ApoE小鼠动脉粥样硬化模型的建立_图文.

ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型构建梁璐;洪瑞云;周敏;张毅;邹海林;钟一鸣;王烈峰【摘要】目的:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)雄鼠,给予高脂饲料喂养,构建动脉粥样硬化模型,观察血脂变化及主动脉全长动脉粥样硬化斑块形成.方法:选取饲养于SPF屏障环境内8周龄的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)雄鼠18只,随机分成对照组(9只)和实验组(9只).实验前对两组雄鼠进行鼠尾基因型鉴定,并随机抽取6只,测得8周龄对照组小鼠血脂.实验组给予高脂饲料(脂肪15%、胆固醇1.25%、0.5%胆酸盐);对照组予普通饲料,饮水不限.分别在喂养0周、8周时眼眶采血,测血脂.两组小鼠均在饲养8周处死,处死前12 h禁食不禁水,取主动脉全长,油红O染色,观察主动脉病理变化.成功建立AS模型后,将小鼠分为AS+生理盐水(NS)组及AS+辛伐他汀(ST)组(各9只),分别在给药4周及8周时眼眶取血,测血清中血脂浓度变化.结果:对小鼠鼠尾基因型鉴定确定ApoE基因敲除雄鼠均为阳性纯合子小鼠,且Neo cassette已被去除.通过对ApoE基因敲除雄鼠实验组及对照组血脂比较,表现为TG、TC和LDL-C显著升高(P<0.05),HDI-C(P<0.05)显著降低;实验组高脂饲料喂养8周后,ApoE基因敲除雄鼠主动脉形成明显的AS斑块,对照组则未见明显AS斑块.AS小鼠给予NS和ST后,检测表明ST给药时间增长,TC、TG、LDL-C均有降低趋势.其中,TC及LDL-C给药ST 8周后有显著性差异(P<0.05),小鼠主动脉油红O染色显示斑块脂质沉积较NS组有所减少,面积减小,凸向管腔程度也明显降低(即狭窄程度降低).结论:ApoE基因敲除雄鼠高脂饲料喂养8周后,血脂明显异常,且形成明显的AS斑块,AS模型成功构建;AS小鼠给予ST(8周)则血脂浓度明显降低,且主动脉油红染色显示斑块明显少于对照组,表明该模型可用于抗动脉粥样硬化药物药效检测.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】7页(P337-342,364)【关键词】动脉粥样硬化;载脂蛋白E基因敲除小鼠;疾病模型;动物【作者】梁璐;洪瑞云;周敏;张毅;邹海林;钟一鸣;王烈峰【作者单位】赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院,江西赣州 341000;赣南医学院基础医学院生物技术教研室,江西赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】R-332动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是一组称为动脉硬化的血管病中常见且最重要的一种，AS主要累及体循环系统的大动脉和中动脉。

动脉粥样硬化（LDLR）小鼠模型介绍
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种复杂的慢性炎症疾病，包括冠状动脉疾病、心肌梗死、多种亚型脑卒中、外周血管疾病和主动脉瘤，主要特征是动脉壁上斑块积聚。

基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型是目前较为认可的探讨动脉粥样硬化发病机制及寻找新药物靶点的关键工具，也应用于潜在抗动脉粥样硬化药物的药理和毒理研究。

载脂蛋白E(ApoE)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和B类Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)等基因的表达促进机体脂质、胆固醇和低密度脂蛋白等转运和代谢，维持血管正常功能，敲除这些基因会引起脂质转运及代谢紊乱从而诱发动脉粥样硬化及并发症的发生发展。

LDLR是介导胆固醇进入细胞的主要受体，ApoB 100作为 LDL主要的载脂蛋白，在高脂肪饲料喂养的动物中与富含甘油三酯的VLDL浓度呈正相关。

LDLR被敲除或沉默影响胆固醇的转运，破坏细胞内胆固醇平衡，造成胆固醇聚积在动脉壁，诱发AS。

LDLR基因敲除(LDLR -/-)小鼠AS模型具有在人类家族性高胆固醇血症中观察到主动脉瓣和主动脉根部的病变特征，是目前在AS研究领域中应用最多的基因工程动物模型之一。

LDLR基因突变也是当前研究的一个热点，目前至少已发现180种LDLR基因突变型，一些研究通过构建LDLR基因突变小鼠来研究基因突变导致的动脉粥样硬化发病机制。

[收稿日期]㊀2020-06-28[修回日期]㊀2020-09-15[基金项目]㊀国家自然科学基金项目(81670134);江苏省自然科学基金项目(SBK2020021780)[作者简介]㊀吴凡,硕士,研究方向为动脉粥样硬化,E-mail 为wufan9547@㊂通信作者唐朝君,博士,副研究员,硕士研究生导师,研究方向为血管疾病机制研究与转化,E-mail 为zjtang@㊂[文章编号]㊀1007-3949(2021)29-07-0579-06㊃实验研究㊃新型小鼠动脉粥样硬化消退模型的构建吴凡1,盛玉兰2,梁羽3,唐朝君2,4,5(1.苏州大学医学部剑桥-苏大基因组资源中心,2.苏州大学唐仲英血液学研究中心,3.苏州大学卫生与环境技术研究所,4.苏州市血栓与血管生物学重点实验室,5.江苏省血液学协同创新中心,江苏省苏州市215123)[关键词]㊀动脉粥样硬化消退;㊀血液扰动流;㊀动物模型;㊀部分颈动脉结扎[摘㊀要]㊀目的㊀动脉粥样硬化通常被认为是一种不断发展的病变,但斑块的消退提示动脉粥样硬化病变存在逆转的可能,因此建立一种高效且操作方便的小鼠动脉粥样硬化斑块消退模型对于阐明斑块消退的机制具有重要意义㊂方法㊀在ApoE -/-模型鼠中,首先进行三种类型的颈动脉结扎,诱导不同类型的血流形成颈动脉斑块㊂为了建立斑块消退模型,利用活结部分结扎小鼠左颈动脉分支造成扰动流,高脂饮食喂食2周诱导斑块形成后,打开活结,并恢复正常饮食㊂颈动脉血流超声检测追踪由结扎或斑块引起的血流变化;苏丹Ⅳ染色评估动脉粥样硬化病变区域;免疫荧光染色评估巨噬细胞浸润情况㊂结果㊀颈动脉部分结扎高脂饮食喂养2周后,扰动流模型诱导的动脉粥样硬化斑块面积最大㊂造模小鼠打开活结2周后,颈动脉血流恢复接近正常值;且可显著减少动脉粥样硬化斑块大小,同时斑块中巨噬细胞含量和血管腔内斑块面积也明显减少㊂结论㊀基于颈动脉结扎手术的新型小鼠动脉粥样硬化消退模型成功建立,利用该模型将帮助理解动脉粥样硬化消退的潜在机制㊂[中图分类号]㊀R363;R5[文献标识码]㊀AThe establishment of a novel model of atherosclerosis regression in ApoE -/-miceWU Fan 1,SHENG Yulan 2,LIANG Yu 3,TANG Chaojun 2,4,5(1.CAM-SU Genomic Resource Center ,2.Cyrus Tang Hematology Center ,3.Sanitation &Environment Technology Institute ,4.Suzhou Key Laboratory of Thrombosis and Vascular Biology ,5.Collaborative Innovation Center of Hematology of Jiangsu Province ,Soochow University ,Suzhou ,Jiangsu 215123,China )[KEY WORDS ]㊀atherosclerosis regression;㊀disturbed blood flow;㊀animal model;㊀partial carotid ligation[ABSTRACT ]㊀㊀Aim ㊀Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease,but the regression of plaques suggests the possibility of reversal of atherosclerotic disease.㊀Thus,the establishment of a model of atherosclerosis regression in mice is of great significance for elucidating the mechanism of plaque regression.㊀㊀Methods ㊀In ApoE -/-mice,three types of carotid ligation were performed to induce different types of blood flow.㊀To establish the regression model,partial carotid ligation with a slipknot was firstly used to induce disturbed flow.㊀After feeding on a high-fat diet for 2weeks,the slipknot was removed,and followed by a chow diet for two weeks.㊀The ultrasonic testing was performed to monitor the blood flow in real time caused afterligation or plaque formation;Sudan Ⅳstaining was used to assess atherosclerotic lesions;immuno-fluorescence staining with anti MOMA2was applied to examine monocyte-macrophage infiltration.㊀㊀Results ㊀Three types of ligation induced different types of blood flow.㊀The disturbed flow induced the largest atherosclerotic plaque area in ApoE -/-mice.㊀After restore of blood flow combined with chow diet,atherosclerotic plaques can be significantly reducedand reversed,and the macrophage infiltration also significantly decreased.㊀㊀Conclusion ㊀A novel atherosclerosis re-gression model in mice based on carotid ligation surgery was successfully constructed,which will help to understand the un-derlying mechanism of atherosclerosis regression.㊀㊀动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一种好发于大㊁中等动脉以脂质蓄积和炎症为特征的血管壁慢性病变,其病变过程包括血管炎症㊁内皮损伤㊁血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)表型转化和迁移增殖㊁泡沫细胞形成㊁细胞死亡㊁脂质和胆固醇蓄积以及血栓形成等[1]㊂临床上通常利用各种抗动脉粥样硬化药物抑制斑块进展,但是很少有药物表现出显著诱导斑块消退的作用㊂据报道某些新一代他汀类药物可减少啮齿类动物的颈动脉斑块大小,但在人体中促成斑块减小的有效剂量限制了其临床应用[2-5]㊂尽管到目前为止进展有限,但人们仍在努力寻找可以逆转动脉粥样硬化病变的新型药物[2,6]㊂先前的研究表明,巨噬细胞和单核细胞浸润至动脉内皮下在动脉粥样硬化的发病机制和进程中起着至关重要的作用[7]㊂已知高脂血症和扰动流会促进白细胞向病灶处募集和迁移,从而导致内皮炎症促进动脉粥样硬化斑块发生[8]㊂相关遗传模型的建立如载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)和低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因敲除小鼠揭示了该过程的机制,这为开发抗动脉粥样硬化药物提供了有价值的工具[9-12]㊂但目前已报道的斑块消退动物模型较少,Reis等[9]利用ApoE-/-小鼠主动脉段移植模型来研究动脉粥样硬化病变的消退㊂另有报道利用遗传手段构建了用于斑块消退的模型,一种可逆转的高脂血症小鼠品系(LDLR-/-ApoB100/100Mttpfl/flMx1Cre+/+),可通过失活微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTTP)抑制小鼠高胆固醇血症的发生[13]㊂此外,给ApoE-/-小鼠注射ApoA1[14]或miR-33抗体[15-16],可以迅速降低小鼠血液胆固醇水平㊂总之,这三个动脉粥样硬化斑块消退模型都是基于降低低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平的㊂与胆固醇相似,大量研究表明血液扰动流(dis-turbed flow,Db-flow)在动脉粥样硬化中具有促斑块形成的作用,而稳定的层流可保护前期内皮免受动脉粥样硬化刺激㊂尽管如此,层流对动脉粥样硬化消退的贡献仍有待阐明㊂为了确定层流是否可以调节动脉粥样硬化斑块的消退,本研究根据Nam 等[17]先前报道的小鼠部分颈动脉结扎(partial carotid ligation,PCL)模型提出了一种手术诱导的小鼠颈动脉斑块消退模型㊂该模型利用ApoE-/-小鼠PCL手术后高脂饮食(high fat diet,HFD)诱导斑块形成,通过开结恢复颈动脉血流同时停止HFD而促使斑块消退㊂该斑块消退模型具备操作简易和观察期短的特点,有望成为未来心血管研究的有用工具㊂1㊀材料和方法1.1㊀实验动物野生型C57BL/6J小鼠和ApoE-/-(C57BL/6J 背景)小鼠购自南京大学模式动物研究中心㊂动脉粥样硬化消退模型中,小鼠喂食正常的食物8周成年后进行颈动脉结扎手术,之后改用含0.15%胆固醇和21%脂肪的高脂饮食喂养㊂将所有动物饲养在SPF级动物房条件下,保持恒温24ħ,湿度40%~70%和光照周期为12/12h的昼夜节律,并自由获取食物和水㊂苏州大学动物实验许可证为SYXK(苏)2017-0043,所有实验操作符合苏州大学动物使用指南㊂1.2㊀颈动脉结扎模型构建气体麻醉系统麻醉小鼠,剪开小鼠颈部皮肤暴露颈动脉,利用10-0规格医用结扎线进行颈动脉分支结扎手术㊂颈动脉结扎小鼠颈外动脉(external carotid artery,ECA)和甲状腺上动脉(superior thyroid artery,STA)两个分支构建缓速流模型(decreased flow,De-flow)(图1A)㊂扰动流模型(disturbed flow, Db-flow)参照Nam等[17]所述,结扎小鼠左颈动脉(left carotid artery,LCA)的颈外动脉㊁颈内动脉(in-ternal carotid artery,ICA)和枕动脉(occipital artery, OA),而保留甲状腺上动脉完整(图1B)㊂通过结扎颈动脉中的所有分支建立全扎模型(blocked flow, Bl-flow)模型(图1C)㊂右颈动脉(right carotid artery,RCA)作为假手术对照㊂进行颈动脉超声检查以检测是否成功构建模型,结束后将小鼠置于加热垫苏醒㊂1.3㊀En-face染色采用0.1%苏丹Ⅳ(S4261,Sigma-Aldrich)染液对颈动脉的动脉粥样硬化斑块进行染色㊂颈动脉固定后,70%乙醇中浸泡2min后放入0.1%苏丹Ⅳ中染色30min或过夜,用80%乙醇洗涤1min㊂然后将样品浸于PBS中,沿中线纵向切开,展平后用毛细针固定在黑石蜡盘中,体视显微镜(Olympus SZX16)进行图像采集㊂1.4㊀免疫荧光染色及定量分析组织固定后蔗糖脱水,OCT包埋及冰冻切片㊂使用大鼠抗小鼠MOMA-2(anti-monocyte/macrophage, MOMA-2)抗体(ab33451,Abcam)鉴别单核/巨噬细胞,DAPI(C1002,Beyotime)定位细胞核㊂荧光偶联的山羊抗大鼠二抗(ab150167,Abcam)染色单核/巨噬细胞㊂使用激光共聚焦显微镜拍照,通过FV10-ASW软件进行图像分析㊂根据荧光染色切片结果,血管斑块横截面积占比(%)=1-(血管残余内腔面积/内弹力板管腔面积)㊂1.5㊀统计学分析所有数据均至少有3次以上重复,每组数据均至少有3个样本㊂数据统计以xʃs表示㊂两组数据之间比较用Students t检验进行分析,多组数据分析使用单因素方差分析,数据用GraphPad Prism软件进行统计,当P<0.05被认为差异有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀颈动脉结扎方式的改变造成不同的血流动力学改变血流动力学影响动脉粥样硬化的发生发展过程,2009年Nam等[17]成功利用部分颈动脉结扎(PCL)手术构建了扰动流诱导的动脉粥样硬化小鼠模型,但改变结扎方式造成的血流动力学改变和动脉粥样硬化斑块形成还不清楚㊂首先,结扎左颈动脉的两个分支导致血流减少构建缓速流模型(De-flow),超声血流频普显示与假手术组右颈动脉血流无差异,2周后血流减缓但相较于右颈动脉血流流速无明显差异(图1A)㊂结扎左颈动脉的三个分支导致血流紊乱构建扰动流模型(Db-flow),恢复2周后左颈动脉血流频普呈多峰形态,收缩期迅速达高峰,上升陡直,舒张期下降亦快,相比右颈动脉血流明显减缓并且出现逆向流,相较于右颈动脉血流减少67.5%(图1B)㊂全扎模型(Bl-flow)结扎左颈动脉全部分支,血流超声波形呈平直单峰型,峰值低,频带窄,相较于右颈动脉血流减少72.2%(图1C)㊂图1.PCL引起的不同血流类型导致血流速度下降(nȡ4)A为缓速流模型(De-flow)和对应的血流超声图像及统计数据;B为扰动流模型(Db-flow)和对应的血流超声图像及统计数据;C为全扎模型(Bl-flow)和对应的血流超声图像及统计数据㊂Figure1.PCL induced the decline of velocity of blood flow(nȡ4)2.2㊀扰动流模型促进ApoE -/-小鼠颈动脉斑块形成为进一步探究血流变化对高脂饮食喂养小鼠斑块形成的影响,三种血流模型在手术后进行高脂饮食喂养2周,所有小鼠安乐死并分离出颈动脉㊂苏丹Ⅳ染色可见所有小鼠均形成颈动脉粥样斑块;定量结果表明Db-flow 组斑块面积较其他两组更大,Db-flow 组斑块面积较De-flow 组增加65%,与Bl-flow 组相比增加88%(图2)㊂结果表明低速且振荡的扰动流可加重ApoE -/-小鼠高脂饮食诱导的斑块形成㊂图2.Db-flow 诱导ApoE -/-小鼠形成的斑块面积最大(n ȡ3)A 为苏丹Ⅳ染色观察ApoE -/-小鼠颈动脉的腔内动脉粥样硬化斑块;B 为三种模型小鼠染色斑块面积占左颈动脉总面积大小的统计图㊂Figure 2.Db-flow induced the largest plaque size in ApoE -/-mice (n ȡ3)2.3㊀基于扰动流模型的动脉粥样硬化消退模型建立小鼠动脉粥样硬化消退模型设计如图3A 所示,对照组喂食高脂饲料4周,斑块消退组在Db-flow 手术2周后喂食高脂饲料2周,之后释放左颈动脉的活结以恢复颈动脉血流,转为正常饲料喂养㊂高分辨率小动物超声监测部分颈动脉结扎手术前后的血流(红色曲线表示PCL 之后和活结释放之前的血流速度,蓝色曲线表示活结释放后的流速),结果显示解除部分颈动脉结扎(release partial carotid ligation,rPCL)后颈动脉血液流速增加,2周后血流速度恢复至原始流速的66%(图3B)㊂图3.动脉粥样硬化消退模型的构建(n ȡ8)A 为小鼠斑块消退模型的示意图,对照组为小鼠部分颈动脉结扎后高脂饮食喂养4周,消退组为在部分颈动脉结扎手术后高脂饮食喂养2周后解除结扎即rPCL,之后采用正常饮食喂养2周㊂B 为活结释放后,利用高分辨率小动物超声仪记录颈动脉血流速度㊂Figure 3.The construction of a model of atherosclerosis regression (n ȡ8)2.4㊀消退模型小鼠颈动脉斑块形成减少为检测血流恢复是否促成斑块消退,将ApoE -/-小鼠分为三组:PCL 2周组㊁PCL 4周组和rPCL 组㊂苏丹Ⅳ染色结果显示rPCL 组的斑块大小与PCL 后喂食高脂饮食4周组小鼠相比明显减少23%,而与PCL 后喂食高脂饮食2周组小鼠斑块总面积差异无显著性(图4A 和4B)㊂进而通过免疫荧光染色检测了颈动脉管腔内斑块区域的横截面积,结果发现与PCL 2周组和PCL 4周组相比,rPCL 组血管腔内斑块面积分别减少26%和33%(图4C 和图4D)㊂单核/巨噬细胞的积累对动脉粥样硬化斑块的进展至关重要㊂进一步通过单核/巨噬细胞抗体MOMA-2对LCA 斑块进行染色以定量巨噬细胞,结果显示,与PCL 2周组和PCL4周组相比,rPCL 组中观察到MOMA-2+单核/巨噬细胞显著下降(图4C 和图4E)㊂斑块巨噬细胞含量和斑块横截面积下降表明血流和饮食的恢复促进了动脉粥样硬化斑块的消退㊂图4.ApoE -/-小鼠的血流和饮食恢复减少动脉粥样硬化斑块形成A 为PCL 手术结合高脂喂食2周㊁4周和rPCL 组小鼠的颈动脉斑块苏丹Ⅳ染色㊂B 为LCA 中的斑块占LCA 总面积的占比统计图(n ȡ4)㊂C 为左颈动脉腔内斑块MOMA-2染色(红色);L 为管腔㊂D 为3~6个切片样品定量斑块面积相对于管腔面积的占比(n ȡ3)㊂E 为3~6个切片样品定量MOMA-2荧光面积相对于斑块总面积占比(n ȡ3)㊂Figure 4.Restore of blood flow and diet decreased the atherosclerotic plaque formation3㊀讨㊀论高脂血症是引起动脉粥样硬化斑块发生发展的必要因素[18]㊂当血浆LDLC 浓度降低,HDL 胆固醇逆向转运功能增强时,动脉粥样硬化斑块消退效果最佳㊂降脂治疗也是目前临床治疗消退斑块努力的方向[19]㊂为探索动脉粥样硬化的发生发展机制,广泛应用的动物模型包括ApoE 和LDLR 基因敲除小鼠具有非常重要的作用[2]㊂然而,关于斑块消退的研究遇到了相当大的阻力,现有的斑块消退动物模型难以得到广泛应用㊂因此,仍然需要更多可以应用于研究动脉粥样硬化消退的新方法和模型㊂在我们的研究中,基于ApoE -/-小鼠的动脉粥样硬化消退模型利用部分颈动脉结扎手术在短期诱导动脉粥样硬化斑块,恢复血流和正常饮食后即可促进动脉粥样硬化斑块消退㊂2018年Mueller 等[20]报道低密度脂蛋白受体相关蛋白1(low-density lipo-protein receptor-related protein 1,LRP1)敲除能够加速动脉粥样硬化斑块消退㊂因此,利用本研究的斑块消退模型结合降脂或者LRP1阻断抗体结合或能在促进动脉粥样硬化斑块消退方面取得更显著的效果㊂此外,在将来的研究中,如何在同一实验动物个体内实现实时精确定量追踪斑块的消退也是该领域需要重点攻克的难点㊂除了已知的动脉粥样硬化的危险因素(包括高脂血症㊁高血压或糖尿病)导致内皮功能障碍以外[21-23],血液扰动流也被认为是诱导动脉粥样硬化斑块发生的重要因素㊂已知血液扰动流主要存在于血管弯曲和分岔处,血液剪切应力较低且紊乱,抑制内皮细胞一氧化氮合酶产生,上调内皮炎症因子表达,促进动脉粥样硬化的发生㊂相反,稳定的层流起到动脉粥样硬化保护作用[8,24],因此剪切应力在动脉粥样硬化的发病机制中起重要作用㊂本研究对比不同血流速度变化对动脉粥样硬化斑块形成的影响,与之一致的是,发现只有血流低速且振荡才能导致更加严重的动脉粥样硬化病变,而层流则发挥保护血管功能的作用㊂鉴于此,PCL模型经过改进后成功构建颈动脉斑块消退小鼠模型㊂与已有研究报道的消退模型相比,该模型技术要求更低,更重要的是该模型可以使动脉粥样硬化斑块在1个月内开始消退,为研究动脉粥样硬化消退的机制和介入研究提供了有效的途径㊂基于PCL的动脉粥样硬化消退模型可应用于研究基因敲除或转基因小鼠研究疾病进展与机制㊂通过与最先进的彩色多普勒超声结合,该模型有望增进对动脉粥样硬化中血液动力学调节作用的理解,参与相关药物的研发与创新㊂该模型导致斑块消退的机制如何,是否与血管细胞和血液细胞的炎性反应相关,需要进一步的实验探讨㊂综上,本研究中紊乱的血液扰动流在动脉粥样硬化斑块的发生和进展中起着至关重要的作用㊂因此,本研究建立了一种基于扰动流诱发动脉粥样硬化的新型消退模型㊂该模型具有更低的介入性和较低的技术要求,并且可以短期内促进动脉粥样硬化斑块消退,将为动脉粥样硬化的机制研究提供新的手段㊂[参考文献][1]赵战芝,姜志胜.我国动脉粥样硬化基础研究几个热点领域的新进展[J].中国动脉硬化杂志,2019,27(8):645-654. 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西格列汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变影响的实验研究的开题报告一、课题背景动脉粥样硬化是一种常见的心血管疾病，其特征表现为动脉壁内有脂质沉积和血管壁增厚。

目前，大多数药物治疗的靶点都是调节血脂水平，例如他汀类药物可以降低胆固醇水平，从而减少动脉粥样硬化的病变。

然而，一些患者依然存在难以控制的高胆固醇水平和血管病变。

ApoE（载脂蛋白E）缺陷是导致动脉硬化的关键因素之一。

ApoE-/-小鼠是一种广泛应用于研究动脉粥样硬化模型的动物实验模型。

这种小鼠没有ApoE蛋白，从而导致胆固醇在体内无法正常代谢，因此易患上动脉粥样硬化。

西格列汀是一种治疗2型糖尿病的口服药物，其作用机制是通过抑制葡萄糖的途径，降低血糖水平。

同时，西格列汀还具有抗炎和抗氧化的作用，可以调节血管内皮细胞的功能，防止动脉粥样硬化病变。

因此，本研究旨在探究西格列汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的作用及其机制。

二、研究内容1. 构建动脉粥样硬化模型：选用ApoE-/-小鼠，通过高脂饮食的喂养来构建动脉粥样硬化模型。

2. 药物治疗：选用西格列汀进行治疗，将小鼠随机分为治疗组和对照组，治疗组口服西格列汀，对照组口服生理盐水。

3. 检测指标：采用组织学和分子生物学方法，检测小鼠动脉粥样硬化病变程度和相关分子机制变化。

其中包括HE染色和Oil Red O染色法定量测量动脉斑块的大小和数量；ELISA法检测炎性因子、氧化应激指标和脂质代谢指标的变化；Western Blot法检测相关信号通路的蛋白表达变化。

三、研究意义本研究将探究西格列汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的作用及其机制，可以为临床治疗提供新的思路和理论基础，同时对理解动脉粥样硬化的病理生理机制具有重要意义。

ApoE--（载脂蛋白E敲除）小鼠构建技术原理
ApoE-/-小鼠在正常饮食下也可产生复杂的血管病变，主要发生在主动脉根、头臂动脉和其他分支，以及颈动脉和肺动脉，并且这些病变与人As病变具有可比性。

普通饲料喂养，小鼠在8-10周龄时开始出现泡沫细胞病变，15周龄时出现中间病变大量平滑肌细胞向外移行，超过20周龄时，在主动脉根部可以形成明显的由平滑肌细胞、细胞外基质、纤维帽组成的纤维斑块。

而高脂高胆固醇饲养的小鼠会加速As病变的进程，促使小鼠产生更高级的病变，血管内壁胆醇结晶、坏死中心和钙化明显。

ApoE-/-小鼠也存在一些缺陷，人类As病变过程中最为关键的蛋白是LDL，而ApoE-/-小鼠血浆胆固醇主要受脂蛋白残粒运载并不是LDL，另外，ApoE蛋白同时还有其它功能，包括影响免疫功能、巨噬细胞生理和脂肪组织生理功能，每项功能都对动脉粥样硬化有影响，使得分析其具体机制变的复杂和困难。

乳酸杆菌对ApoE小鼠动脉粥样硬化形成的影响及机制研究一、内容简述本研究旨在探讨乳酸杆菌（Lactobacillus）对ApoE基因敲除（ApoE）小鼠动脉粥样硬化（AS）形成的影响及其作用机制。

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，是心脑血管疾病的主要病理基础。

乳酸杆菌作为一种益生菌，在调节肠道菌群平衡、抑制炎症反应等方面具有显著效果。

本研究假设乳酸杆菌通过改善肠道菌群平衡、降低炎症因子表达、促进血管内皮细胞修复等多方面途径，发挥对抗ApoE小鼠动脉粥样硬化的作用。

为了验证这一假设，本研究将通过构建乳酸杆菌干预的ApoE小鼠模型，从多个角度分析乳酸杆菌对动脉粥样硬化的影响，并探讨其可能的作用机制。

1. 动脉粥样硬化（AS）的严重性和普遍性动脉粥样硬化是一种全球性的疾病，影响着各年龄段的人群。

它是心血管疾病的主要病因，可能导致心肌梗死、中风等严重的健康问题。

动脉粥样硬化的严重性在于其可导致血管壁变厚、血管腔变窄，进而影响血液流动和氧气供应。

这种狭窄和硬化还可能引发炎症反应、血栓形成等病理过程，从而导致心脏病发作或中风。

在全球范围内，动脉粥样硬化的发病率呈现出上升趋势。

这可能与日益不利的生活环境和遗传因素有关。

不健康的饮食习惯、缺乏体育锻炼、吸烟和饮酒等不良生活习惯都可能增加患动脉粥样硬化的风险。

随着人口老龄化和老龄化程度的加深，动脉粥样硬化的患者数量也在不断增加。

动脉粥样硬化的普遍性还体现在其广泛的影响范围。

它不仅影响心脏血管，还可能影响到大脑、肾脏、肢体等器官的血管。

动脉粥样硬化是一个需要全球共同关注和努力解决的公共卫生问题。

通过研究和了解动脉粥样硬化的发病机制和影响因素，我们可以更好地预防和控制这种疾病，保护人们的健康。

2. 乳酸杆菌在食品和人体中的地位乳酸杆菌（Lactic Acid Bacteria, Lactobacillus）作为一种益生菌，在食品和人体中具有重要地位。

它们是公认的安全级微生物，广泛存在于发酵食品、饮料以及人类的肠道中。

网络出版时间：２０２３－１１－３０１６：１３：５６　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３１１３０．１３１９．０１８卡维地洛调节ＡｐｏＥ－／－小鼠肝脏ＡＣＡＤ１０、ｍＴＯＲ抗动脉粥样硬化王　鹏，袁　瑶，张海港，刘　雅（陆军军医大学药学与检验医学系药理学教研室，重庆　４０００３８）收稿日期：２０２３－０７－２０，修回日期：２０２３－０９－２７基金项目：重庆市自然科学基金资助项目（Ｎｏｃｓｔｃ２０１９ｊｃｙｊ－ｍｓｘｍＸ０６０９）作者简介：王　鹏（１９８９－），男，硕士生，研究方向：动脉粥样硬化代谢调控，Ｅ ｍａｉｌ：１８０９８３３１９４７＠１６３．ｃｏｍ；刘　雅（１９７９－），女，博士，教授，硕士生导师，研究方向：心血管代谢疾病及其药物防治，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉ ｕｙａ１９７９＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０８０６３文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）１２－２２５１－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２２ ４７；Ｒ５４３ ５；Ｒ５７５ ５；Ｒ９７２摘要：目的　初步探明卡维地洛抗动脉粥样硬化的作用。

方法　８周龄ＡｐｏＥ－／－小鼠用高脂高胆固醇饲料喂养，随机分为对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ）和卡维地洛组（Ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ），分别给予５ｇ·Ｌ－１羧甲基纤维素溶液和卡维地洛（１２ ５ｍｇ·ｋｇ－１）灌胃，每天一次，共计１０周。

组织切片观察头臂干、肝脏、胰腺和脂肪病理形态学变化；检测血糖、血脂、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）水平、肝脂肪酸β 氧化酶水平；进行葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验；Ｒｅａｌ ＴｉｍｅＰＣＲ和Ｗｅｓｔ ｅｒｎｂｌｏｔ分别检测肝脏ＡＣＡＤ１０和ｍＴＯＲ蛋白及ｍＲＮＡ表达。

结果　与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，Ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ组小鼠动脉粥样硬化斑块面积（Ｐ＜０ ０１）和内－中膜比值（Ｐ＜０ ０５）和均明显减少，动脉损伤明显减轻，葡萄糖和胰岛素耐量增强，外周血高密度脂蛋白胆固醇含量明显增加（Ｐ＜０ ０５）。

世界中医药　２０２１年 １月第 １６卷第 １期·７１·实验研究ＡｐｏＥ－／－ 小鼠动脉粥样硬化模型的中医证型白云绮１　李　慧２　宋　珂１　王淑琪２　高　照１　孙克寒２　金秋硕１ 娄利霞１　吴爱明１　吴圣贤１　聂　波１，２（１北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室，北京，１００７００；２北京中医药大学中药学院，北京，１０００２９）摘要　目的：探讨长期高脂饲养 ＡｐｏＥ－／－小鼠中医的证型，为抗动脉粥样硬化证候中药的研究提供证型动物模型。

方法： 将 ２０只雄性 ＡｐｏＥ－／－小鼠按随机数字表法分为四妙勇安汤组（ＳＭ 组）和模型组（Ｍ 组），每组 １０只，采用高脂饲料喂养 １４周建立动脉粥样硬化模型，ＳＭ组于造模开始进行预防性给药。

同时以 Ｃ５７ＢＬ／６小鼠 １０只作为正常对照组（Ｎ组）。

检测血清总胆固醇（ＴＣ）、三酰甘油（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬＣ）水平，观察主动脉 和肝脏病理，评价是否为血瘀痰湿证型；通过 ＩＬ６、核因子κＢ免疫组织化学变化评价是否为毒损证型。

结果：与 Ｎ组比 较，Ｍ组小鼠血清 ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬＣ显著提高，ＨＤＬＣ显著降低，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）；肝脏病理出现球形脂滴及炎 性细胞浸润；主动脉出现明显斑块，血管内膜厚度（ＩＴ）、中膜厚度（ＭＴ）、斑块面积（ＰＡ）及 ＩＴ／ＭＴ明显增大，差异有统计学 意义（Ｐ＜００５），血管管腔面积（ＬＡ）明显减小，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）；免疫组织化学显示 ＩＬ６、核因子κＢ在主动 脉的表达明显增加，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。

与模型组比较，ＳＭ 组能够明显降低 ＡｐｏＥ－／－小鼠主动脉 ＰＡ、ＩＴ及 ＩＴ／ＭＴ，明显降低 ＩＬ６及核因子κＢ表达，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）；减轻肝脏病变；但对血脂水平无明显作用。

结 论：长期高脂饲料饲养 ＡｐｏＥ－／－小鼠制备的动脉粥样硬化模型为痰湿血瘀毒损型病证结合动物模型。

载脂蛋白 E 基因敲除小鼠血管内皮功能失调模型的建立刘丽娟;唐智奇;郭予洁【摘要】目的：探讨用高脂饮食诱导载脂蛋白 E（ ApoE）基因敲除小鼠制作血管内皮功能失调模型的可行性。

方法高脂饮食饲养 ApoE－／－小鼠（ApoE 组）以及野生型 C57BL ／6J 小鼠（对照组），8周后，检测两组小鼠血脂、血糖、血胰岛素及一氧化氮水平；取主动脉做病理观察及血管内皮依赖性血管舒张功能实验。

结果高脂喂养8周后 ApoE 组小鼠主动脉出现明显粥样硬化斑块；ApoE 组小鼠的血清总胆固醇、HDL－C、LDL－C 水平显著高于对照组小鼠（P ＜0．05），血清一氧化氮水平显著低于对照组（P ＜0．05）；两组小鼠的血糖、血清胰岛素水平均在正常范围，且差异无统计学意义（P ＞0．05）；ApoE 组小鼠主动脉内皮依赖性舒张功能最大舒张率为（51．14±6．21）％，显著低于对照组小鼠的（86．52±2．88）％（P ＜0．05）。

结论经过8周高脂饮食喂养的 ApoE 基因敲除小鼠可以作为研究内皮功能失调的理想动物模型。

%Objective To explore the feasibility of establishing the vascular endothelial dysfunction model induced by high cholesterol diet in apolipoprotein E(ApoE) knockout mice.Methods ApoE-/-knockout mice(ApoE group) and wild-type(WT)C57BL/6J mice(control group) were fed with high cholesterol diet for 8 weeks.And then the levels of blood lipid,blood glucose,blood insulin and nitric oxide were detected in two groups.The arterial samples were collected for the histopathological observation and endothelium-dependent vasodilatation test. Results Significant aortic atherosclerotic plaques were observed in ApoE-/-mice after 8-week high cholesterol diet.The mice in the ApoE group had significantly higher levels of serumTC,HDL-C and LDL-C as well as significantly lower serum nitric oxide level compared with the controls (P <0.05).The levels of blood lipid and serum insulin of the mice,which showed no significant difference between two groups(P >0.05),were normal.The maximum arterial endothelium-dependent vasodilatation value of ApoE group was significantly lower than th at of control group ((51.14 ±6.21)% vs.(86.52 ±2.88)%,P<0.05).Conclusion ApoE knockout mice which have been fed with high cholesterol diet for 8 weeks can act as an ideal animal model for endothelial dysfunction research.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P740-743)【关键词】血管内皮功能失调;载脂蛋白 E;基因敲除;小鼠;动物模型【作者】刘丽娟;唐智奇;郭予洁【作者单位】广西医科大学继续教育学院，南宁市 530021;广西医科大学继续教育学院，南宁市 530021;广西医科大学继续教育学院，南宁市 530021【正文语种】中文【中图分类】R332血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)是一种衬于血管腔表面的单层扁平上皮细胞。

重组腺病毒介导脂联素基因对 ApoE －／－小鼠动脉粥样硬化的作用机制王雪梅;魏琴;张春;姜涛;段明军;杨毅宁【摘要】目的：研究腺病毒介导的脂联素（ APN）过表达对ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化（ AS）的抑制作用和对NF-κB信号通路的影响。

方法将12周龄雄性ApoE－／－小鼠120只分为空载腺病毒对照组和脂联素干预组，每组60只。

在3个不同时间点（0天、4周、8周）处死小鼠收集组织。

全自动生化仪检测血脂指标；ELISA法测定血清APN浓度；油红O染色法检测小鼠主动脉血管组织的病理学变化；Masson染色法检测进展性斑块区的胶原含量和纤维帽厚度变化；免疫荧光法测定小鼠主动脉血管APN和NF-κB p65蛋白的表达；免疫印迹法检测主动脉血管APN、NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。

结果 APN过表达抑制了ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块形成。

与对照组相比，脂联素干预组的动脉粥样硬化病理损伤面积减少（P＜0.01），动脉粥样硬化损伤程度降低（P＜0.001），总体油红O染色测定血管表面损伤百分比，4周时为（27.78±8.64）vs（33.02±5.18）％；8周时为（31.58±5.87）vs（52.16±5.79）％。

脂联素减缓了高脂饮食导致的小鼠血清中TC（P＜0.001）、TG（P＜0.001）、LDL-C（P＜0.001）的浓度增加，使血脂水平趋向正常化。

随着血清脂联素浓度增加，可以阻遏NF-κB通路的激活，抑制NF-κB p65核蛋白和炎症因子的表达。

结论脂联素通过抑制NF-κB通路激活来减轻AS的炎症反应。

%Objective Atherosclerosis ( AS) is a common pathological basis of cardiovascular diseases.Adiponec-tin ( APN) has been shown to have an anti-AS effect, and the underlying mechanisms, however, are largely unknown.Nu-clear transcription factorκB ( NF-κB) has also been regarded as a proatherogenic factor, mainlybecause of its regulation of a variety of the proinflammatory genes linked to AS.It is hypothesized that the inhibitory effects of APN on AS is through the inhibition of NF-κB signaling pathway.The aim of this study was to test the hypothesis via investigation and validation of the inhibitory effect of APN on AS in ApoE-/-mice, and to delineate the roles of NF-κB signaling pathway in modulating the APN effect on AS in vivo.Methods APN overexpression in ApoE-/-mice were mediated by transfecting adenovirus bearing a vector encoding for APN and enhanced green fluorescent protein ( Ad-APN-eGFP) .The AS in ApoE-/-mice was induced by feeding a high-fat diet.To validate the inhibitory effect of the adenovirus mediated APN overexpression on AS in&nbsp;the ApoE-/-mice.120 male ApoE-/-mice aged 12 weeks were randomly and evenly assigned into two groups (60 mice per group), and were fed with a high-fat diet to induce AS.At 0 day, 2, 4, and 6 weeks of high-fat diet feeding.The 2 groups of mice were injected intravenously in the tail with either 100 μL (3.0 ×108 p.f.u) of Ad-eGFP virus ( control group) or the same amount of Ad-APN-eGFP virus ( APN group) .Blood samples and aortic tissues were taken at 0 day, 4, and 8 weeks of high-fat diet feeding.For the blood samples, FABA was used to analyze the concentrations of blood lipids and ELIZA was used to test the concentrations of serum APN.For the aortic tissues, oil red O staining was used to detect the surface lesion percentage.Masson staining was used to evaluate the collagen content and fibrous cap thickness of the plaque area.Immunofluorescence method was used to detect APN and NF-κB p65 expression.Western blot was used to de-tect the expressions ofAPN,nuclear NF-κB p65 and the downstream factors of NF-κB pathway.Results APN inhibited the formation of atherosclerotic plaque in ApoE-/-mice.The lesion formation in aortic sinus was significantly inhibited ( P<0.01).Compared with the control group, the oil red O staining showed that the surface area ratio of atherosclerotic le-sions was decreased significantly in the Ad-APN group ( P<0.001 ): the percentage of surface lesions in the 4 weeks groups was 27.78 ±8.64 vs.33.02 ±5.18 (%);the 8 weeks groups was 31.58 ±5.87 vs.52.16 ±5.79 (%) .As the serum APN was increased,the concentration of TC, TG and LDL-C were significantly decreased( P<0.001 for all) , and the growth of body weight was slowed down(P<0.05).APN effectively inhibited the expression of NF-κB nuclear protein p65 and inflammatory factors.Conclusions Adiponectin reduces the inflammatory reactions in atherosclerosis through in-hibiting the NF-κB pathway.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2016(024)002【总页数】9页(P175-183)【关键词】脂联素;动脉粥样硬化;ApoE-/-小鼠;炎症;NF-κB信号通路【作者】王雪梅;魏琴;张春;姜涛;段明军;杨毅宁【作者单位】新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011;新疆医学动物模型研究重点实验室，新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】Q95-33目前普遍认可的炎症学说，认为动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的发生和发展是一个慢性炎症过程，而AS性疾病是一种全身系统性的血管病变，也是多种心血管疾病发生发展的病理生理基础［1］。

DOI：10.3969/j.issn.l007-5062.2021.03.015•基础研究•重组腺病毒载体敲减ApoE-/-小鼠血管平滑肌细胞Orai1基因模型的构建费舒扬葛长江［摘要］目的：为探讨Orai1基因在动脉粥样硬化进展中的作用，通过重组腺病毒载体建立ApoE"小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Orai1基因的敲低模型,为深入相关研究奠定基础。

方法：构建针对小鼠Orai1基因的重组腺病毒载体。

高脂饲养ApoE，小鼠至16周龄后处死。

取胸主动脉原代VSMCs改为体外培养，细胞分为三组,分别为shOrai1组、shNC组和对照组。

转染后通过实时定量聚合酶链式反应(qPCR),Western blot检测Orai1表达水平，同时对转染模型进行验证。

结果：qPCR示，重组腺病毒在ApoE"小鼠VSMCs中Orai1基因的干扰效率达57%,Western blot结果示,Ad-GFP-Orial-shRNA转染组Orai1蛋白表达水平显著降低。

结论：通过成功建立ApoE"-小鼠VSMCs中Orai1基因敲低模型，从而为阐明钙库操纵性钙通道在动脉粥样硬化进程中的作用，尤其关于斑块延展和不稳定的相关性研究奠定了基础。

［关键词］Orai1基因；动脉粥样硬化;核糖核酸干扰;血管平滑肌细胞［中图分类号］R54［文献标志码］A［文章编号］1007-5062(2021)03-281-06Establishment of Orail gene knock down model in ApoE""mouse vascular smooth mucsle cells with ad­enovirus interference vector FEI Shuyang,GE Changjiang Department of Cardiology,Beijing Anzhen Hos­pital,Capital Medical University,Beijing Institute of Heart,Lung and Blood Vessel Diseases,Beijing100029,China［Abstract］Objective:To further investigate the role of calcium release-activated calcium channelmodulator1(Orai1)in the process of Atherosclerosis,the recombinant adenovirus vector was used to establishthe ApoE--mouse vascular smooth mucsle cells(VSMCs)Orai1gene knock down model for further relatedstudies.Methods:A recombinant adenovirus vector(Ad-GFP-Orial-shRNA)targeting the Orai1gene in micewas constructed.ApoE--mouse fed with high-fat diet were sacrificed at16weeks of age.VSMCs extracted fromthe thoracic aorta were cultured in vitro.The cells were randomly divided into3groups for Ad-GFP-Orial-shRNA infection,Ad-GFP-NC-shRNA infection and control group.Orai1expression was tested by qPCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)and Western blot to validated the model.Results：qPCRshowed that the Orai1mRNA in VSMCs decreased by57%,Western blot showed that Orai1protein expressionlevel was significantly reduced.Conclusions:The ApoE--mouse VSMCs Orai1gene knock down model wassuccessfully established,building a foundation to further study the mechanism of SOCC participate in theprocess of atherosclerosis and its impact on plaques'extension and instability.［Keywords］Orai1；RNA intereference；Atherosclerosis；Vascular smooth mucsle cells钙库操纵性钙通道(stored operated calcium内流的重要离子通道，参与调节血管平滑肌细胞channel,SOCC)是非兴奋细胞所介导胞质外钙离子(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖、迁移基金项目：2020年北京自然科学基金（7202039）作者单位：100029首都医科大学2018级临床心血管专业硕士研究生（费舒扬）；首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科（葛长江）通信作者：葛长江,教授,研究生导师，博士，研究方向：冠心病的药物和介入治疗。

体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS ）的重要原因之一。

载脂蛋白E（apolipoprotein E, apoE ）主要存在于乳糜微粒（chylomicron, CM ）、极低密度脂蛋白（very low desity lipoprotein, LDL ）ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型的建立欧海龙，张礼林，何晓兰，李红梅，雷霆雯*(贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，中国贵州贵阳550004摘要：ApoE -基因敲除小鼠（ApoE -/-）经含有21％脂肪和0.15％胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红O 染色与主动脉根部病理切片油红O 染色等动脉粥样硬化病理分析。

结果显示经过高脂诱导的ApoE -/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE -/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P <0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE -/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65％，显著高于ApoE -/-小鼠的正常饮食组（21％）（P <0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。

实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。

关键词：ApoE -/-小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394文献标识码：A 文章编号：1007-7847(201502-0141-04Abstract ：The ApoE gene knockout mice (ApoE -/- were fed with a high-fat (HFdiet containing 21%fat and 0.15%cholesterol for 12weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction, the ApoE -/-mice were sacrificed and plasma total cholesterol (TC,triglyceride (TG,low -density lipoprotein -cholesterol (LDL-Cand high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-Clevels were measured. The whole aortas and se -quential sections of the aortic root were stained with oil red O. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE -/-mice were both dramatically higher than normal diet(ND-fedApoE -/-mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet (P <0.05.The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type (NDand HFD. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta (65%as compared with normal diet ApoE -/-mice (21%.Similar result was obtained from cross-sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE -/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen, gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE -/-mice; atherosclerosis; cholesterol; lipoprotein; aorta（Life Science Research ，2015，19（2）：141～144）收稿日期：2014-08-25；修回日期：2014-10-21基金项目：贵阳医学院博士启动基金项目（2012006）作者简介：欧海龙（1977-），男，福建莆田人，贵阳医学院副教授，博士，主要从事脂代谢与动脉粥样硬化研究; *通讯作者：雷霆雯（1962-）女，贵州贵阳人，贵阳医学院教授，硕士，主要从事基因工程药物研究，E-mail:**************。

ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立摘要：ApoE-/-基因敲除小鼠（ApoE-/-）经含有21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红0染色与主动脉根部病理切片油红0染色等动脉粥样硬化病理分析。

结果显示经过高脂诱导的ApoE-/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE-/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P＜0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE-/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65%，显著高于ApoE-/-小鼠的正常饮食组（21%）（P＜0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。

实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。

关键词：ApoE-/- 小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）02-0141-04The Establishment of Atherosclerosis Model in ApoE-/- MiceOU Hai-long，ZHANG Li-lin，HE Xiao-lan，LI Hong-mei，LEI Ting-wen （Department of Biochemistry and Molecular Biology，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China）Abstract ：The ApoE gene knockout mice （ApoE-/-）were fed with a high-fat （HF）diet containing 21% fat and 0.15% cholesterol for 12 weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction，the ApoE-/- mice were sacrificed and plasma total cholesterol （TC），triglyceride （TG），low -density lipoprotein -cholesterol （LDI-C）and high-density lipoprotein-cholesterol （HDL-C）levels were measured. The whole aortas and sequential sections of the aortic root were stained with oil red 0. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE-/- mice were both dramatically higher than normal diet（ND）-fed ApoE-/- mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet （P <0.05）. The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type （ND and HFD）. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta （65%）as compared with normal diet ApoE-/-mice （21%）. Similar result was obtained from cross -sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE-/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen，gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE-/-mice；atherosclerosis；cholesterol；lipoprotein；aorta（Life Science Research，2015，19（2）：141 ?144）体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis AS）的重要原因之一。

Apoe敲除⼩⿏研究应⽤
1. 在接触⾹烟烟雾和减少危害的背景下研究⼼⾎管和呼吸系统疾病
动脉粥样硬化是⼀种慢性疾病，其中全⾝性炎症是动脉内膜斑块堆积的基础。

Apoe敲除⼩⿏的全⾝促炎状态也使它们成为研究慢性阻塞性肺疾病的良好候选对象，其特征是肺部炎症、⽓道阻塞和肺⽓肿，并与包括吸烟在内的⼼⾎管疾病有共同的危险因素。

图脂质失衡、内⽪功能障碍和全⾝性炎症⼀起决定了Apoe敲除⼩⿏（和⼈类）的动脉粥样硬化以及肺部炎症的发展。

2. 研究对⼼⾎管功能的影响
动脉粥样硬化⼩⿏模型和在⼩⿏体内进⾏⾎流动⼒学测量的技术的结合，可以⽤来研究⾼胆固醇⾎症和/或动脉粥样硬化对⼼⾎管功能的影响。

可⽤于研究⼀氧化氮、活性氧、衰⽼和饮⾷在⼼⾎管功能损害⼩⿏模型中的相互作⽤。

3. 动脉粥样硬化过程的⼲预疗法
●营养⼲预研究：使⽤不同饮⾷（营养程度的不同程度缺失或增加）可导致斑块形态的改变或者引起斑块不稳定性。

●药理研究：已知的降低⾎脂的药物都会影响Apoe敲除⼩⿏的动脉粥样硬化病变⾯积，对动脉粥样硬化作为炎症性疾病的兴趣也引起了Apoe敲除⼩⿏模型对抗炎药物的动脉粥样硬化研究。

18F-FDG显像对ApoE-/-小鼠主动脉斑块评价的初步研究
的开题报告
题目：18F-FDG显像对ApoE-/-小鼠主动脉斑块评价的初步研究
研究背景：
动脉粥样硬化是一种慢性进行性疾病，是心血管疾病的主要原因之一。

主要表现为动脉壁内有大量脂质物质沉积，形成斑块，并进一步发展为狭窄或阻塞。

ApoE-/-小鼠由于其缺陷的ApoE基因，易发生动脉粥样硬化，并形成明显的主动脉斑块。

因此，利用ApoE-/-小鼠模拟人类动脉粥样硬化是一个常用的方法。

18F-FDG显像是一种广泛应用于临床医学的功能性影像技术，可用于检测组织代谢的改变。

近年来研究表明，18F-FDG显像可用于评价动脉粥样硬化和斑块活性。

但是，其在ApoE-/-小鼠主动脉斑块评价中的应用还不充分。

研究内容：
本研究旨在探讨18F-FDG显像在评估ApoE-/-小鼠主动脉斑块的可行性和准确性。

首先，利用高脂饮食法制备ApoE-/-小鼠模型。

然后，采用microPET/CT技术对ApoE-/-小鼠进行18F-FDG显像扫描。

最后，根据显像结果分析斑块的大小和位置，并与组
织病理学结果进行比较。

研究意义：
通过本研究，可以探讨18F-FDG显像在评估ApoE-/-小鼠主动脉斑块中的应用与优越性。

此外，该研究还有助于进一步理解动脉粥样硬化的形成和发展机制，并为开
发治疗该疾病的新方法提供理论基础和实验依据。

ApoE基因敲除小鼠模型特点及原理介绍
展开全文
ApoE小鼠品系名：C57BL/6
ApoE小鼠毛色：黑色
ApoE小鼠基因名：Apoe， apolipoprotein E
ApoE小鼠染色体：7号
ApoE小鼠打靶技术：同源重组
ApoE小鼠基因型：ApoE（-/-）
ApoE小鼠表型特征：ApoE基因剔除小鼠模型表现出异常高血脂症状，随着月龄增加将出现大量类似动脉粥样硬化前期的损伤。

ApoE基因敲除小鼠简介:
ApoE基因敲除小鼠是通过同源重组技术制备的具有3号外显子纯合缺失的小鼠模型。

该小鼠模型表现出异常高血脂症状，在3月龄时即出现动脉脂肪堆积。

随着月龄增加将出现大量类似动脉粥样硬化前期的损伤。

17月龄时小鼠脑内将出现脂瘤性纤维瘤，同时还有脂质小球和泡沫细胞。

最新研究还发现该基因剔除小鼠的学习记忆能力出现障碍（赛业可提供ApoE小鼠）。

ApoE基因是目前国内外研究的热点之一，ApoE与CHD、高脂血症、脑梗塞、AD及慢性乙型肝炎等疾病相关。

ApoE基因敲除小鼠是研究该基因与多种相关疾病的重要模型。

小鼠动脉粥样硬化模型指标小鼠动脉粥样硬化模型是一种常用的实验模型，用于研究人类动脉粥样硬化的发病机制和寻找新的治疗策略。

建立有效的小鼠动脉粥样硬化模型需要明确一系列指标，以评估疾病的发展程度和治疗效果。

以下将介绍一些常用的评估指标。

1.动脉病变指标：(1)肿块形成：通过解剖方法测量动脉内膜的肿块面积和体积，反映动脉内膜病变程度。

(2)斑块组成：使用组织学染色方法（如HE染色、伊红染色）观察斑块中不同成分的比例，例如胆固醇晶体、炎症细胞和纤维组织等。

(3) 动脉弹性：使用Ultrasound Elastography 或者类似的方法，通过测量动脉壁的弹性变化来评估动脉硬化的程度。

2.生化指标：(1)血脂水平：测量小鼠血液中胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白（LDL）等脂质代谢产物的含量，了解脂质代谢紊乱的程度。

(2)炎症因子：测量血液或组织中炎症因子（如白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ等）的水平，评估炎症反应的强度。

(3)氧化应激：测量血液或组织中氧化应激指标（如丙二醛、超氧化物歧化酶等），了解氧化应激对动脉粥样硬化发展的影响。

3.分子生物学指标：(1)基因表达：使用实时荧光定量PCR或RNA测序等方法，测量目标基因在动脉组织中的表达水平，探究与动脉粥样硬化相关的分子机制。

(2) 蛋白表达：通过免疫组化或Western blot等方法，测量目标蛋白在动脉组织中的表达水平，了解蛋白的变化和功能。

(3)细胞因子和生长因子：测量血液或组织中细胞因子（如血小板成长因子、纤溶酶原激活物抑制剂等）和生长因子（如血小板衍生生长因子、血管内皮生长因子等）的水平，评估其在动脉粥样硬化中的作用。

总结：。