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53《轻工标准与质量》2019年第1期高效液相色谱-串联质谱检测化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素共22种禁用激素朱海佩 张亮 张碧宇（温州市质量技术监督检测院，浙江温州 325000）摘要：建立了化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素类共22种大范围禁用激素的电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱分析方法。
化妆品试样用甲醇超声提取，提取液离心后取上清液加亚铁氰化钾和醋酸锌溶液沉淀大分子杂质，再次离心将上清液以Oasis HLB 固相萃取小柱净化，经Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱（2.1×150mm,2.7μm）反相色谱分离后在多反应监测MRM 模式下进行定性和定量分析。
结果表明，22种激素的检出限为0.1～27.4 μg/kg；该方法样品的平均添加回收率为72.4%～99.7%，相对标准偏差RSD 均小于10%。
关键词：化妆品；激素；电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱分析法中图分类号：O657.63 TQ658 文献标识码：A DOI：10.19541/ki.issn 1004-4108.2019.01.011短期使用添加激素的化妆品可以防止皮肤老化，有除皱、增加皮肤弹性等作用，但长久使用也会导致色素沉积，皮肤萎缩变薄，甚至具有致癌性。
化妆品中激素物质的检验，对于控制化妆品产品质量安全，保障人们身体健康具有重要意义。
目前化妆品中激素的检测方法中，现行有效的国家标准有：《化妆品安全技术规范》，其中仅提供了雌三醇等七种组分的检测法；GB/T 24800.2—2009《化妆品中四十一种糖皮质激素的测定 液相色谱/串联质谱法和薄层层析法》也单是糖皮质激素的检测等。
由于化妆品基质复杂、激素种类繁多，增加了多种不同类别激素净化和检测的难度。
本研究应用电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱仪建立化妆品中糖皮质激素（曲安西龙、曲安奈德、泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、氢化可的松、可的松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松、倍他米松、地塞米松、醋酸地塞米松、丙酸氯倍他索、丙酸倍氯米松）、雌激素（雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚）、雄激素（睾酮、甲基睾丸酮）、孕激素（黄体酮（孕酮））共22种禁用激素的测定分析方法，筛选更优化的前处理方法，实现对各类激素、多组分的快速准确测定。
动物源性食品中糖皮质激素残留检测方法研究糖皮质激素是一类激素类物质，具有抗炎、免疫抑制、抗过敏等作用，在医药领域广泛应用。
然而，长期过量使用糖皮质激素可能导致一系列副作用，因此对于动物源性食品中糖皮质激素的残留水平进行监测具有重要意义。
本文将对动物源性食品中糖皮质激素残留检测方法进行研究，包括目前常用的高效液相色谱法、气相色谱法以及免疫分析法等。
一、高效液相色谱法：高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，其通过将样品溶解于有机溶剂中，然后采用高压泵将溶液通过填充在柱子中的固定相进行分离。
在检测糖皮质激素残留时，可以选择不同的检测波长以及不同的固定相，实现糖皮质激素的快速、准确分离和定量。
同时，该方法简便易行，结果稳定可靠，因此被广泛应用于糖皮质激素残留的检测中。
二、气相色谱法：气相色谱法（GC）是一种将样品中的化合物蒸馏至气态后通过色谱柱分离的技术。
与高效液相色谱法相比，气相色谱法具有分离能力好、分析速度快等优点。
在糖皮质激素残留的检测中，GC通常与质谱联用，能够提高分析的灵敏度和选择性。
然而，气相色谱法对样品的前处理要求较高，需要进行提取、洗脱、洗涤等步骤，且一些溶剂可能与色谱柱相互作用，影响分析结果。
三、免疫分析法：免疫分析法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫法等。
该方法通过将待测样品与抗体结合，形成抗原-抗体复合物，通过测量光学、电化学信号或放射性衰减来定量目标物。
免疫分析法具有灵敏度高、专属性强等优势，且操作简单快速。
然而，免疫法对样品的前处理也较为复杂，同时需要合适的抗体和标记物来实现对糖皮质激素的定量分析。
在实际研究中，通常会综合运用上述方法来进行糖皮质激素残留的检测。
首先，使用样品前处理方法，如萃取、净化等，将样品中的糖皮质激素提取出来。
然后，使用HPLC或GC对提取物进行分离，通过不同的检测波长或质谱联用分析等手段进行定量分析。
最后，为了确保结果的准确性和可靠性，通常会进行多次重复实验，并比较结果。
[作者简介] 吴大南(1964-),女,副主任医师,主要从事化妆品检验和环境卫生工作。
【化学测定方法】高效液相色谱法检测化妆品中6种糖皮质激素吴大南,郑和辉,李 洁(北京市疾病预防控制中心环境卫生室,北京 100013)[摘要] 目的:建立检测化妆品中6种糖皮质激素的分析方法。
方法:本文利用液相色谱带二极管阵列检测器,检测波长240n m,C18色谱柱,流动相:乙腈+水=40+60,测定化妆品中氢化可的松,醋酸波泥松,醋酸氢化可的松,醋酸氟氢可的松,醋酸可的松,醋酸地塞米松。
结果:在化妆品中糖皮质激素的最低检出浓度015μg/g,回归系数r≥019997。
各糖皮质激素添加量为5μg时,氢化可的松,醋酸波泥松,醋酸氢化可的松,氟氢可的松,醋酸可的松,醋酸地塞米松的添加回收率分别为7912%±416%,8315%±311%,8513%±614%,8617%±511%,8515%±317%和8211%±018%;添加量为50μg时,添加回收率分别为8616%±510%,8818%±415%,8913%±417%,9416%±512%,9116%±414%和9017%±415%。
结论:该方法简单,分离效果好,能够满足检测化妆品中6种糖皮质激素的需要。
[关键词] 糖皮质激素;化妆品;液相色谱[中图分类号] TS97411 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2006)03-0309-02 糖皮质激素可抑制纤维细胞增生,减少5-羟色胺形成,因而对皮肤具有一定的嫩白作用[1]。
但长期使用后则会发生皮肤变薄、毛细血管扩张、毛囊萎缩,一旦停用,皮肤就会发红、发痒、出现红斑、丘疹、脱屑等。
在医学上称之为糖皮质激素依赖性皮炎、接触性皮炎或化妆品皮肤病。
因此我国《化妆品卫生规范》[2]规定此类物质为禁用成分。
高效液相色谱测定血清皮质醇郭连兴;马淑清【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】1994(011)003【摘要】高效液相色谱测定血清皮质醇的方法，０．５ｍｌ血清加１５０ｎｇ地塞美松（内标剂）在５５℃孵育１５分钟后用５ｍｌ乙醚提取类固醇。
移有机相于一尖底管、蒸干，残留物用１００μｌ动相（１，２─二氯乙烷、异丙醇、环已烷按６／１１／８３容积混合，每升加冰醋酸０．２ｍｌ）重溶，注２０μｌ于色谱系统。
分析柱为Ｓｈｉｍ─ｐａｃｋＣＬＣ─ＣＮ柱，柱温４０℃，流速２．０ｍｌ／分。
检测器波长２４２ｎｍ，０．００１Ａ满刻度。
皮质醇和内标剂的相对保留时间分别为４．６８和５．１４分。
分析回收率平均在９８．１～１００．０％之间，批内和批间ＣＶ＜４％。
本法在６８．８９～１１０３．５４ｎｍｏｌ／Ｌ之间呈线性，回归方程ｙ＝０．０２４２＋０．００５２ｘ，ｒ＝０．９９９６，最低检出限１３．８ｎｍｏｌ／Ｌ。
１５８名健康成人上午８～９时血清用本法测得皮质醇浓度为１９３．１２土６５．００ｎｍｏｌ／Ｌ（７０．０７＋２３．５６μｌ／Ｌ），男性（ｎ＝８１）平均２１３．６９土６１．３Ｏｎｍｏｌ／Ｌ（７７．３１±２２．２２μｇ／Ｌ）明显高于女性的（ｎ＝７７）１７２．２３±６２．４３ｎｍｏｌ／Ｌ（６２．４６±２２．６３μｇ／Ｌ），Ｐ＜０．００１。
【总页数】5页(P172-176)【作者】郭连兴;马淑清【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R446.112【相关文献】1.脑梗死合并感染患者血清皮质醇含量测定及其与神经功能、体液免疫、细胞免疫的相关性 [J], 翟洁敏;李会琪;何剑波;王海过2.高效液相色谱法测定血清皮质醇 [J], 林连波;郭幼莹3.基于液相色谱-串联质谱平台测定血清皮质醇的实验方法与质量评估 [J], 王菀叶4.高灵敏均相酶免疫法测定血清皮质醇方法建立与性能评价 [J], 吴剑;冯杰;薛辉;虞留明;陆丽华;高艳红;颜光涛5.早产儿血清皮质醇水平测定及临床意义研究 [J], 葛艳辉;包智洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
化妆品中地索奈德等4种糖皮质激素检验方法与风险研究摘要：糖皮质激素（Glucocorticoids,GC）是一类共同拥有环戊烷骈多氢菲结构目核的甾体激素，是机体内极为重要的一类调节分子。
它对机体的发育、生长、代谢以及免疫功能等起着重要调节作用，是机体应激反应最重要的调节激素，也是临床上使用最为广泛而有效的抗炎和免疫抑制剂，具有抗炎、抗毒、抗过敏、抗休克、非特异性抑制免疫及退热作用等多种作用，可以防止和阻止免疫性炎症反应和病理性免疫反应的发生。
关键词：化妆品；糖皮质激素检验1 仪器与材料1.1 仪器Thermo Fisher Scientific Vanquish超高效液相色谱仪、Thermo Fisher Scientific TSQ Endura三重四级杆液质联用仪、涡旋震荡器（江苏康健）、AllegraX-30R冷冻离心机（贝克曼）、XPE204万分之一天平（梅特勒-托利多）、MSA225S-1CE-D1十万分之一天平（赛多利斯）、KQ-800KDE超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司）、Agilent Technologies全自动固相萃取仪、ThermoHyper⁃sil Gold C18色谱柱（100×2.1mm 1.9μm）。
1.2 材料与试剂标准品：地索奈德（Desonide，公司：CATO Research Chemicals Inc，批号：Y0001553，含量：100%）、环索奈德（Ciclesonide，公司：EPRS，批号：Y0001553，含量：100%）、氟尼缩松（Flunisolide，公司：HPC批号：785380，含量：100%）、氯二氟美松（Halometasone，公司：Toronto Research Chemicals INC，批号：11-GUY-35-6，含量：100%）。
试剂：乙腈和乙酸（Thermo Fisher Scientific，分析纯）、氯化钠（重庆川东，分析纯）、亚铁氰化钾和醋酸锌（成都市科龙化工，分析纯）。
分析检测液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中糖皮质激素类药物的残留康宗华1,2，周雨洁1（1.湖南口味王集团有限责任公司，湖南益阳 413000；2. 湖南拓谱检测技术有限公司，湖南益阳 413000）摘 要：目的：利用液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中糖皮质激素类药物的残留。
方法：将组织样品进行碱水解后，用乙酸乙酯提取。
使用高效液相色谱-串联质谱仪分析，采用电喷雾离子源，正离子扫描。
结果：本方法线性关系良好，相关系数均大于0.99，加标回收率为72.95%～99.86%。
结论：该方法可用于动物源性食品中糖皮质激素类药物残留的检测，简单灵敏，准确度高。
关键词：液相色谱-串联质谱法；糖皮质激素类；药物残留Determination of Glucocorticoid Residues in Foods of Animal Origin by Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryKANG Zonghua1,2, ZHOU Yujie1(1.Hunan Kouweiwang Group Co., Ltd., Yiyang 413000, China;2.Hunan Tuopu Inspection Institute, Yiyang 413000, China)Abstract: Objective: To detect the residues of glucocorticoids in animal-derived foods by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method: After alkaline hydrolysis, the tissue samples were extracted with ethyl acetate. Using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis, using electrospray ion source, positive ion scanning. Result: The linear relationship of this method was good, the correlation coefficient was greater than 0.99, and the recovery rate was 72.95%～99.86%. Conclusion: This method can be used for the detection of glucocorticoid drug residues in animal-derived foods, which is simple, sensitive and accurate.Keywords: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; glucocorticoid; drug residues糖皮质激素为类固醇类激素[1]，具有抗炎[2]的作用，常用的糖皮质激素有倍他米松、地塞米松、倍氯米松以及可的松等[3]。
在线净化液相色谱-高分辨质谱法快速测定化妆品中糖皮质激素徐振东; 陈少波; 高玲; 顾娟红; 朱振华【期刊名称】《《香料香精化妆品》》【年(卷),期】2019(000)005【总页数】5页(P38-42)【关键词】在线净化; 高分辨质谱; 化妆品; 糖皮质激素【作者】徐振东; 陈少波; 高玲; 顾娟红; 朱振华【作者单位】苏州出入境检验检疫局江苏苏州 215104; 苏州世标检测技术有限公司江苏苏州 215104; 江苏出入境检验检疫局动植食中心江苏南京 210001【正文语种】中文激素具有使皮肤光滑白嫩、增加皮肤弹性、祛痘除皱等作用，但长期使用会产生大量副作用甚至有致癌的风险[1]。
我国的《化妆品安全技术规范》（2015 版）[2]和欧盟化妆品法规（No.1223/2009）[3]中均明确规定化妆品中不得添加任何激素类药物。
但化妆品，特别是功能化妆品行业滥用激素现象却愈演愈烈，这些原本只能用作药物的成分被非法添加到化妆品中，以期产生特殊的功效。
消费者长期使用这类化妆品，其中激素类药物会通过经皮吸收进入人体，往往会破坏使用者体内激素平衡从而引发多种疾病，对消费者的身体健康造成严重影响，也会影响化妆品产业的健康发展。
化妆品中激素的分析方法应用较多的是液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）[4-8]，虽然LC-MS/MS 具有高选择性、高灵敏度的特点，但样品前处理复杂繁琐，如GB/T24800.2—2009《化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法》[4]样品前处理方法中，样品经提取后，需要经过SPE 固相萃取柱的净化富集，包含活化、上样、淋洗、洗脱、氮吹、复溶等多个步骤，所需工作量较大，且成本较高。
在线固相萃取技术在食品中农药残留[9]和兽药残留[10]检测方面已经有一定的应用，本文采用在线净化液相色谱与四极杆轨道阱质谱联用技术分析化妆品中41 种糖皮质激素，方法简单、快速、准确。
高效液相色谱法测定皮质激素含量【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定醋酸肤轻松软膏的含量，研究醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素的分离情况。
方法：样品经甲醇溶解后，用diamonsil c18柱分析，结果：五种皮质激素能较好地分离，达到了一种方法可同时分离五种激素的目的。
结论：采用高效液相色谱法测定醋酸氟轻松软膏的含量使操作更方便，结果更准确。
【关键词】五种皮质激素；高效液相色谱；含量测定
【中图分类号】r927.1 【文献标识码】a 文章编号：1004-7484（2012）-04-0610-01
醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素软膏为治疗皮肤病的常用药。
国内一般采用紫外－可见分光光度法分别测定吸光度，因为有基质干扰，含量偏高，且操作复杂，测定结果重现性差。
其他方法收载的醋酸肤轻松软膏含量测定方法均不够理想，本人经过试验，采用高效液相色谱法较好，做了回收率试验，确立样品的含量测定。
1.仪器、试剂及样品
岛津uv-2100型高效液相色谱仪，紫外检测器，检测波长：240nm，柱温：30℃；填料用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，diamonsil c185u200×4.6mm柱；甲醇、乙醚为色谱纯规格；醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素对照品及内标物醋酸地塞米松、炔诺酮均符合规定，内标物甲基
睾丸素及黄体酮为中国药品生物制品检定所提供的标准品；供试品均为市售品。
2.分析条件确定
2.1 取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素的甲醇溶液（浓度为50ug／ml），进样量为10ul，流速为1.0ml／min，以不同比例的甲醇－水为流动相，考察各自的保留时间，计算容量因子（k）。
通过实验结果，表明分离醋酸肤轻松、醋酸去炎松和醋酸氟氢可的松这三种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为60～70%，而分离丙酸倍氯美松及氯氟舒松这两种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为75%左右为好，这样它们的容量因子均能在2～8之间。
2.2 有文献报导在反相hplc分离甾体激素时，在流动相中加少量乙醚作为有机改性剂，可提高化合物的分离灵敏度。
实验证明在流动相中加少量乙醚能使醋酸肤轻松、醋酸去炎松及内标物的保留时间提前，峰形尖锐并提高了分离度。
2.3 峰面积与浓度的线性关。
精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松这五种皮质激素的对照品与内标物适量，用甲醇制备对照品溶液、内标溶液与测定溶液，按选定的色谱条件进样10ul，从所得的色谱图，以被测皮质激素对内标物的峰面积比为纵坐标，以相应的浓度为横坐标作校正曲线图谱，均得到能过零点的直线，其数据经直线回归，线性关系及精度较好。
2.3.1 对照品溶液的制备。
精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松对照品25mg，置200ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。
2.3.2 内标溶液的制备。
精密称取内标物炔诺酮10mg、醋酸地塞米松30mg、甲基睾丸素12.5mg、黄体酮15mg各置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。
2.3.3 测定溶液。
精密量取5种对照品溶液各1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置10ml量瓶中，各分别加内标溶液１ml（醋酸肤轻松、醋酸去炎松加炔诺酮内标溶液，醋酸氟氢可的松加醋酸地塞米松内标溶液，丙酸倍氯美松加甲基睾丸素内标溶液，氯氟舒松加黄体酮内标溶液）加甲醇稀释至刻度。
3.回收率测定
称取按处方制得的空白基质5g，精密加对照品溶液10ml，搅匀，加甲醇适量，置80℃水浴中加热2分钟，使软膏熔融，精密加内标溶液5ml，放冷至室温后，用甲醇稀释使成50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时，取出后迅速滤过，量取续滤液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
按内标法以峰面积计算，色谱条件同上面所述。
根据以上同体积对照品溶液在相同色谱条件下测得的校正因子计算回
收率。
5种对照品所得回收率分别为101.8%、100.4%、99.89%、101.0%、99.82%。
4.重复性试验
取市售各种软膏，精密称取约相当于皮质激系1.25mg，置50ml
量瓶中，加甲醇约30ml，置80℃水浴中加热2分钟，操作及色谱条件同上。
平行操作5份样品，rsd值为1.2%。
5.样品的含量测定
样品操作及测定方法同重复性试验，另按照提取法测定样品。
其结果分别为：醋酸肤轻松：hplc法：95.37%，提取法101.65%；醋酸去炎松：hplc法：96.00%，提取法97.10%；醋酸氟氢可的松：hplc法：99.68%，提取法100.60%；丙酸倍氯美松：hplc法：98.02%，提取法100.50%；氯氟舒松：hplc法：98.25%，提取法99.92%。
6.结果与讨论
本文采用高效液相色谱法测定醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素软膏的含量，经反复试验，本法与提取法所得结果基本一致，且操作简单，所用试剂方便易得，应用hplc法可有效分离这五种成分，所以认为此法较好。
参考文献
［1］《药物分析杂志》，1982.
［2］药学学报，1983.
［3］《中草药》，1985.。
