绿豆芽中游离氨基酸总量的测定
一、实验目的：掌握茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法。
二、实验原理：游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。 三、材料、仪器设备及试剂 材料：绿豆芽
仪器设备：722型分光光度计，分析天平，研钵，容量瓶，移液管，水浴锅，三角瓶，漏斗
试剂:水合茚三酮试剂、乙酸-乙酸钠缓冲液、标准氨基酸、0.1%抗坏血酸、10%乙酸 四、实验步骤 1.样品的制备
用剪刀将绿豆芽剪碎、混匀，称取1g 放入研钵中加入5mL 10%乙酸，研磨匀浆后，用蒸馏水稀释至100mL 。混匀，并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。 2.标准曲线的制作
取6支20ml 具塞刻度试管，下表操作 试剂 管号
1 2 3 3 5 6 标准氨基酸/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 无氨蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮/mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸/mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量/μg
1
2
3
4
5
加完试剂后混匀，盖上大小合适的玻璃球，置沸水中加热15min ，取出后用冷水迅速冷却，并不时摇动，使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去，进而呈现蓝紫色时，用60%乙醇定容至20 ml 。混匀后用1cm 光径比色皿在570 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 3.样品的测定
吸取样品滤液1.0ml ，放入20mL 干燥试管中，加无氨蒸馏水1.0ml ，其他操作与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。 四、结果计算
按下式计算样品中氨基态氮的含量。
100V V C 100s T
⨯⨯⨯=
W
克样品中氨基态氮含量
式中：C 为从标准曲线上查得的氨基态氮含量，/μg;V T 为样品稀释总体积，mL ；Vs 为测定时样品体积，mL ；W 为样品鲜重。 五、实验结论与误差分析 六、思考题
1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗？为什么？
2.抗坏血酸的作用是什么?
