对羟基苯甲酸甲酯含量测定法

食品中对羟基苯甲酸酯类的检测摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。

对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。

本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。

本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。

关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-21 实验部分1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。

1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。

标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。

1.2 标准溶液的配制[2]标准贮备液：精密称取三种标准物质0.05g，用无水乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1mg/ml的标准贮备液，贮于4℃冰箱中备用。

标准使用液：用刻度吸管准确吸取三种标准贮备液，根据需要用无水乙醇配制成不同浓度的标准溶液系列，待用。

1.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18，粒度5μm，4.6mm×250mm（id×l）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：20 μl；流动相：水-乙腈（体积比为45：55）；柱温：室温。

食品中对羟基苯甲酸酯类的测定高效液相色谱法1 范围本标准适用于酱油、醋、果酱、糕点、腌制品、果酒及饮料等食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。

本标准检出限：对羟基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；对羟基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；对羟基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；对羟基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。

2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

3 原理试样用乙醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱法分离，二极管或紫外检测器检测，外标法定量。

4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇（色谱纯）。

4.2 乙酸铵（分析纯）。

4.3 20 mmol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54 g乙酸铵（4.2）用水定容至1000 ml，过0.45μm 滤膜。

4.4 无水乙醇（分析纯）。

4.5 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯：99 %以上。

4.6 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准储备溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1 mg的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。

4.7 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准工作溶液：将混合标准溶液用甲醇（4.1）依次稀释成1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的系列标准溶液，使用前配制。

MM_FS_CNG_0362食品对羟基苯甲酸酯类气相色谱法MM_FS_CNG_0362食品中对羟基苯甲酸酯类的测定方法1.适用范围本方法适用于酱油、醋、水果汁及果酱中对羟基苯甲酸酯类的测定。

2.原理概要样品酸化后，对羟基苯甲酸酯类用乙醚提取浓缩后，用具氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

3.主要试剂和仪器.主要试剂乙醚，重蒸；无水乙醇；无水硫酸钠；饱和氯化钠溶液；1g／100mL碳酸氢钠溶液；1∶1盐酸：量取50mL盐酸，用水稀释至100mL；对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准溶液：准确称取对羟基苯甲酸乙酯、丙酯各，溶于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1mg对羟基苯甲酸乙酯、丙酯；对羟基苯甲酸乙酯、丙酯使用溶液：取适量的对羟基苯甲酸乙酯、丙酯标准溶液用无水乙醇分别稀释至每毫升相当于50，100，200，400，600，800μg 的对羟基苯甲酸乙酯、丙酯。

.仪器气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器；KD浓缩器。

4.操作方法.提取净化酱油、醋、果汁:吸取5g预先均匀化的样品于125mL分液漏斗中，加入1mL1∶1盐酸酸化，10mL饱和氯化钠溶液，摇匀，分别以75，50，50mL乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于250mL分液漏斗中，加10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以1g／100mL碳酸氢钠溶液30，30，30mL洗涤三次，弃去水层，用滤纸吸去漏斗颈部水分，塞上脱脂棉，加10g无水硫酸钠于室温放置30min，在KD浓缩器上浓缩近干，用吹氮除去残留溶剂。

用无水乙醇定容至每毫升含1毫克对羟基苯甲酸乙酯、丙酯供气相色谱用。

果酱:称取5g事先均匀化的样品于100mL具塞试管中，加入1mL1∶1盐酸，10mL饱和氯化钠溶液，摇匀，用50，30，30mL乙醚提取三次，每次2min，用吸管转移乙醚至250mL分液漏斗中，以下按上法操作。

GC法测定保健食品中的两种对羟基苯甲酸酯
张翔
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2016(028)011
【摘要】目的建立保健食品中对羟基苯甲酸酯的快速测定分析方法 .方法采用毛细管柱气相色谱法,用FID检测器同时测定对羟基苯甲酸乙酯及丙酯的含量.结果两种对羟基苯甲酸酯在49.6~793.6μg·mL-1(EP)及50.1~801.7μg·mL-1(PP)的范围内线性良好,阴性样品的加标回收率在93.6%~100.7%(EP)与
90.4%~100.6%(PP),RSD<10%,方法的检出限为1.0mg·kg-1(S/N=3).结论本法快速简便、重现性及选择性较好、灵敏度回收率较高,适合保健食品常规检测及监督的需要.
【总页数】3页(P47-49)
【作者】张翔
【作者单位】南京市食品药品监督检验院南京 210038
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3;R917
【相关文献】
1.GC-ECD法测定5种保健食品中六六六和滴滴涕的农药残留 [J], 于桂芳;王宪平;胡军华;李家春;黄文哲;王振中;萧伟
2.毛细管GC法测定氟比洛芬酯原料药中两种溶剂残留量 [J], 郭云程;李雪;钟玲
3.两种GC法测定胶粘剂中卤代烃的方法比较研究 [J], 张惠;冷中成;王强
4.ASE-GC-MS法测定食品接触用塑料及制品中两种非邻苯类增塑剂含量 [J], 周良春;马俊辉;张晓飞;吴纯洪;胡伟;李双琦
5.GC法测定蒙药安神补心六味丸中两种挥发性成分的含量 [J], 新图雅;王徽;美丽;于水;陈红梅;王秀兰
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

水产调味品中对羟基苯甲酸酯的测定方法研究作者：暂无来源：《中国食品》 2018年第12期摘要：对羟基苯甲酸酯(Paraben)，又称为尼泊金酯和对羟基安息香酸酯，是具有酚羟基结构的一类化合物，其具有杀菌、防腐的作用。

近年来，有研究报道对羟基苯甲酸酯类具有潜在的雌激素活性，对羟基苯甲酸酯类物质的安全性有待重新审定，需要加强监控、加强风险评估，制定更科学的使用标准，更好地保护人们的健康。

本文建立了气相色谱法测定水产调味品中对羟基苯甲酸酯的测定方法。

实验过程是：样品经过盐酸酸化，用饱和氯化钠溶液进行分散，再用乙酸乙酯进行萃取，使用分散固相快速净化法净化样品，测定水产调味品中对羟基苯甲酸酯的含量的在5.0mg/L-200mg/L范围线性良好，相关系数在0.9990以上，检出限为0.5mg/L，精密度小于5.0%，用该方法测定耗油、虾油和鱼露中对羟基苯甲酸酯的回收率在80%以上。

一、材料与方法仪器及材料。

气相色谱仪：GC2010Puls（日本岛津公司）；色谱柱：DB-5毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm，美国安捷伦公司)；旋转蒸发仪（德国IKA公司）；电子分析天平（德国Sartorius 公司）；涡旋混合器（德国IKA公司）；超纯水系统（德国Millipore公司）。

对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯标准品纯度均大于99%（德国Dr.Erenstorfer公司）；无水乙醇、乙醚、乙酸乙酯（色谱纯，美国CNW公司）；盐酸、甲醇、乙腈、无水硫酸钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。

仪器条件。

进样器：恒温分流模式，进样量1.0μL，分流比为1:10，温度220℃；色谱柱：载气为氮气(纯度≥ 99.999％)，柱流量为1.08mL/min，升温程序：初始温度100℃，保持2min，然后以20℃/min升至170℃，保持1min，最后以20℃/min升至220℃，保持2min；检测器：氢火焰检测器（FID），温度220℃，氢气流量40mL/min，空气流量400mL/min。

酱腌菜中对羟基苯甲酸酯的测定以水溶液对酱腌菜进行预处理，超声后过滤，并用HPLC法测定处理后的样品溶液中对羟基苯甲酸酯类的含量。

方法加标回收率为95.4%-102.3%，6次测定的RSD（n=6）小于3.98%。

方法操作方便，分析速度快，结果准确。

标签：高效液相色谱；对羟基苯甲酸酯；酱腌菜对羟基苯甲酸酯类具体检验项目有对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯。

国家卫生标准明文对这类添加剂进行限量。

目前，食品中对羟基苯甲酸酯类的检验方法是气相色谱法。

其方法是将样品酸化后用具毒性的溶剂乙醚进行多次萃取，浓缩近干后再用毒性更大的甲醇定容，然后用气相色谱仪测定。

这种方法费时费力，对羟基苯甲酸酯类物质的损耗也较大。

本文采用水溶液直接对样品进行溶解稀释，超声后过滤，然后用HPLC进行测定，取得了满意的结果。

1 实验部分（1）样品与试剂。

①酱腌菜：市售。

②试剂：甲醇（专用试剂）；乙酸胺（优级纯）。

③标准物质：对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯（国家标准物质研究中心）各1.0g。

实验用水为蒸馏水。

（2）仪器及分析条件。

①1100型液相色谱仪（配紫外检测器，美国Agilent 公司）。

②仪器工作条件：色谱柱为迪马C18（200mm×4.5μm）；流动相为甲醇和0.02mol/L乙酸胺混合溶液（V甲醇：V乙酸胺=55：45）；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；波长为286nm；定量环为20μl。

③CQ-250型超声仪（上海船舶电子研究所）。

（3）标准溶液的配制。

取购置的标准物质对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯配制并按逐级稀释的方法配制成标准溶液系列，如表1所示。

（4）样品预处理。

准确称取约20.0000g样品于300mL烧杯中，加入适量水，搅拌均匀经超声仪超声30min，用蒸馏水定容于250mL容量瓶中，静置后上清液经普通滤纸过滤后再用0.45μm微孔滤膜过滤，收集滤液于样品瓶中待测；同时作试剂空白。

2 实验结果及讨论（1）工作曲线。

实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。

对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。

它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。

山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。

对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。

虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。

各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。

不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。

本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。

本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。

一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。

二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。

以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。

X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。

食品中对羟基苯甲酸酯类的测定2009.81. 实验步骤：采用GB/T5009.23—2003的方法测定食品中对羟基苯甲酸乙酯的含量。

1.1 标准系列配制：对羟基苯甲酸乙酯标准溶液（acros ，含量99.%）：用1#天平精密称取0.0513g 对羟基苯甲酸乙酯标准品，加乙醇定容至50ml A 级容量瓶中，摇匀。

该溶液每毫升含甜蜜素1.026毫克。

标准系列：用10ml 分度移液管分别取0.5、1、2、4、6、8ml 对羟基苯甲酸乙酯标准溶液于10ml 容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀。

该标准系列为： 0.0513、0.1026、0.2052、0.4104、0.6156、0.8208 mg/ml 。

1.2样品制备：称取5g 左右试样到100具塞比色管中，加1ml 盐酸（1+1）酸化，加入10ml 饱和氯化钠溶液，摇匀，加入75、50、50ml 乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液于250ml 分液漏斗中，加入10ml 饱和氯化钠溶液洗涤一次，然后加入30、30、30ml 1g/100ml 碳酸氢钠溶液洗涤3次，弃去下层水溶液，将分液漏斗出口处水用滤纸吸干，塞上脱脂棉，加入10g 无水硫酸钠脱水30min 。

将滤液转入150ml 梨形瓶，在40℃水浴上，吹氮浓缩到近干，用5ml 单标移液管加入5ml 乙醇，溶解残渣，分析。

2. 实验条件：使用 PE AutoSystem XL 气相色谱仪进行测定； 检测器：FID ；色谱柱：SE-54 30m ×0.530mm ×0.6μm ； 柱温：130℃（1min ）；→5℃/min →170℃(3min)检测器温度：250℃；进样口温度：220℃。

3. 定量数学模型：1000)/(⨯⨯=mv c kg mg XX ——样品中被测物含量，mg/kg ；c ——由标准曲线计算出的提取液中被测物含量，mg/ml ； v ——提取液定容体积，ml ； m ——称样量，g 。

对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱测定一、实验目的⒈学习高效液相色谱用保留值定性和用归一化法定量的技术。

⒉熟悉高效液相色谱分析操作。

3.掌握用高效液相色谱法测定食品中防腐剂的含量。

二、实验原理高效液相色谱仪是一种色谱分析仪器，主要用于有机化合物的分析，可以对已知80%左右的有机化合物进行分离和分析。

特别适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物以及生物活性物质的分离和分析。

液相色谱仪在医药、食品、农业、生命科学、化工和环保等领域都有广泛的应用。

液相色谱分析方法实质上是一种物理化学分析方法，又称色层法或层析法。

它是利用不同物质在两相（固定相和流动相）中具有不同的分配系数和吸附能力及其他亲和作用性能的差异为分离依据，当混合物中各组分随流动相移动时，在两相中反复进行多次分配，从而使各组分得到分离。

流动相为液体的色谱分析叫做液相色谱分析。

根据分离原理的差异，液相色谱通常分为以下几种类型：液固吸附色谱、液液分配色谱、离子交换色谱和离子对色谱、凝胶色谱。

在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯，它们都是强极性化合物，可采用反相液相色谱进行分析，选用非极性的C-18烷基键合相作固定相，甲醇的水溶液作流动相。

在一定的色谱条件下，酯类各组分的保留值是恒定的，因而在同样条件下，记录纯酯类各组分和未知样品的色谱图，将测得的未知样品的各组分保留时间与已知纯酯类各组分保留时间对照，便可确定未知样品中各组分存在与否。

这种利用纯物质对照定性分析的方法适用于来源已知且组分简单的混合物。

本实验采用归一化法定量。

归一化法适用条件及计算公式与气相色谱法相同： Ci（%）=(fiAi)/(ΣfiAi)在对羟基苯甲酸酯类混合物属同系物，具有相同的生色团和助色团，因此紫外光度检测器测量时，它们的校正因子相同，故上式便可检测为Ci（%）=Ai/ΣAi×100％三、仪器和试剂仪器：高效液相色谱仪LC-20aT试剂：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、甲醇、水（GB/T 6682规定的一级水）、乙酸铵（分析纯）实验条件1 色谱柱：长15cm、内径3mm，装填C-18烷基键合相、颗粒度为10um的固定相。

实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。

对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。

它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。

山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。

对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。

虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。

各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。

不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。

本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。

本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。

一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。

二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。

以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。

X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。