带盖的试管内,试管试管上应有明显的标记,标明样品的编号或受检者的姓名、种类和采集时间。
HIV初筛实验室管理制度1.目的为加强本实验室艾滋病初筛检测工作的规范化管理,提高检测工作,根据《全国艾滋病检测工作管理办法》(2020年修订版),特制定本实验室的管理制度。
2.范围适用于艾滋病初筛实验室。
3.人员组成本实验室人员均参加过省疾病控制中心HIV初筛检测技术培训,并获得培训证书,实验室负责人为副主任检验师及以上,且有2年以上临床免疫工作经验:认可的授权签字人为主管检验师,且从事申请认可授权签字领域专业技术工作3年以上,符合相关要求。
4.安全等级HIV初筛实验室为二级生物安全实验室。
5. 管理制度5.1 热爱本职工作,遵守医务人员服务守则与工作原则;5.2 坚持不歧视原则,与服务对象建立良好关系,关心他人;5.3 做好合格和规范的预防艾滋病传播的宣传工作;5.4 严格执行《全国艾滋病检测工作管理办法》(2020年修订版),遵照本实验室的相关SOP文件工作;5.5 严格执行实验室生物安全通用要求,工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术;5.6 不得在实验室内喝饮料,抽烟,吃食物和化妆等,不得在实验室会客;5.7 实验室用品(包括工作服)不得用作其他用途,不可将私人用品和无关用品带入实验室;5.8 工作时,要戴手套,穿工作服,操作时手套破损应立即丢弃,洗手并戴上新手套;5.9 不要用戴手套的手触摸暴露皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等;5.10 尽量避免使用尖锐物品和器具,宜用不易破碎材料制品;禁止用口吸任何物品;5.11 工作认真负责。
严格执行本实验室的质量管理控制程序规则;做好室间质评和室内质控工作;保证检测结果准确无误,杜绝差错事故的发生;5.12 工作结束后,要对工作台面消毒,如用消毒液清洁后要干燥20分钟以上;操作时要有标本,检测试剂外溅时,应及时消毒;平时要保持环境整洁;5.13 工作完毕,脱去手套后洗手,再脱去工作服,用消毒洗手液和流动水洗手;5.14 遇到意外事故,应立即处理并报告上级,妥善处理。
涡阳县中医院HIV抗体初筛实验室SOP文件目录第一部分工作制度...................................................................................................... - 2 -实验室工作制度 .................................................................................................... - 2 - HIV标本采集与接收登记制度 ............................................................................... - 3 - 艾滋病实验室保密制度.......................................................................................... - 3 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度.............................................................. - 3 - 差错事故处理制度................................................................................................. - 4 - 报告单签发审核制度 ............................................................................................. - 5 - 设备管理制度........................................................................................................ - 5 - 试剂管理制度........................................................................................................ - 6 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度............................................................................ - 6 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案 ........................................................................ - 7 -第二部分标准操作规程............................................................................................. - 10 -第二章样品采集与处理...................................................................................... - 10 - 第二章标准操作程序 ......................................................................................... - 10 -一、北京金豪............................................................................................... - 10 -二、上海科华生物........................................................................................ - 12 -三、英科新创............................................................................................... - 13 -第三章结果报告与注意事项............................................................................... - 14 - 第三部分设备SOP文件............................................................................................ - 16 -一、多功能自动酶标仪RT-2100C ........................................................................ - 16 -二、KHB ST-36W洗板机.................................................................................. - 18 -三、电热恒温水箱............................................................................................... - 21 - 第四部分流程图 ....................................................................................................... - 22 -一、HIV抗体筛查流程图 .................................................................................... - 22 -二、暴露级别的评估 ........................................................................................... - 23 - 附件:血清加样表...................................................................................................... - 24 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清晰,有良好的通风设备。
HIV抗体初筛实验室SOP文件适用部门:检验科目录第一部分工作制度.................................................................................................................... - 2 - 实验室工作制度.................................................................................................................. - 2 -HIV标本采集与接收登记制度.......................................................................................... - 2 - 艾滋病实验室保密制度...................................................................................................... - 3 - 艾滋病筛查实验室常规消毒清理工作制度...................................................................... - 3 - 差错事故处理制度.............................................................................................................. - 4 - 报告单签发审核制度.......................................................................................................... - 4 - 设备管理制度...................................................................................................................... - 5 - 试剂管理制度...................................................................................................................... - 6 - 艾滋病筛查实验室安全防护制度...................................................................................... - 6 - 艾滋病病毒职业暴露预防处理方案.................................................................................. - 7 -第二部分标准操作规程............................................................................................................ - 9 -第二章样品采集与处理.................................................................................................... - 9 - 第二章标准操作程序...................................................................................................... - 10 -一、北京金豪............................................................................................................ - 10 -二、上海科华生物.................................................................................................... - 11 -三、英科新创............................................................................................................ - 12 -第三章结果报告与注意事项.......................................................................................... - 14 -第三部分设备SOP文件 ........................................................................................................ - 15 -一、多功能自动酶标仪RT-2100C .................................................................................. - 15 -二、KHB ST-36W洗板机............................................................................................. - 18 -三、电热恒温水箱............................................................................................................ - 20 -第四部分流程图...................................................................................................................... - 22 -一、HIV抗体筛查流程图................................................................................................ - 22 -二、暴露级别的评估........................................................................................................ - 23 -附件:血清加样表.................................................................................................................... - 24 -第一部分工作制度实验室工作制度1.室内应经常保持整洁,各种仪器设备要安装适当,器皿试剂摆放整齐,标志清晰,有良好的通风设备。
艾滋病初筛中心实验室标准操作程序(SOP)编号:TJKHIV001机构名称:亭湖区疾病预防控制中心实验室名称:亭湖区疾控中心艾滋病初筛实验室实施日期:2010年1月6日前言本标准操作程序(SOP)根据《全国艾滋病检测技术规范2009》的要求,由亭湖区疾病预防控制中心实验室全体人员参与编写。
主要起草人:张贵马,审核人:花长庚。
根据《全国艾滋病检测技术规范2009》的要求,实验室编写了相关的SOP文件,以适应HIV抗体检测的相关需要。
为全社会的艾滋病检测工作提供科学的、准确的检测服务。
一些相关的制度及规范,可以为实验提供准确的结果并为实验人员及环境提供良好的保护作用。
本标准操作程序(SOP)覆盖了实验室全部工作内容,主要包含以下内容:一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理(编号:TJKHIV001-01)二、检测方法和步骤(编号:TJKHIV001-02)三、仪器的使用、维护、校准(编号:TJKHIV001-03)四、实验中的质量控制(编号:TJKHIV001-04)五、结果解释与报告(编号:TJKHIV001-05)六、保密程序(编号:TJKHIV001-06)七、检测数据的记录与保存(编号:TJKHIV001-07)八、追踪与处理(编号:TJKHIV001-08)九、实验室的清理与消毒(编号:TJKHIV001-09)十、实验室的安全防护(编号:TJKHIV001-10)本标准操作程序(SOP)至编写完成并审核通过之日起开始实施,每年由实验室主管负责组织岗位人员进行修订。
所有岗位人员要在所从事工作的SOP文件上签名并认真阅读掌握相关内容。
审核人(签字):____________目录一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理 (4)1 样品接收、登记、运输及处理办法 (4)2 样品采集 (5)二、检测方法和步骤…………………………………………………………………71 检测程序………………………………………………………………………72艾滋病抗体初筛检测常用的方法 (8)3 丽珠试剂检测方法和步骤 (8)4 万泰试剂检测方法和步骤 (9)三、仪器的使用、维护、校准 (10)1仪器使用制度 (10)2 仪器设备的管理、使用、维修、报废制度 (11)3仪器的使用、维护及校准方法与记录表样 (12)4 仪器档案 (14)四、实验中的质量控制 (15)1 质控血清的制备和保存 (15)2 质控图的建立与应用 (16)五、结果解释与报告 (19)1 HIV抗体筛查报告 (19)2 HIV抗体阳性送检单 (19)3 自愿咨询检测报告单 (19)六、保密程序 (20)七、检测数据的记录与保存 (21)1 原始记录 (21)2 结果登记表样 (21)3 数据记录的保存 (21)八、追踪与处理 (221)九、实验室的清理与消毒 (23)1 HIV实验室消毒方法 (23)2 HIV实验室消毒规范 (23)3 HIV实验室废弃物处理规范 (24)4 HIV实验室废弃物处理登记表样 (25)十、实验室的安全防护 (26)1 实验室安全制度 (26)2 实验室分区 (27)3 实验人员安全防护 (27)4 标本的安全防护 (29)附表1. 样品接收、运送及处理办法1.1 样品接收1.1.2 核对样品与送检单,检查样品管有无破损或溢漏。
艾滋病筛查实验室标准操作程序(SOP)编号:LZFBYHIV实验室名称:莱州市妇幼保健院艾滋病筛查实验室实验室编码:NO 355实施日期: 2014年3月20日本标准操作程序(SOP)根据《全国艾滋病检测技术规范2004》的要求,由莱州市艾滋病筛查实验室全体人员参与编写。
主要起草人:姜子明王永彬,审核人:綦洪敏。
根据《全国艾滋病检测技术规范2004》的要求,实验室编写了相关的SOP 文件,以适应HIV抗体检测的相关需要。
为全社会的艾滋病检测工作提供科学的、准确的检测服务。
一些相关的制度及规范,可以为实验提供准确的结果并为实验人员及环境提供良好的保护作用。
本标准操作程序(SOP)覆盖了实验室全部工作内容,主要包含以下内容:一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理(编号:LZFBYHIV-01)二、检测方法和步骤(编号:LZFBYHIV-02)三、仪器的使用、维护、校准(编号:LZFBYHIV-03)四、实验中的质量控制(编号:LZFBYHIV-04)五、结果解释与报告(编号:LZFBYHIV-05)六、保密程序(编号:LZFBYHIV-06)七、检测数据的记录与保存(编号:LZFBYHIV-07)八、追踪与处理(编号:LZFBYHIV-08)九、实验室的清理与消毒(编号:LZFBYHIV-09)十、实验室的安全防护(编号:LZFBYHIV-10)本标准操作程序(SOP)至编写完成并审核通过之日起开始实施,每年由实验室主管负责组织岗位人员进行修订。
所有岗位人员要在所从事工作的SOP 文件上签名并认真阅读掌握相关内容。
审核人(签字):____________ 审核日期年月日一、样品的采集、运输、接收、登记、保存、处理 (4)1 样品接收、登记、运输及处理办法.................................‥ (4)2 样品采集…………………………………………………………………………‥5二、检测方法和骤………………………………………………………………71 检测程序....................................................................................72艾滋病抗体初筛检测常用的方法 (8)3万泰试剂检测方法和步骤 (9)三、仪器的使用、维护、校准 (10)1仪器使用制度 (10)2 仪器设备的管理、使用、维修、报废制度 (11)3仪器的使用、维护及校准方法与记录表样 (12)4 仪器档案 (14)四、实验中的质量控制 (15)1 质控血清的制备和保存 (15)2 质控图的建立与应用 (16)五、结果解释与报告 (19)1 HIV抗体筛查报告 (19)2 HIV抗体阳性送检单 (19)3自愿咨询检测报告单 (19)六、保密程序 (20)七、检测数据的记录与保存 (21)1 原始记录 (21)2 结果登记表样 (21)3 数据记录的保存 (21)八、追踪与处理 (22)九、实验室的清理与消毒 (23)1 HIV实验室消毒方法 (23)2 HIV实验室消毒规范 (23)3 HIV实验室废弃物处理规范 (24)4 HIV实验室废弃物处理登记表样 (25)十、实验室的安全防护 (26)1 实验室安全制度 (26)2 实验室分区 (27)3 实验人员安全防护 (27)4 标本的安全防护 (29)十一、样品编码的操作程序 (30)1. 样品接收、运送及处理办法1.1 样品接收1.1.1由经过培训的、穿戴防护衣的实验人员在具有处理感染源设备的实验室内接收。
装标本的包裹或容器须消毒。
1.1.2 核对样品与送检单,检查样品管有无破损或溢漏。
若发现有破损或溢漏的应立即将尚存的标本移入新管中,对破损或溢漏的样品管进行消毒,同时报告有关领导。
1.1.3检查样品的状况,记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。
如果污染过重或者认为样品不能被接受,则应将样品安全废弃。
并要将样品情况立即通知送样人。
1.1.4打开标本容器时要小心,以防内容物泼溅。
样品处理时若内容物有可能溅出,则应在生物安全柜中戴手套进行。
同时应戴口罩、防护眼镜,以防皮肤或粘膜污染。
1.1.5接收样品时应填写样品接收单。
样品接收登记表样(见附件1)1.2 样品运送1.2.1实验室间传递的样品应为血清或血浆,除特殊情况外一般不运送全血。
1.2.2应采用WHO提出的三级包装系统第一层容器:装样品,要求防渗漏。
样品应置于带盖的试管内,试管上应有明显的标记,标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。
在试管的周围应垫有缓冲吸水材料,以免碰碎。
随样品应附有送检单,送检单应与样品分开放置。
第二层容器:要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器,可以装若干个第一层容器。
将试管装入专用带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理。
第三层容器:放在一个运输用外层包装内,应易于消毒。
在第三层容器外面要贴标签(数量,收、发件人)。
1.2.3血清和血浆样品应在2-8℃条件下由专人运送。
1.2.4运送感染性材料必须有记录。
1.2.5如分离血浆仍有困难,可直接将抗凝血-20℃以下冻存,采用冰壶冷藏运输,避免冻融。
1.2.6特殊情况下如需对个别样品进行复测,可以用特快专递形式投寄,但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好,避免使用玻璃容器,以保证不会破碎和溢漏。
1.3 处理:血清、血浆标本在检测前或运送前需离心(3000转/min 15min)、灭活(56℃ 30min)。
保存期限已过的标本,需经过焚烧处理并有处理记录。
1.3.1 保存1.3.1.1用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于-20℃以下,短期(1周)内进行检测的样品可存放于2-8℃。
1.3.2 废弃处理标本一般保存1年以上,过期后进行处理。
采用焚烧法,有处理记录。
2. 样品的采集艾滋病检测最常用的样品是血液,包括血清、血浆和全血。
唾液或尿液有时也可作为测试样品。
常用的血液样品的采集和处理方法如下:2.1.1 血清样品采集和处理2.1.1.1 用一次性注射器(或真空采血管)抽取足量静脉血,室温下自然放置1~2h,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,吸出血清备用。
2.1.1.2 如用滤纸片采样,则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒,在刺破皮肤后,迅速把滤纸片沾上,切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。
采血后要待血样干燥后再包装送检。
2.1.2 抗凝血样品采集和处理2.1.2.1 用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血,转移至加有抗凝剂的试管),反复轻摇,分离血浆和血细胞备用。
2.1.2.2 应根据实验要求选用适当的抗凝剂,如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠,HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA 或枸橼酸钠。
2.1.2.3 用于核酸定性检测时,采集的抗凝全血应在4~8h内分离PBMC和血浆,否则应在24~48h内分离血浆和血细胞。
2.1.3 采集样品注意事项2.1.3.1 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作(试剂盒说明书有特殊要求除外)。
2.1.3.1 采集样品时应注意安全,建议采用真空采血管及蝶形针具,以避免直接接触血液;直接接触HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人血液/体液的操作,应戴双层手套。
1.检测程序2.艾滋病抗体初筛检测常用的方法HIV抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确认试验。
筛查试剂:必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、由临检中心批批检合格、在有效期内的试剂。
筛查方法:(一)常用的筛查方法是酶联免疫试验(ELISA):目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂。
化学发光法,使用与机器配套意大利索灵试剂。
我实验室使用第三代ELISA试剂,目前主要使用万泰试剂(国家下拨)。
(二)快速检测(RT)及其它检测:1、明胶颗粒凝集试验(PA);2、斑点EIA 或称斑点ELISA(dot—EIA);3、斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验;4、艾滋病唾液检测卡;5、其它快速筛查试验方法:家庭HIV检测、尿液检测等。
我实验室主要有PA试剂。
3. 万泰试剂检测方法和步骤方法:酶联免疫(ELISA)步骤: 1.样品、试剂、酶标板条室温平衡30 分钟。
2.配制洗涤液,取浓缩洗涤液50ml,加去离子水1000ml(稀释)备用。
3.取板条,放在板架上,撕去板条上的封条。
4.在确定的板孔中加入100µl的标本或阴阳性对照,震荡混匀。
设1个空白对照,3个阴性对照,1个HIV-Ⅱ阳性对照1个HIV-Ⅰ阳性对照,并填写加样顺序表。
5.在微板上盖上贴膜(洗板前撕去贴膜),37℃孵育60±2分钟。
6.用洗板机洗板,每孔5次(程序已编好)。
最后拍干。
7.在每孔中加入100µl酶标试剂,空白孔除外 ,37℃孵育30±2分钟。
8.用洗板机洗板,每孔5次(程序已编好)。
最后拍干。
9.每孔加入显色剂A、B各50µl,轻轻振荡混匀。
10.封板膜封板后37℃闭光显色30±1分钟。
11.每孔加入50µl终止液,轻轻振荡混匀,终止反应,10分钟内比色12.在450nm波长读取每孔的吸光度,并打印结果。
分析:符合以下条件的实验成立:阴性对照平均值≤0.10 阳性对照平均值≥0.80 结果分析:结果临界值=阴性对照平均OD值+0.121. 仪器使用制度仪器设备是实验室检测工作的物质基础和技术条件,是国有资产的组成部分,是重要的卫生资源。
仪器贴有红、黄、绿三色标识,有唯一编号。
(1)、用仪器前必须熟读使用说明书或实验指导,熟练掌握仪器性能和使用方法,并在仪器负责人或教师的同意和指导下,才能开启仪器。
(2)、仪器使用过程中必须严格遵守仪器的具体操作程序,不得擅自做与实验无关的内容。
操作前要熟知使用注意事项。
使用后,操作人应认真检查仪器状态,擦净仪器,断电后方可离去,如有损坏要及时上报,检修。
(3)、对仪器要经常性的保养,定期检查,认真填写实验记录及仪器使用记录。
(4)、实验仪器不准随便乱动,否则造成仪器设备损坏者,要追究其责任,认真处理。
1.1安图2010型酶标仪操作程序1.1.1检测读数前接通电源,打开电脑、打印机、酶标仪。
1.1.2打开酶标仪工作站,输入密码,选定检测项目(若需重新设定检测条件,要由仪器管理员设定)。
1.1.3放入待测酶标板,开始检测(酶标板放置要正确)。
1.1.4保存、打印检测数据。
1.1.5检测完毕后,关机,切掉电源。
用75%的乙醇对仪器表面擦拭消毒。
1.2安图2010型洗板机操作程序1.2.1洗板前接通电源。
1.2.2开机,选择清洗程序及所需通道,用50mL洗液灌洗管路。