天然色素检测波长及溶剂一览表

2、重复性和精密度
此外，该方法具有较好的重复性和精密度，能够满足实际测定的要求。通过 本研究的开展，为准确评估蔬菜的营养价值提供了科学依据。
谢谢观看
2、样品中胡萝卜素的测定结果
表1 15种蔬菜中胡萝卜素的含量（mg/100g）
3、样品中水分含量的测定结果
3、样品中水分含量的测定结果
采用烘干法测定了15种蔬菜中的水分含量，结果如表2所示。由表可知，不同 蔬菜中的水分含量也存在显著差异。其中，生菜和芹菜中的水分含量较高，分别 为94.7%和92.5%；红薯和土豆中的水分含量较低，分别为79.3%和78.6%。其他 蔬菜中的水分含量介于上述两者之间。
采用高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素，需对方法进行重复性和精密度 评估。实验结果表明，该方法的重复性和精密度均较好，能够满足实际测定的要 求。
2、重复性和精密度
结论 本次演示介绍了高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素的方法及注意事项。 该方法具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点，能够准确测定蔬菜中类 胡萝卜素的含量。通过对不同种类蔬菜中类胡萝卜素含量的测定，发现叶菜类蔬 菜中类胡萝卜素含量较高，而根茎类蔬菜中类胡萝卜素含量较低。
2、实验方法
（2）色谱条件：采用高效液相色谱仪进行分离分析，色谱柱为C18柱（5μm， 4.6mm×250mm），流动相为甲醇-丙酮（1:1），流速为1ml/min，检测波长为 450nm，柱温为30℃。
2、实验方法
（3）标准曲线绘制：精确称取适量胡萝卜素标准品，用甲醇-丙酮（1:1）混 合溶剂配制成不同浓度的标准溶液。分别进样分析，以峰面积（A）对胡萝卜素 浓度（C）绘制标准曲线。
3、高效液相色谱法测定类胡萝 卜素
3、高效液相色谱法测定类胡萝卜素

花青素检测内容和方法花青素（Anthocyanins）是一类广泛存在于植物中的天然色素，具有丰富的抗氧化和抗炎特性。

以下是关于花青素检测的50条内容和方法：1. 花青素的检测可以通过分光光度法进行，该方法通过测量样品吸收特定波长的光来确定花青素的含量。

2. 除了分光光度法，高效液相色谱法（HPLC）也是一种常用的花青素检测方法，可以准确测量不同类型的花青素。

3. 在花青素检测中，常用的溶剂包括甲醇、乙腈和水，这些溶剂可以帮助提取样品中的花青素。

4. 还可以使用质谱法（MS）结合色谱法进行花青素的鉴定和定量分析，能够提高检测的精准度和准确性。

5. 花青素的含量可以通过比色法进行测定，该方法通过添加试剂产生有色产物来测量花青素的浓度。

6. 采用高性能液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）可以对花青素进行定性和定量分析，具有高灵敏度和选择性。

7. 使用紫外-可见分光光度法（UV-Vis）可测定花青素的吸光度，从而推算花青素的浓度。

8. 考虑到植物样品中可能存在其他干扰物质，需要对样品进行预处理，如蛋白质去除和净化，以提高花青素的检测灵敏度和准确性。

9. 对于不同环境下的花青素含量变化调查，可以通过原子吸收光谱分析（AAS）确定植物中金属离子对花青素生成的影响。

10. 考虑到花青素的稳定性，检测前样品处理和存储条件至关重要，如低温保存、光照避免、氧气隔离等。

11. 比较两个或多个样品中花青素的含量，可以通过内标法（Internal standard method）进行定量，以减小实验误差。

12. 回收率试验可以通过添加已知浓度的花青素作为标准品，验证提取方法的效果和准确性。

13. 花青素的结构分析可以使用质谱联用色谱技术（LC-MS）进行，以确定不同花青素的分子结构和质量。

14. 对于不同类型的花青素，还可以使用凝胶层析法（Gel Filtration Chromatography）进行分离和检测。

15. 非离子表面活性剂（Non-ionic surfactants）可以在样品制备中用来改善花青素的提取率和稳定性。

ABTS [2,2’-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfpni- 洗色谱柱 10 min 并平衡后再进样。 红色部分的检测波
cacid)] (Sigma)；Trolox[(6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchro-
长为 538 nm，黄色部分的检测波长为 478 nm。
(trolox equivalent antioxidant capacity) 表示，空白为乙醇。
采用 Sephadex LH-20 分离甜菜红色素主要部分， 2.5 DPPH 自由基清除试验测定抗氧化能力[14-15]
用 pH=5～6 的乙酸洗 脱[7]，收集红 色 部 分 和 黄 色 部 分 ，
Trolox 当量。
3 结果与讨论 3.1 甜菜红色素中甜菜色苷和甜菜黄素的分离效果
利用 Sephadex LH-20 对甜菜红色素进行分离，结 果显示， 用 pH=5～6 的乙酸洗脱可以将红色素和黄色 素分成明显的两个大的区带，分别收集洗脱液得到色 素 的 两 大 部 分— — — 红 色 部 分 和 黄 色 部 分 。
道， 采用不同抗氧化体系对这两类化合物的抗氧化活 紫外一可见光检测器(model 525)测定甜菜色苷和甜菜
性进行评价，来探究甜菜红色素的主要抗氧化部分。
黄素。 将上述冷冻干燥样品溶解过 0.22 μm 滤膜后进
样， 进样量为 20 μL， 所用色谱柱为 Kromasil C18 5μL
1 材料和仪器
甜菜红色素[1-2]。 国内外现均已将其作为天然色素加以
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
度为 30 ℃，时间为 20 min。 纤维素酶水解枣纤维的最

中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2015, 46(7)
・ 695 ・
中药与天然药物
中药中 48 种非法染色色素的 TLC 法检测
胡 青，孙 健，张 甦，冯 睿，季 申*
(上海市食品药品检验所，上海 201203) 摘要 ： 建立了薄层色谱法检测中药中的 48 种非法染色色素。分别采用乙腈、0.1％甲酸甲醇溶液、甲醇∶ 0.1％甲酸 (3 ∶ 2 ) 混合溶液超声提取样品粗粉。将乙腈提取液与脂溶性色素对照溶液点于同一硅胶 G 板上，以石油醚∶乙醚∶无水甲酸 ( 80 ∶ 20 ∶ 1 ) 为展开剂展开。将 0.1％甲酸甲醇溶液提取液与水溶性碱性色素对照溶液点于同一硅胶 G 板上，以乙酸乙 酯∶乙醇∶水∶氨水 ( 12 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1.2 ) 为展开剂展开。将甲醇∶ 0.1％甲酸 ( 3 ∶ 2 ) 提取液与水溶性酸性色素对照溶 液点于同一硅胶 G 板上，以乙酸乙酯∶乙醇∶水∶氨水 ( 6 ∶ 4 ∶ 2 ∶ 0.2 ) 为展开剂展开。均在日光下检视。48 种色素 的检测限为 0.025 ～ 0.6 g。本法快速简便，可应用于中药材多色素染色初步筛查。 关键词：色素；中药；薄层色谱；检测 中图分类号：O657.7 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2015)07-0695-06 DOI：10.16522/ki.cjph.2015.07.008
，但尚未见关于中药多
2 方法与结果 2.1 对照溶液的配制 2.1.1 对照试剂贮备液 准确称取 R13、R14、R22、O6、R20 和 Y5 对 照试剂 10 mg，各置 20 ml 量瓶中，分别用乙腈溶 解并定容，配制成 0.5 mg/ml 的对照试剂贮备液。 准确称取 R16 对照试剂 10 mg， 置 50 ml 量瓶中， 用乙腈溶解并定容，配制成 0.2 mg/ml 的对照试剂 贮备液。 准确称取 R15、R25 和 R18 对照试剂 10 mg， 各置 100 ml 量瓶中，分别用乙腈溶解并定容，配制 成 0.1 mg/ml 的对照试剂贮备液。 准确称取 V2、B4、B5、G3、O7、R10、R4、

早在 １８１５ 年姜黄素就被从姜黄中分离出来，从此
以后，姜黄素和类姜黄素的结构表征及合成方面的报道 陆续出现［３，４］。国内外有关姜黄的研究一直十分活跃，研 究内容主要涉及姜黄药用活性成分及有效成分的提取、 分离、分析、检测和结构鉴定，姜黄素及其衍生物的 化学反应及药用功能研究等［ ５ ～７ ］ 。研究资料表明［ ８ ］ ，不 同产地的姜黄一般具有不同的化学成分及组成；那么， 从不同产地的姜黄中提取出的姜黄素是否有同样的分子 与晶体结构？本文的工作证实，分子与晶体结构基本相 同，但是结构数据有些差异。国内外对于天然姜黄素 分子与晶体结构的研究报道较少［ ９ ， １ ０ ］ ，因此本文在天然 姜黄素的纯化、谱学表征和分子与晶体测定方面的工作
Ｃ２１ Ｈ ２０ Ｏ６ ３６８．３７ ２９３（２） Ｋ ０．０７１０７３ｎｍ Ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ， Ｐ２／ｎ ａ ＝ １．２６９５（３） ｎｍ α＝ ９０° ｂ ＝ ０．７２０７５（１６） ｎｍ β＝ ９５．０９８（４）° ｃ ＝ １．９９６０（４） ｎｍ γ＝ ９０° １．８１９１（７）ｎｍ３
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｏｈｈｏｔ ０１００６２， Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈｏｈｈｏｔ ０１００２２， Ｃｈｉｎａ；
ＦＴＩＲ 光谱在 Ｎｉｃｏｌｅｔ ＦＴ－ＩＲ 光谱仪上测定，ＫＢｒ 压 片；ＵＶ－Ｖｉｓ 光谱在 Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ－３１０１ 光谱仪上记录； １ＨＮＭＲ 和 １３ＣＮＭＲ 光谱在 ＪＥＯ－ＪＮＭ－ＡＬ－３００ＦＴＮＭＲ 仪上 测定，ＴＭＳ 作内标，ＣＤＣｌ３ 作溶剂；ＭＳ 谱在 Ｆｉｎｎｉｇａｎ－ Ｐｌｏａｒｉｓ Ｑ－ＭＳ 质谱仪上记录；利用 ＳＧＷ Ｘ－４ 型熔点仪测 定天然姜黄素的熔点。 １．２ 姜黄素的提取、纯化及谱学表征数据

编号学士学位论文石榴花中花青素的提取与理化性质分析学生姓名：美合日古丽·努尔麦麦提学号：20060303025系部：生命与环境科学系专业：生物科学年级：2006年级3班指导教师：阿布来提·阿布都热西提完成日期：2011 年 5 月 6 日1中文摘要本文以已晾干备用的石榴花瓣为原料酸性乙醇做溶剂提取了花青素并分析了该色素的溶解性、光照、热、PH 、氧化剂、还原剂、食品添加剂和金属离子对石榴花花青素理化性质的影响。

结果表明：该色素水溶性好，最大吸收波长为 376nm 。

耐热性、耐光性和耐氧化还原性较差，尤其是还原剂对该色素的理化性的影响较显著，在酸性条件下较稳定，食品添加剂（NaHCO 3 、食盐、柠檬酸）和Na +、Ca 2+、Zn 2+对石榴花花青素无影响，它们具有一定的护色作用，但 Fe 3+、Al 3+和Cu 2+对花青素有破坏作用，因此在使用和保存过程中考虑Fe 3+、Al 3+ 、Cu 2+和还原剂的作用。

石榴花花青素是颜色鲜艳、提取容易、操作简便、稳定性较好、易保存的天然色素，可用于食品、饮料、妆品等其它化工产品中。

关键词：石榴花；花青素；理化性质目录中文摘要 (1)引言 (3)1实验部分 (4)1.1实验仪器与材料 (4)1.1.1实验仪器 (4)1.1.2实验材料 (4)1.1.3实验试剂 (4)1.2实验方法 (4)1.2.1花青素的提取 (4)1.2.2花青素的溶解性 (4)1.2.3花青素溶液的光谱特性 (4)1.2.4pH值对花青素的影响 (4)1.2.5花青素溶液的热稳定性 (5)1.2.6花青素溶液的光稳定性 (5)1.2.7花青素溶液的耐氧化还原性 (5)1.2.8金属离子对花青素的影响 (5)1.2.9不同添加剂对花青素的影响 (5)2结果与讨论 (5)3结论 (10)参考文献 (10)致谢 (11)2引言天然色素与合成色素相比,安全性高,且具有一定的营养和药理作用[1]。

1.天然色素的概述
1.3 天然色素的特点 (1) 绝大多数天然色素无毒、无副作用，安全性高。 (2) 天然植物色素大多为花青素类、黄酮类、类胡萝卜素类化合物，因此，天然 食用色素不但无毒无害，而且很多天然食用色素含有人体必需的营养物质或 本身就是维生素或具有维生素性质的物质。如核黄素、番茄红素、玉米黄色 素、胡萝卜素等，尤其是β-胡萝卜素，国家已归类为营养强化剂，用于食品
1.天然色素的概述
1.4 天然色素的基本性质 1.4.4 安全性 根据(LD50)可将物质毒性分级：
用做食品着色剂的天然食用色素其LD50 应在基本无毒范围内。
1.天然色素的概述
1.4 天然色素的基本性质 1.4.4 安全性
(1) 毒性试验 是研究动物在一定时间内以一定剂量进入机体所引起的毒性反应。
1.天然色素的概述
1.4 天然色素的基本性质 1.4.2 pH值的影响 几种天然色素在不同pH值下的显色情况
1.天然色素的概述
1.4 天然色素的基本性质
1.4.3 稳定性 (1) 对热的稳定性 很多天然食用色素在遇热时就会分解，造成褪色，其对热的稳 定性较差。天然食用色素用于食品着色时，常常需加热食品，热稳定性差的 色素在使用中应尽量控制短的加热时间以保证色素尽可能少的破坏。 (2) 对光的稳定性 多数天然食用色素在紫外光照射下都会发生褪色，有的甚至放
在生产过程中有毒物质的带入，国家规定天然食用色素产品中砷、 汞、铅等有害物质不得超过规定量。 (3) 卫生检验 主要是检验致病微生物，应呈阴性反应，其他不应含有
黄曲霉素等有害物质。一般菌数应在30个以下。只有在以上几个方 面达到要求，该品种才达到要求的安全性。
1.天然色素的概述
1.4 天然色素的基本性质

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（4）叶绿素铜钠 ） 天然叶绿素稳定性差。 叶绿素经提取后，再经铜化、成盐可得到稳定的叶绿素铜钠。 墨绿色、有金属光泽的粉末；易溶于水、水溶液呈蓝绿色； 1％溶液pH为9.5 ~ 10.2。 着色能力强，色泽鲜艳。 LD50：小鼠口服>10g／kg； ADl 0~15 mg／kg 配制酒、糖果、青豌豆罐头、冰淇淋：0.5g／kg 注意事项：遇硬水或酸性食品或含Ca食品，可产生沉淀。
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（三）色调的选择与拼色 色调选择应该与食品原有色泽相似或与食品的名称相一致。 在使用合成着色剂时，我国规定允许使用8种食品合成着色剂拼 色，它们分属红、黄、蓝3种基本色，可以根据不同需要来选择 红 其中2种或3种拼配成各种不同的色谱。 基本方法： 基本方法： 由基本色拼配成二次色，或再拼成三次色。 红 黄 橙 绿 蓝 紫 红 橙 黄 （基本色） （二次色） （三次色
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（2）胭脂虫红 ） 干燥的雌性胭脂虫受精虫体用水提取。 深红色液体；呈酸性(pH5—5.3)；易溶于水、丙二醇、甘油。 LD50 小鼠口服>21.5g／kg ADI：0—5mg／kg 碳酸饮料：0.02g／kg 冰淇淋、雪糕：0.025g／kg
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三、食品着色剂的发色机理
（一）吸收波长 不同的物质能吸收不同波长的光。如果某物质所吸收的光， 其波长在可见光区以外，这种物质看起来是白色的；如果它 吸收的光波长在可见光区域（400－800nm），那么该物质 就一定会呈现一定的颜色，其颜色是由未被吸收的光波所反 映出来的，即被吸收光波颜色的互补色。 生色基（ 和助色基（ （二）生色基（团）和助色基（团） 生色基（ 生色基（团）： 分子本身含有的能使物质吸收可见光而呈现不同的颜色的特 殊基团。这些基团有碳一碳双键、酮基、醛基、羰基、偶氮 等。

附件3化妆品中10种着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316着色剂含量的高效液相色谱测定方法和橙黄Ⅰ的阳性结果确证方法。

本方法适用于胭脂、口红、粉底、指甲油、睫毛膏、眼影等修饰类化妆品中CI16185、CI16255、CI16035、CI14700、CI45380、CI15510、CI59040、橙黄Ⅰ、CI15985、CI10316含量的测定。

2 方法提要试样经甲醇超声提取后，过0.45 μm滤膜，采用高效液相色谱系统分离，二极管阵列检测器进行检测，外标法定量。

本方法的检出限、定量下限和取样品5.0 g时的检出浓度、定量浓度见表1。

表1 各种着色剂的检出限和检出浓度着色剂索引号着色剂索引通用中文名CAS号检出限（μg）定量下限（μg）检出浓度（μg/g）定量浓度（μg/g）CI 16185 食品红9 915-67-3 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16255 食品红7 1390-65-4 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 16035 食品红17 25956-17-6 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 14700 食品红1 4548-53-2 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 45380 酸性红87 548-26-5 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 15510 酸性橙7 633-96-5 0.3 1.0 0.06 0.20 CI 59040 溶剂绿7 6358-69-6 5.0 16.5 1.0 3.3 ——橙黄Ⅰ523-44-4 5.0 16.5 1.0 3.3 CI 15985 食品黄3 2783-94-0 15.0 50.0 3.0 10.0 CI 10316 酸性黄1 846-70-8 15.0 50.0 3.0 10.0 3试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为一级水。

万方数据
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辣椒红色素的检测方法
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 王丽霞， 庞杰 王丽霞(福建农林大学生命科学院,福州,350002)， 庞杰(福建农林大学食品科技 学院,福州,350002) 辣椒杂志 JOURNAL OF CHINA CAPSICUM 2003，1(1) 3次
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辣椒杂志 ( 季刊 +
产品加工
辣椒红色素的检测方法
王丽霞 ’ 庞
( ’ .福建农林大学生命科学院 摘 福州
杰"
福州 $ / # # # " " .福建农林大学食品科 技学院
要! 综述辣椒红色素的多种检测方法 , 即溶解性试验 0 显色反应 0 分光光 度测定法及薄层层析法 检测 显色反应 分光光度法 薄层层析法
’ 2 含 量1 显色反 -本文从介绍了溶解性试验 0 1 ’ 2 " , $ 2 应0 可见光谱测定方法 0 分光光度测定法 1
定 - 该法包括测定紫外可见吸收光谱和 红外
/ 2 吸收光谱 1 紫外可见吸收光谱是取少量样品 -
用 石 油 醚 溶 解0 稀 释, 以 石 油 醚 为 参 比, 在分 光光 度 计 ( 岛 津 9:%" 上测定其吸收光 ; # + 谱红外吸收光谱是将样品制片 ,在红外分光
/ 0 1
组分组成 * 极性大小不同 * 用展开剂 系统可 以 将 其 分离 ( 即将高效硅胶 @ 板在 = = # A活化 将 色 素 用 丙 酮 稀 释* 用微量毛细管点 # $ 3 * B 样* 点 样 后 薄 板 放 在 层 析 缸 中* 按上行法展 开* 至斑点分开时终止层析 * 取出薄板晾干 ( 计 算展开系 统薄层层析的 C 值( D 质量指标分析 ?

叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。

二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。

为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得：C A =13.7D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。

2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。

计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025??A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025??B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025??G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。

临床生化常用的色原及检测波长Toos 545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD（P）H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、CK、UREA、LDH等。

苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。

过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。

可见光波长及其互补色：可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色（630～700nm）、橙色（600～630nm）、黄色（570～600nm）、绿色（500～570nm）、蓝色（435～500nm）、紫色（400～435nm）。

★540nm：1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。

在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。

2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红Y燃料离解成阴离子型，染料的黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。

★628nm：1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。

复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。

★603nm：1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄色。

当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。

★650nm：1. 磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。

2. 米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。

从当前国内红曲色素的发展趋势看，生产技 术水平 越 来 越 高， 红 曲 发 酵 液 的 色 价 已 可 达 到 700U / mL 以上，而产品中桔霉素的含量则成下降 趋势。2002 年前后［8］检测的红曲红产 品 （ 色 价 10000U / g） 中，大都含有桔霉素； 而最近几年对 国内某些红曲红生产企业的产品桔霉素含量的跟 踪检测中，发现大部分 100U / g （ 1% ） 红曲红产
2. 2 薄层层析［1］ 采用规格为 8cm × 20cm 玻璃板，每块涂布 4g
硅胶 G，晾干后于 120℃ 下活化 30min，置于干燥 器中充分冷却，将红曲色素溶于 70% 乙醇溶液中 制成浓缩液体点在薄板上，用展开剂乙醚∶ 苯∶ 无水乙醇∶ 水 = 20 ∶ 22 ∶ 40 ∶ l5 （ 体积比） 上行 展开 90min，至最后出现明显的色素斑点，测其 Rf 值。 2. 3 色价测定方法
品中桔霉素含量几乎降至未测出的水平。说明我 国的产品已达到或超越日本同类产品的质量标准 ［据 我 们 2002 年 所 测， 日 本 的 色 价 为 60U / g （ 1% ） 红曲红样品，桔霉素含量为 0. 73mg / kg］。 这说明经过多年来的努力，原来谈之色变的桔霉 素问题，至少在红曲红色素这一产品上已经基本 解决，因此在国家标准中设立这一限量指标的条 件已经基本成熟。通过在国标中设定限量指标表 明我们能彻底解决桔霉素问题，更重要的是向世 界表明我们的红曲红色素产品是安全的。
红曲黄色素，日本和韩国均已制定了国家标 准，但在中国大陆，红曲黄色素的生产才刚刚起 步，主要的生产方法有液态发酵法、固态发酵法 和转化法。由于红曲黄色素的生产起步较晚，目 前生产厂家也很少，产品并未大规模上市。最近 有关单 位 和 企 业 正 在 制 定 红 曲 黄 色 素 的 国 家 标 准，因此建立一套合理可行的红曲黄色素检测方 法是非常必要的。

人工合成色素和天然色素广泛应用于食品、医药、化妆品等领域，但由于色素的化学特性和来源不同，其测定方法和原理也会有所不同。

本文将介绍人工合成色素和天然色素的测定方法及原理。

一、人工合成色素的测定方法及原理1. 分光光度法：人工合成色素通常具有特定的吸光特性，通过分光光度法可以测定其在特定波长下的光吸收情况，从而进行定量分析。

该方法原理简单，操作方便，广泛用于色素的测定。

2. 液相色谱法：利用液相色谱仪将样品中的色素物质在色谱柱中进行分离，并通过波长可编程检测器检测其吸收峰，从而实现色素的定量分析。

该方法准确性高，分离效果好。

3. 电化学法：通过将样品与电极接触，测定其在电极表面发生的氧化还原反应，从而测定颜色产生的电流信号，进而实现色素的测定。

二、天然色素的测定方法及原理1. 高效液相色谱法：天然色素通常具有复杂的化学成分，利用高效液相色谱仪将样品中的色素物质进行分离，并通过紫外检测器检测吸收峰，实现色素的定量分析。

2. 薄层色谱法：将样品中的色素沿着薄层色谱板上升，根据各色素成分在薄层色谱板上的相对迁移距离进行定性和定量分析。

3. 气相色谱法：气相色谱法适用于分析不易挥发的色素成分，通过色谱柱的分离作用将样品中的色素分离，并利用检测器进行定量分析。

总结：人工合成色素和天然色素的测定方法和原理各有不同，选择合适的分析方法需要根据样品的特性和分析要求来确定。

无论是人工合成色素还是天然色素，都需要进行严格的测定和监控，以确保产品的质量和安全。

人工合成色素和天然色素的测定方法和原理是食品、医药、化妆品等行业必不可少的重要步骤。

鉴别和测定色素的原理和方法不仅是对产品质量的保障，也是对用户健康的保障。

以下将继续扩展人工合成色素和天然色素的测定方法和原理，讨论其在日常生活中的重要性以及目前存在的问题。

一、人工合成色素的测定方法和原理扩展1. 气相色谱-质谱联用技术: 在分析物质中，特别是不同种类色素混合体系中，气相色谱-质谱联用技术有着得天独厚的优势。

硝酸盐
GB/8271-1987 3.0
4.0-6.0 10.0 14.0
0.0002 0.0005
指标 FAO/WHO（1988） 0.4%（以甜菜苷计）
0.0003 0.0010 0.0040 每克（已甜菜苷计） 不大于2g硝酸盐阴离
子
5．黑豆红Black bean red（质量标准GB/9992-1988）
≤
0.0002
叶绿素/%
≥
1.0
铜/%
≤
0.006
水分/%
≤
6.0
28．茶黄色素Tea yellow（质量标准 安徽六安市 Q/TCSI-1993）
项目
指标
项目
指标
吸光度380nm ≥
5.0
灰分/%
≤
6.0
黄酮类化合物/% ≥ 8.0
铅/%
≤
0.0002
水分/%
≤
6.0
铜/%
≤
0.006
29．植物碳黑Vegetable carbon black（质量标准FAO/WHO，1988）
10
铅（以Pb计）/% ≤
灼烧残渣/% ≤
14
砷（以As计）/% ≤
吸光度400nm ≥
0.4
汞/%
≤
指标 0.0005 0.0001 0.00003
9．密蒙黄Buddleia yellow（企业标准）
项目
指标
项目
浸膏 粉末
吸光度435nm 1500 3000 铅/%
≤
≥
指标 浸膏 粉末 0.0005 0.0005
项目
指标
固体发酵
液体发酵
吸光度495±10nm ≥

测定紫外光谱时溶剂的选择（常用的溶剂的波长极限）由于溶剂对电子光谱图的影响很大，因此在吸收光谱图上或数据表中必须注明所用溶剂；对已知化合物作紫外光谱比较时，也应注意所用溶剂是否相同。

紫外-可见分光光度法中如何正确选择溶剂？
溶剂极性除了对最大吸收峰波长有影响外，还影响吸收光谱的精细结构。

当物质处于蒸气状态时，由于分子间的相互作用力减小到最低程度，电子光谱的精细结构(振转光谱)清晰可见；当物质处于非极性溶剂中时，由于溶质分子和溶剂分子间的相互碰撞，使精细结构部分消失；当物质处于极性溶剂中时，由于溶剂化作用，限制了分子的振动和转动，使精细结构完全消失，分子的电子光谱只呈现宽的谱线包封。

测定化合物的紫外吸收光谱时选择溶剂的原则是：
（1）样品在溶剂中溶解良好，能达到必要的浓度以得到吸光度适中的吸收曲线；（2）溶剂不影响样品的吸收光谱，因此在测定的波长范围内溶剂应当是紫外透明的，即溶解本身没有吸收。

透明范围的最短波长称为透明界限，测试时应根据溶剂的透明界限选择合适的溶剂；
（3）为了降低溶剂与溶质分子间的作用力，减少溶剂对吸收光谱的影响，应尽量采用低极性溶剂；
（4）溶剂挥发性小、不易燃、无毒性、价格便宜；
（5）所选用的溶剂应与待测组分不发生化学反应。

标准溶液配制一．概述常规检测过程中需要配置的溶液有：1．辣椒方面：70%甲醇、1mol/L盐酸、1mol/L氢氧化钠；2．菊花方面：HEAT、10%硫酸钠、40%氢氧化钾-甲醇溶液；3．水溶方面：pH=3测甘蓝红色价用缓冲液、0.3%柠檬酸缓冲液、0.15mol/L 盐酸、30%酸性乙醇、盐酸乙醇溶液、0.2%柠檬酸10%食盐水；4．麦胚方面：0.1mol/L氢氧化钾乙醇溶液、1+1乙醚：乙醇溶液；5．肥料方面：NaOH溶液（0.5mol/L、400g/L、10%）、硫酸溶液（0.5mol/L、0.05mol/L、10%）、四苯硼钠溶液（15g/L）、喹钼柠酮试剂、重铬酸钾溶液—硫酸溶液（c1/6K2Cr2O7=0.4mol/L）、FeSO4溶液（0.25mol/L）、混合催化剂、邻菲啰啉指示剂、甲基红指示剂（1g/L）、1%酚酞、甲基红—亚基兰混合指示剂、EDTA（40g/L）、硼酸溶液（2%）、甲基红—溴甲酚绿指示剂、钒钼酸按试剂、二硝基酚指示剂（0.2%（m/V）溶液）、无二氧化碳水、MgCl2·6H2O（100g/L）、重铬酸钾基准溶液（c[1/6（K2Cr2O7）=1mol/L、0.1 mol/L）、1+1硫酸、1+1硝酸、磷标准溶液（50μg/mL）、钾标准贮备溶液（1mg/mL）、钾标准溶液（100μg/mL）6．乙丙醚溶剂检测试剂：1:15硫酸、硫代硫酸钠溶液（0.1mol/L）、淀粉指示剂 （0.5g/100mL）二．辣椒方面溶液配制1.70%甲醇在500mL量筒内加入350mL分析纯甲醇，再用纯净水定容至500mL，倒入1000mL试剂瓶，摇匀，备用。

2.1mol/L盐酸在1000mL容量瓶内加入500mL纯净水，再准确加入83mL浓盐酸（浓度36～38％），加纯净水定容，摇匀，倒入试剂瓶内备用。

3.1mol/L氢氧化钠准确称量40g分析纯氢氧化钠固体到200mL烧杯内，加入150mL水使之溶解，倒入1000mL容量瓶内，用纯净水洗烧杯3次以上，定容，摇匀，倒入试剂瓶内备用。